人PD-1Δex3基因的克隆、表达及其生物学活性的鉴定

目的:构建表达人PD-1Δex3(ΔPD-1)基因的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法:通过RT-PCR的方法获得人PD-1全长(PD-1)基因,设计特异性引物,PCR方法获得PD-1Δex3基因的2个cDNA片段,通过重组PCR的方法获得ΔPD-1基因,将目的片段双酶切后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP/PD-1和pIRES2-EGFP/ΔPD-1并进行鉴定;脂质体转染法将重组载体导入293T细胞;流式细胞术(FCM)检测转染细胞膜表面PD-1的表达;Western blot法检测培养上清中可溶性PD-1(sPD-1)的表达;间接免疫荧光实验分析ΔPD-1蛋白与PD-1两个配体PD-L1和PD-L2的结合。结果:酶切和测序结果均证实插入的基因序列正确,成功构建两个真核表达载体;FCM分析和Western blot检测结果表明,PD-1转染细胞膜表面高表达PD-1蛋白,细胞培养上清中无sPD-1蛋白,而ΔPD-1转染细胞膜表面不表达PD-1蛋白,细胞培养上清中则有大量sPD-1;间接免疫荧光实验结果表明,ΔPD-1蛋白能够与PD-1两种配体产生特异性结合。结论:成功进行PD-1Δex3基因的真核表达,证实PD-1Δex3基因编码sPD-1蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究PD-1Δex3在PD-1/PD-L信号通路中的生物学作用提供了有价值的物质基础。     

可溶性gp130酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异、稳定和简便的人可溶性gp130 (sgp130 )酶标检测试剂盒。方法 :采用本室制备的鼠抗人gp130单抗T2作为包被单抗 ,另一株识别不同抗原位点的单抗T12经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sgp130酶标检测方法 ,并分别测定了 40例健康供血员、40例甲亢及 47例慢性肾炎患者血清中sgp130的含量。结果 :成功地研制了人sgp130酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 10ng/ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 6 %,回收率为95 %～ 111%,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得的血清中sgp130含量的 95 %正常值范围为5 36 92～ 2 87 88(ng/ml) ,甲亢及慢性肾炎患者血清中sgp130的含量分别为 937 16± 2 17 5 9和 80 6 4 5± 138 4 7(ng/ml) ,明显高于正常对照者 (P <0 0 1)。结论 :建立的人sgp130酶标检测试剂盒 ,能够对血清中sgp130进行准确定量 ,可为临床gp130相关性疾病的辅助诊断、疗效估价和判断预后提供有价值的生物学参数 ,具有良好的运用前景。     

可溶性CD40酶联检测试剂盒的研制及其检测的临床意义

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0 (sCD4 0 )酶标检测试剂盒及探讨其检测的临床意义。方法 :采用该室制备的鼠抗人CD4 0单抗 5C11作为包被抗体 ,另一株识别不同抗原位点的单抗 3G3经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sCD4 0酶标检测方法和对各种质控参数进行优化。在此基础上测定了健康供血员、甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿性关节炎患者的血清、肺癌患者血清和胸水及多种多发性骨髓瘤 (MM)、淋巴瘤细胞株培养上清中sCD4 0的含量。结果 :成功地研制了人sCD4 0酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 15 6pg ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 9% ,回收率为 95 %～ 114 % ,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得血清中sCD4 0含量的 95 %正常值范围 (x±s)为 10 5 0 0± 18 88pg ml,甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿患者的血清、肺癌患者血清和胸水中sCD4 0的含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 :成功地研制了检测人sCD4 0酶标检测试剂盒 ,对一些与CD4 0分子表达或信号异常的疾病患者外周血检测结果显示 ,该试剂盒在临床检测中具有潜在的应用价值     

