缺氧诱导因子1α对不同毒力刚地弓形虫从速殖子到缓殖子转化的影响

目的研究缺氧诱导因子1α(HIF1α)在3种弓形虫虫株由速殖子到缓殖子转化过程中的作用,阐释HIF1α对弓形虫不同毒力虫株转化的影响。方法选取3种不同毒力弓形虫虫株(Ⅰ型RH-GFP,Ⅱ型ME49-GFP和Ⅲ型VEG),分别感染野生型HIF1α细胞(HIF1αWT)和缺陷型HIF1α细胞(HIF1αKO),在碱性条件下进行诱导转化,通过免疫荧光试验(Immunofluorescence assay,IFA)检测不同条件下弓形虫诱导转化情况,通过细胞中RH-GFP和ME49-GFP荧光值的变化分析Ⅰ型和Ⅱ型弓形虫的转化水平。无荧光标记的Ⅲ型VEG虫株选用速殖子特异性表达蛋白SAG1作为弓形虫速殖子阶段的特异性标记。将包裹弓形虫缓殖子囊肿外层的囊壁作为缓殖子的特异性识别标记,用DBA抗体识别,将封片的载玻片置于荧光显微镜下观察并计数。将玻片上总量为300个被弓形虫感染的细胞分为3组:(1)只含有速殖子(GFP);(2)只含有缓殖子(DBA);(3)同时含有速殖子和缓殖子(GFP+DBA)。每个实验条件至少分别计数3张玻片并计算其平均值。结果最佳诱导转化时间为诱导后96h,Ⅰ型RH-GFP弓形虫感染的HIF1αKO细胞中均不包含DBA和GFP+DBA的细胞,而只含有速殖子GFP蛋白标记,RH-GFP感染的HIF1αWT细胞中偶见极少数速殖子到缓殖子的中间转化标识GFP+DBA;Ⅱ型ME49-GFP弓形虫感染的HIF1αKO细胞中无诱导转化,而在HIF1αWT细胞中有20%～25%只含有DBA的细胞,30%左右只含有GFP的细胞,其他大部分细胞均处于转化中期。Ⅲ型VEG弓形虫感染的HIF1αKO细胞中无诱导转化,而大部分HIF1αWT细胞中的VEG发生了速殖子到缓殖子的转化,完全转化为DBA的比例为55%～60%。结论 HIF1α是弓形虫虫株从速殖子转化为缓殖子的必要条件,且虫株转化速率与虫株毒力成反向调控。     

弓形虫感染后宿主细胞泛素化蛋白谱变化的特征分析

目的探究刚地弓形虫不同毒力虫株感染后宿主细胞泛素化蛋白谱变化的特点。方法将人外周血单核细胞诱导成巨噬细胞后分为3组,分别为未感染组、 RH感染组、 ME49感染组。2个感染组分别用弓形虫不同毒力株(RH株与ME49株)速殖子感染4 h后,收集3组细胞的总蛋白,应用泛素抗体富集泛素化蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白后进行蛋白定性质谱鉴定。检测完成后,搜索UniProt数据库中的人类数据库,利用Mascot鉴定蛋白质种类。蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析蛋白CDC42的泛素化水平。利用DAVID数据库对感染组与对照组、不同毒力株感染组之间的显著差异性泛素化蛋白(DUP)进行基因本体(GO)注释和富集分析,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)在线网站对DUP进行信号通路富集分析,利用STRING 11.0在线网站对DUP进行蛋白-蛋白相互作用网络分析。结果质谱筛选结果显示, RH感染组的特异性泛素化蛋白有194种,ME49感染组的有47种,两个感染组均筛选到的宿主泛素化蛋白有31种。Western blotting检测结果显示,宿主CDC42在弓形虫感染后泛素化水平显著升高。GO聚类分析显示,细胞组分聚类中,RH感染组的DUP主要涉及能量代谢以及蛋白质合成、加工的细胞器,有67个蛋白;ME49感染组的DUP则主要涉及细胞骨架结构,有11个蛋白;在生物进程聚类中两组差异不大,不同的是,ME49感染组的DUP富集到肝配蛋白受体信号通路(3个)和网格蛋白介导的内吞作用蛋白(2个);在分子功能聚类中,RH感染组的DUP主要富集在与RNA转录/加工、 GTPase活性、泛素连接酶相关的聚类项,分别有47、7和11个蛋白;ME49感染组的DUP则主要富集在肌动蛋白丝结合(3个)等GO项上。KEGG信号通路富集显示,RH感染组的DUP主要富集在核糖体(12个)、泛素介导的蛋白水解(8个)、吞噬体(7个)、核苷酸切除修复(4个)、致病性大肠埃希菌感染(4个)等通路;ME49感染组的DUP则富集在核糖体(3个)、肌动蛋白细胞骨架调节(3个)和致病性大肠埃希菌感染(2个)的通路上。RH感染组DUP相互作用网络图主要的节点蛋白包括60S核糖体蛋白L9、蛋白质转运蛋白SEC61亚单位α亚型1以及RAS相关C3肉毒毒素底物1等。RH感染组与ME49感染组共有泛素化蛋白的相互作用网络图主要节点蛋白则有核糖体蛋白以及细胞分裂周期蛋白42等。结论弓形虫感染引起宿主细胞的泛素化蛋白谱发生显著变化,与感染虫株的毒力相关;DUP包括细胞骨架、核糖体、泛素蛋白酶体途径的主要蛋白。     

