血管紧张素Ⅱ诱导A549细胞趋化因子的分泌

目的 通过研究人重组血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人肺腺癌A549细胞核转录因子-κB(NF-κB)和趋化因子白细胞介素-8(IL-8)的影响,探讨机械通气肺损伤的致病机制.方法 人肺腺癌A549细胞株以2.0×105/mL接种在12孔细胞培养板内,随机(随机数字法)将细胞分为4组(n=24):(A)对照组不加药物;(B)AngⅡ1 h组培养液中加入终浓度为1×10-6mmol/L的AngⅡ刺激1 h;(C)AngⅡ2 h组培养液中加入终浓度为1×10-6 mmol/L的AngⅡ刺激2 h;(D)AngⅡ4 h组培养液中加入终浓度为1×10-6 mmol/L的AngⅡ刺激4 h.收集细胞培养上清液,用ELISA法测定IL-8含量;提取细胞总RNA,采用逆转录PCR技术检测Ⅱ-8 mRNA的表达水平;提取细胞核蛋白,用凝胶电泳迁移率法检测NF-κB的活性,Western Blot法检测NF-κB p65亚基的水平.采用方差分析检验总体差异,组间两两比较使用q检验.结果 ELISA法测得AngⅡ1 h组细胞培养上清液中IL-8含量(135.35±28.93)pg/mL较对照组(29.59±8.36)pg/mL显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组IL-8含量(357.12±57.21)pg/mL较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组IL-8含量(1732.13±261.73)pg/mL较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异具有统计学意义(F=58.41,P＜0.05).PCR检测AngⅡ1 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.49±0.08)较对照组(0.13±0.03)显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.71±0.10)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.88±0.11)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.05),4组总体差异具有统计学意义(F=19.08,P＜0.05).凝胶电泳迁移率法测得AngⅡ1 h组NF-κB的活性(Au·mm)(139.76±11.72)较对照组(70.37±6.57)显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组NF-κcB的活性(Au·mm)(198.90±18.95)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.05);AngⅡ4 h组NF-κB的活性(388.73±26.27)(Au·m)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异具有统计学意义(F=23.15,P＜0.05).Western blot法检测AngⅡ1 h组NF-κB p65的水平(Au·mm)(73.97±5.34)较对照组(33.05±6.23)显著增高(P＜0.01);Ang Ⅱ2 h组NF-κB p65的水平(Au·m)(168.72±8.40)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组NF-κB p65的水平(254.63±12.26)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异有统计学意义(F=16.33,P＜0.05).结论 AngⅡ可通过激活人肺腺癌A549细胞的NF-κB系统,显著上调趋化因子IL-8的表达,引起中性粒细胞的浸润和活化,造成急性肺损伤,其作用呈时间依赖性,这可能是机械通气肺损伤的致病机制之一.     

一氧化氮和白介素-10抑制核因子-κB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4 h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1 h最显著(P＜0.01).结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

一氧化氮和白介素—10抑制核因子—kB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1h最显著(P＜0.01).结论LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

血管紧张素Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的影响

目的 阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺泡巨噬细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 收集正常或其他肺病患者正常肺叶组织肺泡灌洗液,分离、纯化、培养肺泡巨噬细胞.予10-6M AngⅡ刺激15,30,60,120 min.另外,予AT-1受体阻断剂irbesartan(10-6M)预处理肺泡巨噬细胞60 min后再予10-6 M AngⅡ刺激60 min.设置对照组.凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NFκB的结合活性.免疫蛋白质印迹检测胞浆内IκBα的表达.RT-PCR检测TNF-α和ICAM-1的表达.应用SPSS 13.0软件进行One-Way ANOVA方差分析,多重比较采用LSD法.以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 AngⅡ刺激肺泡巨噬细胞15 min NF-xB结合活性增强,60 min达到峰值.AT-1受体阻断剂irbesartan可阻断NF-κB结合活性增强.与对照组(1.0)相比,AngⅡ处理组(0.29±0.11)ⅠκBα旺表达减弱,且差异具有统计学意义(P=0.013).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组ⅠκBα表达(0.83±0.12)则增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与对照组(0.42±0.099)相比,AngⅡ处理组TNF-α(1.13±0.17)表达增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.77±0.15)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.02).与对照组ICAM-1表达(0.16±0.050)相比,AngⅡ处理组(0.55±0.08)增强且差异具有统计学意义(P=0.003).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.32±0.07)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.001).结论 Ang Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB通路有正向调节作用.     

