血吸虫对吡喹酮抗药性评价方法的研究进展

吡喹酮自问世以来，以其高效、低毒、使用方便、价格低廉等优点在血吸虫病临床治疗和防治工作中得到广泛应用，并成为目前治疗各种血吸虫病的首选药物。然而，近年来在非洲北塞内加尔采用标准剂量吡喹酮治疗曼氏血吸虫病的治愈率仅为18％～36％，增加治疗剂量并不能明显提高治愈率。继而又在埃及发现部分患者经反复治疗难以治愈。鉴于人群化疗仍是当前血吸虫病防治的一个重要措施，是否出现了吡喹酮抗性虫株的问题引起了科学界的重视。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究ⅩⅢ日本血吸虫吡喹酮抗药性的实验诱导

目的 实验研究在吡喹酮药物压力下中国大陆日本血吸虫对吡喹酮产生抗药性的可能性.方法 取采自湖南省血吸虫病流行区湖滩现场和江苏省实验室传代的感染性钉螺实验室逸蚴,获得日本血吸虫尾蚴感染小鼠,从感染鼠肝脏分离成熟虫卵孵化毛蚴感染湖北钉螺,建立现场采集株和实验室传代株日本血吸虫小鼠-钉螺实验室生活史循环.用定量尾蚴(40条/鼠)感染小鼠,感染35 d后将小鼠随机分为对照组和抗性诱导组:对照组小鼠感染后45 d解剖收集肠系膜静脉和肝门脉静活虫体,计算虫负荷(条/鼠);抗性诱导组小鼠采用灌胃法一次口服亚治疗剂量吡喹酮进行治疗,服药22d后解剖收集肠系膜静脉和肝门脉静存活虫体.计算虫负荷(条/鼠)和减虫率,完成首轮诱导.取抗性诱导组小鼠肝脏,分离虫卵,实验室孵化出毛蚴重新感染钉螺,感染后的钉螺经25℃生化培养箱内饲养60～70d后,分离感染性钉螺并逸蚴,用成熟尾蚴感染小鼠,开始新一轮循环诱导.首轮诱导吡喹酮口服剂量为100 mg/kg,后每循环2～3轮增加100 mg/kg口服剂量.取完成8轮诱导后和未经诱导原代虫株的尾蚴感染小鼠,感染35 d后分别采用300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮一次性灌胃治疗感染小鼠,服药后14 d解剖感染鼠,收集活虫,计算各虫株减虫率,评价虫株经8轮诱导后对吡喹酮敏感性的变化.结果 在实验室内建立了江苏实验室传代株和湖南现场采集株2个虫株,并对其实施了8轮诱导.江苏实验室传代株在小鼠体内经第1轮口服1 00 mg/kg吡喹酮治疗后减虫率为22.3％,第8轮口服300 mg/kg吡喹酮治疗后减虫率为53.7％,减虫率随口服吡喹酮剂量增加而增加;湖南现场采集株在小鼠体内经第1轮口服100 mg/kg吡喹酮治疗后减虫率为66.8％,第8轮口服300 mg/kg吡喹酮治疗后减虫率仅为20.6％,减虫率随口服吡喹酮剂量增加而显著降低.未经吡喹酮诱导的江苏实验室传代株在小鼠体内经300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮治疗后,减虫率分别为71.5％和97.4％;经8轮吡喹酮筛选治疗后该虫株减虫率降至32.6％和68.1％.未经吡喹酮诱导的湖南现场采集株在小鼠体内经300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮治疗后,减虫率分别为70.8％和97.5％;经8轮吡喹酮筛选治疗后该虫株减虫率降至45.7％和61.9％.结论 中国大陆日本血吸虫在吡喹酮持续药物压力下可产生抗药性,但不同虫株间对吡喹酮敏感性存在差异,药物压力下产生抗性的潜能也存在差异.中国大陆日本血吸虫吡喹酮抗性株的建立,可为研究日本血吸虫吡喹酮抗性机制及其检测和监测技术奠定基础.     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究ⅩⅢ日本血吸虫吡喹酮抗药性的实验诱导

