Numb通过上调V1G1的表达激活近端肾小管细胞mTORC1信号通路

目的探讨Numb对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）复合物1（mTORC1）信号通路活性的影响及潜在的分子机制。方法建立Numb-siRNA转染和/或顺铂诱导的雄性BALB/c小鼠急性肾损伤模型，分为4组：NC-siRNA、Numb-siRNA、NC-siRNA+顺铂、Numb-siRNA+顺铂。免疫组化检测肾脏Numb、Megalin的表达与分布；Western blot检测各组动物肾脏中Numb、S6、p-S6、S6K1、p-S6K1、4EBP1、p-4EBP1的蛋白表达。分离培养Numb-siRNA转染的小鼠原代近端肾小管上皮细胞。体外建立Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞模型，分为NC-siRNA组、Numb-siRNA组、NC-siRNA+ 氨基酸刺激组和Numb-siRNA+氨基酸刺激组。Western blot检测各组细胞Numb、S6、p-S6的蛋白表达，检测沉默Numb表达前后的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及原代近端肾小管上皮细胞中AMPK、p-AMPK的蛋白表达。V1G1过表达及空白对照慢病毒感染、Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激NRK-52E细胞，分为NC-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组、Numb-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组及Numb-siRNA+V1G1过表达慢病毒+氨基酸刺激组；Western blot检测V1G1、S6、p-S6的蛋白表达。结果与NC-siRNA组相比，Numb-siRNA组小鼠肾脏近端肾小管上皮细胞Numb及p-S6的蛋白表达均下调（P < 0.05），但不影响近端小管标记蛋白Megalin的表达与分布；与对照组小鼠相比，顺铂处理组小鼠肾脏p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达均上调（P < 0.05），而Numb-siRNA处理组小鼠抑制顺铂介导的p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达水平的上调（P < 0.05）。在NRK-52E细胞中，与氨基酸饥饿组相比，氨基酸刺激组细胞p-S6的蛋白表达上调（P < 0.05），而转染Numb-siRNA的细胞中Numb及p-S6的蛋白表达较对照组均下调（P < 0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及小鼠原代近端肾小管上皮细胞中，p-AMPK的蛋白表达均下调（P < 0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞中，V1G1的蛋白表达下调（P < 0.05），上调NRK-52E细胞中V1G1的蛋白表达，可以逆转Numb沉默介导的p-S6的降低（P < 0.05）。结论Numb可通过上调V1G1的蛋白表达促进近端肾小管上皮细胞mTORC1信号通路的活化。     

GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗对小鼠卵巢功能的影响

目的探究促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂和经血源性干细胞（MenSCs）联合治疗对小鼠卵巢功能的影响。方法将45只SPF级实验小鼠随机分为Control组（腹腔注射生理盐水）、POF组（腹腔注射120 mg·kg^-1·d^-1 CTX）、MenSC+POF组（CTX损伤处理后注射移植含2×10⁶ MenSCs的细胞悬浮液）、GnRHa+POF组（造模前14 d注射丙氨瑞林0.1 mg·kg^-1·d^-1，第15天开始CTX注射）、MenSC+POF+GnRHa组（按MenSC+CTX组和GnRHa+CTX组方案联合用药），每组9只。HE染色观察小鼠卵巢组织病理变化情况，ELISA法检测小鼠血清中黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）和雌二醇（E2）的含量水平，Western blot检测小鼠卵巢颗粒细胞中KI-67、Bcl-2、BAX、caspase 9、caspase 3、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、p-PI3K、PI3K、p-Akt及Akt蛋白的表达情况。结果与Control组相比，POF组小鼠卵巢纤维化明显，闭锁卵泡数增多，血清中LH和FSH的含量水平极升高（P < 0.01），AMH和E2含量水平降低（P < 0.01），BAX、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/ caspase 3蛋白表达水平升高（P < 0.01），KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平降低（P < 0.01）；与POF组比较，GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可抑制小鼠卵巢闭锁卵泡的产生，降低小鼠血清中LH和FSH的含量水平（P < 0.01），提高AMH和E2的含量水平（P < 0.05或P < 0.01），抑制小鼠卵巢颗粒细胞中BAX、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白的表达（P < 0.05或P < 0.01），促进KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达（P < 0.05或P < 0.01）。结论GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可能通过上调PI3K-Akt信号通路表达，减少卵巢闭锁卵泡的产生，提高小鼠卵巢的储备功能，从而达到对卵巢修复和保护的目的。     

