幽门螺杆菌感染儿童胃窦黏膜CD4+、CD8+的研究

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染儿童胃窦黏膜T淋巴细胞CD4+、CD8+ 及CD4+/CD8+的变化.方法流式细胞仪(FCM)直接免疫荧光法测定79例慢性浅表性胃炎(CSG)患儿(Hp+44例,Hp-35例)胃窦黏膜及其中33例(Hp+12例,Hp-21例)患儿外周血的T淋巴细胞CD4+、CD8+变化.所有患儿均行内镜检查并取胃窦黏膜作快速尿素酶试验、组织病理学检查及胃窦黏膜单个核细胞提取.33例儿童同时抽取外周静脉血2 ml.提取的胃窦黏膜及外周血单个核细胞经异硫氰酸荧光素标记CD3(CD3-FITC)、藻红蛋白标记CD4(CD4-PE)、多甲藻(黄)素叶绿素蛋白标记CD8(CD8-PerCP)单克隆抗体染色后行流式细胞术测定,其中胃窦黏膜T淋巴细胞的检测以CD3设门.结果 (1)胃窦黏膜CD3+细胞的检出率分别为Hp-CSG组(3.26±1.98)%,Hp+CSG组(4.37±1.97)%.(2)胃窦黏膜CD3+细胞中CD4+,CD8+的相对百分比及CD4+/CD8+值分别为Hp-CSG组为(23.74±10.37)%,(47.04±12.00)%,0.52±0.23,Hp+CSG组为(40.28±11.35)%,(27.91±8.84)%,1.55±0.52.Hp+CSG组胃窦黏膜CD4+细胞相对百分比、CD4+/CD8+比值明显高于Hp-CSG组,CD8+细胞相对百分比则低于Hp-CSG组(P均<0.01).(3)两组外周血T淋巴细胞CD3+(%)、CD4+(%)、CD8+(%)、CD4+/CD8+的比较差异无统计学意义.结论儿童Hp+CSG的T淋巴细胞变化为局部胃窦黏膜的细胞免疫应答所致.     

CD4^＋T淋巴细胞表面CD4^＋CD45RA和CD4^＋CD45RO在支气管哮喘患儿外周血中的表达

目的探讨CD4^＋CD45RA和CD4^＋CD45RO分子在支气管哮喘患儿中的表达及其意义。方法分别收集支气管哮喘发作期28例、支气管哮喘缓解期27例、健康对照儿童20例抗凝静脉血100μL，采用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗CIM单抗、藻红蛋白（PE）标记的抗CD45RA单抗和PE-菁蓝色素荧光素（PE—Cy5）标记的抗CD45RO单抗，流式细胞仪检测各组儿童外周血CD4^＋T淋巴细胞表面CD45RA和CD45RO的表达。采用SPSS13．0软件进行统计学分析。结果与健康对照和支气管哮喘缓解组患儿比较，支气管哮喘发作组患儿CD4^＋CD45RA^＋T细胞明显减少（q=12．47，8，39Pa〈0．05），CD4^＋CD45RO^＋T细胞显著升高（q=9．50，8．30Pa〈0．05），CD4^＋CD45RA^＋／CD4^＋CD45RO^＋细胞比值显著降低（q=8．96，6．21P。〈0．05）；支气管哮喘缓解组患儿CD4^＋CD45RA^＋T细胞较健康对照组明显升高（q=3．08P〈0．05），CD4^＋CD45RO^＋T细胞及CD4^＋CD45RA^＋／CD4^＋CD45RO^＋细胞比值与健康对照组比较差异无显著性（q=0．45，2．02Pa〉0．05）。结论外周血CD4^＋CD45RA^＋和CD4^＋CD45RO^＋T淋巴细胞平衡失调可能参与支气管哮喘的发病。     

CD4^＋CD25^调节性T细胞与儿童血液病的关系研究进展

1995年Sakaguchi等首次分离获得具有免疫调节作用的CD4^＋CD25^＋细胞,称之为调节性T细胞（regulatory Tcell,Treg）,在自身免疫疾病、肿瘤免疫以及移植耐受等方面发挥了重要作用,显示了巨大的应用前景。近年来研究表明,     

