一种新的致突变物检测新方法——λDNA体外重包装法的构建 Ⅱ 新方法检测10种化学受试物致突变的分子机理初探

利用基因工程中的λDNA重包装技术,我们提出并设计了一种以化学受试物直接处理λDNA的致突变物检测新方法。在此基础上,对10种化学受试物进行了新方法检测下的突变分子机理研究。从理论上讲,如果DNA发生随机断裂,琼脂糖电泳时就会出现拖带现象或酶切后跑不出标准带;如果DNA发生特异位点断裂,酶切后可能多出     

彗星试验检测间接致突变物的DNA损伤作用

目的与方法：用彗星试验检测在体外活化与不活化条例下9种间接致突变物（苯并（a）芘、7，12－二甲基苯并蒽、3－甲基胆蒽、2－氨基蒽、2－氨基芴、4－硝基喹啉－1－氧化物、乙基亚硝基胍、黄曲霉素B1和环磷酰胺）对V79细胞的DNA损伤作用。结果：在活化条件下，8种物质出现DNA损伤作用或损伤作用增强，1种物质（4－硝基喹吉林－1－氧化物）DNA损伤作用减弱。结论：加入体外活化系统，彗星试验可检测间接致突变物的DNA损伤。     

9—氨基吖啶和乙基亚硝基脲诱导含LacZ靶基因重包装噬菌体突变机制的研究

为了提高λ噬菌体体外重包装致突变检测系统的特异性和利用该系统用于致突变分子机制的研究,我们引入了LacZ基因作为靶基因和报告基因。乙基亚硝基脲（l-ethyl-1-nitrosourea,ENU)和9－氨基吖啶（9－aminoacriaine,9-AA)直接处理含LacZ基因的λgell DNA,在体外重新包装为噬菌体,然后转染宿主菌Y1090并在含X－Gal和IPTG的选择培养基上培养。通过计数清亮斑突变体和兰斑野生型的数目计算噬菌体的存活率和突变率;扩增和测定突变噬菌体中LacZ基因的序列,分析了两种化合物的分子致突变机制。结果表明：在ENU和9－AA作用下,噬菌体存活率明显下降,而突变率则相应上升,并呈较好剂量－反应关系;9－AA主要诱发移码突变（71.85),A,G,C,T4种碱基发生移码突变率分别为27.3%,24.2%,24.2%和24.4%;9－AA诱发的单个碱基缺失主要发生在相同的碱基的重复区内（68.6%),在单个或2个重复碱基位点发生缺失频率较底。9－AA诱发碱基置换主要是碱基巅换（92％）,G：C碱基对比A：T碱基对易于诱发碱基置换（76.7%vs24.3%);9－AA诱发碱基置换后一铁于同邻近碱基形成相同碱基的重复。ENU诱发的突变主要发生在G：C碱基对上,ENU诱发碱基置换主要是G：C→A：T、G：C→C：G和A：T→T：A巅换。该实验表明含有LacZ靶基因的λgtll DNA致突变检测系统比λDNA致突变检测系统更完善。该系统以噬菌斑的存活率、突变率和分子突变谱作为检测终点,不仅提高了检测系统的特异性和敏感度,而且能进一步研究化合物的致突变分子机制和进行危险度的评价。     

