卡维地洛逆转膀胱癌细胞株多药耐药性

目的：研究卡维地洛对人膀胱癌耐药细胞株BIU-87／ADM的多药耐药性逆转作用。方法：应用MTT法检测人膀胱癌耐药细胞株(BIU-87／ADM)的耐药性；将卡维地洛与多柔比星联合作用于B10-87和BIU-87／ADM细胞，检测细胞内多柔比星聚集量。结果：卡维地洛与多柔比星共同温育BIU-87／ADM细胞后．能使BIU-87／ADM细胞内多柔比星聚积量增加，与单用多柔比星比较，差异有显著性。结论：卡维地洛对多柔比星有增敏作用，卡维地洛可逆转人膀胱癌细胞株BIU-87／ADM的多药耐药性。     

As2O3对人膀胱癌细胞凋亡和MDR1表达及细胞周期的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的凋亡诱导作用及对多药耐药基因(MDR1)蛋白表达、细胞周期的影响。方法：采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同作用时间对BIU-87细胞的生长抑制率；流式细胞术(FCM)检测不同浓度As2O3作用72h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、bcl-2及MDR1蛋白表达、细胞周期变化。结果：As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长增殖，与浓度、时间相关，P＜0．05；Fas、bcl-2的表达分别与浓度增高呈正、负相关，P＜0．05，且二者随浓度增高呈负相关，P＜0．05；MDR1蛋白表达与对照组相比As2O3 1 μmol／L作用后升高，P＜0．05，2、5 μmol／L作用后降低，P＜0．05；随As2O3浓度升高，细胞周期被阻滞在G0／G1期。结论：As2O3可有效抑制人膀胱癌细胞的生长增殖，诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期可能起了重要作用。     

人膀胱癌耐药细胞中TopoⅡ基因的表达

目的：研究DNA拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）基因在人膀胱癌多药耐药细胞中的表达状况。方法：应用MTT法检测人膀胱癌耐药细胞系（BIU-87/ADM）的耐药性；应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别对BIU-87/ADM及敏感细胞系（BIU-87）中TopoⅡ基因进行检测。结果：BIU-87/ADM细胞对阿霉素的耐药性为BIU-87细胞的56.4倍；TopoⅡ基因表达在BIU-87/ADM细胞中呈弱阳性，而在BIU-87细胞中呈强阳性。结论：TopoⅡ基因在人膀胱癌耐药细胞中表达的降低，可能与人膀胱癌多药耐药性的产生有关。     

他莫昔芬联合化疗对胆管癌耐药细胞株QBC939／ADM的影响

目的探讨他莫昔芬（TAM）联合化疗对胆管癌耐药细胞株QBC939／ADM的影响及其机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测TAM、多柔比星（ADM）、丝裂霉素（MMC）、长春地辛（VDS）及TAM分别联合其他三种化疗药对胆管癌细胞株QBC939及其耐药细胞株QBC939／ADM存活率的影响。流式细胞术（FCM）观察细胞生长周期及凋亡情况，观察细胞内ADM浓度的变化。免疫组织化学法（IHC）检测细胞P糖蛋白（P—gP）的表达。结果加用TAM后化疗药的作用得到增强，细胞凋亡率也明显提高。IHC结果显示QBC939／ADM呈过度表达，与QBC939相比，QBC939／ADM细胞内ADM的含量明显减少。用高浓度的TAM（10umol／L）作用QBC939／ADM后，细胞表面P—gP含量降低，细胞内ADM的含量相应提高。TAM对两种细胞的化疗都有增敏作用，其中耐药细胞的增敏作用更为显著。结论TAM可增强化疗药对胆管癌细胞株QBC939以及耐药细胞株QBC939／ADM的抑制作用，并可提高QBC939／ADM细胞内的药物浓度，其机制可能与其竞争结合过度表达的P—gp有关。     

鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株放射增敏作用的实验研究

[目的]探讨鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株的放射增敏作用.[方法]MTT法测定0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0和32.0μmol/L浓度鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制率.实验分4组:常氧照射组、乏氧照射组、0.887 μmol/L鹤草酚+乏氧照射组和1.774μmol/L鹤草酚+乏氧照射组,测定各组存活分数(SF),计算细胞生存率,拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比.[结果] MTT结果表明,鹤草酚对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,不同浓度鹤草酚作用组间细胞抑制率有显著性差异(F=26.818,P=0.002).鹤草酚作用A549细胞的IC50为8.87μmol/L.0.887、1.774μmol/L鹤草酚联合乏氧照射组的D0、Dq和2Gy时的细胞存活分数(SF2)均小于单纯乏氧照射组.0.887μmol/L和1.774μmol/L鹤草酚联合乏氧照射组的放射增敏比(SER)分别为1.484和1.525.[结论]鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株有抑制增殖作用,其常氧培养IC50值为8.87μmol/L.鹤草酚对乏氧培养的人肺腺癌A549细胞株有放射增敏作用,随着鹤草酚浓度的增加其放射增敏作用增强.     

单用TAM及联合应用5-FU对结肠癌细胞株生长抑制作用及增殖凋亡的影响

目的：探讨他莫昔芬(tamoxifen，TAM)单独或联合5-FU化疗对结肠癌细胞株生长抑制作用及凋亡的影响。方法：应用MTT法，比较单纯应用TAM和TAM与5-FU联合对SW480、HT29细胞株生长抑制作用，通过药物量-效关系曲线，观察TAM有无化疗增敏作用，同时检测PCNA和AI，探讨TAM联合5-FU对增殖、凋亡的影响。结果：单独应用TAM对SW480、HT29细胞株无生长抑制作用；TAM联合5-FU在一定浓度时可抑制SW480和HT29细胞的生长，提高对5-FU的敏感性，起到化疗增敏作用。通过对PCNA和AI2个指标的检测，随着浓度的增加和时间的延长，TAM联合5-FU抑制细胞的增殖和促进细胞的凋亡均呈上升趋势。结论：一定浓度的TAM能增加入结肠癌细胞株SW480、HT29对化疗药物5-FU的敏感性，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。     

三氧化二砷对人膀胱癌细胞BIU-87作用的体外研究

目的观察三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的作用,并探讨其作用机制.方法采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同时间对BIU-87细胞的生长抑制率,同时流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用72 h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、Bcl-2的表达.结果As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长,具有浓度、时间依赖性特点.Fas、Bcl-2的表达分别与浓度增加呈正、负相关,P<0.05,且二者随浓度增高呈负相关,P<0.05.结论As2O3可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制与凋亡有关.     

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法：用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素（Survivin）表达的变化。结果：三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论：As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。     

调控组蛋白乙酰化水平抑制膀胱癌细胞增殖的实验研究

背景与目的： 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂磺胺酰基苯胺复合物(sulfonamide anilimde compound, Compound)对人膀胱癌细胞BIU-87的杀伤作用和机制。 材料与方法： 以不同浓度的Compound和羟基喜树碱(HCPT)作用于体外培养的膀胱癌BIU-87细胞株;采用MTT法检测细胞生长抑制率;以流式细胞术测定不同浓度的Compound和HCPT作用前后膀胱癌细胞的调亡情况及细胞周期的变化;应用RT-PCR分析Compound和HCPT作用前后膀胱癌细胞中P21waf/cif1 mRNA表达的变化。 结果： Compound和HCPT在微摩尔级浓度即能有效抑制BIU-87细胞增殖,而Compound抑制BIU-87细胞增殖的效果更明显。流式细胞术测定结果表明Compound能显著诱导细胞发生调亡,且主要诱导G1期细胞发生调亡而出现调亡峰,HCPT也诱导细胞发生调亡,但是没有出现明显的调亡峰。RT-PCR结果示Compound和HCPT能显著诱导P21waf/cif1 mRNA表达。实时定量PCR分析显示,经Compound处理的BIU-87细胞能诱导P21waf/cif1 mRNA定量表达。上述结果均呈现出明显的量-效与时-效关系。 结论： Compound在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人膀胱癌细胞生长,其抗肿瘤生长机制可能是通过上调P21waf/cif1 mRNA水平从而使细胞阻滞于G1期所致。     