小儿CD56^＋急性髓系白血病临床生物学特征

目的 研究CD56^＋小儿急性髓细胞白血病（AML）的生物学特征及临床意义。方法 对80例初治小儿AML进行细胞形态学、免疫表型、多药耐药P糖蛋白（P170）检测、临床观察、并常规采用HAE方案诱导治疗，判定疗效。结果 综合我中心8年间小儿急性髓系白血病资料分析，CD56阳性率20．69％（30／145）。CD56^＋患儿在FAB分型中以M2b、M5、M7多见，CD56^＋组中免疫表型特征为多表达CD34（85．00％和44．11％P=0．01）。HLA—DR（76．66％和42．00％P=0．003）。和PgP（85．71％和25．58％P=0．001）。此外，CD56^＋AML患儿髓外浸润现象明显（77．27％和45．00％P=0．017），尤其是淋巴结（59．09％和22．50％P=0．006）和脾脏（63．63％和22．50％P=0．002）受累显著，CD56表达与年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数、及外周血幼稚细胞数无关，也不影响CR率和无病生存时间（DFS），但达首次缓解时间较长，中位时间56天。结论 CD56^＋AML具有独特的，临床生物学特征，生物学侵袭性较强，多表达耐药蛋白P170，预后较差。建议初诊时监测CD56分子表达以判断预后。     

高胆红素血症新生儿细胞免疫状态

近年来研究发现胆红素是一种潜在的免疫毒性物质，本研究以高间接胆红素血症患儿为研究对象，选择可反映红细胞免疫粘附功能的CD35及反映T细胞亚群功能的CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋／CD8^＋为检测指标，以探讨新生儿高胆血症的免疫功能变化。     

脓毒症患儿外周血自然杀伤细胞比例及亚群的变化

目的 探讨脓毒症患儿外周血自然杀伤（natural killer,NK）细胞及各亚群比例的变化.方法 2009年1月至2012年12月我院住院的脓毒症患儿按病情分为脓毒症组25例和严重脓毒症组12例,同时设健康对照组37例.提取各组患儿外周血,采用流式细胞术检测NK细胞及各亚群比例.结果 脓毒症组患儿CD16^＋ NK细胞（0.44％±0.13％）较健康对照组明显减少（P＜0.01）.严重脓毒症组患儿外周血CD16^＋ NK细胞（0.73％±0.25％）较健康对照组（1.78％±0.39％）明显减少（P＜0.05）.严重脓毒症组患儿外周血CD56^＋ CD16^＋ NK细胞（4.82％±2.57％）较健康对照组（9.52％±1.16％）明显减少（P＜0.05）.严重脓毒症组患儿外周血NK细胞总数（5.90％±3.27％）较健康对照组（11.80％±2.40％）明显减少（P＜0.05）.脓毒症组与健康对照组患儿NK细胞总数差异无统计学意义（P＞0.05）.严重脓毒症组、脓毒症组、健康对照组患儿CD56^＋ NK细胞差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 脓毒症患儿NK细胞总数减少不明显,但其亚群CD16^＋ NK细胞明显减少.严重脓毒症患儿CD16^＋ NK细胞、CD56^＋ CD16^＋ NK细胞两个亚群均减少.NK细胞总数也减少.脓毒症及严重脓毒症患儿CD56^＋ NK细胞数量无明显减少.CD16^＋ NK细胞数量减少可能是脓毒症的易感因素之一,并与严重脓毒症的发生发展有关.     

