标本保存温度、时间和不同采血管对核酸检测结果的影响

目的验证不同真空采血管、保存温度、时间等对核酸检测(NAT)结果的影响,为NAT检测的采血管选取、过程控制、检测策略等提供数据支持。方法进行3个试验:1)标本保存温度、离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果的影响:将含HIV-1(150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存温度分为30℃组、4℃组,之后依据标本离心前的保存时间不同分为4 h,6 h,8 h,10 h,12 h,24 h组,再依据采血管生产厂家不同分为A、B、C组,对所有标本进行NAT联检试验,利用卡方统计分析各因素对NAT联检试验结果的影响;2)标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响:将含HIV-1(150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存时间不同分为0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d组,再依据采血管不同分为采血管A、B、C组,对所有标本进行NAT鉴别试验,利用卡方统计分析标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响;3)保存时间对HCV阳性标本NAT定量结果的影响:选取9份浓度范围在1.04×102IU/ml～4.86×103IU/ml之间的弱阳性标本,依据标本在4℃保存时间的长短不同,分为0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d组,进行定量HCVRNA检测,分析4℃保存条件下保存时间对血浆中HCV RNA浓度的影响。结果试验1:对于全血标本,4℃或30℃的保存温度,4～24 h的离心前保存时间以及采用不同的采血管对弱阳性标本NAT检出率的影响差异均无统计学意义(P>0.05)。试验2:在4℃保存条件下,采用A采血管保存含HIV-1(150 IU/ml)的弱阳性标本0～7 d,保存后d 3,d 4、d 5、d 6、d 7弱阳性标本的NAT检出率与0 d相比,差异具有统计学意义(P<0.01);采用B采血管保存含HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本0～7 d,保存后d 3和d 7此标本的NAT检出率与保存前相比差异有统计学意义(P<0.01);其余各组标本的NAT检出率与保存前相比差异没有统计学意义;试验3:9份HCV弱阳性标本的浓度7 d内没有出现明显变化。变化范围均在0.56log之内,且有相同的变化趋势,即在4℃保存2 d后,其浓度开始下降。结论采用Procleix Ultrio Assay和Procleix Ultrio Discriminatory Assay分析系统,在不超过30℃的采血环境中,NAT标本采集后可以在24 h内离心处理;为提高鉴别阳性率,建议4℃保存的献血者标本在NAT联检阳性后2d内完成NAT鉴别检测。     

不同储存条件和时间对HCV RNA检测结果的影响

目的评估无偿献血者核酸检测标本的反复冻融和在4℃保存不同时间间隔对HCV-RNA检测的影响。方法选取1份定量检测HCV RNA浓度低于102IU/m L的血浆标本作为本次研究的目标标本。将该标本分为2管,每管50 m L,分别在4℃保存和-20℃保存。并于保存第24 h、48 h、72 h、7 d、14 d每组同时重复取5个标本,用Cobas s 201 Config D核酸自动检测系统检测HCV RNA定量值。结果几乎所有检测结果都为阳性;反复冻融标本核酸定量值(IU/m L)随时间延长有逐步下降趋势,在4 h、24 h、48 h、72 h、7 d和14 d检测值分别为:36.9;62.6,89.4,58.8,88.1,68.8;68.0,67.6,40.2,57.9,61.6;15.0,19.3,69.9,37.5,56.8;16.9,21.6,15.0,37.7,15.0;26.4,30.8,49.4,15.0,42.7,第4次、第5次和第6次冻融循环中都有1个检测结果低于检测限(15.0)。4℃保存7 d内定量检测结果稳定,d14检测结果显著下降(P0.05),出现了3个低于检测限(15.0)的结果,在4 h、24 h、48 h、72 h,7 d和14 d时,核酸定量检测结果(IU/m L)分别为36.9;38.0,32.3,40.4,31.5;26.7,43.8,50.8,59.9,44.3;37.9,25.3,63.4,55.5,74.6;50.5,19.2,31.8,95.6,17.1;39.8,30.7,15.0,15.0,15.0。结论血浆标本储存在4℃中小于7 d,冻融循环不超过3次对HCV RNA检测结果无明显影响。     