刚地弓形虫入侵人包皮成纤维细胞前后转录组差异分析

目的利用RNA-seq技术分析刚地弓形虫入侵人包皮成纤维(HFF)细胞前后转录组的差异。方法将纯化的刚地弓形虫RH株速殖子与HFF细胞按3∶1的比例共培养,37℃、 5%CO2培养24 h后收集HFF细胞和弓形虫共培养物(感染组),以纯化弓形虫RH株速殖子作为对照组。提取感染组和对照组总RNA,纯化mRNA并构建转录组文库,利用BGISEQ-500平台进行高通量测序,测序获得的质控数据与NCBI数据库中的弓形虫基因组(GCF_000006565.2_TGA4_ncbi)进行比对,对感染组与对照组相比差异倍数≥2.0且P 0.05的差异表达基因进行功能注释、基因本体(GO)功能富集分类、富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析以及蛋白相互作用网络分析。结果共测序获得5 888个基因,差异基因986个,其中上调基因533个,下调基因453个。GO分析结果显示,富集的GO条目分别为膜、膜的组成部分、膜的固有成分、膜相关组分等。KEGG富集通路主要为胃癌、脂肪酸生物合成、钙离子信号等通路。蛋白相互作用网络分析结果显示,相互作用蛋白数最多的6个蛋白分别是TGME49_282200、 TGME49_305980 (PDHE3I)、 TGME49_316310 (SOD)、 TGME49_310440(MORN1)、 TGME49_237110和TGME49_222020 (PGKII)。结论弓形虫RH株速殖子入侵HFF细胞前后转录组存在差异,差异表达基因KEGG富集通路主要为胃癌、脂肪酸生物合成、钙离子信号等通路,筛选出6个相互作用蛋白数量最多的蛋白基因。     

弓形虫的热休克蛋白

Nagasawa等(1992)的一项研究发现,以无毒的Beverley株弓形虫缓殖子腹腔接种小鼠,腹腔内巨噬细胞上可以检测到鼠源的65kDa热休克蛋白(HSP65),而在有毒的RH株速殖子感染的小鼠中测不到这种HSP65。为此,本文作者对弓形虫3个有毒株(RH、ENT和P株)和3个无毒株(Bever-ley,ME和Fukaya株)表达的热休克蛋白作了进一步的研究。     

基于CRISPR/Cas9技术对刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420的研究

目的鉴定刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420在速殖子阶段的功能及其蛋白N端序列的亚细胞定位作用。方法在线设计针对TGGT1_310420的sgRNA,通过定点突变弓形虫CRISPR/Cas9载体pSAG1::CAS9-GFP-U6::sgUPRT上的sgRNA序列获得针对TGGT1_310420的CRISPR/Cas9载体。利用CRISPR/Cas9编辑技术将含有荧光蛋白mCherry和弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)的PCR片段m CherryTy_HXGPRT插入至TGGT1_310420内源基因编码N端前20个氨基酸残基之后。通过PCR鉴定片段是否正确插入;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析检测融合蛋白的表达情况。间接免疫荧光分析和共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位;空斑实验检测基因缺失株虫体表型的变化。结果 PCR和测序结果显示,成功构建了针对TGGT1_310420的CRISPR/Cas9载体, mCherry-Ty_HXGPRT序列定点插入至靶点位置。蛋白质印迹分析结果显示, mCherry融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为36 000;间接免疫荧光实验表明mCherry融合蛋白与弓形虫滑行相关蛋白45 (Tg GAP45)共定位于虫体的表膜。空斑实验检测结果显示, TGGT1_310420的缺失并未引起虫体出现可测的表型变化。结论 TGGT1_310420编码蛋白前20个氨基酸残基序列具有定位到弓形虫表膜的功能, TGGT1_310420在弓形虫速殖子阶段为非必需基因。     