CD4+ CD25+调节性T细胞与口服耐受的研究新进展

胃肠道是人体与外界抗原接触的第一道防线,肠上皮细胞、固有层及Peyer淋巴节内的多种淋巴细胞和各种生物活性因子、肠腔内的大量共生菌共同参与食物抗原的耐受形成;食物耐受不能形成或被打破则可导致食物过敏。食物过敏主要发生在学龄前儿童,发病率4％-6％。儿童食物过敏随着年龄的增长,多数最终可形成临床食物耐受,即摄人对先前过敏的食物后不再出现临床症状。近来研究表明,外周和肠道局部的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cells,Treg细胞）在形成食物耐受中发挥重要作用。     

冻存脐血中血小板、血小板微粒的变化及其与CD34^＋细胞粘附分子表达关系的观察

研究新鲜和冻存脐血中血小板(PLT)、血小板微粒(PMPs)含量的变化，以及它们对脐血CD34^ 造血干／祖细胞粘附分子表达的影响。测定冷冻前后，脐血中PLT、PMPs的含量，以及脐血CD34^ 细胞与PMPs孵育后粘附分子(CD41a，CD61，CD62P)的变化。结果，冻存脐血中PLT含量减少、PMPs含量增加；新鲜PMPs上调CD34^ 细胞粘附分子表达的作用比冻存PMPs强；脐血PLT经过深低温冷冻后仍然能被激发产生PMPs，并能上调CD34^ 细胞粘附分子表达。结果显示：我们可以用冻存的PLT来获得PMPs，以提高干细胞粘附分子表达。     

调节性T细胞及Foxp3基因在特发性血小板减少性紫癜患儿免疫失调中的作用

特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是一种儿童常见的出血性自身免疫病，但发病机制尚未完全明了，难以找到真正特异而有效的治疗方法。近年研究发现CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulation T cell，Tr细胞）是维持机体免疫耐受的重要调控者，在自身免疫病中的作用逐渐成为研究的热点。为探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与ITP发生、发展的关系及其临床意义，我们于2005年2月-2006年7月采用流式细胞术和RT—PCR检测了ITP患儿外周血中Tr细胞的数量及相关基因Foxp3的表达。     

IL-15对MDS CD34^＋细胞的诱导分化作用探讨

目的 观察IL-15对体外培养的MDS CD34^ 细胞的诱导分化作用，方法 应用MACS免疫磁珠分离系统提取高纯度MDS骨髓CD34^ 细胞，建立以造血生长因子为基础的体外培养体系，用不同浓度的IL-15作用CD34^ 细胞，流式细胞术检测培养后的细胞单克隆抗体分化和细胞周期的表达，细胞化学染色观察细胞形态变化。结果 应用MACS方法成功提取MDS CD34^ 细胞，体外培养MDS CD34^ 细胞生长情况一般，IL-15作用后MDS CD34^ 细胞出现明显分化，细胞形态学显示细胞向成熟转化，实验组的单抗表达水平CD71、CD33、CD19、CD13均较对照组为高，细胞周期分化。结论 IL-15对MDS CD34^ 细胞有一定的诱导分化作用，IL-15对MDS可能有一定的治疗应用前景。     

CD4^＋CD25^＋T细胞在呼吸道病毒感染诱导儿童支气管哮喘急性发作中的作用

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tr）是近年来确定在抑制自身免疫性疾病的发生、诱导机体免疫耐受、调节Th1／Th2平衡机制中有着重要作用的一类T细胞亚群。CD4^＋CD25^＋Tr在呼吸道病毒感染后导致免疫失衡所诱导的儿童支气管哮喘（哮喘）急性发作中表现出数量与功能异常，白细胞介素-10、转化生长因子-β、细胞毒性T细胞相关抗原-4和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体等相关因子在其功能调控中发挥着重要作用。研究CD4^＋CD25^＋Tr在呼吸道病毒感染所诱导的儿童哮喘急性发作中的功能机制，对阐明哮喘的发病机制及探索疾病免疫治疗方面有重要意义。     