Rictor对小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞线粒体钙信号的调控

目的探索Rictor在小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞（ESC-CM）中的表达、定位及其对线粒体钙信号的调控作用。方法通过经典"悬滴-悬浮-贴壁"三步法建立ESC-CM模型。利用免疫荧光法及蛋白质印迹法观察Rictor在ESC-CM中的定位。慢病毒技术干扰小鼠胚胎干细胞Rictor表达后，采用免疫荧光法考察ESC-CM内质网与线粒体的叠加情况；通过透射电镜观察ESC-CM的超微结构；活细胞工作站测定分化后心肌细胞线粒体钙瞬变；免疫共沉淀法检测ESC-CM中1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP3R）、葡萄糖调节蛋白75（Grp75）、线粒体外膜的电压依赖性阴离子通道1（VDAC1）间的相互作用；蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2（Mfn2）的表达情况。结果Rictor在ESC-CM中主要定位于内质网及线粒体-内质网结构偶联（MAM）域，且其表达定位与线粒体及内质网有很好的叠加。干扰Rictor后，心肌细胞线粒体部分呈散点状，线粒体与内质网的叠加率降低（ P < 0.01）；ESC-CM超微MAM形成减少；ATP刺激引起的ESC-CM线粒体钙瞬变幅度下降，其中钙瞬变斜率和上升峰值均降低（均 P < 0.01）；MAM中IP3R、Grp75、VDAC1相互作用明显减弱，且Mfn2蛋白表达降低（ P < 0.01）。 结论干扰小鼠胚胎干细胞中Rictor表达可降低ESC-CM中钙从内质网到线粒体的释放，这可能是通过影响IP3R、Grp75、VDAC1间相互作用，减少Mfn2表达，进而破坏MAM来实现的。     

激活大麻素受体2可减轻实验性脓毒症大鼠的急性肺损伤

目的探讨激活大麻素受体2（CB2）对大鼠脓毒症急性肺损伤的保护作用及机制。方法将48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、CB2激动剂组和P38 MAPK抑制剂组（12只/组）。对照组腹腔注射生理盐水，其余3组均腹腔注射脂多糖造模6 h；CB2激动剂组在注射脂多糖前30 min腹腔注射CB2激动剂JWH133（3 mg/kg），P38 MAPK抑制剂组在CB2激动剂组基础上提前30 min腹腔注射P38 MAPK抑制剂SB203580（5 mg/kg）。观察和检测肺组织病理学、含水率、液体清除率、炎症因子的变化情况，肺组织CB2、紧密连接的基因及蛋白表达情况以及P38 MAPK磷酸化情况。结果与对照组相比，模型组大鼠的肺泡结构破坏严重，液体清除率、肺组织中CB2、occludin和ZO-1蛋白的mRNA及蛋白表达降低，肺组织含水率、P38 MAPK的磷酸化程度、肺灌洗液中TNF-α、IL-1β均增加，差异有统计学意义（P < 0.05）。与模型组相比，CB2激动剂组肺泡形态有所恢复，但仍有炎性浸润，肺组织含水率、P38 MAPK磷酸化程度、肺灌洗液中TNF-α、IL-1β降低，液体清除率、肺组织CB2、occludin和ZO-1蛋白的mRNA及蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P < 0.05）。与CB2激动剂组相比，P38 MAPK抑制剂组肺泡结构有所恢复，肺组织P38 MAPK磷酸化程度、肺灌洗液中TNF-α、IL-1β水平降低，occludin、ZO-1蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P < 0.05），而CB2的mRNA及蛋白表达无变化（P > 0.05）。结论CB2激活后可通过抑制P38 MAPK信号通路，降低肺组织炎症因子释放，促进紧密连接蛋白表达，对实验性脓毒症大鼠急性肺损伤起到保护作用。     