人源弓形虫分离株的生物学鉴定及群体DNA含量分析

通过对不同分离株弓形虫抗原的分析 ,探讨弓形虫虫株间的差异性。取弓形虫 CAg阳性血液标本进行小鼠接种 ,对分离株进行生物学特性鉴定 ;采用流式细胞仪 ( FCM)对分离株弓形虫速殖子进行群体 DNA含量分析。结果在 5份 CAg阳性血液样本中分离到 4株弓形虫 ,两者符合率达 80 % ;经生物学鉴定结果显示 ,4个分离株的形态大小、毒力及抗原性均与 RH株弓形虫相似。上述 5株弓形虫速殖子 DNA含量分析均呈明显规律性 ,即均有 2个分布峰 ,但各虫株间的 2个分布峰中所占速殖子数存在显著性差异 ( P<0 .0 1)。表明检测弓形虫 CAg可作为弓形虫早期、急性期感染的确诊指标 ;采用流式细胞术进行 DNA群体分析 ,似可反映弓形虫虫株间的差异     

刚地弓形虫缓殖子分化相关细胞周期中有丝分裂前期的一个变化

-127弓形虫速殖子和缓殖子之间的转变是导致艾滋病患者弓形虫脑病的重要原因。转变的分子机制不明,可能与它们“发育钟”的开启有关;速殖子向缓殖子分化与细胞周期中的一个变化同时发生,而缓殖子在特殊细胞周期中启动的分化尚未明了。Radke等对弓形虫子孢子和缓殖子启动发育的时间和范围、包括限制速殖子复制的专性生长的改变、以及从新的S/G2晚期亚群体中导致缓殖子的分化进行研究,阐明缓殖子、子孢子转变成速殖子的生长调控、退出S期进入有丝分裂阶段的机制。研究对VEG株卵囊来源的子孢子、子孢子接种3d后产生的速殖子和卵囊接种40d后…     

5株内阿米巴14-3-3蛋白序列比较及生物信息学分析

目的 比较具有不同致病性以及毒力的5株内阿米巴的14-3-3蛋白序列,并选取溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株进行相关生物信息学预测,用以指导进一步实验研究。方法 收集各虫株滋养体的基因组DNA,根据Gen-Bank收录的溶组织内阿米巴编码基因序列设计特异引物,以基因组DNA为模板扩增目的基因片段,测序后利用生物信息学网站的各种在线分析工具和Genetyx软件ver 13.0,对所得序列进行比较,构建分子进化树,并对溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株的14-3-3蛋白进行相关的生物信息学分析。结果 5株内阿米巴属虫株均含有3个14-3-3基因,编码的氨基酸序列同源性较高,个别位点存在差异。取溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株14-3-3-1序列与其他物种的同源蛋白比较并构建分子进化树,与种系进化过程非常吻合。根据生物信息学分析结果预测,溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株14-3-3-1含720个碱基,编码239个氨基酸;14-3-3-2含717个碱基,编码238个氨基酸;14-3-3-3含723个碱基,编码240个氨基酸。3种异构体都带有2个14-3-3蛋白家族标记,含有多个潜在的磷酸化位点,但不含线粒体、过氧化物酶体等细胞器定位序列以及信号肽。该蛋白在大肠埃希菌中表达的半衰期〉10 h。结论 内阿米巴属14-3-3基因高度保守。生物信息学分析结果提示14-3-3蛋白是研究物种进化的理想分子。     

