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相似文献
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1.
目的:为明确了解中国不同地区(广东,云南,香港)庚型肝炎病毒(HGV)株5‘端非编码区(NCR)序列的差异。方法:采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从广东省2例,云南省1例,香港3例共6例HGV感染者血浆中扩增HGV5’NCR cDNA片段,为238bp,PCR产物纯化后直接经对脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果:中国HGV株间5‘NCR相应序列的同源性介乎92.93% ̄97.98  相似文献   

2.
从广东省1例慢性丙型肝炎病人血清中提取HCVRNA,随机引物逆转录为cDNA后用HCV5’端非编码区(5’NCR)特异引物进行聚合酶链反应(PCR),扩增产物302bp,经补齐和提纯后插入pUC19质粒,获得的重组质粒pUN采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列,与国内外多相株比较,核苷酸同源性介乎92.69%~100%,其中与HCVⅡ(1b)型的同源性最大,本文的测序结果可为引物设计提供依据,获得的H  相似文献   

3.
从广东省1例慢性丙型肝炎病人血清中提取HCVRNA,随机引物逆转录为cDNA后用HCV5’端非编码区(5’NCR)特异引物进行聚合酶链反应(PCR)。扩增产物302bp,经补齐和提纯后插入pUC19质粒,获得的重组质粒pUN采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列,与国内外多个株比较,核苷酸同源性介乎92.69%~100%,其中与HCVⅡ(1b)型的同源性最大。本文的测序结果可为引物设计提供依据。获得的HCVcDNA在常规PCR步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假阴性及评估试剂有重要意义。  相似文献   

4.
测定庚型肝炎病毒(HGV)非结构基因5(NS5)区部分基因序列。方法从3例献血员,2例肝硬化患者及1例非甲-戊型肝炎患者血清中通过逆转录-套式-聚合酶链反应(PCR)扩增出长994bp的cDNA序列,PCR产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的6株HGVNS5区部分核苷酸序列与国外报道的3株(GBV-C、PNF2161、R10291)比较,同源性为87.2%~93.9%;6株间同源性为90.1%~93.8%。根据所测得的6株cDNA序列推导出其编码的氨基酸序列,与国外发表的3株序列相比,同源性在93.6%~98.7%,6株之间为93.6%~98.4%。在此区内发现有16个保守的脯氨酸残基及8个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出6株HGV,其NS5区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。可依赖此区序列设计诊断试剂  相似文献   

5.
①目的 探讨山东省丙型肝炎病毒(HCV)分离株C区、NS5区的核苷酸序列及其基因型别。②方法 以RT-nest-PCR方法从1例临床HCV感染者血清中分别扩增出HCVC区(432bp)及NS5区(319bp)的基因片段,将其克隆于T载体上,以双脱氧末端终止法自动测序并进行序列分析。③结果 该分离株与GenBank中50多个1b型分离株同源性均在90%以上,其中C区与中国北京的1b型株HCU6337  相似文献   

6.
目的:分析中国人血清中庚型肝炎病毒(HGV或GBV-C)NS3区部分基因序列。方法:从个体供血者及肝硬化患者血清中,通过逆转录合成cDNA,设计特异性引物进行多聚酶链式聚合反应,将产物克隆于载体上,采用双脱氧核苷酸链终止法进行双向测序。结果:分离出的5株NGV毒株的NS3区部分核苷酸序列之间同源性从85%到98%,与国外已发表的HGV序列比较,同源性在79%~91%。推测的其编码氨基酸序列,5株之间100%一致,与国外已报告的HGV比较,同源性为94.9%~100%。结论:从中国人血清中分离出5株HGV序列,其NS3区部分核苷酸存在着一定的变异性,但其编码的氨基酸非常保守。  相似文献   

7.
用RT-PCR的方法从非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病人血清中检测到一株庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)。其中扩增NS3区基因采用56例循环周期减温PCR方法;扩增NS5区基因采用35个循环周期的正常PCR方法。并对其PCR产物进行了克隆测序。在NS3区,样品与GBV-C和HGV的核苷酸序列同源性分别为84.2%和89.9%;而在NS5区样品与HBV-V和HGV的核苷酸同源性分别为94.9%和98.  相似文献   

