DNA纳米结构用于肿瘤细胞生物传感和药物递送的研究进展

<正>早期准确检测和诊断是癌症治疗成功的前提和关键。解决非特异性给药和耐药性是提高化疗效果的重要途径。DNA纳米结构是以DNA为材料,基于碱基互补配对原则,采用“自下而上”的精确设计所得到的二维或三维多种形状的纳米结构,现已逐渐应用于肿瘤领域。本文对近年来DNA纳米结构用于肿瘤细胞生物传感和药物递送方面的研究进展作一综述。     

基于纳米结构氧化锌的生物传感研究

Ⅱ-Ⅵ族材料,特别是其纳米结构材料,因为具有独特的功能,在多种领域得到广泛应用;而纳米ZnO材料因其良好的生物兼容性和高等电点,在生物传感器领域具有重要的应用优势和研究价值.近年来不断涌现的研究结果表明,纳米结构ZnO在力学传感、光学传感、气体传感、生物分子检测或DNA传感方面均具有广阔的应用前景.本文以本研究组近年来...     

基于核酸适配体的比率荧光探针定量检测血浆外泌体

目的:建立一种新型比率荧光探针法用于定量检测血浆中外泌体。方法:将Cy5荧光探针标记的CD63核酸适配体固定到链霉亲和素磁珠(MNPs)上,得到MNPs-Apt,加入SYBR GreenⅠ(SGⅠ)核酸染料构建比率荧光免疫磁珠(MNPs-Apt-SGⅠ)。当外泌体存在时,CD63核酸适配体捕获外泌体而发生结构改变,SGⅠ探针从双链中释放,免疫磁珠上的SGⅠ荧光强度大幅减弱,而Cy5荧光探针的荧光恒定,根据两种荧光探针被激发的荧光信号比值变化[Δ(F_C/F_S)]对外泌体进行定量检测。结果:外泌体浓度在8.0×10⁴～1.0×10⁷个/μL范围内,Δ(F_C/F_S)与外泌体浓度呈良好的线性关系。该方法灵敏度高,选择性好,检出限为4.0×10⁴个/μL。此外,所建立的方法成功地应用于血浆外泌体的检测。结论:构建的比率荧光探针法具有快速、灵敏、准确度高、特异性强等优点,可用于血浆样品外泌体的定量检测。     

氮化碳纳米片耦合适配体的赭曲霉毒素荧光检测新方法研究

目的建立快速测定药材外源性有害成分赭曲霉毒素（OTA）的含量,为药材快速质控技术提供前期基础。方法制定一段一端标记有羧基荧光素（FAM）荧光团的赭曲霉毒素DNA适配体序列片段:5’-GAT-CGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-FAM-3’,在20 mM Tris-HCl缓冲液（包含100 mM NaCl、5.0mM KCl、5.0 mM MgCl2,pH 7.4）中,以氮化碳纳米片（g-C3N4nanosheets,CNNS）为荧光淬灭基质,利用CNNS对游离态DNA和OTA-DNA复合态的吸附差异和其对FAM的荧光淬灭作用,实现对OTA的检测。结果该传感器对OTA的检测线性范围为1～100 nM,检测限为0.7 nM,且10倍浓度的赭曲霉毒素B和黄曲霉毒素B1均不会对检测结果有明显影响。结论氮化碳纳米片耦合OTA适配体的荧光检测方法具有较高的选择性和灵敏度,且操作简单,有望成为中药材中赭曲霉毒素含量测定的新方法。     

α-巨球蛋白对不同年龄阶段凝血酶生成能力的影响

目的:分析α-巨球蛋白对不同年龄段凝血酶的生成能力的影响。方法:采用全血TG测定方法年龄1个月～1岁、1岁～5岁、6岁～10岁、11岁～15岁,以及成年4个组各20例正常人进行总ETP、与结合α-巨球蛋白结合的凝血酶EPT、游离凝血酶EPT测定。结果:在11岁～15岁年龄段的与结合α-巨球蛋白结合的凝血酶EPT显著低于成年组;而总ETP和游离凝血酶EPT与成年组也有显著性差异,同时游离凝血酶EPT随年龄逐渐增高。结论:α-巨球蛋白对ETP的测定有影响,游离ETP的测定是必需的。     

医用纳米羟基磷灰石的制备

目的探讨超临界流体干燥制备医用纳米羟基磷灰石的方法。方法以Ca(NO3)2·4H2O和(NH4)2HPO4为原料,采用超临界流体干燥法(SCFD)制备了纳米羟基磷灰石,并用X射线衍射仪(XRD),透射电子显微镜(TEM),红外光谱(FTIR)等手段进行了表征。结果超临界干燥法制备的羟基磷灰石呈针状结晶,长度为100～200nm,宽度10～15nm。结论用溶胶凝胶结合超临界流体干燥法制备的纳米羟基磷灰石,具有结晶性好,分散性好、尺寸分布均匀,其结构与骨骼中的分级结构类似。     