蛋白酶体亚基对肝细胞癌发生发展的调控作用研究进展

蛋白酶体是真核细胞中负责降解细胞内短寿命蛋白、参与维持细胞内蛋白质稳态的重要细胞器。研究表明，在肝细胞癌（HCC）的发生发展进程中，蛋白酶体调节颗粒亚基可通过调节PTEN基因、P53、Bcl-2、Bcl-2相互作用的细胞死亡介体蛋白、周期蛋白依赖性激酶4、β型转化生长因子受体、E2F1、生长因子受体结合蛋白2等多种肿瘤相关蛋白以及相关的通路分子，例如信号转导及转录激活蛋白3、蛋白激酶B，诱使这些蛋白质功能失调，进而促进HCC的发生，癌细胞增殖、侵袭与转移。蛋白酶体核心颗粒亚基则更多参与HCC相关蛋白的降解，因此核心颗粒的抑制剂表现出良好的抗肿瘤效应。本文就当前蛋白酶体调节颗粒亚基和核心颗粒亚基在HCC发生发展过程中的调控作用及其机制进行综述。     

TGF-β1通过上调Shh信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组：分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组（TGF-β1组）、10 ng/mL TGF-β1联合20 μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力；细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力；免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白（Fn）的表达；Western blotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh蛋白的表达；q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖（P < 0.05）；TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移（P < 0.05）。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌（P < 0.05）。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达（P < 0.05），TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌（P < 0.05）。结论TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达，诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。     

槟榔碱通过促进巨噬细胞分泌含miR-155-5p外泌体诱导人口腔成纤维细胞的活化

目的探讨槟榔碱（ARE）通过调控巨噬细胞外泌体内miR-155-5p水平诱导人口腔黏膜成纤维细胞向成纤维表型转化的作用机制。方法以人单核细胞系（THP-1）与人口腔黏膜成纤维细胞系（HOMF）为研究对象。实验设为空白对照组、阴性对照组、ARE刺激组、ARE刺激后THP-1培养上清刺激组（CS）、ARE刺激后THP-1外泌体刺激组（EXO）、ARE刺激后THP-1无外泌体上清刺激组（NES）、miR-155-5p过表达组（miR-155-5p mimics）、ARE刺激后EXO处理对照组（NC+EXO-ARE）和miR-155-5p抑制联合ARE刺激后EXO处理（miR-155-5p inhibitor EXO-ARE）组。以流式细胞术检测THP-1细胞极化情况。Transwell细胞迁移实验检测HOMF细胞迁移能力。DCFH-DA检测细胞氧化应激水平。qRT-PCR检测细胞α-SMA、I型胶原和SOCS1的mRNA转录水平。免疫印迹实验检测细胞α-SMA、I型胶原与SOCS1蛋白表达。结果流式检测显示，相较于对照组，ARE组THP-1细胞由M0趋向M1极化。ARE对THP-1和HOMF细胞的刺激结果显示，相较于对照组，CS组与EXO组HOMF细胞迁移能力增强；细胞内氧化应激水平上调；细胞内miR-155-5p水平升高；细胞内α-SMA、I型胶原mRNA转录增多（1.90±0.08 vs 3.17±0.08；3.19± 0.05 vs 5.65±0.01，P < 0.05），SOCS1的mRNA转录减少（1.08±0.06 vs 0.34±0.02，P < 0.05）；α-SMA、I型胶原蛋白表达上调，SOCS1蛋白表达下调。miR-155-5p操纵实验显示，与阴性对照组相比，miR-155-5p mimics组HOMF细胞迁移能力增强，细胞内α-SMA和I型胶原蛋白表达上调；而与NC+EXO-ARE组相比，miR-155-5p inhibitor组HOMF细胞迁移能力减弱，细胞内α-SMA和I型胶原mRNA转录减少（5.84±0.08 vs 2.00±0.98；7.32±0.51 vs 2.33±0.43，P < 0.05）；α-SMA、I型胶原蛋白表达下调。结论ARE可上调THP-1胞内miR-155-5p并经外泌体途径转导和抑制HOMF胞内SOCS1蛋白表达，促进HOMF细胞的纤维化表型转化。     