单用TAM及联合应用5-FU对结肠癌细胞株生长抑制作用及增殖凋亡的影响

目的探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)单独或联合5-FU化疗对结肠癌细胞株生长抑制作用及凋亡的影响.方法应用MTT法,比较单纯应用TAM和TAM与5-FU联合对SW480、HT29细胞株生长抑制作用,通过药物量-效关系曲线,观察TAM有无化疗增敏作用,同时检测PCNA和AI,探讨TAM联合5-FU对增殖、凋亡的影响.结果单独应用TAM对SW480、HT29细胞株无生长抑制作用;TAM联合5-FU在一定浓度时可抑制SW480和HT29细胞的生长,提高对5-FU的敏感性,起到化疗增敏作用.通过对PCNA和AI 2个指标的检测,随着浓度的增加和时间的延长,TAM联合5-FU抑制细胞的增殖和促进细胞的凋亡均呈上升趋势.结论一定浓度的TAM能增加人结肠癌细胞株SW480、HT29对化疗药物5-FU的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

小鼠uroplakinⅡ启动子在人细胞中的作用

目的　研究小鼠UroplakinⅡ (UPⅡ )启动子在人细胞中的作用。方法　采用半定量RT PCR方法 ,检测人类膀胱移行细胞癌细胞系 (BIU 87)、肾癌细胞系 (GRC 1)、脐静脉血管内皮细胞系(EC)、肺癌细胞系 (A549)和皮肤成纤维细胞系 (Hs2 7)中UPⅡ基因mRNA的表达情况 ;同时构建pEGFP UPⅡ、pGL UPⅡ重组质粒 ,应用脂质体转染技术 ,将重组质粒转染入BIU 87、GRC 1、EC、A549和Hs2 7;利用共聚焦显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察细胞表达绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶(Luc)的情况。结果　UPⅡ基因mRNA在BIU 87中有较高的表达 ,而在其他组织细胞中表达极低。BIU 87表达GFP较多 (5～ 10 /HP) ,亮度较强 ,流式细胞仪测定表达量为 10 .1% ;而GRC 1、EC细胞表达GFP极少 (0～ 2 /HP) ,亮度暗 ,流式细胞仪测定表达量分别为 0 %和 1.8%。Luc在BIU 87中的表达量是其他组织细胞的 1.8～ 8.2倍 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　UPⅡ特异性的表达在膀胱癌细胞中。小鼠的UroplakinⅡ启动子在人类细胞中仍具有膀胱特异性的启动活性     

MTA1沉默对膀胱癌细胞株BIU-87侵袭能力影响的探讨

目的:采用RNAi沉默膀胱癌细胞株BIU-87 MTA1基因的表达,观察对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法:构建针对MTA1的siRNA表达质粒,体外转染BIU-87细胞。分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组MTA1 mRNA和蛋白表达;Milli-cell PCF侵袭小室及肿瘤细胞体外黏附试验研究转染前后膀胱癌细胞侵袭能力的变化。结果:与转染空质粒组和未转染组相比,转染siRNA载体组细胞MTA1表达在RNA及蛋白水平都显著低于对照组,前组穿透侵袭小室滤膜的数目明显少于空质粒组和未转染组(F=213.147,P=0.000),MTT法测定已黏附细胞的OD490 nm,显示前组的体外黏附能力与转染空质粒组和未转染组体外黏附能力差异有统计学意义,F=5.663,P=0.008。结论:shMTA1可抑制MTA1在膀胱癌细胞中的表达,并可抑制膀胱癌细胞侵袭转移,以MTA1为靶点的RNA干扰技术可望成为膀胱癌基因治疗的新方法。     