脂多糖对中性粒细胞核转录因子-κB活性的影响

目的：探讨在脂多糖（LPS）刺激下,中性粒细胞核转录因子-κB（NF-κB）活性变化及其抑制因子（IκBα）的影响。方法：离体培养人中性粒细胞,分为来普霉素B（LMB）干预组（A组）、LPS刺激组（B组）和LPM＋LPS组（C组）。各组分别在刺激后0、15、60、120min,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,用Western-blot检测细胞核、浆中IκBα含量。结果：A组中各时相点NF-κB活性无明显变化;同一时相点细胞核、浆之间,以及不同时相点细胞核之间、细胞浆之间IκBα含量无明显变化。B组LPS刺激后,NF-κB活性较0点时明显增强;细胞核、浆中各时相点IκBα较未刺激时显著降低;细胞核、浆中呈现一致性变化。C组NF-κB活性于60min时点后,较B组同时相点明显受抑制;胞浆中IκBα于60min时较B组明显减少,而核中IκBα于60min后较B组明显增加。结论：NF-κB活性与核中IκBα含量呈负相关;IκBα在中性粒细胞存在核浆穿梭,通过抑制IκBα核浆穿梭,可显著降低NF-κB活性。     

Rho激酶抑制剂对血管平滑肌细胞核因子κB活性的影响

目的 探讨Rho激酶抑制剂对血管平滑肌细胞核因子κB的作用,为动脉粥样硬化的治疗提供新的思路.方法 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,传代3～5代后给予抗平滑肌细胞特异性蛋白α-肌动蛋白(α-SMC)进行鉴定;分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)组及白细胞介素1(IL-1)组,其中Ang-Ⅱ组及IL-1组又分为直接刺激组及Rho激酶抑制剂Y-27632干预组,分别按组别给予相应的药物干预,然后提取核蛋白,再行化学发光法(EMSA)检测核因子-κB(NF-κB)的表达.结果 对照组血管平滑肌细胞未检出NF-κB活性,给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激后,NF-κB活性明显增高.在加用Y27632预处理后再给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激,NF-κB活性较直接刺激组有下降.条带密度分析显示,给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激后,NF-κB活性的相对密度值为1.31±0.21和1.09±0.07,加用Y27632预处理后再给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激,条带相对密度值分别为0.58±0.23和0.54±0.11,较直接刺激组有明显下降(P＜0.05或＜0.01).结论 Ang-Ⅱ及IL-1具有刺激NF-κB表达的作用,Rho激酶抑制剂 Y-27632能下调上述的刺激作用,并可能通过此机制起到抗动脉粥样硬化的作用.     

白介素-10对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的 探讨白介素-10对内毒素(LPS)诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的调节,为临床运用白介素-10提供理论依据。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、IL-10＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h明显高于正常对照组;IL-10＋LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;白介素-10可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