65. 9-氨基吖啶和乙基亚硝基脲诱导含LacZ靶基因重包装噬菌体突变机制的研究

为了提高λ噬菌体体外重包装致突变检测系统的特异性和利用该系统用于致突变分子机制的研究,我们引入了LacZ基因作为靶基因和报告基因。乙基亚硝基脲（1-ethyl-1-nitrosourea,ENU）和9-氨基吖啶（9-aminoacriaine,9-AA）直接处理含LacZ基因的λgtll DNA,在体外重新包装为噬菌体,然后转染宿主菌Y1090并在含X-Gal和IPTG的选择培养基上培养。通过计数清亮斑突变体和兰斑野生型的数目计算噬菌体的存活率和突变率;扩增和测定突变噬菌体中LacZ基因的序列,分析了两种化合物的分子致突变机制。结果表明：在ENU和9-AA作用下,噬菌体存活率明显下降,而突变率则相应上升,并呈较好剂量-反应关系;9-AA主要诱发移码突变（71.8％）,A,G,C,T 4种碱基发生移码突变率分别为27.3%,24.2%,24.2％和24.2%;9-AA诱发的单个碱基缺失主要发生在相同的碱基的重复区内（68.6％）,在单个或2个重复碱基位点发生缺失频率较底。9-AA诱发碱基置换主要是碱基巅换（92％）,G：C碱基对比A：T碱基对易于诱发碱基置换（76.7% vs 24.3%);9-AA诱发碱基置换后一般易于同邻近碱基形成相同碱基的重复。ENU诱发的突变主要发生在G：C碱基对上;ENU诱发碱基置换主要是G：C→A：T、G: C→C: G和A: T→T: A巅换。该实验表明含有LacZ靶基因的λgtll DNA致突变检测系统比λDNA致突变检测系统更完善。该系统以噬菌斑的存活率、突变率和分子突变谱作为检测终点,不仅提高了检测系统的特异性和敏感度,而且能进一步研究化合物的致突变分子机制和进行危险度的评价。     

对20种抗肿瘤药物的致突变性研究

本文报告用噬菌体诱导试验对20种抗肿瘤药物的致突变性进行筛选,并用Ames试验、SOS固体显色试验和噬菌体诱导试验3种方法联合测试其中11种药物的致突变性,各种试验方法均做加和不加大鼠肝脏微粒体酶代谢活化系统(S9)的两种试验。结果15种药物有致突变作用,阳性率为75％。三种试验方法联合检测的符合率为72.73％。     

城市回用水致突变性研究

背景与目的： 对城市回用水的致突变性进行分析。 材料与方法: 分别于丰水期(2005年8月)、枯水期(2006年3月)采集处理前、后的某城市回用水水样,利用固相萃取技术提取水中有机物。采用Ames试验、体外胞质阻滞法微核试验和质粒DNA断裂试验研究水样对遗传物质的损伤,并采用基因测序方法研究水样对p53基因外显子的致突变性。 结果: 对两次水样的出水和入水检测结果显示,除丰水期入水在活化条件下无致突变性外,其余水样在非活化和活化条件下TA98和TA100菌落回变数均为自然回变菌落数的2倍以上,且具有剂量-反应关系(P<0.05)。微核试验中相当于原水体积16.7、33.3和66.7 ml/ml 的3个剂量组中,微核数仅在相当于原水66.7 ml/ml浓度组有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。DNA断裂试验显示随着城市回用水(出水及入水)剂量的增加,对质粒的损伤作用也明显增加(P<0.05),且在枯水期水样的实验中出现了线性DNA。基因测序法证实,城市回用水(出水及入水)有机提取物能诱导人胚肝细胞(L-02细胞)p53基因突变。 结论: 城市回用水具有一定的致突变作用,对环境与健康具有潜在的风险。     

原位法检测职业环境空气中致突变物和致癌物的研究

应用NIOSH发展的原位测试系统,以TA98W和TA100W为测试菌株,对职业环境空气中致突变和致癌物进行了测定研究。结果表明,TA98w±S9和TA100w±S9测试菌种对氯乙烯聚合工段采集大气样品均呈阳性反应,亦有剂量反应关系,TA98W+S9表现尤其敏感。由此可见,氯乙烯不仅是直接致突变剂,而且是间接致突变剂。环氧乙烷     

一种氧化型染发剂的致突变性研究

目的: 检测一种染发剂的致突变性作为毒理学评价的一部分.方法:用Ames试验和体外哺乳动物细胞(CHL)染色体畸变试验来检测氧化型染发剂的致突变性.结果:在加S-9mix条件下,每皿2 500 μg至5 000 μg对测试菌株TA98具有明显的诱变性,其回变菌落数是自发回变数的2～3倍, Ames试验检测结果为阳性.体外哺乳动物细胞(CHL)染色体畸变试验显示在加或不加S-9mix条件下,当受试物终浓度为300 μg/ml,600 μg/ml和1 000 μg/ml,除了300 μg/ml在加S-9mix时染色体畸变细胞率未显著增加外(P＞0.05),其余浓度无论加或不加S-9mix,染色体畸变细胞率与阴性对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论:受试的氧化型染发剂具有一定的遗传毒性.     

