丝裂原活化蛋白激酶信号转导系统对Vp-16诱导分化作用的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-acti-vated protein kinases,MAPKs)信号转导系统对依托泊苷(Vp-16)诱导K562细胞分化作用的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖活性;流式细胞仪解析细胞周期;硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞向单核/巨噬系统分化。结果:0·1~0·8μg/mL的Vp-16抑制K562细胞增殖,引起细胞G2/M期阻滞,诱导细胞向单核/巨噬系统分化;细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)抑制剂PD98059降低Vp-16的诱导分化作用,P<0·05;p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kina-ses,p38MAPK)抑制剂SB203580增强Vp-16的作用,P<0·05;而C-JUN氨基末端激酶(c-jun N-terminal ki-nases,JNK)抑制剂SP600125对Vp-16的诱导分化作用无明显影响,P>0·05。结论:在Vp-16诱导K562细胞向单核/巨噬系统分化过程中,ERK正向,p38MAPK负向调节Vp-16的诱导分化作用。     

丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路与卵巢上皮癌

丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一组可以被多种细胞外信号激活的丝／苏氨酸激酶，其参与细胞的多种生物学行为，包括基因的转录、细胞的分化及增殖、细胞周期调控、诱导细胞凋亡和维持细胞生存以及细胞的恶性化等。在信号转导过程中，3种MAPK（ERK、JNK和p38）信号通路所调节的细胞反应有所不同，持续活化的ERKI／2途径有助于肿瘤细胞的生长、增强抗凋亡能力；而JNK和p38的活化则可引起肿瘤抑制，诱导肿瘤细胞的凋亡。在卵巢癌细胞中MAPK级联可以被顺铂、TNF（肿瘤坏死因子）和GnRH促性腺激素释放激素等激活和调节。本文将对激素、生长因子和化疗药物作用于卵巢上皮细胞及肿瘤细胞后引起MAPK通路的变化情况作一综述。     

p38丝裂原活化蛋白激酶阻滞剂SB203580对白血病K562细胞周期的作用及机制

 目的　研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）阻滞剂SB203580对K562细胞周期的作用及机制。方法　以反转录-聚合酶链反应（RT-PCR ）和Western blotting方法检测SB203580处理K562细胞后p38、Cyclin D2、Cyclin E、p27 mRNA和蛋白的表达并以流式细胞术（FCM）检测其细胞周期的变化。结果　SB203580处理后K562细胞 p38、Cyclin D2、Cyclin E mRNA和蛋白表达降低;p27 mRNA和蛋白表达增高。G0／G1期细胞增多,S期细胞减少,与用药前相比差异均有统计学意义。结论　SB203580可能通过p38途径,影响细胞周期调控蛋白,最终抑制K562细胞的增生。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与脑胶质瘤

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)对于细胞的生长、分裂、分化和凋亡具有重要的调节作用。脑胶质瘤是一种严重危害人类健康的颅内恶性肿瘤,具有发病率和病死率高的特点。近年来的研究发现,MAPK信号通路在脑胶质瘤等多种恶性肿瘤组织中发生了活性改变,同时MAPK又介导了多种药物的抗肿瘤作用。本文对MAPK与脑胶质瘤的关系进行简要综述。     

ras-丝裂原浯化蛋白质激酶通路与肿瘤靶向治疗

ras-丝裂原活化蛋白质激酶通路细胞信号转导网调节细胞的分化、细胞骨架的构建、蛋白质的转运等许多生理过程.近年来在肿瘤治疗中得到了进一步的重视与应用,很多临床研究将重点放在其抑制制剂通路上,如Raf激酶抑制剂、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激酶(MEK)抑制剂、Src激酶抑制剂通路等.     