目的实验研究在吡喹酮药物压力下中国大陆日本血吸虫对吡喹酮产生抗药性的可能性。方法取采自湖南省血吸虫病流行区湖滩现场和江苏省实验室传代的感染性钉螺实验室逸蚴,获得日本血吸虫尾蚴感染小鼠,从感染鼠肝脏分离成熟虫卵孵化毛蚴感染湖北钉螺,建立现场采集株和实验室传代株日本血吸虫小鼠钉螺实验室生活史循环。用定量尾蚴（40条/鼠）感染小鼠,感染35d后将小鼠随机分为对照组和抗性诱导组：对照组小鼠感染后45d解剖收集肠系膜静脉和肝门脉静活虫体,计算虫负荷（条/鼠）;抗性诱导组小鼠采用灌胃法一次口服亚治疗剂量吡喹酮进行治疗,服药22d后解剖收集肠系膜静脉和肝门脉静存活虫体。计算虫负荷（条/鼠）和减虫率,完成首轮诱导。取抗性诱导组小鼠肝脏,分离虫卵,实验室孵化出毛蚴重新感染钉螺,感染后的钉螺经25℃生化培养箱内饲养60~70d后,分离感染性钉螺并逸蚴,用成熟尾蚴感染小鼠,开始新一轮循环诱导。首轮诱导吡喹酮口服剂量为100mg/kg,后每循环2~3轮增加100mg/kg口服剂量。取完成8轮诱导后和未经诱导原代虫株的尾蚴感染小鼠,感染35d后分别采用300mg/kg和600mg/kg吡喹酮一次性灌胃治疗感染小鼠,服药后14d解剖感染鼠,收集活虫,计算各虫株减虫率,评价虫株经8轮诱导后对吡喹酮敏感性的变化。结果在实验室内建立了江苏实验室传代株和湖南现场采集株2个虫株,并对其实施了8轮诱导。江苏实验室传代株在小鼠体内经第1轮口服100mg/kg吡喹酮治疗后减虫率为22.3%,第8轮口服300mg/kg吡喹酮治疗后减虫率为53.7%,减虫率随口服吡喹酮剂量增加而增加;湖南现场采集株在小鼠体内经第1轮口服100mg/kg吡喹酮治疗后减虫率为66.8%,第8轮口服300mg/kg吡喹酮治疗后减虫率仅为20.6%,减虫率随口服吡喹酮剂量增加而显著降低。未经吡喹酮诱导的江苏实验室传代株在小鼠体内经300mg/kg和600mg/kg吡喹酮治疗后,减虫率分别为71.5%和97.4%;经8轮吡喹酮筛选治疗后该虫株减虫率降至32.6%和68.1%。未经吡喹酮诱导的湖南现场采集株在小鼠体内经300mg/kg和600mg/kg吡喹酮治疗后,减虫率分别为70.8%和97.5%;经8轮吡喹酮筛选治疗后该虫株减虫率降至45.7%和61.9%。结论中国大陆日本血吸虫在吡喹酮持续药物压力下可产生抗药性,但不同虫株间对吡喹酮敏感性存在差异,药物压力下产生抗性的潜能也存在差异。中国大陆日本血吸虫吡喹酮抗性株的建立,可为研究日本血吸虫吡喹酮抗性机制及其检测和监测技术奠定基础。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究X日本血吸虫中国大陆株对吡喹酮敏感性的现场调查