As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的　观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法　采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果　As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论　As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起了重要作用     

丹皮酚对表柔比星诱导的膀胱癌BIU-87细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨丹皮酚对表柔比星诱导的膀胱癌BIU-87细胞凋亡的影响,并对其及作用的分子机制进行探讨。方法:将培养的人膀胱癌BIU-87细胞以不同浓度的丹皮酚处理后,采用MTT法检测对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-1β（IL-1β）水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）和生存素（survivin）的表达水平。结果:丹皮酚抑制人膀胱癌细胞BIU-87增殖。表柔比星抑制膀胱癌细胞BIU-87的增殖,诱导细胞凋亡,促进Cleaved Caspase-3、IL-1β的表达,抑制survivin的表达,与对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。丹皮酚可增强表柔比星对膀胱癌细胞BIU-87增殖抑制作用,增强表柔比星对细胞凋亡的诱导,与EPI组及对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:丹皮酚可增强表柔比星诱导膀胱癌细胞的凋亡和增殖抑制作用,其作用机制与Caspase-3的活化,下调survivin的表达,促进IL-1β的分泌有关。     

尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性

目的:研究尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性.方法:采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测膀胱癌细胞株BIU-87和其他多种非膀胱癌细胞株在转染含尿路斑块蛋白Ib启动子和Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac前后Smac mRNA和蛋白质的表达变化.结果:BIU-87在转染后Smac mRNA的表达比转染前增强约2.1倍,Smac蛋白表达阳性细胞率也由转染前的约25.6%增加为转染后的约70.5%;非膀胱癌细胞株转染前后SmacmRNA及蛋白的表达没有显著性变化.结论:尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达具有膀胱癌靶向性及相当启动活性,为膀胱癌的靶向基因治疗研究奠定了基础.     

Rab27在膀胱癌细胞中过表达并促进细胞的增殖和侵袭

目的:检测Rab27在人膀胱癌细胞系中的表达情况,并探讨Rab27表达与膀胱癌增殖侵袭的关系.方法:采用Western blot和RT-PCR检测Rab27在BIU-87、5637、RT4、J82 和T24细胞系中的表达.应用Rab27转染人膀胱癌细胞系BIU-87,应用Rab27 siRNA干扰人膀胱癌细胞系5637后,应用CCK-8、集落形成实验和基质胶侵袭实验来检测Rab27对膀胱癌增殖和侵袭的影响.结果:CCK-8、集落形成实验结果表明膀胱癌细胞系中Rab27转染能够提高细胞的增殖率,而Rab27敲除后则抑制细胞的增殖.基质胶侵袭实验表明Rab27敲除后下调了穿过基底膜的细胞数,而转染Rab27后穿过基底膜的细胞数显著增多.结论:Rab27促进着膀胱癌细胞的增殖与侵袭能力.     

塞来昔布对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2 mRNA表达的影响

 目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-CmRNA及bcl-2mRNA表达的影响,研究COX-2抑制剂抗肿瘤的作用机制。方法将培养的PC-3细胞分为四组:试验组(分别以10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L不同浓度塞来昔布处理)和对照组,采用RT-PCR的方法检测四组中VEGF-C及bcl-2mRNA的表达。结果10μmol/L塞来昔布组VEGF-C/GAPDH值及bcl-2/GAPDH值与对照组相比差别均无统计学意义(P>0.05);20μmol/L及40μmol/L塞来昔布组VEGF-C/GAPDH值分别为0.370±0.063、0.263±0.062,bcl-2/GAPDH值分别为0.339±0.047、0.272±0.042,两组中上述两项指标均较对照组明显下降(P均<0.01)。结论塞来昔布可能通过对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2mRNA表达的抑制发挥其抗肿瘤作用。