四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究

目的了解四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况,分析现行标准下原料血浆的HBV残余风险。方法采用实时荧光PCR和ELISA法,对四川地区10个单采血浆站2007年7月～2009年7月筛查合格的56 620名次供浆者的135 542份原料血浆标本作HBV NAT和HBsAg同步筛查,对筛查阳性的标本以进口试剂复核、作中和试验及HBV DNA定量测定,并对阳性血浆的供血浆者追踪分析,确认OBI标本。结果共检出HBV DNA阳性12份(9人),四川地区原料血浆HBV DNA检出率为0.008 9%(12/135 542);HBV DNA载量均<1 000 IU/ml;采用国产ELISA试剂检测该12份标本HBsAg均为阴性,而用进口试剂检测并经中和试验确认了其中5份(3人)为HBsAg阳性,其余7份(6人)为OBI血浆,血清学模式均为HBsAg-/HBeAg-/HBcAb+;对供血浆者2～9个月的追踪分析显示ELISA和NAT检测结果无变化,与筛查结果一致。结论 HBsAg阴性供血浆人群中存在OBI感染者,四川供浆人群中OBI感染率为0.010 6%(6/56 620),低于现有报道的我国无偿献血者的OBI感染率;按照现行要求采用ELISA法检测原料血浆,灵敏度较低的国产试剂检测HBsAg的残余风险(0.0089%)高于进口试剂(0.005 2%)。增加HBV NAT能有效降低原料血浆OBI的漏检风险。     

无偿献血者巨细胞病毒感染状况调查

目的了解汕头地区无偿献血人群中巨细胞病毒(HCMV)感染情况,探讨HCMV的临床检测方法。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对450份无偿献血者血样进行IgM抗体和IgG抗体检测,并进一步对12份HCMV-IgM、HCMV-IgG均阳性的样本、278份HCMV-IgM阴性而HCMV-IgG阳性样本、10份HCMV-IgM、HCMV-IgG均阴性的血液样本进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并对2种方法的检测结果进行相关性分析。结果汕头地区无偿献血人群中HCMV-IgM阳性率为2.67%,HCMV-IgG阳性率为93.78%,经统计分析,FQ-PCR对HCMV-DNA的检出率高于HCMV-IgM阳性率(P<0.05)。结论汕头地区无偿献血人群巨细胞病毒感染率与国内其他学者所报道资料相近,FQ-PCR方法能够敏感、准确地检测出HCMV感染。     

隐匿性乙型肝炎病毒感染与输血传播风险

尽管乙型肝炎疫苗普遍免疫接种且抗病毒治疗技术不断提高,但乙型肝炎病毒(HBV)的持续感染仍是全球面临的主要公共卫生问题.据报道,全球共有20多亿人口曾经感染过HBV,并且有2亿多人呈慢性感染状态[1].HBV慢性感染可通过血液中检测到的HBV表面抗原(HBsAg)浓度进行判断,但随着分子生物学诊断技术的发展,发现了 HBsAg阴性的HBV 长期携带者,被确定为隐匿性 HBV 感染(OBI).     

闽南地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究

目的研究闽南地区无偿献血者中隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况,探讨现有输血传播乙肝病毒(HBV)的检测方法的有效性。方法依据多种与HBV相关血清学指标的检测情况对献血者标本进行HBV携带风险评价分级,对较高携带风险的标本做单份多区段巢式-PCR检测其HBV DNA,对低携带风险的标本做10份混合的巢式-PCR检测。采用这一方案,对闽南地区19 360例HBsAg阴性的无偿献血者标本做检测分析。结果闽南地区HBsAg阴性献血者中的HBV DNA阳性检出率为0.21%(40/19 360,95%CI:0.15%—0.28%),属于OBI;其中抗-HBc阳性检出率85%(34/40),但阳性预测值仅为3.4%(34/995,95%CI:2.4%—4.7%);HBV NRAg阳性预测值30%(6/20),但灵敏度为15%(6/40)。结论现有筛查体系下无偿献血者中仍存在一定比例的OBI,需要寻求更为有效的检测方法。     

