缺氧应激对人肝癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨缺氧应激对人肝癌细胞HepG2黏附、侵袭和迁移能力的影响.方法 缺氧(5%O2、5%CO2、90%N2)和常氧培养HepG2细胞.细胞.基质黏附实验测定常氧组和缺氧4、12、24h组HepG2细胞黏附能力;细胞侵袭和迁移实验测定缺氧和常氧24 h组HepG2细胞侵袭和迁移能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定常氧组和缺氧4、12、24 h组HepG2细胞缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α mRNA的表达量.结果 随着缺氧时间的延长HepG2细胞的黏附能力明显增强(P＜0.01),缺氧24 h组HepG2细胞侵袭和迁移能力明显高于常氧组(P＜0.01).常氧下HepG2细胞不表达HIF-1α mRNA,缺氧4 h时HIF-1α mRNA表达量最高,随后下降(P＜0.01),但仍高于常氧组.结论 缺氧应激上调HepG2细胞HIF-1α mRNA的表达,促进HepG2细胞黏附、侵袭和迁移.     

姜黄素对肝细胞癌耐药细胞上皮间质转化的影响及分子机制研究

目的探讨姜黄素对肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM上皮-间质转化（EMT）的影响及分子机制。方法取人肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM,以预实验确定的姜黄素合适浓度20μmol/L处理细胞。采用噻唑蓝溴化四唑法、划痕实验、Transwell实验分别检测姜黄素对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,Westernblot法检测姜黄素对EMT标志物及NF-κB/Snail通路相关蛋白表达的影响。结果相较于HepG2/ADM组,HepG2/ADM+姜黄素组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达上调（P＜0.05）,N-cadherin、Vimentin、NF-κBp65、Snail蛋白表达均明显下调（均P＜0.05）。HepG2/ADM细胞过表达Snail后,由姜黄素诱导的E-cadherin表达上调、N-cadherin和Vimentin表达下调均被逆转（均P＜0.05）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显增强（均P＜0.05）。结论姜黄素能够抑制HepG2/ADM细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过NF-κB/Snail通路抑制细胞的EMT过程。     

在肝癌细胞中HBx对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的揭示在常氧和缺氧状态下，缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在HepG2中的表达及HBx对HIF-1α表达的调节。方法 对肝癌细胞HepG2及HBx转染的HepG2分别进行常氧和缺氧培养，其中缺氧状态用1％O2、5％CO2和94％Nz模拟，缺氧时间分别为1h，2h，4h，8h，16h，32h。采用免疫印迹检测HIF-1α表达。结果 在常氧状态下，HepG2细胞中HIF-α几乎无表达而HBx转染的HepG2明显表达。二者在缺氧1h开始均表达，8h达到高峰，16h后逐渐下降，测量二者缺氧8h时的表达，发现HBx转染的HepG2细胞中HIF-1α的表达增高。结论 在常氧状态下，HBx可诱导HIF-1α在HepG2细胞中表达。在缺氧状态下，HIF-α在HepG2细胞中表达与缺氧的时间相关且HBx可增强缺氧状态下HIF-1α在HepG2细胞中表达。提示HBx可能通过HIF-1α通路在肝癌的形成过程中发挥重要的作用。     

IGFBP2增强IGF-1诱导的HepG2细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱导人源肝癌(HCC)细胞株HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制.方法 选用15.6、31.2、62.5、125、250 ng/ml的IGFBP2与50 ng/ml的IGF-1联合刺激HepG2细胞.用CCK-8法检测细胞增殖,transwell法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞内信号通路相关蛋白的活化和表达.结果 与IGF-1单独刺激相比,IGFBP2与IGF-1联合作用可增强HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力;IGFBP2与IGF-1联合刺激增加HepG2细胞株中IGF1R、Akt和ERK磷酸化水平,而对总表达无明显改变,同时上调早期生长反应蛋白1(EGR1)的表达.结论 IGFBP2通过活化Akt及ERK信号通路增强IGF-1诱导HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的能力.     