刚地弓形虫VEG株速殖子感染宿主细胞最优接种比的曲线拟合分析

目的 探讨不同浓度梯度的刚地弓形虫速殖子体外感染对侵蚀宿主细胞能力的影响及二者之间的最优接种比。方法 依照耗材规格和建议上液量,将宿主Vero细胞依次铺入96孔、24孔、12孔、6孔细胞板和25T培养瓶后培养12 h;常规纯化和计数VEG株速殖子并倍比稀释出8个梯度,分别用来感染上述细胞,使首个感染量与宿主细胞铺入数相等;继续培养4 d后全量收集培养物,经DNA提取和Real-time PCR定量检测,以7种回归模型对所得速殖子数的均值进行拟合分析(n=3),选出最佳函数类型并求极值,以此明确弓形虫感染与宿主细胞间的接种关系。结果 Real-time PCR定量结果显示,VEG株速殖子最初感染量及所用耗材培养规格对弓形虫侵蚀宿主细胞的能力均有影响,并且四次多项式函数为弓形虫感染宿主细胞4 d时的最佳拟合曲线方程;经求导和求极值发现,同种耗材培养条件下,弓形虫VEG株速殖子感染数与宿主Vero细胞间存在最优接种比例关系。结论 96孔、24孔、12孔、6孔细胞板和25T培养瓶内弓形虫速殖子与宿主细胞间的接种比例依次为1/7.20、1/5.32、1/4.53、1/4.03和1/43.02。     

弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16基因重组表达载体的构建及其对A549细胞STAT3/6磷酸化水平的影响

目的探索弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16在A549细胞中的功能。方法提取弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(ME49)型虫株总RNA,PCR扩增ROP16基因全长序列后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染A549细胞,采用Western blot方法检测细胞中STAT3/6磷酸水平,采用实时荧光定量PCR检测IL-12、iNOS、ARG1mRNA表达水平。结果 PCR扩增Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16基因全长为2148bp。双酶切和测序验证重组载体构建正确,pEGFP-N1-RH ROP16和pEGFP-N1-ME49ROP16过表达载体转染A549细胞后ROP16mRNA表达水平较未转染组上调(P0.05,F=824.184,270.904),pEGFP-N1-ME49ROP16转染A549细胞p-STAT3/6表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P0.05,F=1.051,1.203),IL-12、iNOS mRNA与对照组表比呈高表达(P0.01,F=157.705,173.623)。pEGFP-N1-RH ROP16转染组相比A549细胞对照组p-STAT3/6表达水平上调(P0.05,F=121.227,68.324),IL-12mRNA表达下调(P0.01,F=186.397),ARG1mRNA表达上调(P0.01,F=126.236)。结论弓形虫Ⅰ型RH株ROP16蛋白具有激活p-STAT3/6作用,且能使ARG1 mRNA的表达上调,IL-12 mRNA的表达下调,而弓形虫Ⅱ型ME49虫株ROP16蛋白则无激活p-STAT3/6作用,但能使IL-12mRNA和iNOS mRNA的表达上调。     

弓形虫胚层发育相关蛋白基因的克隆和序列分析

目的 对15个弓形虫虫株的弓形虫胚层发育相关蛋白(TgERP)基因进行克隆和序列分析,了解其变异和进化情况,为评价该蛋白在血清学诊断和疫苗防疫应用上的价值提供理论基础。方法 设计TgERP基因的PCR引物,对15个弓形虫虫株进行PCR扩增和序列测定,测序结果利用Puzzle 5.2、Paup 4.0和DNAStar 5.0软件进行分析。结果 TgERP基因包含的完整开放阅读框(ORF)长度均为315 bp,A+T含量在46.67%～46.98%之间,仅有1个碱基发生变异,变异率为0%～0.32%。编码104个氨基酸,变异率在0%～0.96%之间。系统进化分析显示,TgERP基因序列虽然能够将弓形虫I型虫株与II/III型虫株区分开,但却不能区分所有基因型的虫株。结论 TgERP基因在各基因型虫株中十分保守,不适合作为遗传标记分子来区分不同基因型的弓形虫虫株。     

Immunization with a DNA plasmid encoding the SAG1 (P30) protein of Toxoplasma gondii is immunogenic and protective in rodents

Immunization with DNA can induce humoral and cell-mediated immune responses, both of which are important in conferring immunity to Toxoplasma gondii. The efficacy of genetic vaccination with a cDNA encoding the T. gondii SAG1 (P30) surface antigen was evaluated. Sera of immunized mice showed recognition of T. gondii tachyzoites by immunofluorescence and exhibited high titers of antibody to SAG1 by ELISA. SAG1-stimulated splenocytes from vaccinated mice produced primarily interferon-gamma and interleukin-2. Vaccinated mice survived challenge with 80 tissue cysts of ME49 strain, whereas all control mice died; challenge with 20 tissue cysts resulted in fewer brain cysts, compared with controls. Challenge of vaccinated rats with VEG strain oocysts resulted in a reduction in brain cysts. No protection was observed when mice were challenged with the highly virulent RH strain tachyzoites. These results suggest that nucleic acid vaccination can provide protection against T. gondii infection in mice.     