4 种水果的致突变及抗突变同步试验

 目的　为筛选有抗突变作用的天然水果。方法　采用抗突变和致突变同步快速试验对猕猴桃、石榴籽、冬雪蜜桃及野茄果 4种可食性水果进行了试验。做加和不加大鼠肝脏微粒体酶(S9)的两种试验。结果　全部受试物均未发现致突变毒性 ;猕猴桃及石榴籽显示对丝裂霉素C引起的致突变作用有拮抗效应 ;冬雪蜜桃有间接抗突变作用 ;野茄果未显示抗突变性。结论　猕猴桃、石榴籽及冬雪蜜桃是抗突变剂。     

灭菌丹的致突变研究

背景与目的:研究灭菌丹在不同遗传终点的致突变作用。材料与方法:采用Comet试验、Ames试验、微核试验和小鼠精母细胞染色体畸变试验分析灭菌丹在不同剂量下对DNA和染色体的损伤。结果:Comet体内试验PMNC尾长呈现出随剂量增加而增长的趋势,体外试验尾长与溶剂对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。Ames试验加和不加S9,各菌株回变菌落数均超过溶剂对照组的2倍,并呈现出剂量反应关系。微核试验和小鼠中期I精母细胞染色体畸变试验显示各剂量组与阴性对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:灭菌丹可引起鼠伤寒沙门氏菌碱基置换和移码突变,并可能损伤人外周血淋巴细胞DNA的完整性。     

三种咖啡对已知致突变物诱导SOS反应的抑制效应

应用SOS/umu试验研究了MAXWELL速溶咖啡(美国产品)、亚洲咖啡(中国广东产品)和MAXIN咖啡(日本产品)对已知致突变物4-硝基喹啉、AF-2及2-氨基蒽诱导SOS反应的抑制作用。结果表明三种咖啡提取物对4-硝基喹啉和AF-2都具有明显的抑制作用,MAXIN咖啡抑制率为80％以上。     

λDNA体外重包装法进行化学诱变的初步研究

λDNA体外重包装技术,是基因工程中的一个重要技术。该方法是先把带有目的基因的外源DNA片段插入到DNA载体上,然后再与发生了突变的特殊噬菌体提供的噬菌体壳蛋白混合。即可在离体条件下装配成有感染活性的噬菌体颗粒,以用于基因组文库的构建和外源基因表达的研究。λDNA体外重包装,要求λDNA长度约在野生型λDNA的75-105％之间。在此范围以外,就不能包装成噬菌体颗粒。另外,λ噬菌体是迄今为止研究得最为详尽的噬菌体,现在已经知道λ噬菌体约有61个基因,其中有一半参与了噬菌体的生命周期活动。如这些必要     

中国传统加工食品致突变性的研究

选取烧烤和腌腊鱼肉、禽肉类制品、粉肠及调味品等十个具有代表性的中国传统加工食物样品,用乙醚和/或甲醇提取,再过XAD-2树脂柱,以Ames试验进行致突变性检测。其中有七种样品具有不同程度的致突变性,以烧烤肉类中的烤鸭皮及羊肉串的致突变性最为明显,均对TA98(+S9)呈阳性反应,具有剂量反应关系。烧烤时间长则突变性增强。在醃腊鱼肉制品中,四个样品全部有致突变反应。且作用于多个菌株(TA97、TA98、TA100、TA102)。对酿造制品酱油和鱼露及粉肠中未检出致突变性。 本研究提示中国部分传统食品在加工制作过程中所形成致突变物,烧烤肉类的致突变性可能主要与氨基酸热解产物有关。醃腊制品的致突变性可能与亚硝基化合物有关。     

