人-人杂交瘤:分泌人源性抗链球菌溶血素“O”单克隆抗体细胞系的建立

用人骨髓瘤细胞株与人脾细胞在PEG促进下进行人—人杂交,育选出能分泌抗链球菌溶血素“0”McAb杂交瘤细胞系S-19和S-22两株,共传了50多代。历时5个多月,冻存后复苏仍继续分泌链球菌溶血素0抗体。较为稳定。细胞染色体为68～76条,符合于人型杂交瘤。     

杂交瘤细胞系产生单克隆抗体稳定性研究

大文对10株乙肝表面抗原(HBsAg)的McAbs细胞系在BALB/c小鼠体内连续传代和体外连续传代产生HBsAg单克隆抗体(McA-HBs)的稳定性进行了研究。表明10株杂交瘤细胞在体外连续传代12周各株细胞分泌McAb的稳定性是有明显差别的,而在BALB/c小鼠体内连续传3代其产生McA-HBs的能力均较稳定。 Sr-6和Sr-19在37℃和33℃两种不同培养温度下,以及在液氮中长期冻存复苏后对杂交瘤细胞产生McA-HBs的能力也无明显影响。     

腹水杂交瘤细胞的直接冻存法与复苏效果的观察

在单克隆抗体的研究中,目前有关杂交瘤细胞的冻存均是采用传统体外培养的细胞进行。实验表明,这种冻存和复苏后的杂交瘤细胞的活力尚欠理想,尤其一些经数次克     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

杂交瘤细胞系复苏方法的探讨

淋巴细胞杂交瘤技术开展以来,人们获得越来越多的分泌不同特性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,一般冻存于液氮罐中,当在复苏时,常常遭遇失败,直接影响后续工作。究其原因,如冻存细胞数量少,生长状态不良、细胞污染或补充液氮不及时等;此外,复苏时培养基条件的改变(换用另一批号小牛血清)及复苏方法不得当等也是原因。本     

抗人血清型IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

本文使用从IgA骨髓瘤患者血清中提出的IgA,免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合的方法,获得4株针对IgA的单克隆抗体杂交瘤细胞系。抗体效价培养上清为10~(-2),诱生腹水ELISA测定为10~(-1)～10~(-6),冻存6个月后复苏,腹水效价仍保持10~(-1)～10~(-6)。染色体分析为102,基本上是Sp2/0骨髓瘤细胞染色数68和小鼠脾细胞42之和,说明为杂交瘤细胞。专一鉴定:本McAb经ELISA测定证明,仅与IgA起反应,小鼠亚类测定证明为IgG_1本McAb与     

分泌抗人Ig Kappa和Lambda轻链单克隆抗体细胞株的建立及其抗体的临床应用

本文报告获得的5株能稳定分泌高效价的McAb,其中3株为抗人McAb(1D1、5C3、11A7),2株为抗K McAb(4G12、14A6)。这5株杂交瘤细胞冻存一年后复苏其腹水滴度仍 在6.4×10~4～12.8×10~4之间。 特异性分析:①该5株McAb分别与纯的游离λ和κ链进行免疫双扩散试验,只与λ链或κ链形成清晰沉淀线,不与α、γ和μ链发生沉淀反应。②免疫电泳分析,5种McAb与正常     

杂交瘤细胞的小鼠腹腔复苏法

<正> 已经建立的杂交瘤细胞,常冻存于液氮,应用时再作复苏传代。传统的复苏方法,程序繁琐,耗费试剂,且容易造成污染。为此,我们对杂交瘤细胞在小鼠腹腔内直接复苏进行了探索,简介如下。 一、方法: (一)将抗-HBs/a杂交瘤细胞(本室建立)从液氮中取出,立即置37℃水箱,待刚好解冻后(约1分钟),全部移入50ml塑料离心     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备和应用

目的:获得高效价、高特异性的促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体,为建立高灵敏度的促甲状腺激素水平的测定方法奠定基础。方法:采用细胞融合技术,以TSH抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合。通过多次阳性筛选和有限稀释,建立了抗人TSH单克隆抗体杂交瘤细胞株。并对所建立的单抗进行了鉴定。结果:细胞融合率达100%,阳性率15%。共建立了5株杂交瘤细胞株,均属IgG1 类。且与FSH、HCG、LH无交叉反应。McAb腹水效价在1∶5×105 ~1∶1×107。6个月液氮冻存后复苏培养测定细胞株的稳定性好。结论:本实验的融合率高,阳性率较高,所建立的细胞株的特异性高,McAb腹水效价高。为提高TSH检测的灵敏度和简便性提供了重要条件。     

杂交瘤细胞系直接在小鼠体内复苏的探索

建株的杂交瘤细胞系一般冻存于液氮,待应用时再作复苏传代。传统的复苏方法易受污染导致失败。为此,我们对杂交瘤细胞系直接在小鼠体内复苏进行了摸索。简介如下: 将抗HBs/a杂交瘤细胞(本室建株的细胞)系从液氮中取出,立即于37℃水箱解冻(约1分钟)后,全部移入50毫升塑料离心管中,加无血清1640或GKN溶液50毫升洗涤,1000转/分     

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法：人工合成人促甲状腺激素（hTSH）上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白（BSA）构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB／c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果：建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于K型,McAb腹水ELISA效价达1：1．6×10^5,与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论：本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。     