干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组（8只/组），利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核，建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠，取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织，采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态，利用免疫荧光检测Iba-1、P2X4受体的表达情况；应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs，采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况；采用Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况；采用siRNA P2X4，下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达，RT-qPCR、Western blot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达；利用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果与对照组相比，荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P < 0.0001），且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.001）；使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后，M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调（P=0.0001、0.001），M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.006、0.001），但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著，同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.005、0.014）。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA（P < 0.01）及蛋白表达水平（P < 0.01，P < 0.05）降低，并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力（P=0.004、0.017）。结论降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。     

二甲双胍通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡改善结肠炎黏膜上皮屏障损伤

目的：探讨二甲双胍对溃疡性结肠炎黏膜上皮屏障损伤的作用及具体机制。方法：用人结肠癌细胞系Caco-2与人单核细胞系THP-1构建结肠炎体外细胞共培养模型，用1 mmol/L二甲双胍作用24 h后，运用流式细胞术检测肠上皮细胞凋亡情况，采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白和内质网应激相关蛋白的表达水平。结果：与模型对照组比较，二甲双胍组细胞凋亡率从（14.22±2.34）%下降至（9.88±0.61）%（ t=3.119， P<0.05），紧密连接蛋白1和密封蛋白1相对表达量增加（ t=5.172和3.546，均 P<0.05），内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白（GRP）78和内质网应激诱导的凋亡相关分子C/EBP同源蛋白（CHOP）、胱天蛋白酶（caspase）-12的蛋白表达水平下降（均 P<0.05），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和真核生物起始因子2α（eIF2α）的磷酸化水平下降（均 P<0.05）。 结论：二甲双胍可以通过减轻结肠炎肠上皮细胞的细胞凋亡和增加紧密连接蛋白的表达改善结肠炎肠黏膜上皮屏障损伤，其分子机制可能与抑制内质网应激诱导的细胞凋亡途径有关。     

抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞“归巢”并改善哮喘

目的观察间充质干细胞（BMSCs）归巢调节哮喘Th1/Th“ 2漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组：正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、BMSCs移植组（BMSCs）、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型，尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学，酶联免疫吸附法检测肺组织白介素（IL）-5、IL-13、IFN-γ，RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达，免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达，免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果与NC组比较，MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低，IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高，Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高（P＜0.05或P＜0.01）。与MC组比较，BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高，BMSCs组Notch1、Jagged1蛋白表达降低，BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低（P＜0.05或P＜0.01）。与BMSCs组比较，BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高，IL-13、Notch1mRNA表达降低（P＜0.05）。结论BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2 “漂移”产生调节作用，Notch1/ Jagged1通路可能参与其过程。     

褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞的异常自噬与凋亡

目的探讨褪黑素（MT）对2，2''，4，4''-四溴联苯醚（PBDE-47）所致大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞异常自噬与凋亡的影响。方法通过一系列浓度梯度MT（12.5、25、50、100、200 μmol/L）预处理PC12细胞2 h后，并联合浓度为20 μmol/L的PBDE-47染毒细胞24 h，采用细胞计数试剂盒（CCK8）检测细胞存活率，筛选25 μmol/L MT用于后续实验。实验分组为：溶剂对照组（0.5‰ DMSO）、20 μmol/L PBDE-47处理组、20 μmol/L PBDE-47+25 μmol/L MT处理组、25 μmol/L MT处理组。采用免疫荧光技术检测自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）阳性着色情况；采用Western blot技术检测自噬关键蛋白自噬相关蛋白7（ATG7）、自噬选择性底物p62、LC3-Ⅱ水平，以及凋亡相关蛋白活化型含半胱氨酸的天冬氨酸-3（active caspase-3）和剪切型多（ADP-核糖）聚合酶（cleaved PARP）水平。结果CCK8结果表明，PBDE-47处理组细胞活力相比对照组有所下降（P=0.001）；与PBDE-47处理组相比，PBDE-47+25 μmol/L MT处理组细胞存活率上升且在80%以上，差异均有统计学意义（P=0.023）。与对照组相比，PBDE-47处理后PC12细胞LC3蛋白阳性着色增强；此外，PBDE-47处理组PC12细胞ATG7蛋白水平下降，p62、LC3-Ⅱ、active caspase-3、cleaved PARP蛋白水平上升，差异均有统计学意义（P均 < 0.001）。与PBDE-47处理组相比，PBDE-47+MT处理组LC3蛋白阳性着色减弱；此外，PBDE-47+MT处理组ATG7蛋白水平上升（P=0.034），p62蛋白水平下降（P=0.048），LC3-Ⅱ蛋白水平下降（P=0.018），active caspase-3蛋白水平下降（P < 0.001），cleaved PARP蛋白水平下降（P=0.032）。结论PBDE-47可通过诱导PC12细胞自噬损伤引起自噬体蓄积，并能促进细胞凋亡，从而降低细胞存活；褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞异常自噬与凋亡，进而提高细胞存活。     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响；将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组，分别采用0.4 g/L Mat及10 μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后，应用光学显微镜观察细胞形态变化，流式细胞术annexin Ⅴ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡，PI单标记检测细胞周期变化，Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示，不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖，具有时间和浓度依赖性，且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P＜0.01）。形态学检查显示，联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示，与对照组及单药组相比，联合组显著促进细胞凋亡（[42.50±2.63）%，P＜0.01]，显著增加了细胞周期G₀/G₁期细胞比率（[57.23±1.44）%，P＜0.01]。Western blot结果表明，两药联合后K562细胞p-mTOR、CyclinD1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平明显增高（P＜0.01），Caspase-9蛋白表达水平下降（P＜0.01）。结论Mat和LY294002联合应用可以增强对K562细胞生长抑制的协同作用，其机制可能是通过有效下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt表达，使p-mTOR、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达下调，Caspase-9蛋白表达上调来实现的。     

瞬时受体电位通道C与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠心脏和肾脏损害的关系

目的探究经典瞬时受体电位通道C（TRPC）相关蛋白在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）大鼠心脏和肾脏损害中的作用。方法18只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组，每组9只。实验组大鼠在间歇性低氧舱中，每天暴露于间歇性低氧环境8 h（10:00—18:00）。此后通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测大鼠心脏和肾脏组织中TRPC mRNA和相关蛋白的表达。结果实验组心脏组织中TRPC3、TRPC4、TRPC5的mRNA表达较对照组升高（均 P < 0.05），而肾脏组织TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5、TRPC6、TRPC7的mRNA表达在两组之间差异无统计学意义（均 P>0.05）；实验组肾脏组织中TRPC4、TRPC5、TRPC6的mRNA表达低于心脏组织（均 P < 0.05），对照组肾脏组织TRPC7的mRNA表达高于心脏组织（ P < 0.05）。实验组心脏组织中的TRPC5蛋白表达较对照组升高（ P < 0.05），而肾脏组织TRPC5、TRPC6、TRPC7相关蛋白的表达在两组之间差异无统计学意义（均 P>0.05）。 结论TRPC5可能参与OSAHS心脏损害的病理生理过程，有望成为治疗OSAHS所致心脏损害的药物新靶点。     

