TRIM22蛋白与A型流感病毒复制的相互关系研究

目的：研究TRIM22蛋白对A型流感病毒复制能力的影响。方法：RT-PCR扩增人TRIM22全长编码序列并制备TRIM22真核表达质粒;通过绘制病毒生长曲线及直接做空斑的方法检测外源性表达TRIM22情况下,两种不同流感病毒株PR8（H1N1）和A/ST/364/2005（H3N2）在MDCK细胞中的复制能力。结果：成功构建TRIM22真核表达质粒;两种不同亚型流感病毒在过表达TRIM22的情况下,其在MDCK细胞中的生长曲线及空斑大小与阴性对照组相似。结论：TRIM22不能有效抑制不同亚型A型流感病毒的复制。     

流感病毒在神经元细胞中的感染与复制研究

目的:研究流感病毒在体外对神经元的感染及活性影响,检测流感病毒在神经元内的复制效率。方法:原代培养小鼠神经元细胞,β-tubulin III抗体进行免疫荧光鉴定小鼠神经元纯度,流感病毒吸附、培养;荧光定量PCR检测神经元内病毒载量;CCK-8检测流感病毒对神经元活性的影响。结果:免疫荧光结果表明,神经元纯度大于95%。CCK-8检测结果显示,流感病毒对神经元感染可显著抑制神经元细胞活性。荧光定量PCR结果表明,流感病毒可感染神经元并在其细胞内进行病毒复制。结论:流感病毒可在体外感染小鼠原代神经元进行病毒复制,并影响神经元活性。     

连翘苷对甲型流感病毒核蛋白基因表达的影响研究

目的探讨连翘苷对甲型流感病毒核蛋白(NP)基因转染后表达的影响。方法将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金法检测连翘苷对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞内NP基因的拷贝数。结果 NP重组质粒组甲型流感病毒核蛋白含量高。空质粒组、脂质体组、Hela细胞组基本不含甲型流感病毒核蛋白。连翘苷组上清无或可能含有微量核蛋白。连翘苷组胞内甲型流感病毒含量不高。RT-PCR校正曲线相关性为0.998,效率为97.4%。重复4次转染后48 h连翘苷组NP基因表达量为(2.1±0.3)×105拷贝数/μl,NP重组质粒组NP基因表达量为(61.5±15.0)×105拷贝数/μl,连翘苷组NP基因表达量低于NP重组质粒组,差异有统计学意义(t=7.672,P<0.05)。结论连翘苷可以抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达。     

基于病毒宿主相互作用的抗流感病毒宿主靶标的研究进展

流感病毒是严重危害人类健康与生命的主要病毒之一。流感病毒感染致病涉及到病毒与机体二者之间的相互作用,其复制和致病都需要宿主细胞因素的参与。病毒与宿主相互作用研究可为病毒性疾病的预防和治疗提供理论依据,有助于发现来源于宿主系统的抗流感病毒药物靶标。基于病毒与宿主相互作用,本文就流感病毒感染过程各环节中宿主细胞潜在药物靶标的研究进展做一综述。     

组蛋白乙酰化修饰调控流感病毒复制中间体dsRNA引起的IL-6激活表达

目的研究组蛋白乙酰化修饰在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6 表达中的调控作用。方法以病毒复制中间体
dsRNA为诱导物,利用组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂、DNA甲基转移酶（DNMT）抑制剂或HDAC siRNA分别处理A549细
胞,双荧光素酶报告系统分析IL-6启动子活性、RT-PCR检测mRNA转录水平以及ELISA检测蛋白表达。结果dsRNA可激活
IL-6启动子活性、增强mRNA转录水平和蛋白的分泌表达,用HDAC抑制剂TSA处理或HADC siRNA干扰均可显著增强IL-6
启动子活性和mRNA转录,同时,HDAC抑制剂TSA和DNA甲基转移酶抑制剂DAC在调控IL-6表达过程中无协同作用。结
论在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6表达上调过程中受到组蛋白乙酰化修饰调控。
     

宿主蛋白LSml-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

目的探讨LSml-7复合体在登革病毒（DENV）RNA复制中的作用。方法DENV感染HepG2细胞后．在不同时间点（2、24、36、48h）收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR（RT-qPCR）分析LSml表达水平;将LSml的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSml表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSml抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSml与dsRNA共定位情况。结果与2h比较,随着时间的推移,DENV-2RNA和LSmlRNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSml组LSmlRNA水平明显降低,沉默效率达78．2％;与对照组siNC比较,siLSml组DENVRNA含量降低35．6％：LSml-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENVdsRNA共定位。结论LSml-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENVRNA的复制。     