Protective effects of immunization with a recombinant cyst antigen in mouse models of infection with Toxoplasma gondii tissue cysts

A portion of the major Toxoplasma gondii tissue cyst antigen (MAG1) was expressed in bacteria as a fusion to glutathione S-transferase (GST) and the purified fusion protein (rMAG1) was used to immunize mice in an attempt to induce protective immunity against challenge with live cysts from the T. gondii ME49 strain. Sixty percent of mice immunized with rMAG1 and challenged with 500 cysts of the T. gondii ME49 strain survived, while only 20% of mice immunized with GST alone survived, suggesting a protective effect specific to the MAG1 portion of the recombinant protein. In a model of chronic infection with ME49 cysts, rMAG1-immunized mice had significantly fewer cerebral cysts and reduced inflammation in the brain compared with mice immunized with GST alone.     

抗弓形虫水通道蛋白多肽抗体的制备及鉴定

目的 研制抗弓形虫水通道蛋白(TgAQP)的特异性多肽抗体,并应用于检测弓形虫ME49株中水通道蛋白的表达和亚细胞定位。方法 根据TgAQP氨基酸序列设计B细胞抗原多肽,并将合成的多肽与KLH偶联作为免疫原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA、Western blot和免疫荧光的方法对所得抗体进行鉴定。结果 选定并合成抗原表位多肽,与KLH偶联作为免疫原制备多克隆抗体;经ELISA测定其多肽抗体效价达1∶40 000; Western blot表明制备的抗体能特异地识别天然弓形虫中29.9 kDa处的条带,与预测的TgAQP相对分子量大小相符;免疫荧光检测到抗血清识别的蛋白定位于弓形虫胞质中。结论 制备了抗弓形虫水通道蛋白多肽的多克隆抗体,为进一步研究弓形虫水通道蛋白的生物学功能和代谢特点奠定了基础。     

3株弓形虫GRA7基因的保守性鉴定

目的　比较弓形虫不同地理株 (RH株、ZS2株、GT株 )GRA7基因的异同。　方法　从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因 ,对目的基因用限制性内切酶 (Esp3I、CfrI、MboI)酶切并比较。将目的基因克隆至pGEX 4T 1质粒 ,转化大肠埃希菌JM 10 9,进行测序并比较。　 结果　PCR扩增出 3株弓形虫的目的基因片段 ,大小均在 5 0 0～ 75 0bp之间 ;经 3种限制性内切酶酶切 ,其大小均与理论值相符 ;3株弓形虫GRA7基因序列相同。　 结论　弓形虫不同地理株GRA7基因具有高度保守性     

VEG株弓形虫卵囊对昆明小鼠的毒力研究

目的探究VEG株弓形虫卵囊对中国昆明小鼠的致病性。方法分别选择1个,100个~108个的VEG株弓形虫卵囊灌胃昆明小鼠,采用MAT、HE和IHC方法研究小鼠对弓形虫的感染情况,并分析小鼠感染率,生存率及其大脑内的弓形虫包囊数量。结果≥10~2个VEG株弓形虫卵囊可引起小鼠100%感染,最低致死剂量为10~2个卵囊,100%致死剂量为108个卵囊,急性期死亡时间为7DPI~14DPI,弓形虫的成囊率是32.14%(9/28),包囊数量为9~857个/只小鼠大脑,感染小鼠生存率为67.44%(29/43),最长存活时间≥390DPI。结论 VEG株弓形虫卵囊对昆明小鼠的毒力中等,包囊形成率较高。     

Kinetics of the nucleoside triphosphate hydrolase of Toxoplasma gondii in mice with acute and chronic toxoplasmosis