低氧诱导对人肝癌SMMC7721细胞生物学行为的影响

目的研究低氧对体外培养的人肝癌细胞株SMMC7721增殖、细胞周期、凋亡和黏附、迁移能力的影响,探讨其中可能存在的分子机制.方法通过氯化钴诱导人肝癌SMMC7721细胞低氧,MTT法、流式细胞术、细胞黏附试验、transwell小室迁移实验观察低氧对肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期以及细胞黏附和迁移能力的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测低氧对细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP2）mRNA和蛋白表达的影响.结果 MTT法显示氯化钴诱导的低氧对肝癌细胞生长起抑制作用;低氧24 h,流式细胞术显示细胞凋亡、坏死增加,细胞周期G0/G1期、S期细胞比例减少,G2/M期比例增加;黏附试验显示低氧后细胞黏附力增强（P〈0.01）,transwell小室实验显示,低氧后细胞迁移能力较常氧时明显增加（P〈0.05）;RT-PCR和细胞免疫化学检测显示低氧条件下HIF-1α、VEGF、MMP2的mRNA和蛋白表达均较常氧时增加（P〈0.05）.结论氯化钴诱导低氧可抑制SMMC7721细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡、坏死增加,同时细胞黏附、迁移能力增强;低氧时HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,并通过调节及其下游靶基因VEGF、MMP2的表达参与了这一生物学行为的转变.     

乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响

[目的]探讨乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响及其机制。[方法]MTT法检测常氧和乏氧条件下紫杉醇对SPCA1细胞的毒性作用;流式细胞术检测紫杉醇对SPCA1细胞周期和凋亡的影响。采用定量RT-PCR和Western Blotting观察SPCA1细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、多药耐药基因-1（Mdr-1）mRNA和P-糖蛋白（P-gp）的表达变化。[结果]常氧和乏氧条件下,紫杉醇对SPCA1细胞的IC50分别为8．45μmol／L和18．17μmol／L（P〈0．05）,乏氧时紫杉醇诱导SPCA1细胞凋亡较常氧条件下明显减少（P〈0．05）,但乏氧对细胞周期无明显影响。乏氧能明显增加HIF-1α蛋白表达,但对Mdr-1mRNA和P-gp蛋白表达无明显影响。[结论]乏氧诱导SPCA1细胞对紫杉醇耐药,但Mdr-1可能不是乏氧诱导耐药的主要因素之一,乏氧条件下SPCA1细胞耐药可能还存在其他机制。     

美洲大蠊提取物对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究

探讨美洲大蠊提取物体外对肝癌（HCC）HepG2细胞增殖、迁移能力，以及细胞中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。方法噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；划痕实验检测美洲大蠊提取物对HCC细胞迁移能力的影响；免疫细胞染色法、酶联免疫吸附试验（ELISA）检测美洲大蠊提取物对细胞中VEGF蛋白表达的影响。结果MTT和划痕实验结果表明，美洲大蠊多肽、CⅡ-3和脱脂膏能抑制人HCC HepG2细胞的增殖和迁移，且呈时间、剂量依赖关系；免疫细胞化学染色法和ELISA 法结果显示，美洲大蠊多肽、CⅡ-3及脱脂膏能下调人HCC HepG2细胞中VEGF 蛋白的表达。结论美洲大蠊多肽、CⅡ-3 及脱脂膏能抑制人HCC HepG2细胞增殖和迁移，同时能降低HepG2细胞中VEGF蛋白的表达，且美洲大蠊多肽的作用优于CⅡ-3 和脱脂膏。     

低氧促进C2C12细胞增殖及相关机制探讨

目的：探讨低氧对小鼠骨骼肌成肌细胞系C2Cl2细胞增殖的影响及其增殖的可能相关机制。方法：采用血细胞计数板法和流式细胞仪观察低氧（10％O2）对C2Cl2细胞数量和增殖指数的影响；用RT—PCR和Western blot方法检测低氧诱导因子-1α（HIF—1α）mRNA和蛋白水平的表达。结果：低氧组细胞较常氧组细胞数量和增殖指数增加（P〈0．01）；HIF—1αmRNA和蛋白水平变化在常氧组和低氧组细胞中无显著差异。结论：低氧可促进C2Cl2细胞的增殖，其增殖机制可能不是直接通过HIF—1αmRNA和（或）蛋白水平量的多少来调控。     

Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

低氧下沉默HLA-G对JEG-3细胞、EPAS1表达及其生物学行为的影响

目的 探讨在低氧条件下，沉默绒毛膜滋养细胞系JEG-3细胞的人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)表达对JEG-3细胞生物学功能的影响和通过内皮PAS1区域蛋白1(EPAS1)低氧反应通路参与高原低氧条件下子痫前期发病的分子机制。方法 通过转染小干扰RNA(siRNA)抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达，将转染后的JEG-3细胞分为4组：常氧对照组、低氧对照组、常氧抑制组、低氧抑制组。采用CCK-8实验及体外侵袭实验法检测4组细胞的增殖及侵袭能力；用流式细胞术检测4组细胞凋亡和细胞周期的影响；通过qPCR技术及Western blot法检测4组细胞中HLA-G和EPAS1 mRNA及蛋白的表达水平。结果 (1)与常氧对照组相比，低氧对照组及常氧、低氧抑制组均可使JEG-3细胞的增殖活性、侵袭能力降低，使得细胞凋亡率显著升高，低氧对照组与低氧抑制组产生了明显的坏死细胞群。低氧条件下，降低HLA-G的表达会提高细胞坏死率。无论在常氧还是低氧下，抑制HLA-G表达均使细胞被阻滞在G1期。(2)与常氧对照组相比，低氧对照组及常氧、低氧抑制组均降低HLA-G蛋白表达，且低氧和抑制HLA-G蛋白表...     

紫草素对肝癌细胞增殖的影响

目的研究紫草素对肝癌细胞株HepG2增殖和表达增殖诱导配体（A proliferation-inducing ligand，APRIL）水平的影响，并与化疗药顺铂进行对比。方法MTT法检测紫草素对HepG2细胞增殖的抑制作用，采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法证实肝癌细胞株HepG2上APRIL的表达，实时荧光定量PCR法检测加入不同终浓度的紫草素和顺铂后24h、48h和72h HepG2细胞表达APRIL mRNA的水平。结果紫草素对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用，呈时间和剂量依赖性，HepG2细胞上有APRIL的表达，加入不同浓度的紫草素和顺铂后，HepG2细胞A-PRIL mRNA的水平均逐渐升高，至72h表达最高并与空白对照相比均有显著差异（P〈0．05）。结论紫草素可抑制肝癌细胞的增殖，但与顺铂一样，残存癌细胞有因APRIL表达升高而增殖能力增强的潜在趋势。     

健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响

目的：本研究旨在探讨：①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响;②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响;②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用。结果：①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性：同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异（P〈0.01）。②健脾化瘀方高、中浓度（2、1mg/mL）作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低（P〈0.01）。健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少（P〈0.05）。③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用（P〈0.05）。结论：①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用;②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力;③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用。     

Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法应用免疫细胞化学法检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFRs）蛋白的表达；ELISA法检测HepG2细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达；Bevacizumab处理HepG2细胞48h后，MTT法检测Bevacizumab对细胞增殖的抑制作用，用流式细胞仪检测并分析细胞凋亡变化。设不加药物的HepG2细胞为对照组。结果HepG2细胞中VEGF和VEGFR蛋白呈阳性表达，其细胞培养上清液中存在VEGF蛋白分泌；Bevacizumab可抑制HepG2细胞增殖；并可诱导HeF，G2细胞的凋亡，凋亡率为（17．04±0．14）％，明显高于对照组（2．85±0．08）％（P〈0．05）。结论Bevacizumab町直接抑制肝癌细胞株HepG2的增殖，并诱导其凋亡；为Bevacizumab除抗血管生成之外的抗肿瘤作用机制提供新的研究依据；为Bevacizumab在肝细胞癌治疗的应用提供理论依据。     

siRNA沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响*

目的 探讨沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（TNFAIP2）表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响。方法 使用Lipofectamine 2000介导siRNA转染胶质瘤细胞U87和U251下调TNFAIP2 mRNA的表达;运用细胞划痕及Transwell实验检测沉默TNFAIP2表达对U87及U251细胞迁移、侵袭的影响;通过CCK-8实验检测沉默TNFAIP2表达对胶质瘤细胞U87及U251增殖的影响。结果 Lipofectamine 2000介导si-TNFAIP2转染U87及U251细胞可下调TNFAIP2 mRNA的表达;沉默TNFAIP2表达可降低胶质瘤细胞U87和U251迁移侵袭的能力;沉默TNFAIP2表达可抑制U87及U251细胞的增殖。结论 siRNA沉默TNFAIP2表达可抑制胶质瘤细胞的侵袭和增殖。     