标本因素及保存条件对HCV RNA检测的影响

目的探讨溶血、脂肪血、保存温度和保存时间对HCV RNA检测的影响,确认用于核酸检测的标本正确采集、处理及保存的关键控制点。方法应用实时荧光PCR法,采用混样检测+单检的检测模式,对在不同浓度的血红蛋白或甘油三脂下以及在不同温度条件下保存不同时间后的HCV RNA标本进行检测,对检测的Ct值进行分析。结果小于7.93mmol/L的不同浓度甘油三脂对HCV RNA检测没有影响(P0.05),血红蛋白浓度为97g/L、34g/L、17g/L以及8g/L时,其对HCV RNA检测均有影响(P0.05),当血红蛋白浓度小于5g/L时,其对HCV RNA检测均无影响(P0.05);保存温度在-30℃下4周内,其检测Ct值差异均无统计学意义(P0.05)。在低于37℃条件下,4h内保存的HCV RNA标本检测Ct值差异均无统计学意义(P0.05)。在4℃的条件下保存72h内,HCV RNA标本检测Ct值差异无统计学意义(P0.05),25℃的条件下能保存48h(P0.05)。结论甘油三脂浓度小于7.93mmol/L对HCV RNA的检测没有影响,血红蛋白浓度大于8g/L时会影响HCV RNA的检测,用于HCV RNA检测的标本在4℃保存时最好在72h内完成检测。     

超速离心浓缩技术富集HBV和HCV颗粒的效果研究

目的 分析超速离心浓缩(简称超浓缩)技术对HBV和HCV病毒颗粒的富集效果.方法 将8份不同浓度的HBV阳性标本(10、102、103 IU/ml各2个、104和105 IU/ml各1个)和9份不同浓度HCV阳性标本(102 IU/ml 1个、103 IU/ml 3个、104 IU/ml 3个,105、106 IU/ml各1个),4℃ 24 600 g超速离心1h,9.6倍浓缩富集病毒;使用Roche COBAS AmpliPrep/COBAS Taq-Man HBV及HCV定量试剂盒对原标本及浓缩标本做HBV及HCV定量测定,计算病毒回收率.结果 经9.6倍超浓缩处理后,8份HBV阳性标本的病毒含量均明显上升,平均是原标本的(5.92±1.98)倍,浓缩处理的病毒回收率为(61.65±20.67)％;9份HCV阳性标本的病毒含量亦均明显上升,平均是原标本的(4.70±1.43)倍,浓缩处理的病毒回收率为(48.95±14.84)％.结论 超速离心处理可有效富集HBV及HCV颗粒,病毒浓缩效果显著.     

标本保存条件对血清单胺氧化酶检测结果的影响研究

目的探讨标本保存时间及温度对血清单胺氧化酶(MAO)检测结果的影响。方法随机选择80份血清MAO待测标本,准确记录采集时间并编号,放置30min后离心立即检测1次MAO水平。然后按照室温、4℃、-20℃3个不同的温度条件进行保存。其中在24h和7d时将-20℃保存的标本检测1次,在2、4、8、12、24h时将室温和4℃保存的标本各测定1次。结果保存条件为-20℃的标本1周之内MAO检测结果与即刻检测水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。室温保存8h和4℃保存12h以内的MAO检测结果与即刻检测水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。4℃保存24h和室温下保存12、24h时的检测水平与即刻检测结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对需进行血清MAO检测的标本,如室温条件下8h内不能完成检测,应将标本放于4℃冰箱保存,且于12h之内检测。4℃冰箱保存的标本在12h之内不能完成检测的,应将标本冷冻于-20℃冰箱,以确保检测结果的准确度。     

不同保存条件对血液酒精浓度检测的影响

目的探讨不同保存条件对血液酒精浓度(BAC)的影响。方法测定三种真空分离胶试管的空白BAC值。观测不同保存状态(室温密封3天、一周;4℃密封一周;室温敞开1h、2h)下的BAC变化情况。结果三种分离胶试管空白BAC值(mg/ml)分别为0.03±0.02,0.27±0.11,0.05±0.02。室温密封3天,一周,4℃密封一周及室温敞开1h的BAC值变化无统计学意义,室温敞开2h的BAC值则明显下降。结论BAC测定标本保存应密封,尽量避免使用带分离胶的真空管,全血标本密封4℃或室温保存一周不影响BAC的检测。     