8.
目的:探索安徽省庚型肝炎病毒(HGV)基因的变异,方法:采用HGV中国株5’非编码区序列设计引物,逆转录套聚合酶链反应法,检测我省不同地区血清中的HGVRNA,5份阳性产物采用ABIPrism3777DNA自动测序仪进行序列测定。结果:测定的213个碱基中,5株安徽HGV分离民非洲GBV-C(u36380)序列同源性分别为88.26%、85.92%、878.26%、85.45%和88.26%,与美  相似文献   

9.
目的 了解山东地区输血后丙型肝炎患者庚肝病毒感染的状况及HGV部分基因核苷酸序列。方法 应用RT-PCR法检测HGVRNA,并对阳性扩增的产物采用PCR技术片段直接克隆法测定。结果 从86例PTH-C患者血清中检出HGVRNA阳性者31例(36%),其中一例患者HGVNS5区部分核苷酸序列与美国原始株和另一例日本株核苷酸同源性比较分别为86%和84%。结论 证实山东地区PIH-C患者存在着HGV感  相似文献   

10.
采用RT-PCR对广东地区33例肝炎病血清进行HGVRNA检测,结果2例(6.1%)阳性,对其中1株输血后HGV(CH-S)基因组5端非翻译区(5′UTR)进行分子克隆与测序,并分别与Linnen等报道的2株HGV(PNF2161,R10291)和Leary等报道的GBV-C相比较,其核苷酸序列的同源性分别为89.2%,88.7%,87.1%,本研究首次证实我国华南地区存在HGV感染,HGV高度保  相似文献   

11.
为探讨河南省献血员中庚型肝炎病毒(HGV)的感染情况和病毒基因的变异特征。方法:利 用逆转录-巢式-聚合酶链反应(RT-Nest-PCR)检测 HGV RNA;克隆人 T载体并测序。结果:在 300名义务献血员 中发现1例庚型肝炎病毒RNA阳性;200例初检合格献血员标本中无1例阳性。河南株HGV与GenBank中HGV 对应位置序列的同源性为90.9%~98.8%。结论:河南省义务献血员中有HGV携带者;河南株HGV与国内(河 北株HGU75356)分离株的同源性为98.8%,其同源性高于国外分离株(90.9%~95.2%);建议对献血员增加 HGV 检测。  相似文献   

12.
付涌水  曹开源  吕凌 《广东医学》2000,21(5):373-374
目的 了解广东地区GBV-C/HGV5'NCR区的序列变异情况。方法 以GBV-C和HGV的5'NCR区安全同源的序列设计合成引物用于套式RT-PCR。从广东地区的10例GBV-C/HGV感染者血中扩增了10个充列,分别克隆对pUC19、pT-Adv载体。以35S标记的双脱氧链末端终止法对这10个序列分别进行正反两个方向的序列测定。结果 10株充列相互间同源性最大为100%,最小为84.4%。与G  相似文献   

13.
采用RT-PCR对广东地区33例肝炎病人血清进行HGVRNA检测,结果2例(6.1%)阳性。对其中1株输血后HGV(CH-3)基因组5'端非翻译区(5'UTR)进行分子克隆与测序,并分别与Linnen等报道的2株HGV(PNF2161,R10291)和Leary等报道的GBV-C相比较,其核苷酸序列的同源性分别为89.2%、88.7%、87.1%。本研究首次证实我国华南地区存在HGV感染。HGV高度保守区5'UTR的分子克隆与核苷酸序列的测定对开展HGV感染的基因诊断具有重要意义。  相似文献   

14.
七株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
比较我国流行性和散发性戊型肝炎病毒(HEV)的部分核苷酸和氨基酸序列及其与戊型肝炎流行的关系。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法(RT-nPCR)从急性散发性戊型肝炎病人血清中扩增HEV开放读码框架2(ORF2)cDNA,并用SequenaseVersion2.0DNA序列分析试剂盒,经双脱氧核苷酸DNA链末端终止直接测序法测定RT-nPCR扩增产物的核苷酸序列。结果从深圳、长春、杭州、西安、北京5个城市41份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得28株HEVORF2cDNA,对其中7株进行了核苷酸序列分析,表明它们与HEV墨西哥株(M)的同源性为78.9%~80.2%;与HEV缅甸(B)流行株(Ep)的同源性为93.1%~95.1%;与HEV缅甸(B)散发株(Sp)的同源性为92.3%~94.2%;与HEV中国新疆流行株CH1.1同源性为96.5%~98.9%;7株散发性HEV间核苷酸序列的同源性为95.7%~100%。结论该7株散发性HEV与HEV(B)和HEVCH1.1核苷酸序列的同源性较高,均属同一亚型。  相似文献   

