迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

益气活血解毒中药及肾上腺髓质素抑制醛固酮诱导的 HK2 细胞自噬作用研究

目的:观察益气活血解毒中药血清及肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)抑制醛固酮(Aldosterone,ALD)诱导的人近端肾小管上皮细胞HK2自噬的作用。方法:本实验采用1μmol/L的ALD诱导HK2细胞自噬,给予10%的益气活血解毒含药血清及100 nmol/L的ADM治疗。实验分为对照组(CON组),ALD组,ALD+益气活血解毒含药血清组(ALD+TCM组),ALD+ADM组,48 h后收集细胞并观察变化。采用免疫细胞荧光、Western blot法检测血清糖皮质激素诱导蛋白激酶1 (Serum and glucocorticoid induced kinase,SGK-1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (Phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,P-ERK1/2)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylated mammalian target of rapamycin,P-mTOR)/mTOR、自噬相关基因5(Autophagy associated gene,Atg5)、酵母自噬基因6 (Atg6)的同源物Beclin1、自噬标志微管相关蛋白1轻链3 (Microtubularassociated protein 1 light chain 3,LC3)的表达。结果:与CON组比较,ALD组SGK-1、P-ERK1/2、Atg5、LC3和Beclin1表达明显增强(P 0.01),P-mTOR/mTOR表达减弱(P 0.01);与ALD组比较,ALD+TCM组、ALD+ADM组这些指标表达均减弱(P 0.01),P-mTOR/mTOR表达增强(P 0.01)。结论:益气活血解毒中药、ADM均可抑制ALD诱导的HK2细胞自噬,从而减轻肾小管的损伤,减缓肾脏损伤的进程。     

淫羊藿苷抑制 Aβ25-35诱导的 N2a 细胞自噬及减少细胞内外 Aβ 的实验研究

目的 研究淫羊藿苷（ICA） 对 β-淀粉样蛋白肽 25-35（Aβ25-35） 诱导的小鼠神经瘤母细胞（N2a）Aβ 含量和自噬溶酶体途径的影响。 方法 N2a 细胞培养基加入不同浓度的 ICA （0.05、0.1、0.2 μmol/L）孵育 6 h，再将 20 μmol/L 老化的 Aβ25-35 处理 24 h。 实验分为 5 组院对照组（DMSO）、AD 细胞模型组（ Aβ25-35 ）、0.05 μmol/L ICA 干预组（ Aβ25-35 +ICA0.05）、0.1 μmol/L ICA 干预组 （ Aβ25-35 +ICA0.1）、0.2 μmol/L ICA 干预组（Aβ25-35+ICA0.2）。 将 0.2 μmol/L 的 ICA 预处理 N2a 细胞 2、4、6 h，再加入 Aβ25-35 处理 24 h。 收集细胞和培养基，ELISA 法测定细胞内外 Aβ40 及 Aβ42 含量；免疫印迹法检测LC3、P62、p70S6K 及其苏氨酸 389 位点磷酸化（p-p70S6K，活性形式）的表达；采用细胞免疫荧光技术观察 LC3 和 4G8（识别 Aβ17-24 片段）的染色强度及 LAMP2 和 4G8 共定位情况。 结果 与对照组比较，AD细胞模型组细胞存活率降低（P<0.05），细胞内外 Aβ42 及 Aβ40 的含量增加（P<0.01，P<0.05），LC3II/LC3I和 P62 蛋白表达均增加（P<0.05），p- p70S6K 表达增加（P<0.01）。 与 AD 细胞模型组比较，0.05、0.1 和0.2 μmol/L ICA 干预组细胞活力下降（P<0.05），0.2 μmol/L ICA 干预组细胞内外 Aβ42 及 Aβ40 含量降低（P<0.05），0.1 和 0.2 μmol/L 干预组 ICALC3II/LC3I和 4G8 蛋白表达降低（P<0.05）。 0.2 μmol/LICA 预处理 4、6 h 可明显降低 AD 细胞模型细胞内外 Aβ42 和 Aβ40 的含量，降低 LC3域/ LC3玉和 P62 蛋白表达及 p- p70S6K/p70S6K（P<0.05）。 结论 ICA 可抑制 Aβ25-35 诱导的 N2a 细胞自噬，降低 p70S6K 活性并减少细胞内外 Aβ。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的保护作用