p38丝裂原活化蛋白激酶过表达与前列腺癌病理特征的关系

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在前列腺癌组织以及相应的癌旁组织中的表达及其与前列腺癌病理分级、临床分期的关系.方法:免疫印迹法检测40例前列腺癌组织及其相应的癌旁组织中p38 MAPK的相对表达水平.结果:p38 MAPK在40例前列腺癌组织及其相应的癌旁组织中表达的阳性率均为100%(40/40),其平均相对表达水平分别为0.77±0.07和0.57±0.09,两者差异有统计学意义,P=0.000.p38 MAPK的相对表达水平与前列腺癌的病理分级(P<0.05)、临床分期(P<0.05)有关.结论:p38 MAPK的过表达与前列腺癌的临床病理特征和生物学行为密切相关,p38 MAPK的过表达可能参与了前列腺癌的发生和发展.     

FTI-277抑制急性髓系白血病细胞增生及增强三氧化二砷诱导细胞凋亡的作用

  目的 研究法尼基转移酶抑制剂FTI-277单独或联合三氧化二砷（As2O3）对急性髓系白血病（AML）细胞增生和凋亡的影响及其作用机制。方法 以HL-60细胞株、31例初治AML患者骨髓标本为研究对象,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增生,用流式细胞术检测细胞周期、磷酸化ERK1／2表达,用AnnexinV-FITC法、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 FTI-277可明显抑制AML细胞增生,对正常细胞无明显抑制增生作用。FTI-277使AML细胞G2／M期百分数显著升高,但亚G1期细胞百分数无明显变化。FTI-277显著下调AML细胞磷酸化ERK1／2的表达,但不影响正常细胞表达。联合组与单用组相比,AML细胞凋亡率明显增高,并可检出梯状DNA条带。结论 FTI-277通过阻断AML细胞ERK／MAPK途径,使细胞发生G2／M期阻滞,抑制细胞增生。FTI-277可增强As2O3对AML细胞的凋亡诱导作用。     

MEKK1在肿瘤MAPK信号传导通路中作用的研究进展

目的:总结国内外关于MEKK1在肿瘤MAPK信号通路中的调控作用,及其对肿瘤转移、细胞迁移和运动影响的研究进展.方法:应用Medline及CNKI期刊全文数据库检索系统,以MEKK1、MAPK信号转导和肿瘤为关键词,检索1992-01-2008-01的相关文献,共检索到英文文献4046篇和中文文献2篇.纳入标准:1)MEKK1的来源和分子结构特征;2)MEKK1与肿瘤相关的MAPK信号通路及其他信号通路的关系;3)MEKK1与AP1的关系;4)MEKK1与肿瘤细胞凋亡的关系;5)MEKK1与肿瘤细胞迁移和运动的关系.根据纳入标准,精选55篇文献,最后纳入分析21篇文献.结果:MEKK1是MAPK信号传导通路中的重要结点,也是MAPK通路与其他信号通路的结点.MEKK1具有广泛的生物学功能,如调控NFκB和AP1,影响细胞的存活和凋亡,并且与肿瘤细胞的侵袭、迁移和运动密切相关.结论:MEKK1是抗肿瘤药物研究的潜在靶点,虽然目前还没有MEKK1的抑制剂上市,但可通过研究疾病状态下与MEKK1过表达有关的细胞功能来开发MEKK1抑制剂.     

阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 :研究丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MAPK/ERK)通路抑制剂PD98059对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖及侵袭能力的影响,初步探讨阻断MAPK/ERK信号转导通路以治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,然后用不同浓度的PD98059处理细胞不同时间。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测2种细胞的增殖活性。蛋白质印迹法检测PD98059对2种细胞中磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)蛋白表达的影响。Transwell小室法检测PD98059作用后SKOV3和OVCAR3细胞侵袭能力的变化。结果:PD98059在一定浓度范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3的增殖,其作用具有时间及浓度依赖性(P值均<0.05)。PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调p-ERK1/2蛋白的表达(P<0.05),从而使得ERK1/2信号转导途径失活。同时,PD98059在一定浓度范围内能抑制2种卵巢癌细胞的侵袭能力(P值均<0.05)。结论:PD98059可能通过阻断ERK1/2信号通路,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力。     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路与卵巢癌关系的研究进展