胰岛素样生长因子1诱导脐血CD14^＋单核细胞转化树突状细胞分化成熟的研究

目的 通过研究胰岛素样生长因子1（IGF-1）对脐血CD14^ 单核细胞转化的树突状细胞分化成熟的影响,以探讨IGF-1对新生儿天然免疫的作用。方法 利用无血清,无激素培养系统,体外培养10例健康足月新生儿脐血及10例健康成人外周血CD14^ 单核细胞,观察IGF-1对新生儿脐血CD14^ 单核细胞转化的树突状细胞（monocyte-derived dendritic cell,mDC)表型和功能的影响。结果 与正常成人比较,IL-4 GM-CSF诱导的新生儿脐血mDC中：CD1a^ 细胞百分率和甘露糖受体（MR）阳性细胞百分率明显降低,细胞表面主要组织相容性Ⅱ型抗原（MHCⅡ）和CD40表达明显降低,其吞噬功能,抗原提呈功能明显下降,IGF-1能显著升高脐血mDCMHCⅡ表达,下调甘露糖受体及细胞的吞噬功能,结论 IGF-1体外可促进脐血CD14^ 单核细胞转化的树突状细胞成熟。     

sCD40L、CD4＋CD45RA＋T细胞及CD4＋CD45RO＋T细胞在儿童ITP中的作用

目的探讨协同刺激分子可溶性CD40配体（sCD40L）及CD4＋T辅助细胞CD45RA和CD45RO亚群在儿童特发性血小板减少性紫癜中的变化。方法用ELISA法检测25例ITP患儿血浆sCD40L水平;用微量全血流式细胞术法检测ITP患儿外周血CD4＋T辅助细胞CD45RA和CD45RO的表达率;并对sCD40L与血小板计数进行相关分析。结果ITP患儿血浆sCD40L浓度明显升高,与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）;CITP组血浆sCD40L浓度升高更为明显,与AITP组或对照组比较差异均有显著性（P〈0.05）。ITP患儿CD4＋CD45RA＋T细胞表达率下降,CD4＋CD45RO＋T细胞表达率升高,差异均有显著性意义（P〈0.05）,而AITP和CITP之间差异无显著性（P〉0.05）。血浆sCD40L与外周血小板计数无相关性（r=-0.047,P〉0.05）。结论CD40L高表达导致的CD40L/CD40信号传导通路异常可能参与ITP发病;ITP患儿存在Th细胞亚群偏移,表现为Th1细胞减少,Th2细胞增多。     

CD4+CD25+调节性T细胞在支气管哮喘中的研究进展

近年来,关于CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在支气管哮喘发病中作用的研究有相当大的进展,支气管哮喘的发病机制已不能单纯用Th1/Th2平衡理论来解释,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞越来越受到重视,它通过细胞接触和分泌细胞因子发挥免疫抑制功能,维持自身免疫平衡,控制支气管哮喘的发展,Foxp3、IL-6等在其功能调控中发挥重要作用。支气管哮喘中,有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞作用机制及数量变化的观点不一,糖皮质激素通过增强CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能发挥治疗作用。     

FOXP3^＋CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及其在重症肌无力中的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tr）是具有免疫调节作用的T细胞,其主要功能是抑制自身反应性T细胞的活化和增殖,参与自身免疫调节,维持自身免疫耐受,在重症肌无力等自身免疫疾病中发挥重要作用。叉头状转录因子（FOXP3）是Fox家族重要成员之一,特异性表达于CD4^＋CD25^＋Tr,在CD4^＋CD25^＋Tr的发育和功能维持方面起关键作用。重症肌无力患者中FOXP3的表达明显减少,FOXP3可能与重症肌无力的发病密切相关,因此FOXP3的研究可能为重症肌无力的治疗开辟新途径。     