核因子-κB、IκB在创伤失血性休克大鼠肝损伤中的作用

目的 从组织受体水平探讨核因子-κB(NF-κB)、IκB在创伤失血性休克后肝组织中的变化及其在肝损伤中的作用机制.方法 雄性健康Wistar大鼠36只,采用双侧股骨骨折伴失血性休克模型,随机分成正常对照组6只,双侧股骨骨折伴失血性休克组30只.动态观察伤后0.5、2、4、6、8 h大鼠肝组织核因子-κB、IκB、肝脏病理、肝功能、TNF-α、IL-6等变化.肝组织NF-κB采用EMSA法测定结合活性、IκB采用免疫印迹法测定其蛋白含量,并进行计算机图像分析.数据采用SPSS 12.0软件分析,两组间比较采用配对资料的t检验.结果 NF-κB的活性伤后迅速升高,伤后2 h与正常对照相比,差异具有统计学意义,[(8.4±0.7) vs (2.3±0.4),P＜0.01];伤后6 h达到高峰,和正常组相比,P＜0.01[(43.4±4.6) vs (2.3±0.4),P＜0.01].IκB伤后迅速降低,伤后2 h和正常对照相比,差异具有统计学意义[(17.0±2.0) vs (26.4±2.2),P＜0.01].伤后6 h继续下降至比较低的水平,和正常组相比,P＜0.01[(6.5±1.1) vs (26.4±2.2),P＜0.01].TNF-α、IL-6伤后逐渐升高,并于伤后6 h达到高峰:和正常组相比,P＜0.01[TNF-α,(173.7±12.1) vs (30.8±1.8)pg/ml,P＜0.01;IL-6,(175.5±12.5) vs (10.4±0.7)pg/ml,P＜0.01].光镜下伤后4～8 h肝窦内有少许淤血,有散在炎性细胞浸润;血清ALT、TB伤后4 h开始增高,和正常组相比,P＜0.01[ALT,(640.6±80.2) vs (536.8±60.0)nmol·L-1,P＜0.01;TB,(4.7±1.1) vs (1.6±0.2)mol/L,P＜0.01];白蛋白伤后4 h明显下降,和正常组相比,P＜0.01[(13.3±1.6) vs (20.6±3.4)g/L,P＜0.01].结论 NF-κB及其抑制蛋白IκB参与了严重创伤失血性休克后肝损伤的发生;且NF-κB增高越多、IκB减少越明显,肝损害越重.提示NF-κB及其IκB在严重创伤休克后肝组织细胞损伤与抗损伤机制方面起着重要作用.     

血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体途径在介导大鼠肺部炎症反应中的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）-血管紧张素Ⅱ1型受体（ATR1）途径在介导大鼠肺部炎症反应和急性肺损伤中的作用。方法清洁级sD大鼠24只,随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋氯沙坦组和氯沙坦组。光镜观察肺组织病理改变并测定肺湿／干重比（W／D）。凝胶迁移率改变电泳（EMSA）测定肺组织核因子-κB（NF-κB）活性,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA表达水平,酶联免疫吸附法（EusA）测定血浆血管性血友病因子（vwT）的含量,比色法测定髓过氧化物酶（MPO）和丙二醛（MDA）含量。结果AngⅡ可致肺泡间隔增宽、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变,氯沙坦可缓解由AngⅡ所致的肺组织病理损伤。AngⅡ组肺W／D、NF-KB活性、TNF—α mRNA表达、MPO、MDA及vWF含量均明显高于其余3组（P〈0．05）,对照组与AngⅡ＋氯沙坦组和氯沙坦组的肺W／D、NF—κB活性、TNF-α mRNA表达、MPO、MDA及vWF含量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论AngII可激活肺部炎症反应并导致急性肺损伤,AngⅡ在肺部的促炎作用主要是通过其1型受体介导的。     