目的现场评价日本血吸虫中国大陆株对吡喹酮的敏感性.方法在云南、江苏、江西、湖南和湖北等5个省的血吸虫病流行区,选择11个村作为调查现场.在血吸虫病非传播季节,采用粪检法（Kato-Katz法和/或尼龙袋集卵孵化法）筛选出病人;以吡喹酮40 mg/kg 一次顿服对粪检阳性病人实施抗血吸虫治疗;治疗后6周采用相同方法复查粪便;阳性者仍按40 mg/kg吡喹酮顿服进行第2次治疗;首次治疗后12周,对所有已治者（包括第2次治疗者）进行再次粪便复查.结果在11个流行村共粪检村民4 760人,阳性者584人,其中505人经吡喹酮首次治疗后6周复查粪便, 480人转阴, 治愈率为95.1%;21例首次治疗后粪检仍然阳性者予以第2次治疗.在首次治疗后12周,对所有已治者（包括第2次治疗者）进行再次粪便复查,未发现粪检阳性者.结论尽管在我国血吸虫病主要流行区采用吡喹酮实施大规模化疗已达10余年,但现场至今尚未发现日本血吸虫中国大陆株对吡喹酮敏感性下降的证据.     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究V吡喹酮对曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株成虫皮层的损伤

目的 体内比较吡喹酮对曼氏血吸虫吡喹酮抗性株与敏感株成虫皮层的损伤程度。方法 用各虫株尾蚴分别感染小鼠，感染后第57天，以300mg／kg微粒化吡喹酮悬液对小鼠作灌胃治疗；在灌药后10、30min和1、12、24h后剖杀感染小鼠，门静脉灌注收集成虫，按常规方法制成扫描电镜标本，扫描电镜下观察成虫体表的变化。结果 吡喹酮诱导的皮层损伤主要为虫体表形成泡状结构的薄壁隆起；给药10min，敏感株雄虫皮层可见较多小泡状物，而抗性株则少见；1h后，敏感株虫体表可见大量的泡状物，泡状物溃破可形成皮层损伤灶，抗性株仅见少量的泡状物；24h后，敏感株雄虫体表完全受损，部分皮层剥落，暴露出肌肉层，而抗性株仅见少量泡状物和破损的泡状物。给药1h后，敏感株雌虫开始出现少量泡状物，抗性株雌虫体表未见泡状损伤；12h后，敏感株雌虫泡状物数量增加，抗性株仪在有限区域见少量泡状物。结论 抗性株和敏感株成虫体表吡喹酮诱导的皮层损伤程度存在明显差异，敏感株的损伤程度重于抗性株，雄虫重于雌虫。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅵ吡喹酮对曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株虫卵肉芽肿形成的影响

目的 体内比较吡喹酮对曼氏血吸虫吡喹酮抗性株与敏感株肝脏虫卵肉芽肿形成的影响。方法 用抗性株与敏感株尾蚴感染小鼠，在感染第58、59、60天每日以200mg／kg微粒化吡喹酮悬液灌胃治疗小鼠，治后35d剖杀小鼠取肝脏做石蜡切片，进行HE染色，显微镜下作病理学观察；以图像分析仪定量测定虫卵肉芽肿的面积。结果 敏感株未治疗组虫卵肉芽肿由大量炎性浸润细胞及少量间质成纤维细胞组成；治疗组则由少量炎性浸润细胞和大量间质成纤维细胞组成；未治疗组肉芽肿的面积明显大于治疗组，两者间差异具有非常显著性。但抗性株治疗组和未治疗组虫卵肉芽肿均由大量炎性浸润细胞和少量间质成纤维细胞组成，两组虫卵肉芽肿的面积间差异无显著性。结论鼠体内吡喹酮的治疗对曼氏血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株肝脏虫卵肉芽肿的形成影响作用具有显著差异；在肝组织中，敏感株虫卵对吡喹酮的敏感性高于抗性株。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅱ曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株虫卵和毛蚴对吡喹酮的反应性