自动化核酸扩增技术(NAT)在血液筛查中的应用研究

目的为了提高血液安全性,探讨自动化核酸扩增技术在血站血液筛查中应用的可行性。方法在酶联免疫试验(ELISA)常规筛查血液的基础上,应用STAR2000加样仪自编程序进行全自动血样汇集(8人份),在KHB-DP1000半自动核酸提取仪上自动化方法提取样本核酸,应用荧光PCR方法在AB I7300上进行扩增和检测分析结果,用临检中心室间质控品和澳大利亚室间质控品进行室间质评,用标准品考评检测限量。结果应用标准品考评检测限量,本法的95%的检出限量HBV DNA、HCV RNA和H IV RNA分别为100.9 IU/m l,155.1拷贝/m l和165拷贝/m l,95%可信限范围分别为(60.1、302.2),(98.9,398.6)和(105.2,425.8)。通过对16 744个样本共2093汇集池检测,初始检测HBV DNA阳性池2个,HCV RNA、H IV RNA未检出阳性池,进一步拆分检测,有2份献血者的血液HBV DNA阳性,HBV DNA阳性率为0.012%。结论随着国内相关技术的不断提高和相关制度的不断完善,可以考虑将国产自动化核酸扩增试剂纳入血站血液常规筛查。     

隐匿性乙型肝炎病毒感染和血站开展核酸检测的重要性

隐匿性HBV感染（OBI）是一个具有挑战性的临床课题.OBI具有2个主要特征：HBsAg检测阴性和低病毒复制.对OBI及其临床意义的研究在过去20年里取得了显著进展.敏感的HBV DNA扩增试验是OBI诊断的基础,病毒和宿主因素与OBI的发病机制相关.本综述旨在阐述OBI的发生机制和相关的病毒学诊断及血站系统开展病毒核酸检测的重要性.     

ELISA结合核酸检测技术对献血者作血液筛查结果分析

目的分析ELISA结合核酸检测技术(NAT)对无偿献血者筛查的结果。方法使用2种ELISA试剂对149 988份献血者标本作血清学筛查,应用Cobas s201全自动核酸血液筛查系统对ELISA筛选为阴性的部分标本作检测。结果 47 335份ELISA筛查阴性标本中,应用NAT共检出15份反应性标本,经确证,13份标本为HBVDNA阳性,没有发现HCV RNA和HIV RNA的阳性标本。结论 2种ELISA检测试剂合用可以降低输血传染的风险,但不能杜绝漏检;ELISA结合NAT检测,可以更大限度地保障输血安全。     

即刻早期抗原-mRNA测定对肾移植后巨细胞病毒感染的诊断价值

目的 探讨器宫移植术后应用核酸基础序列扩增法(NASBA)检测即刻早期抗原(IE)-mRNA对人外周血中巨细胞病毒(HCMV)感染的诊断价值,以评价和推广CMV活动性感染的诊断方法.方法 肾移植术后患者32例,分别于术后3、7周采血5～7ml,每次同时进行针对CMV感染的NASBA、实时荧光定量PCR(Real time-PCR)、ELISA法检测.比较三者的敏感度和特异度.结果 32例肾移植术后受体CMV检测结果显示,采用NASBA法外周血IE-mRNA阳性率为45.8％ (15/32)；Real time-PCR法检测HCMV-DNA阳性率45.8％ (15/32)；ELISA法检测HCMV-(IgG+ IgM)阳性率37.5％(14/32).IE-mRNA、HCMV-DNA灵敏度和特异度明显优于HCMV-(IgG+ IgM),且可以降低后者存在的假阳性率.有CMV症状者共14例,其中NASBA法IE-mRNA检测阳性患者占92.8％ (13/14)；Real time PCR、ELISA 法阳性率分别为71.5％ (10/14)和42.8％ (6/14).结论 NASBA和Real time-PCR是一种敏感、快速诊断HCMV感染的方法,灵敏度及特异性均高于传统ELISA法,并能弥补ELISA的假阴性.NASBA检测IE-mRNA对于辅助临床诊断具有很好的价值.     

环媒恒温扩增技术在病毒感染检测中的应用

环媒恒温扩增法(loop mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型的恒温核酸扩增技术,它利用了2对特异引物和一种有链取代活性的DNA聚合酶,通过使扩增产物形成单链环结构实现核酸的恒温扩增.LAMP自身的一系列特性使其可以达到对特定核酸片段高效、特异的扩增.由于反应结果可以通过测定反应副产物--焦磷酸镁沉淀引起的浊度来判断,因此使其成为一种十分有效的分子检测手段.     