目的:观察人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白(beta-Amyliod,Aβ1-42)诱导PC12细胞自噬性死亡的作用,试探究其神经保护机制。方法:将PC12细胞分为对照组、Aβ组和Aβ+Rg1组。Aβ组细胞用Aβ1-42(10μmol/L)处理24 h;Aβ+Rg1组细胞分别用12.5、25、50μmol/L Rg1预处理24 h后,加入Aβ1-42(10μmol/L)继续培养24 h。采用MTT法测定各组细胞活力,免疫荧光染色法检测细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达变化,Western blot法检测LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达变化。结果:对照组比较,Aβ组细胞活力显著下降(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组细胞活力显著高于Aβ组(P0.01)。与对照组比较,Aβ组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著上升(P0.01);与模型组比较,Rg1各剂量组LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达显著低于Aβ组(P0.01)。结论:人参皂苷Rg1可能通过抑制Aβ诱导的细胞自噬性死亡发挥神经保护作用。     

盐酸小檗碱对 H2O2 诱导的 H9C2 心肌细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨盐酸小檗碱对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用和机制。方法:将H9C2心肌细胞随机分成对照组、模型组(200μmol/L H_2O_2处理)、盐酸小檗碱+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+200μmol/L H2O)2和盐酸小檗碱+Tatbeclin1+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+1μmol/L Tat-beclin1和200μmol/L H2O)2。采用MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞损伤、免疫荧光实验分析细胞自噬情况、Western Blot检测细胞beclin1表达。结果:与对照组比较,模型组H9C2细胞存活率显著降低、LDH释放显著增加、LC3绿色荧光增多、beclin1蛋白表达显著增加(P 0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱+H_2O_2组H9C2细胞存活率提高,LDH释放减少、LC3绿色荧光减少、beclin1蛋白表达降低(P 0.05);与盐酸小檗碱+H_2O_2组比较,盐酸小檗碱+Tat-beclin1+H_2O_2组H9C2细胞存活率降低、LDH释放增加、LC3绿色荧光增多(P 0.05)。结论:盐酸小檗碱能有效减轻H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤和细胞自噬,其机制可能与抑制beclin1表达有关,为临床上应用盐酸小檗碱防治心肌细胞损伤提供实验基础和理论依据。     

葛根素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其分子机制研究

[目的] 探索葛根素（Puerarin）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其可能的分子机制。[方法] 以二甲基亚砜（DMSO，空白组）、葛根素（50、100、200 μg/mL）、顺铂20 μg/mL分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞。48 h后，CCK-8法检测细胞增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平，吖啶橙染色法观察细胞自噬状况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、激活型半胱氨酸蛋白酶（Cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、酵母ATG6同源物（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达。[结果] 与空白组比较，葛根素100、200 μg/mL组和顺铂20 μg/mL组HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.01），p-Akt、p-mTOR、bcl-2表达明显下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-I、LC3-Ⅱ表达明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化（p-Akt/Akt比值）降低且Bax/bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（P<0.01）。与顺铂20 μg/mL组比较，葛根素200 μg/mL组细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05或P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.05），p-Akt、p-mTOR表达下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-Ⅱ明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化降低且Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-I比值升高（P<0.01）。[结论] 葛根素具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬的作用，该作用具有一定的剂量依赖性；抑制Akt/mTOR/Beclin1通路进而诱导促凋亡、促自噬相关蛋白表达和活化可能是其重要的分子机制。     

丹参酮ⅡA对人冠状动脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的?观察丹参酮ⅡA（STS）对缺氧/复氧（H/R）所致人冠状动脉内皮细胞（HCAEC）损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法?将HCAEC分为对照、H/R、STS组。对照组正常培养，H/R、STS组接受H/R干预，STS组采用100μg/mL的STS处理。采用 Hoechst 33258染色测定细胞的凋亡情况，免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3的表达，Western Blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、Beclin1蛋白、LC3蛋白、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白GSK-3β、p-GSK-3β、mTOR、p-mTOR的表达。CCK8法测定50、100μg/mL STS对3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预H/R组后细胞活性的影响。结果?与对照组比较，H/R组 HCAEC细胞凋亡率、LC3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ及p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01），eNOS及p-mTOR/mTOR表达降低（P<0.01）；与H/R组比较，STS组LC3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、eNOS及p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达增加（P<0.05，P<0.01），HCAEC细胞凋亡率及p-mTOR/mTOR表达降低（P<0.05，P<0.01）。50、100μg/mL STS均可使3-MA干预后的H/R组HCAEC存活率升高（P<0.05）。结论? STS可能通过调节GSK-3β/mTOR信号通路，抑制内皮细胞凋亡，从而减缓H/R损伤过程中内皮细胞损伤。     

竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。     

苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究

目的观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响。方法 (1)苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测:分别设空白对照组、不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、5.00mg/mL)苦参碱组和(0.05、0.25、0.50、5.00、20.00μmol/L)伊马替尼组,MTT检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率。分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5μmol/L伊马替尼组,免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象,Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达。(2)苦参碱联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rapa)诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测:实验分6组,空白对照组、苦参碱组(0.4mg/mL苦参碱处理)、3-MA组(5mmol/L 3-MA处理)、Rapa组(0.5μmol/L Rapa处理)、苦参碱+3-MA组(0.4mg/mL苦参碱+5mmol/L3-MA处理)、苦参碱+Rapa组(0.4mg/mL苦参碱+0.5μmol/L Rapa处理),采用MTT检测细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达。结果 (1)苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞,细胞增殖受抑制明显(P0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加,Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高,P62蛋白表达减少(P0.05),以K562/IM细胞更明显(P0.05)。(2)苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率(36.32±2.21)%,凋亡率(15.35±0.39)%。苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高[(65.25±2.06)%,P0.01)],凋亡率升高[(21.70±0.48)%,P0.05],同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降,P62蛋白表达增强,Caspase-3表达增强(P0.05);而苦参碱+Rapa组作用则相反。结论苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬,以耐药K562/IM细胞株自噬明显。通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性,而雷帕霉素减弱苦参碱作用。     

基于自噬探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜保护的作用机制

目的 通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护 的作用机制。方法 将 SD 大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用 2, 4, 6-三硝基 苯磺酸 （TNBS） -乙醇溶液复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型;模型复制成功后灌胃给药,每日 1 次,持续 14 d。 观察大鼠一般状况,计算疾病活动指数 （DAI） 评分;苏木素-伊红 （HE） 染色法观察结肠组织病理形态;透射电 镜观察结肠上皮细胞自噬情况;免疫荧光染色法、蛋白免疫印迹法 （Western Blot） 检测结肠组织肌球蛋白样 BCL2 结合蛋白 （Beclin1） 、微管相关蛋白 1 轻链 3 （LC3） 蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应 （Real-time PCR） 检测自噬蛋白 5 （Atg5） 、自噬蛋白 7 （Atg7） 、泛素结合蛋白 62 （p62） mRNA 表达。结果 与正常组比较, 模型组一般情况较差,DAI 评分明显升高 （P＜0.000 1） ;结肠组织出现明显的上皮细胞损伤,电镜下自噬体的 数量明显减少;结肠组织 Beclin1、LC3-II/LC3-I 蛋白及 Atg5、Atg7 mRNA 表达明显降低 （P＜0.000 1） ,p62 mRNA 表达明显升高 （P＜0.000 1） 。与模型组比较,健脾益肠散组大鼠一般情况明显恢复,DAI 评分明显降低 （P＜0.000 1） ;结肠组织病理损伤有不同程度的改善,电镜下自噬体的数量明显增多;结肠组织 Beclin1、LC3-II/ LC3-I 蛋白及 Atg5、Atg7 mRNA 表达明显升高 （P＜0.01,P＜0.001,P＜0.000 1） ,p62 mRNA 表达明显降低 （P＜0.01） 。结论 健脾益肠散可通过上调自噬相关分子 Beclin1、LC3、Atg5 及 Atg7 的表达,下调 p62 的表 达,增强自噬以达到保护溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜损伤的作用。     

熊去氧胆酸促进肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法 取对数生长期的肝癌HepG2细胞分为0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,各组分别加入0、5、10μmol/L UDCA药液干预24 h。24 h后采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,倒置光学显微镜观察HepG2细胞的数量、形态变化,流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率和线粒体下降的膜电位,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA相对表达量,Western blot检测Bcl-2蛋白相对表达水平。结果 与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05),且UDCA药物浓度越高抑制率越强;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞数量减少,细胞脱落变圆,悬浮细胞相对增加;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞凋亡率均增加(P均<0.05),线粒体下降的膜电位均增加(P均<0.05);与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组Hep...     

竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤北大核心CSCD

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。     

柴胡皂甙d对特发性肺纤维化肺泡上皮细胞自噬作用机制研究北大核心CSCD

目的研究柴胡皂甙d(SSd)对特发性肺纤维化(IPF)中Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)自噬的调控作用及其对纤维化程度的干预作用。方法转化生长因子β1(TGF-β1,5 ng/mL)诱导A549细胞48 h建立肺纤维化细胞模型,分别联合SSd低、中、高浓度(2.5、5、10μg/mL)、雷帕霉素(100 ng/mL)处理细胞。CCK8法检测各组细胞存活率,Western Blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/LC3B-Ⅰ、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活化蛋白表达水平,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测细胞内自噬泡形成。结果与正常组比较,模型组细胞存活率下降(P<0.05),E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平亦降低(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62、mTOR通路活性蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),胞质内荧光标记的自噬泡较少。与模型组比较,SSd高浓度组细胞存活率升高(P<0.05),SSd组及雷帕霉素组E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组p-mTOR/mTOR、p-AKT1/AKT1、p-S6K1/S6K1表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组细胞质内荧光标记的自噬泡增多。与SSd低、中低浓度组比较,SSd高浓度组及雷帕霉素组Ecadherin、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd可改善TGF-β1诱导的ATⅡ纤维化改变,可能通过抑制mTOR通路激活诱导细胞自噬发挥作用。     

姜黄素对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响

目的:通过研究姜黄素(curcumin)对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响,探讨姜黄素对糖尿病肾病足细胞保护作用的可能机制。方法:将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、雷帕霉素组(10 nmol/L)。Western blot分别检测LC3B、Beclin-1、Synaptopodin及Nephrin蛋白表达。将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平。结果:高糖组自噬相关蛋白LC3II/I比值及Beclin-1蛋白表达明显低于正常对照组(P0.05);姜黄素组LC3B、Beclin-1等自噬标志性蛋白表达均高于高糖组(P0.05);姜黄素组足细胞功能性标志蛋白表达水平明显高于高糖组(P0.05);姜黄素组p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平均低于高糖组(P0.05)。结论:姜黄素能明显改善高糖刺激对小鼠肾足细胞的自噬抑制作用,并且通过抑制P13K/Akt/mTOR信号途径减轻足细胞损伤。     

灵猫方抑制饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬研究

目的研究灵猫方对饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬的作用。方法选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液(Earle’s balanced salt solution,EBSS)组、EBSS+空白血清组、EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组及DMEM组,每组3个样本。培养HepG2.2.15细胞1、2、4及6h,构建pEGFP-N1-LC3B表达载体,转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察细胞浆中GFP-LC3B分布表达变化,计算点状样GFP-LC3B的细胞数与GFP-LC3B转染HepG2.2.15细胞数比值。透射电镜观察各组HepG2.2.15细胞浆内自噬体。Western Blot检测各组HepG2.2.15细胞LC3BⅡ/Ⅰ比值(microtubule-associ-ated protein 1 light chain 3 betaⅡ/Ⅰ)。结果培养2h时,与EBSS+空白血清组比较,EBSS+5倍药物血清、EBSS+10倍药物血清明显抑制GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变(P<0.01),电子透射电镜显示EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组抑制自噬体形成,Western Blot检测显示EBSS+10倍药物血清组LC3BⅡ/Ⅰ比值较EBSS+空白血清组明显下降(P<0.01)。结论灵猫方药物血清抑制饥饿诱导HepG2.2.15的自噬。     

活血解毒方对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响＊

目的 研究活血解毒方对缺氧/复氧（H/R）所致的心肌细胞凋亡的影响。方法 体外培养H9C2心肌细胞并分成正常对照组（Control组）、缺氧复氧组（H/R组）、H/R + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组，其中正常对照组给予DMEM培养基培养，缺氧复氧组给予缺氧4 h、复氧6 h处理，缺氧复氧 + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组分别给予活血解毒中药、LY294002、活血解毒中药配合LY294002预处理24 h，然后均给予缺氧4 h、复氧6 h处理。采用CCK8检测各组心肌细胞的存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，电镜观察各组心肌细胞中线粒体、自噬体的变化，Western Blot检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase3）、β-连环蛋白（β-Catenin）、p-p65、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白的表达。结果 活血解毒方预处理显著增加H/R诱导的H9C2心肌细胞凋亡，降低凋亡相关蛋白Cleaved caspase3、β-Catenin、p-p65表达，增加Bcl-2表达。结论 活血解毒方可通过抑制细胞凋亡，降低缺氧/复氧所致的心肌细胞损伤，其作用机制可能与PI3K信号通路相关。     