目的　比较曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株虫卵和毛蚴对吡喹酮的反应性 ,旨在运用敏感株与抗性株反应性间的差异 ,建立简单快速吡喹酮敏感性检测方法。方法　将各株虫卵分别孵育于 5× 10 -6、10 -6、5× 10 -7mol/ L和 10 -7mol/ L吡喹酮溶液中 2 4h,后移至清水孵化 ,比较虫卵的孵化率。将各株毛蚴分别暴露于 10 -3 、10 -4 、10 -5、5× 10 -6、10 -6、5× 10 -7mol/ L和 10 -7mol/ L吡喹酮溶液中 ,0、1、5 min后观察比较毛蚴的运动及形态学变化。结果　经 10 -6mol/ L 和 5× 10 -7mol/L吡喹酮孵育 2 4h后 ,敏感株血吸虫虫卵的孵化率分别为 4.2 %和 3 0 .7% ,抗性株分别为 2 4.2 %和61.2 %。当毛蚴暴露于 5× 10 -6mol/ L吡喹酮中 ,敏感株 10 0 %毛蚴体中部立刻收缩变形 ,而抗性株仅见 13 .4%毛蚴变形 ;当暴露于 10 -6mol/ L 吡喹酮 0、1、5 min后 ,敏感株毛蚴的变形率分别为3 5 .5 %、63 .9%、91.2 % ;抗性株分别为 0、7.6%、14 .3 %。结论　曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株虫卵与毛蚴阶段对吡喹酮的体外反应性的差异均非常显著。提示 ,将毛蚴移入 10 -6mol/ L吡喹酮溶液中 1min,镜下观察其变形率 ,作为曼氏血吸虫对吡喹酮敏感性的检测方法 ,可用于现场判断病人化疗失败的原因是否是由于吡喹酮抗性     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅳ曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株成虫对吡喹酮的体外反应性

目的　体外比较曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株成虫阶段对吡喹酮的反应性。方法　将各虫株成熟成虫分别培养于含吡喹酮分别为 3.2× 10 - 4、8× 10 - 4、1.6× 10 - 3m ol/ L的 MEM培养液中 ,37℃孵育 15、30、4 5、6 0、75 min后 ,分别在解剖镜下观察虫体的存活状况并计算存活率。结果　当孵育于含吡喹酮 3.2× 10 - 4m ol/ L的 MEM中 75 m in,敏感株与抗性株雌虫均能存活 ;但敏感株与抗性株雄虫的存活率仅为 11.5 % - 16 .0 %和 32 .7% - 36 .5 %。孵育于含吡喹酮 8× 10 - 4m ol/L 的 MEM中 15 min,抗性株雄虫与雌虫存活率为 4 8.3% - 5 0 .0 %和 5 7.9% - 6 3.6 % ;敏感株雄虫与雌虫的存活率为 2 2 .4 % - 2 5 .9%和 38.5 % - 4 8.3% ;75 min后 ,抗性株雄虫的存活率为 13.3%- 17.3% ,敏感株雄虫的存活率则为 0。孵育于含吡喹酮 1.6× 10 - 3m ol/ L 的 MEM中 15 min,抗性株雄虫与雌虫的存活率为 11.1% - 19.6 %和 2 7.5 % - 2 9.9% ;敏感株雄虫与雌虫的存活率均为 0。结论　将曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株成虫孵育于含一定浓度吡喹酮的 MEM中不同时间后 ,抗性株的存活率高于敏感株 ;雌虫的存活率高于雄虫     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究 Ⅲ 曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株尾蚴对吡喹酮的反应性

目的比较曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株尾蚴阶段对吡喹酮的反应性,旨在运用敏感株与抗性株反应性间的差异,建立现场监测吡喹酮抗性的方法.方法将各虫株尾蚴分别暴露于10-4、10-5、6×10-7、4×10-7 mol/L吡喹酮溶液中,0、20、40、60、80、100 min后,解剖镜下观察尾蚴的泳动、收缩和断尾率的变化.结果尾蚴暴露于10-4 mol/L吡喹酮中即刻停止泳动、沉底并伴有强直性收缩;5 min 后开始出现体与尾部不协调的快速蠕动,尾蚴体区的后端与尾部的前端发生分离即断尾,敏感株断尾尾蚴明显多于抗性株;暴露于10-5 mol/L吡喹酮中40、60、80 min和100 min 后,敏感株尾蚴的断尾率分别为28.2%、52.7%、67.5%和78.0%;抗性株分别为11.3%、28.6%、39.3%和45.5%.暴露于4×10-7 mol/L中80 min和100 min 后,敏感株尾蚴的断尾率为10.3 %和17.0%;抗性株为0.5%和1.1%.结论曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株尾蚴阶段对吡喹酮反应性存在非常显著的差异.提示,将尾蚴移入4×10-7 mol/L吡喹酮溶液中80-100 min,镜下观察其断尾率,作为曼氏血吸虫对吡喹酮敏感性的检测方法,可用于螺体内吡喹酮抗性虫株的现场监测.     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅶ曼氏血吸虫吡喹酮抗性株与敏感株某些生物学特性