CD8＋ T细胞在肠道病毒71型感染重症手足口病中的作用研究

目的：检测分析肠道病毒71型（EV71）感染手足口病患儿外周血CD8＋T细胞数量变化与患儿年龄以及病情严重程度之间的关系,进而分析探讨CD8＋T细胞在EV71感染神经系统并发症发生中的潜在作用。方法收集2014年3月至9月昆明市儿童医院感染科确诊的手足口病患儿138例,其中普通型33例,重型45例,危重型60例。患儿年龄9个月~5岁。采用流式细胞术对外周血中CD8＋T细胞亚群进行检测。结果与各年龄段健康儿童CD8＋T细胞参考值相比,除~2岁年龄段普通型手足口病患儿CD8＋T细胞百分比增高明显,~5岁年龄段危重型手足口病患儿CD8＋T细胞减低外,其他各年龄段各病情患儿中CD8＋T细胞均增高或略高。其中,9~15个月普通型、重型患儿外周血CD8＋T细胞百分比增高均较明显,而危重型患儿略增高;~2岁患儿随病情加重CD8＋T细胞增高幅度逐渐减低;~5岁年龄段患儿,普通型增高不明显,重型略高,危重型减低。~2岁年龄段普通型与重型、危重型手足口病患儿CD8＋T细胞百分比均存在显著差异（ P均﹤0.05）;而其他年龄段手足口病患儿,不同病情严重程度者CD8＋T细胞的表达无显著差异（ P均﹥0.05）。结论 CD8＋T细胞的表达变化与患儿年龄及病情严重程度间存在一定的关系;尤其是~2岁年龄段手足口病患儿体内CD8＋T细胞的表达减低与患儿病情发展至重症相关,推测CD8＋T细胞在~2岁年龄段手足口病患儿很可能发挥重要的抗病毒免疫反应。     

哮喘患儿CD4+CD25+T细胞FoxP3表达的意义

目的研究表达FoxP3的CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,探讨其在发病机制中的意义。方法采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测哮喘患儿外周血FoxP3表达,并与健康对照组进行比较。结果哮喘患儿CD4和CD25双阳性细胞所占比例与健康对照组比较无明显差异,而CD4^＋ CD25^high和CD4^＋ CD25^＋ FoxP3＋细胞明显低于对照组（Pa〈0.05）。FoxP3 mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化一致。结论哮喘患儿CD4^＋ CD25^＋ FoxP3＋调节性T细胞明显减少,可能与哮喘的发病机制有关。     

人脐血间充质干细胞对脐血CD+34细胞体外扩增作用的研究

目的 探讨含人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)体系在体外对脐血造血干细胞(HSCs)扩增作用。方法 (1)用含人脐血MSCs及不同造血生长因子(HGFs)组合的无血清扩增体系对人脐血CD34^ 细胞进行体外扩增。(2)于扩增前及扩增后第6、12天分别用双色流式细胞仪动态检测HSCs表面抗原标记：CD34^ 、CD34^ CD38^-、CD34^ CD3^ 、CD34^ CD19^ 、CD34^ 和CD34^ CD41^ 。细胞的含量。(3)按本实验室方法行体外半固体培养,观察扩增前后脐血细胞粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、爆式红系集落形成单位(BFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)及高增殖集落形成单位(CFU-HPP)集落形成情况。结果(1)含人脐血MSCs体系对脐血CD34^ CD38^ 细胞的扩增倍数在第6天和第12大分别为159和437倍。该业群百分比在单纯因子组扩增第12天时为1．98％,而在含脐血MSCs组为9．98%,明显高于扩增前。(2)集落培养表明,含脐血MSCs组扩增第12天与扩增第6天相比,其CFU-Mix和CFU-HPP的扩增倍数增加,而单纯因子组这两种集落的扩增倍数下降。(3)随扩增天数的增加,两组扩增体系中CD34^ CD3^ 和CD34^ CD41a^ 细胞均明显增加,而CD34^ CD19^ 和CD34^ CD3^ 细胞均明显减少。两组相比,含脐血MSCs组差异更显著。结论 (1)含脐血MSCs体系不仅能扩增更原始的造血干／祖细胞(HSPC),且具有在短期内(12d)保持HSCs不耗竭。(2)含脐血MSCs体系对脐血CD34^ 细胞向定向祖细胞的扩增,主要为髓系及巨核系祖细胞,而对其向淋巴系祖细胞的扩增具有抑制作用。     

脐血中造血细胞CD34+CD29+细胞含量对移植造血重建的影响

近半个世纪以来的实践证明，造血干细胞移植(HSCT)是白血病、再障、免疫缺陷病等恶性血液病治疗中的一个有效措施，而且提高造血干祖细胞(HSPC)在造血组织中的植入率是加快HSCT后造血重建的关键之一。目前已证实，在外周血移植中，CD29^ 细胞与粒细胞、血小板的恢复相关。我们通