奥氮平连续处理后大鼠中缝背核组织差异表达蛋白的生物信息学分析

目的分析奥氮平连续处理的大鼠中缝背核蛋白的差异表达，探究奥氮平使用早期导致代谢障碍可能的中枢5-HT机制。方法将40只SD大鼠随机分配到奥氮平组[灌胃奥氮平1.2 mg/(kg· d）]和对照组（灌胃等量0.9%氯化钠溶液），两组各分配10只雌性大鼠、10只雄性大鼠。给药1次/d，连续28 d。最后一次给药1 h后处理大鼠，并取大脑中缝背核样本。利用绝对和相对定量同位素标记技术联合液相色谱-串联质谱技术对大鼠中缝背核组织进行蛋白质组学分析，进一步对差异表达蛋白进行GO、KEGG通路、COG、蛋白互作网络分析。另将24只大鼠随机分为4组：2个奥氮平组和2个对照组（6只/组），类似方法得到大鼠中缝背核样本，根据蛋白质组学数据选择目标基因的表达进行qRT-PCR和Western blot验证。结果筛选出奥氮平组与对照组大鼠中缝背核差异表达蛋白有72种上调、142种下调。GO注释分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白参与细胞过程、生物调节、代谢过程、应激反应、多细胞生物过程以及结合、催化活性、分子功能调节、转录调节活性等分子功能。KEGG富集分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白主要参与流体剪切应力与动脉粥样硬化、5-羟色胺能突触、丁酸代谢、甲状腺激素合成和IL-17信号通路等；PPI分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、MAPK9和LOC685513(Gng14）位于蛋白质互作网络的节点。qRT-PCR和Western blot结果显示，丁酸代谢和5-羟色胺(5-HT）能突触通路4个基因及其蛋白，其中丁酸代谢的关键调节基因Hmgcs2及其蛋白在药物处理组明显下调（P < 0.01），5-羟色胺2受体调控的Slc6a4、Gnai1基因及其蛋白在药物处理组均出现显著高表达（P < 0.05）。结论奥氮平使用早期可能主要通过调控中缝背核组织Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、Slc6a4、MAPK9和Gng14等差异表达蛋白以及5-HT能突触通路等，参与大鼠机体代谢障碍的中枢5-HT作用机制。     

Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

目的探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠，并应用PCR鉴定小鼠基因型，然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平，明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降，性激素水平紊乱，卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P < 0.05），引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后，mTOR信号通路激活，颗粒细胞凋亡增加，卵母细胞内BAX蛋白表达增强，Bcl-2蛋白表达减弱，BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P < 0.05）。结论Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用，其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用，分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基；高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基；高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ；高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950；高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后，CCK-8法测定细胞活性；CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化；免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平；Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和CleavedGSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果与CON组相比，HG组细胞活性明显下降（P < 0.01），心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P < 0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P < 0.01）以及焦亡相关因子NLRP3，GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P < 0.01）均明显升高，铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P < 0.01）。与HG组相比，HG+ MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P < 0.01），细胞和线粒体内ROS荧光强度（P < 0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P < 0.01）以及NLRP3、GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达明显降低（P < 0.05），GPX4蛋白表达增高（P < 0.01）。与HG组相比，HG+ MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）；但与HG+MCC950组相比，HG+MCC950+ ROT组细胞活性明显降低（P < 0.01），ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高，GPX4蛋白表达降低（P < 0.05）。结论MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成，减少焦亡和铁死亡的发生；抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生；线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

近视小鼠巩膜成纤维细胞的基因表达谱：基于单细胞RNA测序的生物信息学分析

目的利用单细胞RNA测序(RNA-seq)技术探索巩膜成纤维细胞在近视形成前后基因表达的变化探索巩膜成纤维细胞在近视中的作用机制。方法将正常健康的C57BL/6J小鼠按随机数字法平均分为近视模型组与阴性对照组，6只/组。阴性对照组双眼前节无遮盖、近视模型组使用半透明眼罩行右眼形觉剥夺，实验开始及结束时均测眼轴，并单细胞捕获右眼巩膜成纤维细胞进行RNA-seq，筛选差异表达基因，使用GO功能分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）途径进行功能显著性富集分析。结果近视模型组与阴性对照组比较，筛选出差异基因169个（P>0.05），112个上调基因和57个下调基因，分子功能中71个GO项（P < 0.05）。GO功能分析显示差异基因中有：白细胞聚集、分化以及细胞黏附等与炎症相关GO项；ATP代谢与结合，氧化还原过程、氧化应激反应、氧化磷酸化等与缺氧相关的GO项；蛋白质折叠、蛋白质转运以及蛋白质代谢过程的负调控、内质网、内质网腔、内质网应激等与蛋白质及内质网应激相关GO的生物学过程。KEGG分析显示差异基因显著的富集信号通路主要为与缺氧相关的三羧酸循环、氧化磷酸化、过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、氧化磷酸化等通路，与炎症相关的丝裂原活化蛋白激酶信号通路、白细胞跨内皮转运等，以及与蛋白质相关的帕金森氏病、亨廷顿病、蛋白质消化吸收等通路。结论巩膜成纤维细胞在近视形成过程中出现功能障碍，与炎症、缺氧、蛋白质调节及内质网应激的相关基因表达和通路的调节有一定关系。     

PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法组织层面上，应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平；根据PFN2表达量，将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组（46例）、低表达（48例）组，以及癌旁组织中PFN2高表达组（26例）、低表达（49例）组；采用χ²检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier生存分析法，分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系；细胞功能上，敲低MKN-45细胞中PFN2，将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组；过表达MKN-45细胞中PFN2，将其分为control-vector组与PFN2-vector组，选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织（P < 0.01）；PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关（P < 0.05）；在胃癌组织中，PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系（P < 0.01）；PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差（P < 0.01），并且是胃癌预后的独立预测因子（P < 0.05）；MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强（P < 0.001）。结论PFN2蛋白在胃癌组织中高表达，并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。     

右美托咪定预处理通过抑制NLRP3炎性小体激活减轻大鼠肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的探讨右美托咪定（Dex）对大鼠肠缺血再灌注（II/R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用以及核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法将32只健康雄性SD大鼠，随机分为4组（8只/组）。假手术组（Sham组）仅暴露肠系膜上动脉（SMA），肠缺血再灌注组（II/R组）阻断SMA 1 h后再灌注2 h，II/R+右美托咪定处理组（Dex+II/R组）右美托咪定干预后行再灌注，Dex假手术组（Dex组）右美托咪定预处理假手术组。Sham组和II/R组腹腔注射等量生理盐水。采取夹闭SMA 1 h再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。测定各组大鼠肺部组织湿/干质量比值（W/D）、髓过氧化物酶（MPO）活性，HE染色评估肺组织病理学变化以及行肺损伤评分；ELISA检测肺部组织中炎性因子TNF-α、IL-18、IL-1β水平；Western blot检测肺部组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白的表达水平。结果相较于Sham组，II/R组肺组织病理损伤明显，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达显著升高（P < 0.05），肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（P < 0.05），p-AMPK蛋白表达减少（P < 0.05）；相较于II/R组，Dex+II/R组肺组织病理损伤轻微，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达明显下降（P < 0.05），肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降（P < 0.05），p-AMPK蛋白表达明显增加（P < 0.05）。结论右托美咪定通过对NLRP3炎性小体激活的抑制，减轻炎性反应，进而改善大鼠II/R所致的ALI。     

新风胶囊含药血清抑制脂多糖诱导的类风湿关节炎大鼠的滑膜成纤维细胞焦亡

目的观察新风胶囊（XFC）含药血清对脂多糖（LPS）诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）焦亡的影响及其机制。方法将20只SD大鼠利用随机数字表法分为2组：空白组和XFC组，XFC组予0.324 mg/g灌胃7 d后制备含药血清。CCK-8法检测XFC含药血清作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间。将RA-FLS分为空白组（RA-FLS）、模型组（RA-FLS+5 μg/mL LPS）、MCC950组（RA-FLS+LPS+MCC950）、XFC组（RA-FLS+LPS+XFC含药血清）。CCK-8法检测细胞活性，电镜观察RAFLS焦亡形态，ELISA检测IL-1β、IL-18浓度，Western blotting和qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA的表达。结果XFC作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为20%和24 h。与空白组相比，模型组细胞活性显著上升（P<0.05），电镜下可见RA-FLS内形成大量小泡，膜上形成孔隙，胞膜破裂，细胞内容物流出，IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组相比，XFC含药血清组、MCC950组细胞活性显著下降（P<0.01），细胞焦亡情况改善，IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05、P<0.01）。结论XFC可能通过NLRP3/GSDMD通路抑制FLS细胞焦亡，下调炎症细胞因子的分泌，减轻关节局部炎症反应而发挥治疗作用。