目的 探讨因吡喹酮抗性产生而导致曼氏血吸虫抗性虫株繁殖力发生改变的可能性。方法 以抗性株与敏感株毛蚴和尾蚴定量感染光滑双脐螺和CD，小鼠，宿主体内观察比较曼氏虹吸虫吡喹酮抗性株和敏感株生物学特性：对螺感染率、感染性螺存活期、在螺体内产尾蚴量、尾蚴和虫卵开放前期及虫卵孵化率。结果单只螺暴露于单个毛蚴2h，抗性株与敏感株对螺感染率为19．8％和8．9％，两者间差异有非常显著性(P=0．006)；逸蚴期间，塞内加尔抗性株感染螺存活率高于敏感株；用塞内加尔抗性株和敏感株毛蚴感染所获阳性螺产尾蚴量(尾蚴／螺)为6875条和14611条；塞内加尔抗性株和敏感株尾蚴开放前期为32．2d和27．7d。抗性株与敏感株鼠体内虫卵开放前期为42．8d和45．5d；虫卵孵化率为80．9％和78．0％。结论 曼氏血吸虫吡喹酮抗性株对实验室传代的光滑双脐螺具有高感染性，此生物学改变似与吡喹酮抗性产生相关；塞内加尔抗性株与敏感株问存在其他变化则被认为是曼氏血吸虫不同地理株间的差异。     

吡喹酮抗血吸虫作用机制研究进展

血吸虫病是一种人畜共患寄生虫病。目前,化学治疗控制血吸虫病仍然是主要手段之一。现阶段的治疗血吸虫病药物中,吡喹酮以其疗效高、疗程短、不良反应少等优点,成为治疗血吸虫病等寄生虫病的首选药物。随着吡喹酮在流行区的大量长期使用,血吸虫抗药性问题越来越引起人们的重视,但是虽然吡喹酮治疗血吸虫病已30余年,但其作用机制仍未充分阐明,这极大地阻碍了抗血吸虫新药的发展。     

血吸虫基因组研究进展

血吸虫寄生于人体引起血吸虫病 ,是一种历史悠久、分布广泛的寄生虫病。随着科学技术的进步和有关机构的重视 ,血吸虫病的防治已经取得了相当的成就 ,然而在有些发展中国家血吸虫感染的病例却未见减少。近年来一些大规模的水利资源发展计划尤其可能为血吸虫的中间宿主提供理想的繁殖场所 ,引起血吸虫病的扩散和爆发。为了有效地控制血吸虫病 ,人们需要了解血吸虫的生物学特征、免疫学效应以及它的致病机理、抗药机制等。而开展血吸虫基因组的研究可以帮助阐明有关基因编码序列的特征 ,鉴定新的基因 ,提供有用的基因标记 ,比较基因序列的同源…     

吡喹酮制剂的发展和应用

吡喹酮是临床有效治疗血吸虫病的首选药物, 然而其生物利用度低、 剂型单一、 对童虫作用不明显等缺点, 限制了其发挥最大效用。本文针对吡喹酮性质及药代动力学特点, 并结合现有吡喹酮新型制剂的研究进展做一综述, 为充分发挥吡喹酮的抗血吸虫作用以及吡喹酮新制剂的研究开发提供参考及借鉴。     