The kinetics of the nucleoside triphosphate hydrolase (NTPase) of Toxoplasma gondii was examined using an avidin-biotin sandwich-ELISA (ABS-ELISA) based on an anti-NTPase monoclonal antibody, 6C6. The RH and ME49 strains of the parasite were used to produce acute and chronic infections in mice, respectively. In the acute model, detectable serum concentrations of NTPase were observed from day 1 post-infection and gradually increased until the death of the mice. They were associated with parasitaemia (as estimated by bioassay). No anti-T. gondii antibody could be detected at any time. In the chronic model, in which 20 T. gondii ME49 cysts were given to each mouse per os, the NTPase concentration generally increased from day 3, peaked between days 7 and 14 and then declined. However, one of the four mice used still had a high serum concentration of NTPase on day 35. Again, detectable NTPase concentrations occurred when the mice had parasitaemias. Antibody to T. gondii was detected from day 7 (IgM) or 10 (IgG) and brain cysts were observed from day 14. Since detectable serum concentrations of NTPase appear to be associated with parasitaemia in both acute and chronic toxoplasmosis, the ABS-ELISA of the enzyme may make a useful diagnostic tool.     

弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达

目的在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法采用聚合酶链反应(PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因，经DNA序列分析后导入表达载体。PGEX-5X-3。然后在大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP中进行表达，以SDS-PAGE和Westen blotting进行鉴定，用GST亲和层析柱纯化表达产物。结果1．在我们所比较的336个碱基中，弓形虫昆山分离株与RH株之间碱基基本一致。2．得到一分子量为49kDa的融合蛋白。占大肠杆菌总蛋白的25．55％，通过Westen blotting证实，该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所识别。结论1．弓形虫昆山分离株和RH株的GRA6基因片段几乎完全一致；2．在大肠杆菌中得到了高效表达的融合蛋白；3．该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所别．可用于构建具有高度敏感性和特异性的弓形虫病检测试剂盒．     

Cloning and characterization of a lymphoid-specific, inducible human protein tyrosine phosphatase, Lyp

Protein tyrosine phosphatases act in conjunction with protein kinases to regulate the tyrosine phosphorylation events that control cell activation and differentiation. We have isolated a previously undescribed human phosphatase, Lyp, that encodes an intracellular 105-kD protein containing a single tyrosine phosphatase catalytic domain. The noncatalytic domain contains four proline-rich potential SH3 domain binding sites and an NXXY motif that, if phosphorylated, may be recognized by phosphotyrosine binding (PTB) domains. Comparison of the Lyp amino acid sequence with other known proteins shows 70% identity with the murine phosphatase PEP. The human Lyp gene was localized to chromosome 1p13 by fluorescence in situ hybridization analysis. We also identified an alternative spliced form of Lyp RNA, Lyp2. This isoform encodes a smaller 85-kD protein with an alternative C-terminus. The lyp phosphatases are predominantly expressed in lymphoid tissues and cells, with Lyp1 being highly expressed in thymocytes and both mature B and T cells. Increased Lyp1 expression can be induced by activation of resting peripheral T lymphocytes with phytohemagglutinin or anti-CD3. Lyp1 was found to be constitutively associated with the proto-oncogene c-Cbl in thymocytes and T cells. Overexpression of lyp1 reduces Cbl tyrosine phosphorylation, suggesting that it may be a substrate of the phosphatase. Thus, Lyp may play a role in regulating the function of Cbl and its associated protein kinases.     

弓形虫强毒株和弱毒株致密颗粒蛋白1基因的比较研究

目的比较弓形虫强毒株RH株、桂弓株和弱毒株B36株致密颗粒蛋白1(GRA1)基因片段的异同。方法分别从接种RH株、桂弓株、B36株弓形虫的小鼠腹水中收集、纯化虫体,提取基因组DNA,PCR扩增3个虫株的致密颗粒蛋白1(GRA1)目的基因片段;构建pMD-18-T/GRA1重组质粒,PCR和双酶切鉴定其准确性;测序并用NCBI中Blast软件和MEGA3.1软件分析比较3种不同毒力株GRA1基因的异同。结果获得3株弓形虫的GRA1目的基因片段并构建了pMD-18-T/GRA1重组质粒,经鉴定目的基因片段大小与预期理论值相符。测序分析3不同毒力株GRA1基因片段相似为100%。结论弓形虫强毒株RH株、桂弓株和弱毒株B36株的GRA1基因片段极其相似,且高度保守。因此认为弓形虫GRA1基因具有较高应用价值。