核转录因子-κB在急性心肌梗死血管内皮细胞损伤中的作用

目的 观察急性心肌梗死(AMI)再灌注后核转录因子-κB(NF-κB)活性和血清肿瘤坏死因-α(TNF-α)、可溶性血栓调节蛋白(STM)水平的动态变化,探讨心肌缺血/再灌注对内皮细胞损伤的作用及机制.方法 随机选取进行静脉溶栓再通的AMI患者(AMI再灌注组,8例),并以健康体检者8例作为正常对照组.以电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性,放射免疫法测定TNF-α含量,酶联免疫吸附试验测量sTM水平.结果 NF-κB活性以及TNF-α和sTM水平在溶栓后0.5 h就明显升高,1 h达高峰,3、12和24 h逐渐下降;各时间点的数值均显著高于对照组(P均＜0.05);1 h时的各数值均显著高于24 h(P均＜0.05).sTM与NF-κB活性和TNF-α之间的动态变化有明显相关性(P均＜0.05).结论 AMI再灌注后存在着NF-κB活化、TNF-α增加和内皮细胞损伤;NF-κB活化可能是造成血管内皮细胞损伤的重要机制之一.     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱,活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质.烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚.目的观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB活性、IκB-α的表达及肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制.设计随机对照的实验研究.单位创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室.材料实验于1999-01/06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成.实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只.干预以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15%Ⅲ度烫伤.实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组,即0(正常对照组),2,6,12,24,48 h组.收集腹腔巨噬细胞.采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,免疫印迹法测IκB-α的表达,反转录-PCR测TNF-α mRNA的表达.主要观察指标①检测TNF-α的含量.②测定NF-κB的活性.③检测IκB-α的表达.④测TNF-α mRNA的表达.结果烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12 h达到高峰,为(1 085.65±122.99)ng/L,较正常对照组明显增高(t=14.92,P＜0.01).NF-κB活性于伤后明显活化,于2 h达到了高峰(t=13.31,P＜0.01),为(56.8±7.3)RDU,早于TNF-α的增多.与正常对照组相比,IκB-α的表达于烫伤后2 h显著下降(t=4.23,P＜0.01),达到0.632±0.086,以后上升,至24 h达到高峰(t=7.06,P＜0.01),为1.161±0.097,48 h稍降(t=4.82,P＜0.01),为1.149±0.167.以伤后12 h为调控点,予PDTC后NF-κB活性及TNF-α mRNA表达量均显著下降(P＜0.01).结论烫伤后NF-κB活性及TNF-α表达明显增强,IκB-α对NF-κB在高水平上维持着一种制约关系.烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB信号途径参与TNF-α表达的调控.     

核因子κB在多脏器功能障碍综合征发病机制及预后评估中的作用

目的 检测多脏器功能障碍综合征(MODS)患者外周血单核细胞(PBMC)中核因子κB(NF-κB)mRNA及NF-κB抑制因子(IκBα)mRNA的表达.探讨NF-κB的活性在评估MODS患者病情及预后中的作用.方法 收集30例MODS患者,按疾病的转归分为死亡和存活组.同期选取10例健康体检者作为对照组.应用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测PBMC中NF-κB mRNA及IκBα mRNA的表达.结果 死亡组、存活组和对照组PBMC中NF-κB mRNA相对表达量分别为1.179±0.508、1.247±0.512和0.738±0.238,差异有统计学意义(P＜0.05).死亡组、存活组和对照组PBMC中IκBα mRNA相对表达量分别为0.875±0.451、1.372±0.743和1.966±0.666,差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01).结论 活化的NF-κB参与了MODS的发生发展,而且其活化程度与患者的预后密切相关,NF-κB活性越高,患者预后越差.     

多肽cSN50通过核质转运受体Importinα抑制HepG2细胞核因子-KB及其下游因子的表达

目的 研究乙醇、内毒素是否通过核转录因子NF-kappaB即IκB-NF-κB-importinα途径引起细胞炎症、凋亡和诱导下游基因TNF-α、Caspase-3的表达;cSN50作为一种穿膜多肽通过阻断NF-κB与importinα结合,从而抑制NF-κB核转位及其下游基因的表达,起到保护细胞的作用.方法 应用流式细胞仪观察HepG2经不同浓度乙醇、内毒素刺激后的细胞凋亡率;分光光度计法测Caspase-3活性;ELISA法检测细胞培养上清TNF-α;Western blot法检测NF-κB p50、importinα3、IκBα,间接免疫荧光法测p50、IκBα、importinα3的活化水平.结果 乙醇、内毒素刺激后TNF-α、Caspase-3的值量效上与空白对照组比差异均有统计学意义(P均＜0.05),细胞核内p50显著增加(P＜0.05),胞浆IκBα下降(P＜0.05),cSN50( 100 μmol/L)能部分阻断P50的核转位及其下游因子的表达(P＜0.05).结论 急性酒精肝损伤中,NF-κB的核转位在此损伤中起重要作用,cSN50能部分抑制被刺激后的HepG2细胞核中NF-κB活性及其下游基因的表达.     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠肿瘤坏死因子-α表达及核转录因子-κB活性的影响