α-常春藤皂苷丙烯酸树脂L100纳米粒的制备及其体外评价

目的制备和评价α-常春藤皂苷-丙烯酸树脂EudragitL100纳米粒（SPD．L100．NPs）。方法采用改良乳化一溶剂扩散法制备纳米粒,以粒径大小、包封率（EE）和多分散指数（PI）为指标,通过单因素试验和正交试验设计优化制备工艺。通过红外光谱、X射线衍射、差示扫描量热分析、体外释放试验等对纳米粒的相关性质进行评价。结果所制备的纳米粒外观圆整,平均粒径为（65．2±1．6）nm,EE为（99．13±0．20）％,PI值为0．384±0．008。药物在纳米粒中均被载体材料有效包裹,其体外释放具有显著的pH依赖性。结论采用改良乳化-溶剂扩散法可制备出包封率高、大小均匀的pH依赖性纳米粒。     

纳米金应用于肺癌靶向诊疗的研究进展

纳米金具有独特的物理化学性质及生物性质,经表面修饰后获得生物成像、光热治疗、靶向药物输送等能力,在肺癌的临床诊断和治疗方面具有极高的潜在应用价值。本文基于当前纳米金在肺癌诊断和治疗方面的研究状况,综述了纳米金的特性及其在分子成像、光热治疗、药物输送等肺癌靶向诊疗方面的应用。     

凝血酶预处理减轻凝血酶所致的脑水肿

目的:探讨凝血酶预处理对脑水肿的影响,检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在脑组织内的表达并分析其与凝血酶所致脑水肿的关系.方法:建立大脑皮质内血肿模型.选择健康成年SD大鼠40只,随机分为作为对照的未预处理组(ST组)和小剂量凝血酶(1 U)预处理组(TT组).观察不同时相脑组织含水量及钠含量的变化及TNF-α在脑组织内的表达.结果:ST组脑组织含水量和钠含量明显高于TT组,且第1天高于第3天.TT组与ST组脑组织内TNF-α阳性表达与含水量的变化相一致.结论:凝血酶预处理可以减轻凝血酶所致的脑水肿;TNF-α的表达与凝血酶所致的脑水肿有关.     

几种药物对脑梗死患者血小板活化功能的影响

探讨几种药物对血小板活化功能的影响。方法将44例脑梗死患者随机分成3组A组15例予盐酸丁咯地尔0．2,B组15例予葛根素0．4,C组14例予三七总皂甙0．4,均加入生理盐水250ml静脉滴注,1次·d-1,共用14d。在治疗前后采用流式细胞术(FCM)对患者血小板α-颗粒膜蛋白(CD62P)和凝血酶敏感蛋白(TSP)进行测定。结果B组与C组治疗后与治疗前比较CD62P与TSP均明显降低(P＜0．05),而A组治疗后与治疗前比较CD62P与TSP均无明显变化(P＞0．05)。结论葛根素与三七总皂甙对血小板活化功能有明显抑制作用,而盐酸丁咯地尔则未见影响。     

核酸适配体修饰聚酰胺-胺负载5-氟尿嘧啶纳米给药体系的制备表征及体外抗肝癌作用

目的研究核酸适配体(ZY1)修饰聚酰胺-胺(PAMAM)负载5-氟尿嘧啶-1-基乙酸(FUA)纳米给药体系(ZY1-PAMAM-FUA)的制备表征及其体外抗肝癌作用。方法将FUA、聚乙二醇(PEG)与PAMAM通过酰胺反应键合,然后将ZY1通过静电吸附与PEG-PAMAM-FUA缀合得到ZY1-PAMAM-FUA纳米给药体系。核磁共振氢谱仪(¹H-NMR)和傅里叶红外光谱仪(FT-IR)鉴定ZY1-PAMAM-FUA的化学结构,动态光散射技术(DLS)表征其粒径分布以及稳定性,紫外分光光度法检测其载药量和体外释药性能,流式细胞仪和荧光显微镜考察SMMC-7221肝癌细胞对Cy5标记的纳米给药体系的摄取能力;MTT法检测纳米给药体系对SMCC-7721肝癌细胞增殖活性的影响。结果ZY1-PAMAM-FUA粒径分布均匀,粒径为102.3 nm,其载药量为8.70%±0.43%,并具有良好的缓释性能。与PAMAM-FUA比较,ZY1-PAMAM-FUA可以更高效地靶向SMCC-7721细胞。ZY1-PAMAM-FUA具有良好的生物相容性且对SMCC-7721细胞具有良好的抗细胞增殖作用。结论ZY1-PAMAM-FUA制备方法简单稳定,具有良好的生物相容性,可以高效地将药物靶向SMCC-7721细胞发挥抗肝癌细胞增殖的作用。     

分子影像纳米探针在动脉粥样硬化的应用进展

心血管疾病是造成全球疾病负担的主要因素之一,动脉粥样硬化(As)是冠状动脉粥样硬化性心脏病的病理生理学基础,可以长期隐匿存在,直到斑块破裂和血栓形成,进而可导致急性冠状动脉综合征和猝死。如何有效利用影像方法监测As发生发展已成为迫在眉睫的问题。近年来,分子影像技术和纳米医学在As疾病早期诊断中的应用已成为一大热点。本文对纳米医学和分子影像技术在As疾病中的诊断应用进展进行综述。     