荧光定量PCR在乙型肝炎病毒宫内感染监测中的应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染监测中的作用及临床意义.方法 应用FQ-PCR检测102例乙型肝炎(下称乙肝)感染孕妇血清及其新生儿脐带血的HBV DNA,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝感染孕妇血清及其新生儿脐带血的乙肝血清学标志物.结果 新生儿脐带血的HBVDNA阳性率为16.7%(17/102),高于脐带血乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的阳性率(10.8%,11/102)P＜0.001;102例乙肝孕妇中有29例血清乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性,其新生儿脐带血HBV DNA阳性率为48.3%(14/29),高于孕妇HBeAg阴性组的阳性率(4.1%,3/73)P＜0.001,新生儿脐带血的HBV DNA阳性率随孕妇HBVDNA含量增加而增加(P＜0.001).结论 FQ-PCR检测新生儿脐带血HBV DNA是诊断乙肝宫内感染的良好而敏感的筛选指标;孕妇血清HBV DNA高含量是乙肝宫内感染的高危因素.     

Serological markers of hepatitis A and B virus infection in university students

Serological markers of hepatitis A and B virus infection were determined by radioimmunoassay in 162 university students. Antibody to hepatitis B e antigen (anti-HBe) was demonstrated in 11 of 15 students positive for both antibody to hepatitis B e antigen (HBsAg) and antibody to hepatitis B core antigen (anti-HBc). The presence of anti-HBc alone seemed to denote previous hepatitis B virus infection. Antibody to hepatitis A virus was demonstrated only in 3%. Study of 23 stored HBsAg-positive sera showed high titer anti-HBc significantly more frequently in sera positive for anti-HBe than in sera positive for hepatitis B e antigen. Incidence of hepatitis B e antigen was significantly higher in male students with HBsAg, and that of anti-HBe in female students.     

Usefulness of a newly developed high-speed polymerase chain reaction analysis system for the diagnosis of Clostridioides difficile infection

IntroductionThe incidence of Clostridioides difficile infection (CDI) has been continuously increasing and thereby became an important issue worldwide. Appropriate diagnosis, management, and infection control are required for patients with CDI. Enzyme immunoassay (EIA) is a widely used standard diagnostic tool for C. difficile-specific glutamate dehydrogenase (GDH) and C. difficile toxins (toxins A and B). However, the sensitivity of EIA in detecting C. difficile toxins has been reported to be relatively low, resulting in CDI underdiagnosis. Therefore, nucleic acid amplification tests (NAAT) are recently developed for higher sensitivity/specificity test.MethodsIn this study, a total of 279 stool samples submitted for CDI diagnosis were examined using an independently developed new high-speed polymerase chain reaction (PCR) device (PathOC RightGene, Metaboscreen). In parallel, results were compared with those of definitive diagnosis and conventional diagnostic methods (EIA, real-time PCR) to assess the inspection accuracy.ResultsPathOC RightGene showed high sensitivity (96.7%) and specificity (96.7%). Regarding the measurement time, C. difficile-specific and C. difficile toxin genes were simultaneously detected in approximately 25 min for one sample (including the preprocessing and measurement time).ConclusionPathOC RightGene has been found to show both excellent sensitivity and rapidity and thus can be used for the reliable and early diagnosis, which are needed for the appropriate management of CDI.     

乙肝病毒外膜大蛋白临床应用价值研究

目的检测乙肝患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白（LHBs）,并与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）和乙肝病毒前S1抗原（PreS1Ag）相比较,探讨LHBs的临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测140例乙肝患者血清中LHBs,乙肝病毒标志物（HBV—M）、HBV PreS1Ag,同时采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）方法对血清HBV DNA进行检测,并进行统计分析。结果在所研究的各种模式中,LHBs与HBV DNA的检出率差异均无统计学意义（P均〉0．05）并且LHBs的总阳性率（76．43％）高于PreSiAg阳性率（44．29％）和乙肝e抗原（HBeAg）的阳性率（29．29％）,差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论乙肝病毒外膜大蛋白在一定程度可以反映HBV感染者体内病毒复制情况。其作为HBV复制指标,灵敏度高于PreS1Ag和HBeAg,可作为判断HBV感染者体内乙肝病毒复制情况新的血清学指标,尤其是针对HBeAg阴性患者。     