神经元特异性烯醇化酶测定影响因素的探讨

目的探讨血液标本放置不同时间后分离血清对神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响,以及血清经冰冻后对NSE水平有无影响。方法采用电化学发光法,分别对24例健康体检者的血液标本在室温(25℃)放置30min、1h、2h、3h后再分离血清,以及将放置30min后离心的血清标本放-20℃冰箱过夜,将血清标本进行NSE水平测定。结果30min组血清NSE水平为5.29±1.48ng/ml,1h组为5.32±1.41ng/ml,2h组为7.11±1.96ng/ml,3h组为8.71±2.48ng/ml,冰冻组为5.27±1.50ng/ml,1h组、冰冻组同30min组比较,结果均无显著性差异(P>0.05),2h组、3h组同30min组比较,结果均有极显著差异(P<0.01)。结论血液标本放置时间延长对NSE水平测定有不同程度的影响,血清冰冻后对NSE水平测定无影响。     

0℃液态保存红细胞获得成功

为确定液态保存红细胞的最低适宜温度,作者采集400ml 全血与56ml CPD 保存液混合并分装到4个含DEHP 增塑剂的聚氯乙烯(DEHP-PVC)袋(50ml)和4个玻璃瓶(50ml)中,分别于5±1℃、0±1℃、—2±1℃及—5±1℃保存。分别于保存的第0、7、21、35和42天轻轻混匀塑料袋和玻璃瓶内的血液,并取样检测。结果:血液用DEHP-PVC 袋于5、0、—2和—5℃保存21和35天,当保存温度低时,其pH、2,3-DPG 水     

神经元特异性烯醇化酶测定影响因素的探讨

目的探讨血液标本放置不同时间后分离血清对神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响,以及血清经冰冻后对NSE水平有无影响.方法采用电化学发光法,分别对24例健康体检者的血液标本在室温侣(25℃)放置30min、1h、2h、3h后再分离血清,以及将放置30min后离心的血清标本放-20℃冰箱过夜,将血清标本进行NSE水平测定.结果30min组血清NSE水平为5.29+1.48ng/ml,1h组为5.32+1.41 ng/ml,2h组为7.11±1.96ng/ml,3h组为8.71±2.48 ng/ml,冰冻组为5.27+1.50 ng/ml,1h组、冰冻组同30min组比较,结果均无显著性差异(P＞0.05),2h组、3h组同30min组比较,结果均有极显著差异(P＜0.01).结论血液标本放置时间延长对NSE水平测定有不同程度的影响,血清冰冻后对NSE水平测定无影响.     

一种国产血液核酸检测系统的性能验证研究

目的对一种国产血液核酸检测系统在本实验室进行献血者乙型肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)、丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)、人类免疫缺陷病毒核糖核酸(HIV RNA)检测的性能进行研究,确定该系统是否稳定、准确、可靠。方法根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)的相关文件要求,对一种国产血液核酸检测系统HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA项目的检测灵敏度、准确度、精密度、抗交叉污染、抗干扰及稳定性进行验证。结果该国产血液核酸检测系统HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的95%检出限分别为4.87(3.84~8.22)IU/mL、7.29(5.68~13.89)IU/mL、30.22(22.90~60.17)IU/mL;对16例阳性样本和32例阴性样本进行混样检测,结果均为反应性,拆分检测阴性样本和阳性样本的检测符合率均为100%;HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA阳性样本重复检测的变异系数(CV)分别为4.29%、1.51%、3.73%;将10个阴性样本和10个阳性样本进行阴阳交叉排列单检结果无交叉污染;低浓度HBV(10 IU/mL)、HCV(10 IU/mL)、HIV(40 IU/mL)样本在溶血样本[血红蛋白(Hb)含量为12 g/L]和脂肪样本[甘油三酯(TG)含量为6.13 mmol/L]中的检出均无显著影响;当溶血样本中Hb含量提高至24 g/L、脂肪样本中TG含量提高至11.85 mmol/L时,低浓度样本的检出会受到影响;经过2017年仪器设备的日常核酸检测情况分析,该国产血液核酸检测系统稳定性良好。结论该国产血液核酸检测系统的检测灵敏度、准确度、精密度和抗交叉污染等均达到生产商的检测性能的要求,在标本Hb≤12 g/L以及TG≤6.13 mmol/L时,对低浓度HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的检测无显著影响,满足本实验室检测需求。     