慢性乙型肝炎患者血清中sICOS和sPD-1升高及意义

目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中可溶性可诱导共刺激分子(sICOS)和可溶性程序性死亡蛋白1(sPD-1)的蛋白水平,并初步探讨其意义.方法 收集80例CHB患者和30例健康对照者外周血单个核细胞(PB-MCs)和血液上清.根据HBsAg和HBeAg测定值,将CHB患者分为HBeAg(-)和HBeAg(+)两组;并将HBeAg(+)组分为免疫耐受期和免疫清除期.用ELISA法检测以上研究对象外周血上清中sICOS和sPD-1蛋白浓度.用实时荧光定量PCR检测PBMCs中ICOS、PD-1和PD-1△ex3的表达.结果 与对照相比,sICOS在CHB患者中均增高(P＜0.05);而sPD-1仅在HBeAg(+)组显著增高(P＜0.01),其中免疫清除期比免疫耐受期患者增高更明显(P＜0.05).CHB患者的sPD-1与AST呈正相关(P＜0.01);且HBeAg(+)组的sPD-1与ALT呈正相关(P＜0.01);CHB患者的sICOS与HBV-DNA呈弱的负相关性(P＜0.05).活化前,两组CHB患者的ICOS mRNA表达水平均降低(P＜0.05).结论 sICOS和sPD-1在CHB患者的血清中均异常增高,提示sICOS和sPD-1可能参与了CHB的发生发展.     

一株鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

研制特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。以高表达人PD-1分子的基因转染细胞L929/PD-1作为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-1作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和MTT增殖实验对单抗进行生物学特性的分析。结果表明,成功获得1株特异、稳定分泌鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6E2。对6E2生物学功能的研究结果提示,该单抗能够识别活化T细胞表达的PD-1分子,且在体外能够显著抑制T细胞的增殖和细胞因子的分泌。获得的特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,通过激发PD-1负性途径能够有效抑制T细胞的功能,为进一步研究PD-1信号奠定了物质基础。     

sPD-1、IL-17A、IL-23和IL-37在寻常型银屑病患者血清中的表达与意义

目的:探讨可溶性PD-1(sPD-1)在寻常型银屑病(PS)患者血清中的表达及其与PS的相关性.方法:采用ELISA检测48例寻常型PS患者和35例健康对照者外周血sPD-1、IL-17A、IL-23和IL-37表达,分析其在不同组中表达水平差异及与银屑病皮损面积与严重程度指数(PASI)的相关性.结果:寻常型PS患者...     

可溶性CD40配体酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)酶联检测试剂盒。方法 :采用鼠抗人CD4 0L单克隆抗体 1B1为包被抗体 ,识别人CD4 0L不同位点的单克隆抗体 4F1经琥珀酰羟基生物素 (BNHS)标记后为检测抗体 ,建立双抗体夹心的人sCD4 0L酶联检测方法。在此基础上 ,测定 2 0 0例健康供血员血清和血浆中sCD4 0L的含量。结果 :成功研制人sCD4 0L酶联检测试剂盒 ,灵敏度为 0 5ng ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 6 9% ,回收率为 94 7%～ 10 4 8% ,提示该检测系统具有良好的灵敏度、稳定性和准确性 ,与国外商品化试剂盒的分析结果相似。应用该试剂盒测得的健康供血员血清和血浆sCD4 0L含量分别为 9 5 6± 4 71、2 98± 1 13ng ml。结论 :研制成灵敏、特异和稳定的人sCD4 0L酶标检测试剂盒 ,能够对血清和血浆中sCD4 0L进行准确定量分析 ,并首次证实血清和血浆中sCD4 0L水平的差异性     

一株新型鼠抗人PD-L2单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

为了研制特异性识别人PD-L2(B7-DC,CD273)的鼠单克隆抗体,并对其生物学特性和PD-L2分子的表达特性进行初步分析。以高表达人PD-L2分子的基因转染细胞L929/PD-L2作为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-L2作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人PD-L2单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法和竞争结合抑制实验对单抗进行生物学特性的分析,继而利用该单抗进行免疫荧光标记和流式细胞术检测PD-L2在肿瘤细胞株和免疫细胞上的表达特性。结果显示,通过多次融合和反复筛选,成功获得一株特异性鼠抗人PD-L2(B7-DC)的杂交瘤,该杂交瘤分泌的单克隆抗体能特异识别人PD-L2分子。继而利用上述研制获得的单克隆抗体8F2进行免疫荧光标记和流式细胞术检测发现,PD-L2上调性表达在成熟的树突状细胞和调节性T细胞上。提示,成功地获得一株特异性鼠抗人PD-L2单克隆抗体,并对其生物学特性和表达谱进行初步分析,证明其识别抗原表位不同于商品化抗体,是一株新型鼠抗人PD-L2单抗,这为进一步研究PD-1/PD-L2信号通路在免疫应答中的生物学作用提供了有价值的物质基础。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,并探讨其在该病诊断中的作用。方法克隆NP基因,构建原核表达载体pComb3XSS-NP,并转化大肠杆菌Top10F′,经诱导表达,纯化获得6HIS-NP融合蛋白。以该融合蛋白免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备NP的鼠源单克隆抗体。经鉴定后,选择1株1C8-C6进行大量制备、纯化,并偶联辣根过氧化物酶(HRP),用该酶标抗体对SFTSV感染人的急性期血清进行Western blot检测。结果成功表达、纯化SFTSV重组的NP。经小鼠免疫、细胞融合和ELISA筛选后,共获得4株鼠源单克隆抗体。具较高滴度的1C8-C6酶标抗体能与SFTSV感染人的急性期血清中的NP在Western blot水平上结合,而与汉坦病毒、登革热病毒感染人急性期血清及正常人血清不反应。结论 SFTSV NP的表达及其单抗的制备为该病的实验室诊断奠定了基础。     

棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1/PD-L1与相关细胞因子的水平变化

目的检测包虫患者血清中可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)及其配体sPD-L1,Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-6以及Th17细胞因子IL-17的分泌水平,探讨它们在包虫病感染过程中的相关作用。方法采用细胞因子磁珠阵列测定(CBA)法检测包虫患者血清中Th1、Th2、Th17细胞因子的分泌水平;ELISA检测可溶性PD-1、PD-L1的表达水平。结果与健康对照组相比,棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1的浓度略升高但低于sPD-L1,sPD-L1浓度升高明显,Th2、Th17细胞相关细胞因子的分泌水平明显升高(P0.01),而Th1细胞相关细胞因子分泌水平未见明显变化(P0.05)。结论棘球蚴病感染过程中存在Th1/Th2的表达失衡,而炎性细胞Th17细胞参与机体免疫调节。sPD-1与sPD-L1通过动态平衡参与机体免疫调控,促进棘球蚴免疫逃逸。     

人sPD-1-Fc融合蛋白的构建及Cos-7细胞的表达

目的:构建重组人pSG5-Fc-hPD-1嵌合基因质粒,并在真核细胞进行表达,得到分泌性的sPD-1-Fc融合蛋白。为PD-1的生物学活性研究奠定基础。方法:从GenBank里查到人PD-1胞外区的基因序列,设计特异性引物,以人淋巴细胞cDNA为模板PCR扩增得到人PD-1胞外区片段。以pSG5-Fc真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pSG5-Fc-hPD-1。脂质体瞬时转染猴肾成纤维细胞(Cos-7),收取72 h的细胞上清。用Western blot鉴定,并与原核表达的人PD-L1蛋白免疫共沉淀检测生物学活性。结果:通过EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切及测序证实构建的重组质粒pSG5-Fc-hPD-1正确。重组质粒在Cos-7细胞中高效表达并分泌融合蛋白sPD-1-Fc到细胞上清,应用Western blot测定到上清中的融合蛋白,且得到的sPD-1-Fc融合蛋白具有与PD-L1结合的生物学活性。结论:通过基因重组方法在真核细胞里得到高效分泌型表达的sPD-1-Fc重组蛋白,为研究PD-1生物学活性奠定了实验基础。     

Serum levels of soluble programmed death-1 (sPD-1) and soluble programmed death ligand 1(sPD-L1) in systemic lupus erythematosus: Association with activity and severity

The programmed cell death-1 (PD-1)/programmed cell death ligand 1 (PD-L1) pathway is an important host immunosuppression mechanism. Soluble PD-1 (sPD-1) and PD-L1 (sPD-L1) expression regulates co-inhibitory signals in autoimmune disorders. Here, we evaluated whether serum sPD-1 and sPD-L1 are involved in immune dysfunction and assessed its relationship with SLE. Blood samples were obtained from 130 patients with SLE and 44 healthy controls. Serum sPD-1 and sPD-L1 were tested by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Relevant immune parameters were analysed. Both serum sPD-1 and sPD-L1 were significantly higher in the SLE patients than in the controls. A series of severe disease clinical manifestations and laboratory features such as presence of decreased complement component 3, complement component 4 and SLEDAI >8 were associated with elevated sPD-1 and sPD-L1. Our study suggests that abnormal sPD-1 and sPD-L1 expression may be involved in the imbalance of immune regulation in SLE.     

抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究

目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配体基因表达的影响。体内转染表达sPD 1,用MTT比色法检测HSP70 肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性。结果 :单独的sPD 1就有抗肿瘤效应。HSP70 肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL ,而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD 1及其配体的表达显著升高。用sPD 1与HSP70 肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠 ,能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70 肽疫苗的免疫效果。结论 :sPD 1可通过阻断PD 1与其配体的结合作用 ,及减弱PD 1的负反馈抑制作用 ,而增强HSP70 肽疫苗的抗肿瘤效应     

Expression and purification of soluble human programmed death-1 in Escherichia coli

Programmed death-1 （PD-1）, a member of CD28 family, is able to negatively regulate the TCR complex-initiated signaling by interacting with its cognate ligands （PD-L1 and/or PD-L2）. PD-1/PD-L1 pathway plays an important role in down-regulating the effective phase of adaptive immune responses and the blockade of this pathway has been proved to enhance antiviral and antitumoral immunity, suggesting that it might be a potential target for the development of therapies to improve T cell responses in patients with virus infections or malignancies. In present study, the extracellular domain of human PD-1 with a carboxyl terminal His-tag （designated as sPD-1） was expressed as inclusion bodies in Escherichia coll. The product was on-column refolded, purified by immobilized metal affinity chromatography, and characterized by Western blotting. Furthermore, the soluble PD-1 with high purity possessed specific binding activity with its cognate ligand PD-L1, and the dissociation constant was 0.43 nmol/L as determined by Scatchard plot analysis. These results suggest that refolded sPD-1 from prokaryotic cells may be of therapeutic interest in enhancing antivirus and antitumoral immune responses.     

分泌型重组多肽sPD-1-CellⅠ(P/C-1)调节免疫细胞功能活性及抗肿瘤效应的研究

目的构建双结构域重组多肽sPD-1-Cell Ⅰ（P/C-1）分泌型真核表达载体，并研究体内外表达重组多肽在调节免疫细胞功能活性及抗肿瘤方面的作用和机制。方法用PCR方法分别扩增出编码PD-1胞外结构域的cDNA与编码CH50 CellⅠ结构域的cDNA，3片段连接法插入分泌型真核表达载体pSecTagA中，获得真核表达载体pP／C-1；脂质体介导体外转染BHK细胞，G418筛选出阳性克隆，RT-PCR及免疫印迹检测重组多肽P／C-1的表达，MTT法检测表达产物对脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞杀伤活性的影响，建立小鼠H22肝细胞癌移植瘤模型，裸DNA肌肉注射法分别于体内转染sPD-1、CH50和P／C-1基因，观察并比较各处理因素对小鼠的肿瘤生长的抑制作用。结果酶切及测序鉴定结果表明重组多肽P／C-1真核表达载体构建成功，在BHK细胞培养上清中检测到重组多肽P/C-1的表达，后者能显著增强脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞对H22细胞的杀伤作用，体内实验表明，P/C-1转染对肿瘤生长的抑制作用强烈而持久，显著优于sPD-1和CH50治疗组。结论重组多肽P／C-1真核表达载体构建成功，表达产物P／C-1兼有sPD-1和CH50的生物学功能，能够激活巨噬细胞和脾淋巴细胞，发挥二者协同抗肿瘤作用，从而将非特异性和特异性抗肿瘤免疫有机地结合起来，为肿瘤基因治疗提供新的思路。     

类风湿关节炎患者血清IL 37和可溶性PD 1分子的表达水平及临床意义

目的：通过研究类风湿关节炎（RA）患者血清IL 37和可溶性PD 1分子的表达水平,初步探讨其与RA的相关性以及临床意义。方法：收集RA患者及对照组人群的外周血,然后采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测30例RA患者（RA标准评分≥6）和30名健康对照组血清中IL-37、sPD-1的表达水平,结合分析两组人群外周血IL-18、IL-6和IL-18BP三种细胞因子的表达,并通过Pearson相关分析其相关性。结果：经ELISA检测发现,RA组患者外周血中IL-37和sPD-1以及其他几种炎症相关细胞因子IL-18、IL-18BP、IL-6的表达水平均高于健康对照组（P＜0.05）;且IL-37与细胞因子IL-18、IL-18BP、IL-6均呈正相关,sPD-1仅与细胞因子IL-6呈正相关,IL-37、sPD-1均与患者病情程度评分呈正相关。结论：IL-37、sPD-1在RA患者中表达水平升高,且与其他炎性细胞因子及疾病严重程度具有相关性,两者在RA的进展中可能发挥着重要的调控作用,为今后RA治疗提供新的依据。     