沉默中期因子对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的  探讨中期因子（MDK）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及对肿瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法  选取2015年1月-2016年10月该院收治的50例肝癌患者组织标本，免疫组织化学染色分析组织中MDK的表达。利用沉默核糖核酸（siRNA）沉默人肝细胞癌HepG2细胞内MDK表达，分别采用CCK-8、流式细胞仪及插入式细胞培养皿、穿透小室（Transwell）检测沉默MDK后HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化。结果  肝癌组织中MDK蛋白的表达水平较癌旁组织提高（χ2=19.643，P =0.000）；在HepG2细胞中，沉默MDK的表达可抑制HepG2细胞增殖（F =22.204，P =0.037）和侵袭（t =5.611，P =0.008）能力，并提高HepG2细胞的凋亡比例（t =5.702，P =0.006）。结论  MDK在肝癌中表达升高，沉默肝癌HepG2细胞内MDK表达能够抑制肝癌细胞生长和侵袭。

     

肝癌组织中乙肝病毒X蛋白与缺氧诱导因子-1a的表达及关系

目的探讨乙型肝炎病毒 x 蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)和缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor,HIF-la)在肝癌组织中的表达及关系。方法采用免疫组织化学染色方法检测78例经福马林固定、石蜡包埋的原发性肝癌组织标本中HBx 和 HIF-1α的表达;免疫荧光检测 HepG2及稳定转染 HBx 基因的 HepG2(HBx-transfected HepG2)细胞中 HIF-1α的表达。结果78例肝癌组织标本中,HBx 和 HIF-1α免疫组织化学染色阳性率分别为74.23%(58/78)和69.23%(54/78);免疫荧光检测表明:正常氧状态下,HeptG2中 HIF-1α的表达阴性而 HBx-transfected HepG2中表达阳性,主要位于细胞浆.部分位于细胞核.在缺氧状态下,HeptG2和 HBx-transfected HepG2的细胞质和细胞核均有表达.结论 HBx 及 HIF-1α在人肝细胞肝癌组织中广泛表达,二者存在明显相关(P<0.01),在正常氧状态下,HBx 可诱导 HIF-α在 HepG2细胞中表达。提示:共同表达可能对原发性肝癌细胞的形成有重要作用。     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

肝星状细胞经趋化因子SDF-1/CXCR4轴途径促进肝癌细胞侵袭的作用及其机制

目的：探讨肝星状细胞（HSC）通过SDF-1/CXCR4轴对肝癌细胞侵袭的影响和可能机制,为研究肝癌的侵袭过程提供依据。方法: 采用Western blotting和RT-PCR检测HSC LX02和肝癌细胞MHCC97、SMMC7721、Hep3B、HepG2中SDF-1和CXCR4的表达。采用Transwell实验检测LX02共培养或外源性SDF-1干预对肝癌细胞HepG2以及CXCR4基因沉默后的HepG2侵袭的影响。Western blotting法检测上皮标志E-Cadherin和间质标志Vimentin的表达水平。结果：与肝癌细胞比较,LX02中趋化因子SDF-1呈高表达（P<0.05）。4株人肝细胞癌细胞均有CXCR4高表达。HSC或SDF-1均能促进肝癌细胞HepG2侵袭（P<0.05）,并诱导E-Cadeherin蛋白表达下调,Vimentin蛋白表达上调。通过RNA干扰技术靶向沉默肝癌细胞CXCR4基因后,HSC和SDF-1对肝癌细胞HepG2侵袭能力均无明显影响（P>0.05）,肝癌细胞E-Cadeherin、Vimentin蛋白及mRNA表达水平亦无明显变化。结论：HSC可通过SDF-1/CXCR4轴促进肝癌细胞侵袭,其机制可能与诱导肝癌细胞上皮-间质转化有关。