吡喹酮外用霜剂预防日本血吸虫尾蚴感染的研究

目的 观察吡喹酮外用霜剂预防血吸虫尾蚴感染的效果. 方法 用含吡喹酮的1％和2％外用防护霜剂,采用即时接触感染实验和水冲延迟接触感染实验两种方式对昆明小鼠进行预防血吸虫尾蚴感染的实验,同时用去氯水做对照.观察不同浓度、不同方式感染后小白鼠和对照组小白鼠的肝脏外观及镜下虫卵结果,同时对检获的血吸虫成虫数进行比较,实验组和对照组的成虫数采用方差分析进行比较,两种实验方式之间的成虫数采用t检验进行比较. 结果 两种剂型、两种实验方式的小鼠解剖后,肝脏均呈鲜红色,表面光滑,压片镜检均未发现虫卵,也未检获血吸虫成虫,而对照组小鼠肝脏均色暗,有不同程度的表面结节,压片镜检均发现了散在或成堆的血吸虫卵,同时检获了不同数量的血吸虫成虫,即时接触感染实验对照组检获的成虫数为(6.17±3.86)条,水冲延迟接触感染实验对照组检获的成虫数为(9.50±3.98)条.两种方式对照组与实验组检获血吸虫成虫数比较,其差异具有统计学意义(F=14.316,P＜0.01; F=20.990,P＜0.01),两种方式对照组检获血吸虫成虫数之间比较差异无统计学意义(t=-1.159,P＞0.05). 结论 吡喹酮外用霜剂能较好地防御血吸虫尾蚴感染.     

人体血吸虫再感染与获得性免疫研究进展

早在1934年，Fisher等对埃及血吸虫病流行区人群的研究发现，年龄与流行率／感染度之问存在“凸”线型关系，从而提出了人体存在与年龄相关的获得性免疫力的假说。而真正意义上的再感染研究始于1983年Sturrock等对肯尼亚小学生化疗后感染曼氏血吸虫的观察，其研究结果引起了众多学者的关注。多项研究表明，影响再感染的因素有：疫水接触、治疗次数、化疗前感染度、     

血吸虫的寄生适应性研究及其应用价值

血吸虫的尾蚴和成虫能快速建立并长期维系与终末宿主的寄生关系, 源自于其对寄生生活方式的高度适应性。 本文概述了血吸虫寄生适应性多个方面的研究进展, 并简要介绍其因寄生性适应而进化出的功能基因在血吸虫病防治靶 标发掘方面以及其天然活性分子在多种应用方面的价值。     

Failure to induce resistance of Schistosoma japonicum to praziquantel

In order to explore the possible occurrence of inducing resistance of Schistosoma japonicum to praziquantel (PZQ), a set of animal experiments were carried out. Outbred mice (NIH strain), Anhui isolates of S. japonicum and Oncomelania hupensis were used. In one protocol five weeks after being infected with 48-52 cercariae, mice were orally dosed with PZQ 300 mg/kg, and killed 82 days later to isolate eggs from the liver. Snails were exposed to miracidia released from egg-hatching. F1 progeny were thus obtained through cercarial inoculation. The same scheme was applied for the establishment of the F2 generation. In another protocol two weeks after infection, PZQ 50 mg/kg/day was given to mice for 5 days. Eggs were collected 26-27 days post treatment and the identical procedures were adopted for F1 and F2 generations successively. Analysis of total worm and female worm reduction rates indicated that there was no significant difference between the sensitivity to PZQ of F1 and F2 progenies of S. japonicum and the parent worms.     

血吸虫尾蚴弹性蛋白酶研究进展

血吸虫弹性蛋白酶是在血吸虫的生命周期中起关键作用的酶之一，在感染宿主和免疫应答等多种生物过程中发挥作用。研究表明尾蚴蛋白酶是由一个在多种血吸虫中存在的功能保守的基因家族所编码的。Pierrot等的实验结果说明弹性蛋白酶在曼氏血吸虫中受到转录水平上的调控，并应用免疫定位方法证明了在感染宿主的过程中该酶被大量释放，最终证明该酶是宿主免疫攻击的一个靶点。鉴于日本血吸虫在感染宿主过程中所表现出的快速和较高的成功率，推测其弹性蛋白酶必将具有一些独特的生化和免疫特性。