竹节参总皂苷对脂多糖诱导的BV2细胞炎症反应的影响及机制研究

目的 观察竹节参总皂苷（TSPJ）对脂多糖诱导的小鼠小胶质细胞BV2炎症反应的影响，探讨其改善炎症的作用机制。方法 采用脂多糖诱导BV2细胞炎症模型，将细胞分为正常组、模型组和TSPJ低、中、高浓度组，分别进行干预后，ELISA检测细胞上清液一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-4和IL-10含量，免疫荧光染色检测小胶质细胞标志物CD86、Arginase-1及自噬蛋白LC3表达，Western blot检测自噬相关蛋白p62、Beclin1、LC3及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组细胞上清液NO、TNF-α、IL-1β含量明显增加，IL-4、IL-10含量明显减少，细胞CD86表达明显升高，Arginase-1、LC3表达明显降低，Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达明显降低，p62、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（P<0.01）；与模型组比较，TSPJ高浓度组细胞上清液NO、TNF-α、IL-1β含量明显减少，IL-4和IL-10含量明显增加，细胞CD86表达明显降...     

冬凌草甲素联合免疫因子TRAF4对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响及机制研究

[目的] 探讨冬凌草甲素联合免疫因子肿瘤坏死因子受体相关因子4（TRAF4）对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响及机制研究。[方法] 选择不同浓度的冬凌草甲素处理A549细胞，然后采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞的活力。体外培养A549细胞，将细胞分为对照组、冬凌草甲素组、si-NC组（转染si-NC）、si-TRAF4组（转染si-TRAF4）、冬凌草甲素+pcDNA组（转染pcDNA后，选择冬凌草甲素浓度为20 μmol/L处理）、冬凌草甲素+TRAF4组（转染TRAF4后，选择冬凌草甲素浓度为20 μmol/L处理）。采用流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、微管相关蛋白1的轻链3（LC3）、Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1、自噬相关蛋白7（ATG7）和TRAF4蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TRAF4 mRNA表达量。[结果] 不同浓度冬凌草甲素明显抑制细胞活力。冬凌草甲素组细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG7蛋白表达明显高于对照组；TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组。si-TRAF4组TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显低于si-NC组；细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和ATG7蛋白表达明显高于si-NC组。冬凌草甲素+TRAF4组TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显高于冬凌草甲素+pcDNA组；细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和ATG7蛋白表达明显低于冬凌草甲素+pcDNA组。[结论] 冬凌草甲素通过下调TRAF4的表达抑制非小细胞肺癌细胞的凋亡和自噬。     

槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞,分为二甲基亚砜组和槲皮素组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理。培养48 h后,使用流式细胞仪检测2组细胞凋亡情况,运用腺病毒双荧光载体mRFP-GFP-LC3转染技术检测2组人骨肉瘤MG-63细胞自噬情况。另取人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,采用Transwell侵袭小室试验检测不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素处理后的细胞侵袭能力。结果 与二甲基亚砜组比较,槲皮素组MG-63细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均明显增高(P均<0.05),MG-63活细胞率明显降低(P<0.05),MG-63细胞自噬水平明显上调(P<0.05)。25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L槲皮素处理后的穿膜细胞数分别为空白对照组的(86.48±5.02)%,(70.02±4.93)%和(42.87±4.62)%,呈浓度依赖性降低,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 槲皮素可诱导骨肉瘤MG-...     

大黄醇提物对氯化血红素诱导HT22细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究大黄醇提物对氯化血红素诱导损伤后HT22细胞自噬与凋亡的影响。方法 将HT22细胞分为正常组、模型组和大黄醇提物高、中、低剂量组(25、12.5、6.25μg/mL),给药干预24 h后，以40μmol/L氯化血红素诱导3 h建立细胞脑出血损伤模型。造模结束后，CCK-8法检测细胞存活率，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞凋亡及自噬相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1及P62表达。结果 与正常组比较，模型组细胞存活率降低(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达升高(P<0.01),P62蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较，大黄醇提物各剂量组细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达降低...