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法复制LPS致ALI小鼠模型。实验动物按随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组、DATS预防组、DATS治疗组和DATS对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组血清和肺组织匀浆上清液中TNF-α浓度;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肺组织TNF-a mRNA表达;凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)检测肺组织NF-κB活性。结果ALI模型组2 h血清及肺组织TNF-α含量明显升高(P均＜0．01),6 h有所降低,但仍高于生理盐水和DATS对照组(P均＜0．01)DATS预防组2 h和6 h血清及肺组织TNF-α含量较ALI模型组均明显降低(P＜0．05或P＜0．01),但DATS治疗组无明显效果(P均＞0．05)。ALI模型组2 h肺组织TNF-αmRNA表达较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0．01),DATS预防组可明显抑制肺组织中TNF-αmRNA表达(P＜0．05),但DATS治疗组无明显效果。ALI模型组肺组织NF-κB活性较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0．05),DATS预防组可明显抑制肺组织NF-κB活性(P＜0．05),但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论预先给予DATS可抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织NF-κB活性和TNF-αmRNA表达,减少血清及肺组织中TNF-α的生成,具有一定的抗ALI作用。     

Ad5F35嵌合腺病毒载体介导的突变性IκBα对白血病细胞凋亡的诱导作用

多种不同类型的白血病均存在持续活化的核转录因子κB(NF-κB),而抑制NF-κB活化诱导细胞凋亡有可能成为治疗白血病新的方法。本研究探讨修饰的5型腺病毒载体即Ad5F35嵌合腺病毒载体(Ad5F35 Vec)介导的突变性IκBα(IκBαDN)对白血病细胞凋亡的作用。将携带缺失5’端1-70个氨基酸编码序列的人IκBαAd5F35-IκBαDN Vec转染HL-60细胞。采用流式细胞术、DNA结合试验、实时定量PCR和Western blot技术分别检测细胞凋亡、NF-κB DNA结合活性、IκBα,cIAP-2和xIAP的表达。结果显示,转染48小时后,转染Ad5F35-IκBαDN Vec细胞、空白载体Ad5F35-EGFP Vec细胞以及未转染细胞的凋亡率分别为(22.53±2.999)%,(6.08±2.464)%和(4.86±1.366)%,其差异具有显著意义(Ad5F35-IκBαDN Vec vs未转染:p<0.001;Ad5F35-IκBαDNVec vs Ad5F35-EGFP Vec:p<0.001,p<0.002)。同时,NF-κB DNA结合活性降低,IκBα表达增加,但cIAP-2和xIAP mRNA的表达降低。结论:Ad5F35 Vec能够有效介导IκBαDN cDNA在HL-60细胞的表达,IκBαDN可抑制HL-60细胞NF-κB DNA结合活性并诱导其凋亡。     

烫伤脓毒症大鼠肾脏核转录因子-κB活化与肾损伤关系的研究

目的研究烫伤脓毒症大鼠肾脏核转录因子-κB (NF-κB)活化与肾损伤的关系.方法采用30%总体表面积Ⅲ度烫伤加内毒素攻击制备烫伤脓毒症大鼠模型.54只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烫伤脓毒症1、2、6、12和24 h组,烫伤脓毒症1、2和6 h+NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组.采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测肾组织NF-κB活性;采用酶联免疫吸附法检测血浆及肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化;采用自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量.结果肾组织NF-κB活性于烫伤脓毒症后1 h明显增强并达到高峰(P<0.01),PDTC可显著降低烫伤脓毒症后1 h NF-κB的活性.烫伤脓毒症后1 h和2 h血浆及肾组织中TNF-α水平均明显增高(P均<0.01),PDTC可显著降低伤后血浆TNF-α水平(P均<0.01),对肾组织中TNF-α水平影响不明显.烫伤脓毒症后BUN及SCr含量均明显增高(P均<0.01),PDTC对BUN和SCr含量均无显著影响.结论 NF-κB抑制剂可降低烫伤脓毒症大鼠肾组织NFκB活性,但对肾脏功能无明显保护作用.     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