双抗体间接夹心ELISA法检测乳腺癌患者外周血MUC1蛋白水平的评价

目的优化双抗体间接夹心ELISA试剂盒,并探讨其在乳腺癌患者中检测MUC1黏蛋白水平的应用价值。方法用基因重组MUC1-GST和MUC1-MBP融和蛋白免疫家兔和大鼠,获得抗MUC1血清,并对其纯化,获得纯化的家兔抗人及大鼠抗人MUC1多克隆抗体;经不同的筛选确立了以家兔抗人MUC1抗体作为包被抗体、大鼠抗人MUC1抗体作为检测抗体的双抗体间接夹心试剂盒,敏感度可达到0.2 ng/ml。结果应用建立的试剂盒对40例乳腺癌,18例乳腺良性疾病和120健康对照者血清中MUC1蛋白水平的进行检测,检测结果绘制ROC曲线,分析得出以2.75 ng/ml为乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者的临界值,以1.86 ng/ml为乳腺疾病与正常人为临界值,检测结果表明本研究对乳腺癌诊断的阳性率高达97.5%,乳腺良性疾病的阳性率为66.7%,正常人特异性为96.7%。对于乳腺癌同一病例样本用酶联免疫法CA15-3诊断试剂盒进行对比检测,其检出率为3.33%,特异度为100%。绘制ROC曲线对比显示,本研究所建立的双抗体夹心ELISA方法对乳腺癌诊断的准确度明显高于CA15-3试剂盒。结论本研究成功建立了特异性强,灵敏度良好的双抗体间接夹心ELISA试剂盒,有望开发为临床辅助诊断的常规试剂盒,尤其有望应用于乳腺癌的大规模筛查及早期诊断。     

金黄葡萄球菌肠毒素A诱导的免疫应答

目的 研究超抗原金黄葡萄球菌A型肠毒素(SEA)在体内诱导的体液免疫反应、T淋巴细胞增殖及免疫无应答的规律和作用.方法 利用重组SEA蛋白免疫小鼠,酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测特异性抗体及其亚类水平,观察两者的产生过程及变化规律.RT-PCR反应检测免疫后小鼠脾脏内细胞因子的mRNA表达水平,EUSPOT法检测rSEA对脾细胞分泌IFN-γ能力的影响,流式细胞术检测T淋巴细胞表面抑制性受体PD-1的表达.结果 BALB/c小鼠在低剂量的rSEA初次免疫后2周,即产生了高水平的特异性抗体,此时体内以体液免疫应答为主,IgG2a/IgG1＜1;而在免疫早期,Th1型细胞因子的mRNA表达水平高于Th2型,以细胞免疫应答为主.短时期内进行再次免疫后脾细胞的IFN-γ分泌频率显著下降;流式细胞仪在rSEA激活的T淋巴细胞表面检测到了PD-1(programmed death-1)分子的表达,其表达量随时间及免疫次数增加.结论 超抗原SEA初次免疫即能引起强大的体液免疫应答与细胞免疫应答;再次免疫引起了免疫无应答,这与PD-1介导的抑制作用增强有关.     

B7-1/B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响

目的：探讨Hsp7肽复合物对B7-1／B7-H1相对比例的影响及真核表达可溶性PD-1(sPD-1)对Hsp70-肽复合物抗肿瘤作用的影响。方法：通过RT-PCR和半定量PCR技术检测Hsp70-肽复合物体外刺激和体内免疫对小鼠脾细胞正调控共刺激分子B7-1和抑制性共刺激分子B7-H1及其受体PD-1表达的影响；体内转染表达sPD-1后，观察Hsp70-肽复合物免疫小鼠的肿瘤生长以及脾淋巴细胞毒性的变化。结果：基因表达检测表明．Hsp70-肽复合物体外刺激的小鼠脾细胞B7-1 mRNA和B7-H1 mRNA的水平随时问而变化，B7-1／B7-H1比值随刺激时间而增高；Hsp70-肽复合物体内免疫小鼠后期脾细胞B7-1表达下降，B7-H1及其受体PD-1表达上调，B7-1／B7-H1比值逆转；体内表达sPD-1可显著增强和延长Hsp70-肽复合物的抑瘤效果；体内表达sPD-1可提高Hsp70-肽复合物免疫的荷瘤小鼠脾细胞的杀伤率。结论：Hsp70-肽复合物的刺激引起共刺激分子B7-1和B7-H1表达的变化，B7-1／B7-H1的比例与激活效应相关，sPD-1通过阻抑B7-H1／PD-1途径、上调B7-1／B7-H1比例，可增强免疫应答，提高Hsp70-肽复合物特异性免疫治疗肿瘤的效应。