SP-A,D在宿主抗甲型流感病毒中的作用

肺泡表面活性蛋白A,D(SP-A,D)在宿主对抗甲型流感病毒(IAV)感染中起着重要的作用。SP-A能识别并中和IAV上的血凝素,而SP-D则主要结合IAV上的神经氨酸酶,致使IAV失活。它们都能抑制IAV复制能力及IAV对肺泡上皮细胞的初始感染能力。此外,它们都能介导并增强巨噬细胞、中性粒细胞吞噬和杀灭IAV作用。现就SP-A,D在宿主抗IAV感染中发挥的作用予以综述。     

A(H1N1)甲型流感病毒基因多态性对病毒复制及毒力的影响研究

目的研究A(H1N1)甲型流感病毒基因多态性对病毒复制及毒力的影响。方法选择A/Californ ia/04/2009,A/S ichuan/1/2009和A/Be ijing/3/2009 3株病毒,分别感染MDCK细胞,测定病毒RNA载量和病毒效价;同时滴鼻接种BALB/c小鼠,检测小鼠感染后的多项指标,观察期为14天。另一方面,对3株病毒的全基因组进行测序及序列比对,对其基因突变情况及多态性进行分析。结果 A/S ichuan/1/2009株相较而言具有较高的复制能力及毒力,序列分析结果显示全基因中有5个氨基酸发生了突变,其中PA蛋白中343位点的A突变为T,PB1蛋白中353位点的K突变为R,566位点的T突变为A,PB2蛋白中471位点的T突变为M,对病毒毒力的增强起重要作用。结论 A(H1N1)甲型流感病毒基因组多态性与其复制及毒力密切相关。     

核转录因子NF—кB的研究进展

核转录因子ＮＦ κＢ是 1986年由美国麻省理工学院癌症研究中心的Ｂｌｔｉｍｏｒｅ和麻省Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ生物医学研究所的Ｒｗｉａｎｓｅｎ发现的〔1〕。他们在成熟Ｂ细胞和浆细胞中发现的这种蛋白能与免疫球蛋白κ轻链内含增强子的特异性序列结合 ,该序列由 10个核苷酸组成 (5 -ＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣ - 3) ,命名为κＢ〔1〕。ＮＦ κＢ广泛存在于真核生物中 ,是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白家族。它作为信号传导途径中的枢纽 ,与免疫、肿瘤的发生、发展 ,细胞凋亡的调节以及胚胎发育等重要事件有着密切联系 ,是一种重要的核转录因…     

宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

目的 探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用.方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48 h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR (RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况.结果 与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2％;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6％;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位.结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制.     

流感病毒疫苗研究进展

流感是由流感病毒所引起的一种急性呼吸道传播疾病,可季节性地感染禽类、哺乳动物和人类。流感病毒又可分为A、B、C三种类型,其中以A型流感病毒的暴发最为频繁。甲型流感病毒属于正黏病毒科[1],其基因组共由8个独立的单链RNA片段组成,编码10种蛋白：血凝素蛋白（HA）;基质蛋白（M）分为M1和M2;神经氨酸酶（NA）;核壳蛋白（NP）;非结构蛋白（NS）包括NS1和NEP;PB1,PB2和PA三种聚合酶,每种多肽对于流感病毒都具有重要的生物学功能。甲型流感病毒根据其主要表面抗原HA和NA的抗原性的差异分为不同亚型,目前已发现了17种亚型的HA蛋白,和10种亚型的NA蛋白[2]。具有高度传染性,经常在短期内突然暴发并迅速蔓延,造成不同程度的流行。早在1580年,流感暴发就首次为人类所详尽记载,近年来流感病毒的暴发也越来越频繁,如2009年暴发于美洲的H1N1甲型流感和在香港引起恐慌的H3N2流感,以及2013年在我国长江流域暴发的H7N9禽流感。     

微小染色体维持蛋白与复制

微小染色体维持蛋白家族是复制执照系统的重要组成成分,共有八个亚基.该蛋白家族呈周期性表达,调节DNA复制,使得每个细胞周期的DNA复制一次且仅有一次.微小染色体维持蛋白1和10虽然不归属前者,但其功能却与复制密切相关.本文就微小染色体维持蛋白在复制中的作用简单综述.     