十九种市售化妆品的致突变性检测

应用小鼠骨髓微核试验和Ames试验对各种染发剂、洗发剂、粉霜、冷烫精等十九种市售化妆品的致突变性进行了研究。研究结果表明,冷烫精的微核试验在剂量为0.5g/kg时获得阳性结果(与阴性对照比较,P<0.01)。其余化妆品均未发现其致突变     

用细菌回复突变试验检测两种高效光诱导剂的致突变性

【摘要】 背景与目的： 检测高效光诱导剂4,4＇ˊ-二甲基二苯基碘　盐六氟磷酸盐[Bis(p-toly)iodonium hexaflurophosphaye,IHT-PI 820]和2-异丙基硫杂蒽酮(2-Isopropylthioxanthone,IHT-PI ITX)是否存在致突变性。材料与方法： 采用细菌回复突变试验平板掺入法,鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌(E.coli)WP2 uvrA,在非代谢活化(－S9)与代谢活化(＋S9)条件下同时进行检测。结果： －S9条件下,IHT-PI 820诱发5株测试菌株的回变菌落数、IHT-PI ITX诱发TA98的回变菌落数呈剂量相关性增加;＋S9条件下,IHT-PI 820诱发TA98、TA1537、WP2 uvrA的回变菌落数呈剂量相关性增加。 结论: IHT-PI 820和IHT-PI ITX均对测试菌株有致突变作用,提示这两种高效光诱导剂对人体可能具有潜在的遗传毒性。     

紫露草微核技术在监测环境中致突变物的应用研究

环境中致突变物的存在对人类健康、生存带来不可低估的遗传性伤害;紫露草微核技术是一项监测环境致突变物最简便,有效的新技术。因该技术对致突物检测具有特异性,敏感性,技术易掌握而获国内外的重视及应用。     

环境致突变物和致癌物的抑制剂及其应用

致突变物和致癌物广泛存在于生活环境、生产环境和食物饮料之中。对于生产环境中所接触的致突变物和致癌物,可以通过脱离环境或者限制接触水平实现保护作用。但是,对于环境中绝大多数致突变物和致癌物来说,进行有效的脱离接触是难以办到的。因此,许多学者积极地研究存在于环境或食物中的致突变物和致癌物的抑制剂。探讨它们的作用机制和在实际生活中的应用,因而为防癌工作开辟了一条新的化学预防道路。     

铅对果蝇生殖细胞显性致突变性的研究

铅是有毒重金属之一,其对人类生殖的影响早在1980年就有报告。近年来铅的致突变性的问题已引起了人们的重视。已证明铅能聚积在细胞核内,干扰细胞增殖和DNA的合成,影响DNA合成的精确性。能引起果蝇染色体丢失。铅对哺乳动物有显性致死作用。但铅的某些短期致突变实验的结果均为阴性,因此目前关于铅的致突变性的问题尚有争议。一种致突变物往往引起遗传物质的多种损伤,包括点突变和染色体畸变等。传统的显性致死性突变实验主     

三氯甲烷致突变性的研究

我们用Ames试验和微核试验二种方法对三氯甲烷的致突变性进行了研究。在Ames试验中,当三氯甲烷的浓度为50μg/皿时,无论有无S9,均引起TA_(100)回变菌落数的增加,并为阴性对照组的2倍以上;当浓度为100μg/皿时,则引起回变菌落数的增加更为显著,具有浓度-反应关系。但三氯甲烷不引起TA_(98)的回变菌落数增加。说明该受试物是一种碱基置换型的直接的致突变物。在小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验中,三氯     

油炸猪肉致突变物及其拮抗物的研究

将瘦猪肉制成肉丸并在200℃和280℃油温下油炸,猪肉外壳浸出物经XAD-2树脂提取,用沙门氏菌TA98加S9活化检测其致突变性。发现200℃和280℃油炸猪肉提取物均具有很高的致突变性。其提取物诱导TA98的回变菌落数分别为1787个/100gE和8720个/100gE。进一步用高效液相色谱——紫外光检测法从280℃油炸猪肉中分离鉴定出IO、MeIQ和MeIQx等三种杂环胺化合物。此外在280℃油炸猪肉提取物中加入