-80℃冰箱直接冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤活性的影响

目的:研究-80℃冰箱直接冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的影响。方法采用非程序降温方法-80℃冰箱冻存CIK,于冻存后6、12、18周复苏,通过LDH释放法分别测定其对K562细胞的杀伤活性,与新鲜未经冻存的CIK的杀伤活性进行比较。结果:未冻存的CIK在培养至第11天时,有较多贴壁成团细胞,而冻存后复苏培养的CIK贴壁成团细胞较少。比较各组细胞杀伤活性,冻存6、12周后复苏的CIK与未冻存的CIK,对K562细胞的杀伤活性无显著性差异(P>0.05),冻存18周后复苏的CIK的杀伤活性与未冻存的CIK对K562细胞的杀伤活性有显著性差异(P<0.05)。结论:采用-80℃冰箱直接冻存CIK,在12周内复苏应用于临床治疗较好。     

深低温冻存时限对成骨细胞生物学特性影响的实验研究

探讨深低温冻存不同时限后复苏对成骨细胞生物学特性的影响。取新生SD大鼠颅骨,胶原酶消化法培养成骨细胞。采用活细胞数、成骨细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性的测定等对深低温冻存1、3、6个月后复苏的成骨细胞和新鲜培养的细胞进行了比较。发现各组成骨细胞在细胞增殖功能、碱性磷酸酶活性方面均无显著性差异(P>0.05)。深低温冻存6个月后复苏组成骨细胞活细胞数与冻存1、3月后复苏组及新鲜培养的细胞组相比,活细胞数降低,有显著性差异(P<0.05),深低温冻存1、3个月后复苏组的活细胞数与新鲜培养的细胞组相比无显著性差异(P>0.05)。实验结果表明:较长时间深低温冻存能减少复苏后成骨细胞的活细胞数。但经深低温冻存后复苏的细胞仍保持成骨细胞原有的生物学特性。     

两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较

目的:建立海马神经元适宜的冻存方法.方法:将新生24 h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中,复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性;培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞,分别进行Hoechst,微管蛋白(Tubulin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)显色后,荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率,从而建立最佳冻存方法.结果:冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87.5%,冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73.8%,高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的;而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9.5%和16.5%,胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组.结论:高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长.     

介绍一种有效的拯救小鼠杂交瘤的方法:脾内接种法

在小鼠杂交瘤的制备、传代过程中,常遇到一些棘手问题;小到影响实验进展,大到细胞丢失:其中常见的是 1.污染,包括支原体、细菌及真菌污染。在杂交瘤未冻存前:这些污染会造成很大的损失。2.有些杂交瘤复苏后不易存活。3.个别情况下杂交瘤增殖不良,不易向24孔板内扩增。腹腔接种在一定程度上可以解决这一问题,但常规方法要求细胞数量较     

经冻存的APA微囊牛肾上腺髓质细胞功能研究

目的观察海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊牛肾上腺髓质细胞经液氮冻存前后的微囊形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌功能变化。方法APA微囊牛肾上腺髓质细胞(牛嗜铬细胞,bevine chromaffin cell,BCC)的冻存以DMSO为保护剂,冻存采取循序缓慢降温,复苏采取快速复温。通过微囊形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌量检测观察细胞功能变化。结果与冻存前相比,冻存复苏后的APA微囊BCC形态及细胞活性无明显变化,儿茶酚胺分泌量约为冻存前的80%。结论经冻存复苏的APA微囊BCC仍然保持了较好的形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌功能。     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。     

半固体培养基法制备单抗的可行性研究

目的建立稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。方法常规细胞融合后,用甲基纤维素半固体培养基重悬细胞沉淀,通过优化甲基纤维素半固体培养基中甲基纤维素、血清及L-谷氨酰胺三种成分的浓度,建立稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。并进行有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞的对照实验。阳性克隆扩大培养,ELISA检测后冻存,再次复苏后ELISA检测呈阳性为稳定杂交瘤细胞株。结果甲基纤维素三种浓度中,甲基纤维素浓度1．0％和1．2％时获得的杂交瘤细胞团个数约为甲基纤维素浓度1．25％时的2倍。而甲基纤维素浓度1．2％时细胞团固定效果较甲基纤维素浓度1．0％更好。通过对梯度稀释的SP 2／0细胞培养后,选择半固体培养基中使用的胎牛血清浓度（25％）,在半固体培养基中含4mmol／L L-谷氨酰胺比含2mmol／L L-谷氨酰胺得到多近一倍的杂交瘤。得到的5株阳性杂交瘤在扩大培养、冻存复苏后抗体分泌稳定,得到5株稳定阳性杂交瘤细胞株。有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞对照实验显示半固体培养基法可节省一半时间。结论建立了稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。该法缩短了克隆化的时间,节省了人力和材料．不需要添加饲养细胞和细胞因子,是一种稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。     

介绍一种有效的拯救小鼠杂交瘤的方法：脾内接种法

在小鼠杂交瘤的制备、传代过程中，常遇到一些棘手问题；小到影响实验进展，大到细胞丢失：其中常见的是1．污染，包括支原体、细菌及真菌污染。在杂交瘤未冻存前，这些污染会造成很大的损失。2．有些杂交瘤复苏后不易存活。3．个别情况下杂交瘤增殖不良，不易向24孔板内扩增。腹腔接种在一定程度上可以解决这一问题，     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞，在PEG1000作用下，与小鼠骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag 14融合，共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体，并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个片稳定传代，冻存于液氮中．复苏后其分泌抗体的水平末见下降。