多巴胺及多巴酚丁胺对脓毒症患者肾功能的影响

目的 观察多巴胺、多巴酚丁胺对脓毒症患者肾功能的影响.方法 90例脓毒症患者经充分液体复苏后.随机应用血管活性药物,观察用药后肾功能的变化,包括尿量、肌酐清除率(CCr)、钠排泄分数(FeNa)等指标.结果 多巴胺组尿量、FeNa均显著高于对照组及多巴酚丁胺组[(3072±480)、(2038±515)、(362±522)ml/24 h,(3.80±1.09)、(2.06±1.14)、(2.10±0.95)%,均P＜0.05].多巴酚丁胺组的CCr显著高于对照组及多巴胺组[(79.2±39.1)、(50.6±21.8)、(47.4±16.7)ml/min,P＜0.05].结论 多巴胺能增加尿量和FeNa,但不增加CCr,多巴酚丁胺可增加CCr,但对尿量没有影响.     

神经肽因子对疱疹病毒性角膜基质炎小鼠眼表修复的影响及相关机制

目的探讨神经肽因子对疱疹病毒性角膜基质炎小鼠眼表修复的影响及相关机制。方法通过双眼角膜基质注射建立疱疹病毒性角膜基质炎小鼠模型,共42只,随机平分为模型组、阿昔洛韦组与神经肽因子组,各14只。3组分别在建模14 d分别多点皮下注射5μL的0.9%氯化钠溶液、5μL 10 mg/mL阿昔洛韦、5μL 10 mg/mL神经肽因子,1周1次,连续应用4次。采用角膜基质浑浊及新生血管评分标准对各组小鼠进行评分;采用酶联免疫试验法检测血清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量;采用流式细胞仪检测CD4⁺T淋巴细胞比率;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果阿昔洛韦组与神经肽因子组治疗第2周与第4周的角膜基质浑浊及新生血管评分、血清IL-6和IL-8含量低于模型组[(5.25±0.23)、(5.21±0.18)分;(56.33±3.14)、(56.98±1.58)μg/L;(78.28±3.22)、(78.19±2.22)μg/L],神经肽因子组[(1.20±0.15)、(0.78±0.14)分;(10.38±2.11)、(7.09±1.29)μg/L;(10.76±0.87)、(8.17±0.82)μg/L]低于阿昔洛韦组[(2.48±0.11)、(2.00±0.14)分;(23.09±1.22)、(18.09±2.15)μg/L;(34.09±3.76)、(24.98±2.76)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。阿昔洛韦组与神经肽因子组全血组织CD4⁺T淋巴细胞比率高于模型组[(33.78±1.35)%],神经肽因子组[(54.09±2.57)%]高于阿昔洛韦组[(48.82±1.68)%],差异有统计学意义(P<0.05)。阿昔洛韦组(2.10±0.14)与神经肽因子组(1.09±0.21)治疗第4周的VEGF蛋白相对表达水平低于模型组(5.21±0.13),神经肽因子组低于阿昔洛韦组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论神经肽因子对疱疹病毒性角膜基质炎小鼠的应用能促进眼表修复,抑制炎性因子的表达,改善小鼠的免疫功能,其作用机制可能与抑制VEGF蛋白表达有关。     

慢性丙型肝炎患者外周血树突细胞含量与病毒载量的相关性分析

目的 分析慢性丙型肝炎患者外周血树突细胞含量与HCV-RNA病毒载量的相关性,探讨HCV感染慢性化的免疫学机制.方法 流式细胞仪检测40例慢性丙型肝炎患者（CHC）外周血中髓样树突细胞（mDC）及浆样树突细胞（pDC）的含量,22例健康人作对照比较.实时荧光定量PCR法检测外周血HCV-RNA载量.结果 HCV-RNA1＋ E003 IU/ml患者及HCV-RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血mDC表达（0.25％±0.09％,0.14％±0.07％）均低于健康对照组（0.38％±0.10％）,差异有统计学意义（t=4.340 9,9.222,P值均＜0.05）;HCV-RNA1＋ E003 IU/ml患者及HCV-RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血pDC（0.23％±0.10％,0.13％±0.08％）均低于健康对照组（0.33％±0.09％）,差异有统计学意义（t=6.552 4,11.04,P值均＜0.05）;HCV RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血mDC,pDC的表达量明显低于HCVRNA1＋E003 IU/ml患者的表达,差异有统计学意义（t=4.349 6,2.671 8,P值均＜0.05）.结论 CHC患者外周血DC含量与HCV-RNA病毒载量呈负相关,CHC患者免疫功能低下.     