失血性休克肝枯否氏细胞I-κB激酶的表达及意义

目的探讨IκB激酶-β(IKK-β)在失血性休克继发肝脏损伤中的作用.方法采用失血性休克家兔模型;分离培养肝脏枯否氏细胞(KC),用原位杂交方法(ISH)、凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测KC中IKK-β mRNA表达、核因子(NF)-κB活性和KC培养液上清中TNF-α含量.并进行肝脏组织的病理学光镜检查.结果模型组KC中IKK-β的mRNA表达(0.17±0.04)、NF-κB活性(1.72±0.36)和培养液上清中TNF-α含量(300.05±30.86) ng/L较对照组[IKK-β(0.02±0.01)、NF-κB(0.31±0.10)、TNF-α(134.85±12.09) ng/L]明显增高(P均＜0.01).模型组肝脏组织病理损伤严重.结论 IKK-β介导NF-κB活化诱发细胞因子释放在失血性休克诱发肝脏损害的病理机制中发挥重要作用.     

核因子-κB途径介导脑源性神经营养因子促进多发性骨髓瘤细胞分泌基质金属蛋白酶-9

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)通过核转录因子(NF)-κB诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9分泌的具体机制.方法 培养人MM细胞株RPMI 8226,使用明胶酶谱法检测.RPMI 8226细胞分泌的活性MMP-2、MMP-9水平的变化,用化学发光凝胶电泳迁移率分析(EMSA)法检测RPMI 8226细胞中NF-κB的活性.结果 以25、50、100和200μg/L浓度的BDNF刺激RPMI 8226细胞24 h后,其活性MMP-9的分泌水平分别为2.03±0.48、2.99±0.46、4.63±0.62和5.62±1.29μg/L,均明显高于对照组(P＜0.01),而MMP-2的表达在各浓度组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).当BDNF作用浓度为100μg/L时,预先分别用1 mmol/L的NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂(PDTC)和500 nmol/L的BDNF高亲和力受体TrkB的酪氨酸抑制剂K252a处理15 min和1 h后,K252α和PDTC(P＜0.001)均能显著抑制RPMI 8226细胞MMP-9的分泌(光密度值分别为867.52±101.81、727.98±92.05,对照组为1159.01±233.15,与对照组比,P值均＜0.01).随着BDNF浓度的升高,NF-κB的活化作用明显增强,于100μg/L BDNF加K252α预处理1 h后,6、12、24 h的3个时间点K252α均能明显抑制BDNF对NF-κB的激活作用(P＜0.05),且随BDNF作用时间的延长而增强.结论 BDNF促进MM细胞血管新生的能力可能是通过NF-κB信号转导途径激活MMP-9而实现的.     

N-乙酰半胱氨酸对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞NF-κB活性和血液炎症细胞因子影响的实验研究

【目的】通过检测胰腺腺泡细胞核转录因子(NF-κB)活性及血液IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α及ICAM-1含量的变化,探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对急性坏死性胰腺炎(ANP)胰腺腺泡细胞NF-κB活性和血液炎症细胞因子的影响。【方法】采用5%牛磺胆酸钠胰管逆行注射制备ANP动物模型。SD雄性大鼠40只,按随机分配原则分为ANP( )NAC治疗组和ANP(-)空白对照组。采用EMSA法检测胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性、Western-blotting法检测胰腺腺泡细胞胞质IκBa抑制活性及ELISA法检测血液IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α及ICAM-1含量。【结果】治疗组在1h、3h、5h及7h均可显著抑制(P<0.01)呈点状出血坏死病理学改变的ANP胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性[(22.47±5.39)vs(31.36±5.72)、(27.92±4.75)vs(39.44±6.31)、(23.77±3.95)vs(33.80±5.96)及(19.78±3.48)vs(25.69±4.91)];显著增强(P<0.01)ANP胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性[(8.55±1.26)vs(6.37±1.19)、(7.31±1.76)vs(5.91±1.65)、(9.53±1.73)vs(6.85±1.37)及(9.19±1.48)vs(6.97±0.86)];显著抑制(P<0.05)血液中炎症细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α及ICAM-1活性。【结论】N-乙酰半胱氨酸可通过抑制ANP胰腺腺泡细胞NF-κB活性,增加胰腺腺泡细胞胞质IκBa抑制活性的能力,减少血液中炎症细胞因子活性,从而抑制ANP引起的过度炎症反应。