卵巢癌是妇科肿瘤中致死率最高的恶性肿瘤之一,其发病率居妇女所有的恶性肿瘤第3位,预后较差,5年生存率低于35%。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)是哺乳动物细胞内广泛存在的一类丝/苏氨酸蛋白激酶,与细胞增殖和凋亡密切相关。近年来研究发现,MAPK     

Regulation of biosynthesis and phosphorylation of P210 protein during differentiation induction of K 562 cells

The changes of P210^bcr/abl and other tyrosine phosphorylated proteins in K562 cells during growth and differentiation were studied by metabolic labeling with ³²PO₄ and immunoprecipitation with anti-phosphotyrosine sera. The anti-phosphotyrosine sera recognized P210^bcr/abl and other phosphoproteins with mol wt of 150, 115, 100, 70 and 64 kD. The 2-day incubation of K562 cells with inducers for differentiation, hemin, sodium butyrate and TPA, decreased the level of P210^bcr/abl protein and other phosphoproteins. Inhibitors of tyrosine protein kinase, amiloride and genistein, also reduced the phosphorylation of P210^bcr/abl protein and other substrates, but did not induce differentiation of the cells. Although most of these additives inhibited the cell growth, cytotoxic agents such as adriamycin, vincristine and Ara-C did not affect the level of P210^bcr/abl protein. The experiments using ³⁵S-methionine labeled cells and the immunoprecipitation with anti-abl sera suggested that reduced biosynthesis but not dephosphorylation of P210^bcr/abl protein mainly accounted for the reduction of P210^bcr/abl protein reacting to anti-phosphotyrosine sera in differentiation-induced cells. These results indicate that the reduction of P210^bcr/abl protein synthesis plays some roles in cellular differentiation of K562 cells.     

Trichosanthin down-regulated p210Bcr-Abl and enhanced imatinib-induced growth arrest in chronic myelogenous leukemia cell line K562

Purpose Trichosanthin (TCS), an active component extracted from the root tubers of traditional Chinese medical herb Tian-Hua-Fen of the Cucurbitaceae family, has long been used for medical purpose in China; there is increasing interest in developing TCS as cancer therapeutic agents. The present study was to investigate the growth arrest of K562 cells and its molecular mechanisms, which the drugs induced by TCS and the possible functional interaction of TCS with imatinib (STI571) to K562 cells. Methods Trypan blue exclusive staining was used to access the cell growth inhibition; western blot was used to evaluate the p210^Bcr-Abl, phosphorylated tyrosine kinase (PTK), and some signaling molecules involving in cell proliferation and apoptosis in K562 cells. Results TCS and imatinib inhibited K562 cells at a time- and dose-dependent manners, respectively; TCS down-regulated p210^Bcr-Abl at a time- and dose-dependent manners; TCS synergistically enhanced imatinib-induced K562 cell growth arrest and down-regulation of p210^Bcr-Abl, PTK activities, procaspase-3, Hsp90,NF-κB and PKC. Conclusion The results suggest that TCS not only by itself involves but also synergizes activities of imatinib to induce K562 cell growth arrest, down-regulation of p210^Bcr-Abl and its downstream signals and to stimulate the effect of the tyrosine kinase inhibition.     