多模式镇痛对下肢骨折术后患者 免疫功能、炎性因子及疼痛程度的影响

目的 研究多模式镇痛应用于骨折术后治疗中对患者免疫功能、炎性因子及疼痛程度的影响.方法 回顾性选取2019年1月至2020年1月柳州市工人医院收治的100例下肢骨折患者作为研究对象,根据镇痛方法 不同分为研究组与对照组,各50例.对照组选用芬太尼静脉自控镇痛,研究组选用多模式(硬膜外联合蛛网膜下腔阻滞)镇痛.比较2组患...     

低温疗法在心肺脑复苏中的研究进展

目的 探讨低温对心搏骤停复苏成功后血清炎症因子、肺组织酶学及形态学的影响.方法 对10只猪诱导心室纤颤(室颤)4 min后给予标准心肺复苏,待自主循环恢复(ROSC)后按随机数字表法均分为两组.低温组立即给予4℃的生理盐水以1.33 ml·kg~(-1)·min~(-1)补液22 min,继之以10ml·kg~(-1)·h~(-1)补液4 h;常温组采用室温生理盐水按相同用量和速度输入.实时监测血流动力学指标;分别于室颤前、ROSC后10 min、2 h、4 h检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;于ROSC后24 h取肺组织检测ATP酶活性,同时行普通病理和超微结构观察.结果 与常温组比较,低温组除可降低体温外,余血流动力学指标均无明显差异.低温组ROSC后10 min、2 h、4 h血清TNF-α[(15.55±1.65)、(17.06±0.86)、(12.52±1.82)ng/L]和IL-6[(173.80±15.01)、(184.09±13.44)、(73.17±6.95)ng/L]均较常温组(TNF-α:(20.09±1.32)、(26.18±1.16)、(29.18±1.20)ng/L,IL-6:(176.92±16.68)、(239.17±13.18)、(405.48±55.49)ng/L]显著降低(P＜0.05或P＜0.01).低温组较常温组能显著降低细胞膜Na~+-K~+-ATP酶活性[(3.78±1.14)U/L比(6.22±1.23)U/L,P＜0.01].低温组肺组织病理变化较常温组损伤轻.结论 4℃生理盐水诱导的低温疗法能减少猪心搏骤停模型中炎症介质的释放,抑制肺泡细胞膜ATP酶的活性,并对肺组织形态学有一定的保护作用.     

血标本保存时间和温度对γ-干扰素释放试验结果的影响

目的探讨全血标本采集后放置不同时间和温度对γ-干扰素释放试验结果的影响。方法选取疑似肺结核患者60例,采用ELISA检测其中30例患者的全血标本常温(22~25℃)放置4、8、12、24h后血浆中γ-干扰素水平,检测另30例疑似肺结核患者的全血标本在常温放置4h和4℃放置4h后γ-干扰素水平。结果标本常温放置8h血浆中γ-干扰素水平[(67.705±8.581)pg/mL]与放置4h[(69.979±6.425)pg/mL]比较差异无统计学意义(P0.05),常温放置8h阳性率(46.7%)与放置4h阳性率(46.7%)差异无统计学意义(P0.05);标本常温放置12h血浆中γ-干扰素水平[(61.791±5.997)pg/mL]与放置4h[(69.979±6.425)pg/mL]比较明显降低,差异有统计学意义(P0.05),常温放置12h阳性率(40.0%)比放置4h阳性率(46.7%)明显下降,差异有统计学意义(P0.05);标本常温放置24h血浆中γ-干扰素水平[(50.847±7.910)pg/mL]与放置4h[(69.979±6.425)pg/mL]比较明显降低,差异有统计学意义(P0.05),常温放置24h阳性率(33.3%)与放置4h阳性率(46.7%)明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。标本4℃放置4h血浆中γ-干扰素水平[(32.064±7.077)pg/mL]和常温放置4h[(69.979±6.425)pg/mL]比较明显降低,差异有统计学意义(P0.05),4℃放置4h阳性率(26.7%)比常温放置4h阳性率(40.0%)明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论标本采集后放置不同时间和温度是影响γ-干扰素释放试验结果的2个重要因素。     