Recent changes in serological markers of hepatitis B virus infection in Japanese university students

University students were screened for serological markers of hepatitis B virus infection every year. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) determined by reversed passive hemagglutination and antibody to HBsAg (anti-HBs) by passive hemagglutination were positive in 1.7% and 7.3% of the first-year students in 1978-80, respectively, and 1.1% and 3.8% in 1981-84. The difference in the prevalences of anti-HBs between 1978-80 and 1981-84 was statistically significant (p less than 0.001). Hepatitis B e antigen, which was positive by less sensitive immunodiffusion in 52% of HBsAg carrier students in 1976-79, was detected by more sensitive radioimmunoassay only in 19% in 1980-84. The difference was statistically significant (p less than 0.01). Recently changes in hepatitis B virus infection seem to be occurring in Japanese university students.     

乙型肝炎病毒核酸载量与血清学标志物相关性的研究

目的分析HBVDNA载量与血清学标志物的相关性。方法应用乙型肝炎病毒核酸试剂定量检测468份献血员样本HBVDNA含量,并分别定性或定量检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc及抗-HBcIgM血清学标志物,计算不同病毒核酸水平样本中5个乙肝血清学标志物阳性率及HBsAg、抗-HBs水平的分布情况。结果HBVDNA阴性样本中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc阳性率分别为12.8%、39.8%、0、21.1%、49.6%,而HBVDNA阳性样本中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc血清学标志物阳性率分别为91.3%、0.7%、20.9%、65.0%、88.6%,血清学指标在不同HBVDNA水平的阳性率差异具有统计学意义(χ2=197.4,P<0.01)。HBVDNA载量与HBsAg水平成正相关性,与抗-HBs水平成负相关性。结论低水平的HBsAg在不同HBVDNA载量水平的样本均有分布,HBsAg检测能力需要进一步提高,另外在我国人群中存在低乙型肝炎病毒核酸水平携带者,乙型肝炎病毒核酸可以弥补血清学检测试剂的不足。     

环介导的等温扩增技术对HBV、HCV和HIV核酸检测的研究

目的建立环介导的等温扩增技术(LAMP)对HBV、HCV和H IV核酸检测的方法并对检测灵敏度和特异性作初步考核。方法通过引物设计和筛选、内质控的设计与时间分辨浊度检测方法的运用,建立LAMP HBVDNA、HCV RNA和H IV RNA扩增体系;用连续稀释的阳性样本和不含任何病毒核酸的正常人血浆考核所建立的LAMP扩增体系的灵敏度和特异性。结果建立了LAMP HBV DNA扩增体系及HCV/H IV RNA双联检体系,该体系对5 CP/m l的HBV DNA样本的检出率为51.85%,对100 CP/m l的HCV RNA阳性样本的检出率为61.90%,对100 CP/m l的H IV RNA阳性样本的检出率为45%。对考核样本检测的相对灵敏度和特异性均为100%。结论LAMP HBV、HCV和H IV检测灵敏度较高,在进一步优化以后能用于HBV、HCV和H IV的核酸检测。     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最     

乙型肝炎病毒标志物检测方法的选择与应用

目的探讨乙型肝炎病毒定性与定量方法在临床诊治中的应用价值和合理选择。方法收集920例健康体检者血清,分别用胶体金方法、酶联免疫吸附剂测定方法和时间分辨免疫荧光方法检测乙型肝炎病毒表面抗原,对阳性标本再用中和确认试验进行验证和PCR方法检测HBV-DNA。结果 920例标本中胶体金法检出阳性96例,酶联免疫吸附测定方法检出阳性104例,时间分辨免疫荧光法检出阳性112例,时间分辨免疫荧光方法与胶体金方法、酶联免疫吸附测定方法比较有统计学意义(P0.001、P=0.008);中和确认试验确认112例标本均阳性;实时荧光定量PCR检测112例标本HBV-DNA阳性78例。结论乙型肝炎病毒标志物的日常检测方法应由准确性高的定量方法替代目前常用的定性方法。