以流感病毒M2蛋白为靶点的通用疫苗的研究现状

流感病毒基质蛋白2（M2蛋白）是流感病毒结构蛋白,具有离子通道作用,其基因序列在不同亚型流感病毒中高度保守。M2蛋白细胞膜外区有24个氨基酸残基,简称＂M2e＂,是M2抗原决定簇的集中区域。设计M2e四分肽,将多个M2e分子和具有佐剂效应的蛋白偶联或将其嵌入减毒活疫苗载体,可增强M2基因的稳定表达。用M2蛋白免疫动物能诱导较好的体液免疫和细胞免疫应答,保护动物免受不同亚型流感病毒的致死性攻击。M2蛋白作为流感病毒通用疫苗的靶点,在预防不同亚型流感病毒的感染与流行方面具有重要的社会价值及实际应用意义。     

流感病毒抗原变异的生物学研究进展

人流感是由甲乙丙三型流感病毒分别引起的急性呼吸道传染病，流感流行至今尚无法加以控制的主要原因是其表面的抗原极易发生变异，使人们难弄清其变化的真正规律，同时也使人群无论是通过自然感染还是疫苗接种所获得的免疫力失去作用。致使流感病毒不断变异的主要原因是其表面的两个重要抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不断变异。近年来由于分子生物学技术的迅速发展，在分子水平上对流感病毒抗原变异的研究已有了长足进展。     

登革病毒复制分子机制的研究进展

登革病毒(dengue virus,DV)是登革热(dengue fever,DF)、登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的病原体,按血清型分为四型(DV1～4)。DV以埃及伊蚊和白纹伊蚊为传播媒介,广泛流行于全球热带及亚热带的60多个国家和地区[1]。我     

流感病毒裂解方法优化研究

目的研究流感病毒的裂解剂及裂解灭活条件。方法使用两种裂解剂TritonX100和TritonN101以不同浓度对流感病毒单价纯化液作用,通过电镜进行裂解效果观察,确定最佳裂解时间,用单向免疫扩散法检测HA含量作为评价指标。同时,观察先灭活再裂解和先裂解再灭活对病毒裂解效果的影响。结果TritonX100的裂解效果较优越,0.5%~1%TritonX100作用90min可使流感病毒裂解完全;TritonX100与甲醛作用的先后顺序对病毒的裂解灭活效果影响不大。结论0.5%~1%TritonX100可得到流感病毒的最佳效果。     

慢性乙肝病毒感染者Fas蛋白表达与HBV复制的关系

目的：探讨Fas蛋白表达与乙肝复制指标HBcAg的关系，方法：取87例慢性乙肝病毒感染者的活检肝组织，采免疫组织化学染色和斑点杂交PCR技术，检测患者肝细胞内Fas蛋白，HBcAg和HBV－DNA，结果：慢性乙肝患者肝细胞Fas蛋白表达与HBV复制关系是密切相关，P＜0．005，结论：本研究课题证实乙肝病毒感染后，肝细胞坏死与凋亡并存，Fas蛋白在肝细胞凋亡中起至关重要的作用。     

热休克蛋白90在胃癌研究中的进展

胃癌(GC)是我国最常见的消化道肿瘤。热休克蛋白90(HSP90)被称为分子伴侣,其在合成多肽、控制蛋白质数量、蛋白折叠、活性和降解过程中发挥重要作用。HSP90在胃癌组织中高表达,并通过调节癌细胞生长、粘附、侵袭、转移、血管生成和细胞凋亡等,在胃癌发展过程中起重要作用。近年来HSP90 抑制剂成为重要的胃癌分子治疗靶点,但在抗肿瘤方面和临床应用上有待深入研究。本文就HSP90在胃癌发生发展中的作用机制与表达意义,及HSP90抑制剂在胃癌中的研究作一综述。     

流感病毒对MDCK细胞核转录因子表达的影响

目的研究流感病毒刺激对体外培养的MDCK细胞核转录因子表达的影响，探讨流感病毒损伤细胞的分子学机制。方法体外培养获得MDCK细胞，分别用NF-κB免疫组化方法和TransAM P65试剂盒测定血凝滴度1：64的A型流感病毒H1N1和H3N2两种亚型、B型流感病毒、紫外线照射灭活的B型流感病毒NF-κB蛋白表达和活性的动态变化。以细胞激活剂佛波酯刺激后的MDCK细胞为阳性对照，以等量生理盐水为阴性对照。结果各组细胞加入不同的流感病毒后，与对照组相比，细胞免疫组化显示NF-κB随流感病毒作用相同时间后结果出现明显差异；各组相比，B型流感病毒作用72h对NF-κB的激活作用最明显，而A型两种亚型之间无显著差异。TransAM P65试剂盒测定也得出相同的结果。结论流感病毒可激活体外培养MDCK细胞的核转录因子，且这种作用随时间而增强。