病毒核酸检测在献血者血液筛查中的应用

目的　建立献血者血液混合核酸检测方法 ,调查北京现有检测体系下血液的残余风险度 ,评估核酸检测 (NAT)的必要性和可行性。方法　用世界卫生组织标准品对国产丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒 (HIV)荧光 聚合酶链反应核酸扩增检测试剂进行灵敏度、重复性和精密度试验 ;对 2 0 0 2年 2～ 10月 34373份常规血清学检测 (ALT、HBsAg、抗 HCV、抗 HIV、梅毒抗体 )合格的献血者血样进行HCVRNA和HIV 1RNA核酸扩增分析。采取 2 4人份混合血样测定 ,超离心浓缩病毒 ,Roche核酸提取柱提取病毒核酸。结果　扩增系统能 10 0 %检出 5 0IU/mlHCV及 5 0IU/mlHIV 1标准品核酸 (n =16 ) ;常规血清学检测合格的献血者血液中 ,没有检出HCV或HIVNAT阳性。结论　该核酸检测体系适用于献血者血液病毒筛查 ;北京市血液的病毒安全性已有相当高的保障。为更准确地评估NAT检测项目的可行性和必要性 ,检测标本量尚待增加。     

抗病毒治疗对Ⅰb型慢性丙肝患者PBMC IL-10、IL-12水平变化影响的研究

目的研究派罗欣联合利巴韦林抗病毒治疗对Ⅰb型慢性丙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL-10、IL-12水平的影响,分析IL-10、IL-12水平变化与病毒学应答结果之间的相关程度,探讨IL-10、IL-12作为抗病毒疗效评价指标的可能性。方法选取血清HCV-RNA阳性的Ib型慢性丙肝患者60例,依据病毒载量将其分为3组,低病毒载量组(1.0×103IU/ml     

混合血浆荧光定量PCR法筛查献血者HCV RNA的初步研究

目的 研究用荧光定量PCR方法检测混合血浆中的HCV RNA。方法 用12人份混合血浆为基本单元提取HCV RNA，逆转录，四份逆转录产物混合上样于HCV PCR扩增反应体系，用PE5700荧光定量PCR仪检测。HCV RNA质控品检测灵敏度。结果 检测4128份标本中1例HCV RNA阳性，HCV RNA冻干质控品检测灵敏度为105IU／ml。结论 48人份混合血浆荧光定量PCR法可用于血液筛查。     

Clinical performance of the new rRoche COBAS TaqMan HCV Test and High Pure System for extraction, detection and quantitation of HCV RNA in plasma and serum

We evaluated the Roche COBAS TaqMan HCV Test For Use With The High Pure System (TaqMan HPS; Roche Diagnostics), for the extraction, detection and quantitation of hepatitis C virus (HCV) RNA in serum or plasma of HCV-infected individuals. The TaqMan HPS is a real-time PCR assay with a reported linear dynamic range of 3.0x10(1) to 2.0x10(8) HCV RNA IU/ml, and a reported lower limit of detection (LLD) of 10 IU/ml. Calculation of the HCV RNA titre is based upon an external standard curve in the presence of an internal control. Intra-assay and inter-assay variation were small in reference panel members with HCV RNA > or =100 IU/ml. Genotype performance and quantitative correlation between the TaqMan HPS and the bDNA (VERSANT HCV 3.0 assay; Bayer Diagnostics), assessed in 59 patient samples, were good for HCV genotype 1 but poor for genotypes 2, 3 and 4. For genotypes 2, 3 and 4, values obtained from the TaqMan HPS were in general 0.5 log lower than those from the bDNA. Sensitivity was poor in low viral titre samples of genotypes 1, 2, 3 and 4. The LLD (95%) was estimated at 41 HCV RNA IU/ml for genotype 4. The TaqMan HPS underestimates HCV RNA at all levels in plasma and serum from HCV-infected individuals, and the LLD should be reconsidered. This is clinically relevant because underestimation of HCV RNA levels during therapy may lead physicians into making incorrect treatment decisions.