基于EpCAM核酸适配体分子信标的构建及其对胃癌细胞的靶向成像研究

目的 设计并构建靶向上皮细胞黏附分子(EpCAM)的核酸适配体分子信标MAB-SYL3L用于胃癌细胞的靶向识别/成像。方法 根据分子信标探针的设计原则,将靶向EpCAM的核酸适配体SYL3进行适当的截短,构建核酸适配体分子信标MAB-SYL3L。采用流式细胞术对MAB-SYL3L的特异性和亲和性进行分析,并观察不同温度下MAB-SYL3L的结合能力;采用流式细胞术和荧光显微镜对MAB-SYL3L与SGC-7901细胞一步法靶向识别/成像进行分析。结果 构建的MAB-SYL3L与SGC-7901细胞的结合具有高亲和性和高特异性,解离常数为(47.0±3.8)nmol/L。MAB-SYL3L与SGC-7901细胞的结合不受温度的影响,不需洗涤过程便能一步法实现SGC-7901细胞的靶向识别/成像。结论 成功构建出基于EpCAM的核酸适配体分子信标MAB-SYL3L,建立了一种快速、便捷的胃癌细胞靶向识别/成像方法。     

适配体靶向肿瘤的纳米递送系统的研究进展

核酸适配体是一类能特异性地靶向特定抗原的单链寡聚核苷酸。较之常用的抗体等靶头向性配体,适配体体积相对较小、免疫原性较低且易于体外筛选。目前,以适配体靶向肿瘤的纳米递送系统通常有3类：第1类将适配体修饰于脂质体、纳米粒、胶束等纳米载体上,形成适配体靶向的纳米载体;第2类直接将适配体与药物/荧光物质相连,形成适配体-药物/荧光物质共轭物;第3类将适配体自身作为药物的靶向载体。本文就近期以适配体靶向肿瘤的纳米递送系统的研究进展进行概述。     

硅纳米颗粒的生物毒理学研究

目的：研究硅颗粒制成纳米颗粒后的长期毒性及生殖毒性。方法：将硅纳米颗粒经尾静脉注入小白鼠体内，收集尿液离心后，电镜下观察是否有纳米颗粒的存在，并将小白鼠雌雄合笼交配产生后代，观察其产仔率，同时在电镜下观察纳米颗粒在亲代鼠各脏器中的分布。结果：硅纳米颗粒进入小鼠体内后，分布于小鼠各脏器，并能经肾脏排泄，同时注入纳米颗粒的小鼠能正常的繁殖后代。结论：硅纳米颗粒没有毒性并能在体内使用。     

凝血分子标志物监测在慢性肺心病急性加重期诊治中的意义

目的 :观察慢性肺心病急性加重期 (CPHDA)患者止凝血分子标志物的变化 ,以探索其在CPHDA诊断、治疗及预后判断中的意义。方法 :用ELISA法检测 40例CPHDA患者血浆凝血酶原片段1 2 (F1 2 )、凝血酶 -抗凝血酶复合物 (TAT)及D -二聚体 (D -D)。结果 :治疗前CPHDA患者F1 2 ,TAT及D -D显著增高 ;综合治疗 2 4h后PaO2 增高 ,PaCO2 亦较前稍增高F1 2 ,TAT显著降低 (P <0 .0 0 0 1) ,D -D稍降低 (P <0 .2 92 )。结论 :CPHDA患者的止凝血功能异常 ,可随病情好转逐渐改善 ,F1 2 ,TAT及D -D有助于弥漫性血管内凝血的防治 ,D -D可作为部分CPHDA预后判断的指标     

α_1—抗胰蛋白酶异质体的测量新方法及其临床意义的探讨

本文对a_1-抗胰蛋白酶异质体的检测方法(小扁豆凝集素亲合交叉免疫电泳法)进行改进。改进后的方法操作流程短、成本低、结果清晰、操作简便、不需预测a_1-抗胰蛋白酶总浓度,适合于临床广泛应用。本文用该法对原发性肝癌、转移性肝癌,其它器官癌肿、肝硬化及正常人血清中的a_1-抗胰蛋白酶异质体进行分析,发现小扁豆凝集素结合型a_1-抗胰蛋白酶百分比(LCA-R-AAT％)原发性肝癌组明显高于其它各组,以LCA-R-AAT(％)>25％为阳性标准,则原发性肝癌诊断的敏感性、特异性、准确性分别为80.6％、86.2％和84.3％,与小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白联合检测,可使原发性肝癌诊断的敏感性提高至100％(P<0.05),特异性和准确性分别为82.8％和89.9％(P均>0.05),表明LCA-R-AAT(％)的检测对原发性肝癌的诊断及鉴别诊断有一定的价值。