15.
目的:建立一种简单、快速、可靠的DNA序列分析方法,并利用此方法分析Kras基因和HCV5′非编码区基因的变异情况。方法:PCR循环测序法是将PCR扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理,建立了以PCR扩增引物为测序引物,利用TaqDNA聚合酶、荧光标记的2′,3′双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)直接进行PCR扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Kras癌基因和丙型肝炎病毒5′非编码区(HCV5′NTR)进行了序列测定。结果:肺癌组织中的Kras基因第1外显子第35位碱基发生点突变(GGT→GAT);属于高度保守区的HCV5′NTR存在基因变异。结论:PCR循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点,为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。  相似文献   

16.
用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)扩增丙型肝炎病毒5′端非编码(5′NCR)序列,246例肝炎患者中HCVRNA(丙型肝炎病毒核糖核酸)阳性者45例,阳性率18.3%(45/246),凡阳性者用酶联免疫法测抗-HCV(抗丙型肝炎病毒抗体),其中24例测到抗-HCV,阳性重叠率53.3%(24/45),用RT-PCR法检测HCVRNA,能在抗-HCV转阳以前检出HCVRNA,更早地确诊丙型肝炎。  相似文献   

17.
目的 测定并分析1例中国慢性无症状携带者感染的乙型肝炎病毒(HBV)D基因型的全基因序列。方法 用聚合 酶链式反应(PCR)扩增HBV全基因,将PCR产物克隆后对其进行核酸序列分析并与已发表的HBV毒株全序列进行 同源性比较;对 GenBank中已发表的30株HBV D基因型毒株的全序列进行系统进化树分析。结果 该病毒全基因长 3182bp,为ayw亚型,D基因型;此毒株全基因GenBank AccessionNo为AF280817;与GenBank中已发表的HBVD 基因型全序列同源性为98.3%~94.5%,与已发表的 A、B、C、E、F和G基因型全序列同源性均小于89.5%。结论 首例中 国株 HBV D 基因型全序列与源于瑞典的四株 HBV D 基因型全基因的进化距离最近。  相似文献   

18.
目的:研究慢性肝炎病人血清、肝细胞肝癌组织中丙型肝炎病毒(HCV)5'非编码区变异情况.方法:收集10例慢性肝炎病人及4例肝细胞肝癌病人血清和肝细胞肝癌组织,检测抗HCV抗体阳性,进行HCV5'非编码区RNA的逆转录PCR扩增,PCR产物进行单链构象多态性分析,并对部分病例序列进行测定.结果:6例慢性肝炎病人血清及3例肝细胞肝癌组织中检测到HCVRNA,单链构象多态性分析显示各例条带之间无明显差异,对1例肝细胞肝癌组织中HCV5'非编码区cDNAPCR产物的序列测定表明它与HCV-1的同源性为97.3%,与HCV-BK的同源性为97.7%.结论:我们的结果提示在西安地区HCV5'非编码区几乎是一样的,并进一步证实不同地区HCV5'非编码区的高度保守性.  相似文献   

19.
①目的 通过核衣壳蛋白区( C区)基因序列分析,对丙型肝炎病毒( H C V)山东分离株进行定型。②方法 应用反转录套式聚合酶链反应( R Tnested P C R)方法,从山东省 H C V 抗体阳性血清中扩增出 H C V C区基因的一个片段(432bp),对其进行 T A 克隆及测序,并通过 D N A S I S软件和 Genebank 进行序列分析。③结果 此分离株与基因型1b 的 H C V 分离株同源性最高,与4 个已知 1b 型分离株的核苷酸相应序列同源性为 96.528% ~98.144% ,其推导的氨基酸同源性为94.444% ~96.032% .④结论 此分离株归为 1b 型。  相似文献   

20.
采用套式聚合酶链反应(PCR)方法,以具有高度保守性的丙型肝炎病毒(HCV)RNA5'端非编码区引物对,扩增10例输血后肝炎血清,8例(80%)阳性。并将逆转录与第一轮PCR结合连续进行,使操作简便有效。间接证明了HCV上海株与世界若干地区HCV株5'端非编码区核酸序列具有高度同源性和保守性。  相似文献   

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