Erythroid differentiation in K562 chronic myelogenous cells induced by crambescidin 800, a pentacyclic guanidine alkaloid

The differentiation induction of K562 chronic myelogenous leukemia (CML) cells by crambescidin 800, a pentacyclic guanidine alkaloid isolated from a marine sponge, was examined. Crambescidin 800 increased hemoglobin production in K562 cells at concentrations of 0.15-1 microM and arrested the cell cycle of K562 cells at the S-phase. The expression of p21 was detected after 24-h treatment with crambescidin 800, and an increase of the expression was observed after 48-h treatment, but there was no remarkable change in the expression level of p27. This evidence indicates that crambescidin 800 induced the differentiation of K562 cells into erythroblasts accompanied by cell cycle arrest at the S-phase. Furthermore, crambescidin 800 induced a morphological change with neurite outgrowth in Neuro 2A cells at a 0.03-0.1 microM concentration.     

他莫昔芬诱导K562细胞凋亡的实验研究

 目的 观察他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增生抑制及诱导凋亡作用。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下用他莫昔芬处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率,Wright-Giemsa染色光镜观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带（DNA,ladder）、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 他莫昔芬能够抑制K562细胞增生;1 ~ 5μmol／L他莫昔芬可诱导K562他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞。结论 他莫昔芬可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

三氧化二砷联合miR-203对人白血病K562细胞的抑制作用及其机制

目的： 研究三氧化二砷（As 2O 3）联合过表达的微小RNA-203（microRNA-203,miR-203）对白血病K562细胞的抑制作用及其可能的分子机制。 方法： 将miR-203的真核表达载体pmiR-203转染K562细胞,Real-time PCR检测细胞内miR-203的表达。将K562细胞分为空白对照组、As 2O 3组、pmiR-203组、空质粒对照组、As 2O 3联合空质粒对照组和As 2O 3联合pmiR-203组,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术仪检测细胞凋亡率,Western Blotting检测细胞内Bcr/abl蛋白的表达水平。构建Bcr/abl 3′UTR和Bcr/abl mut-3′UTR的双荧光素酶报告基因载体,将其与pmiR-203共转染K562细胞,通过荧光素酶活性分析判断miR-203是否与Bcr/abl基因的3′UTR结合。 结果： miR-203的真核表达载体pmiR-203转染K562细胞后,细胞内miR-203的表达水平明显增高( P <0.05)。高表达miR-203联合As 2O 3使K562细胞对As 2O 3的敏感性提高到单用As 2O 3的4.86倍,IC50 从3.4 μmol/L降低至0.7 μmol/L,两者联用表现为协同作用。As 2O 3联合pmiR-203组的细胞凋亡率显著高于As 2O 3联合空质粒对照组\[（29.97±3.19）% vs （10.77±1.71）%, P <0.05\]。过表达miR-203显著下调K562细胞内Bcr/abl蛋白的表达水平。Bcr/abl 3′UTR中带有明确的miR-203结合位点。 结论： miR-203可提高白血病K562细胞对As 2O 3的敏感性,miR-203和As 2O 3联用对K562细胞具有协同抑制作用,其作用机制可能与miR-203直接下调Bcr/abl融合基因的表达有关。     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的了解三氧化二砷(As2O3)诱导慢粒细胞系K562细胞株凋亡是否与线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,△ψm)改变有关及其可能机制。方法联合应用As2O3、DTT和BSO处理K562细胞株,通过细胞内荧光染料PI/Rh123的色强度分析(△ψm),测定细胞活力、亚G1期细胞含量及形态学观察等鉴定细胞凋亡。结果As2O3可明显诱导K562细胞线粒体△ψm下降。BSO可加强As2O3诱导的K562细胞凋亡和线粒体△ψm下降,而DTT则有部分拮抗作用。在2×10-6mol/L As2O3处理72h的K562细胞,PI-Rh123-细胞达(26.0±2.5)%,当1×10-3mol/LBSO同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数上升达(37.2±5.7)%和(39.1±4.5)%;而当2×10-4mol/L DTT同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数分别降至(11.5±1.3)%和(15.4±3.5)%。结论线粒体跨膜电位下降是As2O3诱导K562细胞凋亡的关键环节,其机制可能与巯基氧化有关,巯基可能是As2O3凋亡细胞的重要靶分子。