TRAIL联合放射线诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的协同作用研究

目的:研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡诱导作用及与放射线联合应用的协同作用,并探讨不同剂量TRAIL对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡率的影响。方法:利用显微镜、流式细胞仪,观察和检测不同剂量TRAIL、放射线、TRAIL加放射线对传代培养的人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡诱导作用,比较各组间肿瘤细胞凋亡率的差异。结果:TRAIL作用后镜下可见到人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的典型表现,不同剂量TRAIL均有诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的作用,联合应用放射线后U251细胞凋亡率显著提高。结论:TRAIL可有效的诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡,并和放射线有显著协同作用。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

丹皮酚抑制U251人脑胶质瘤细胞增殖的作用研究

目的 探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对人脑胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对U251细胞的诱导凋亡作用.结果 Pae在31.25～250 mg/L浓度范围内对U251细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系.诱导电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变.Pae在31.25～250 mg/L浓度下均可诱导U251细胞发生凋亡,其浓度越高、作用时间越长,凋亡率越高,有明显的时效和量效关系.结论 Pae对有抑制人脑胶质瘤细胞株U251的增殖和诱导其发生凋亡的作用.     

榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响

目的观察榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响。方法应用MTT法检测不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制率。采用榄香烯单独或联合放射线作用于脑胶质瘤U251细胞,用集落形成实验和单击多靶模型拟合细胞存活曲线,获得放射增敏比;应用流式细胞技术分析榄香烯对U251细胞凋亡率的影响。结果榄香烯可抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖,且与浓度相关;97.86μmoL和195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞24 h后,联合放射的放射增敏比(SER)分别为1.179和1.429;195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞3 h和6 h后,联合放射的SER分别为1.139和1.356;流式细胞仪分析表明榄香烯作用24 h后,随着榄香烯浓度的增加,U251细胞凋亡率越高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯能够抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖,并有放射增敏作用,且放射增敏作用的大小与药物作用浓度及作用时间有关系。     

紫杉醇协同肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制胶质瘤细胞活性的探讨

目的探讨紫杉醇(PX)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胶质瘤U251细胞凋亡作用的影响及其可能机制。方法分别采用改良MTT法和流式细胞术检测PX和TRAIL单独用药以及TRAIL/PX联合用药U251细胞后细胞增殖和凋亡的情况,采用Western bloting法检测PX对U251细胞TRAIL受体DR4和DR5表达的影响。结果 TRAIL和PX单独用药对U251细胞增殖均具有抑制作用且呈浓度依赖性,TRAIL/PX联合作用对U251细胞生长抑制率和凋亡率均大于单独用药(P<0.05),TRAIL/PX联合用药与单独用药相比可显著上调DR4表达(P<0.05),DR5表达无明显变化。结论 PX可协同TRAIL上调DR4的表达,进而提高胶质瘤细胞对TRAIL的敏感性,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

福莫司汀对人脑胶质瘤细胞株U251细胞周期的影响

目的:观察福莫司汀(Fotemustine)对人脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响。方法:通过体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251,用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测福莫司汀诱导胶质瘤细胞凋亡及其增殖周期的分布;与对照组比较,并进行统计学处理。结果:Fotemustine诱导后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);诱导后细胞,G1期数量减少,而S期和G2期数量增多,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:Fotemustine可诱导人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡;诱导细胞增殖周期分布的变化,有助于S期、G2期的化疗药物作用的发挥。     

肿瘤坏死因子相关凋亡配体转染骨髓干细胞后对U251胶质瘤细胞的体外靶向抗瘤作用

目的 探究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）体外转染骨髓干细胞（BMSCs）后对U251脑胶质瘤细胞生长及凋亡的作用。方法 利用Transwells小室研究骨髓干细胞的肿瘤迁徙性。将携带TRAIL的质粒体外转染人骨髓干细胞，采用PCR及Western blot检测转染后BMSCs中目的基因的表达强度。将转染的BMSCs与U251细胞体外共培养，采用流式细胞仪检测转染后的BMSCs诱导U251细胞的凋亡情况。结果 BMSCs具备向肿瘤细胞的迁徙性。转染后的骨髓干细胞表达、分泌TRAIL，且干细胞凋亡情况无变化。将转染后的BMSCs与U251细胞共同培养，可明显提高U251细胞的凋亡率，BMSCs TRAIL+U251组U251细胞凋亡率明显高于对照组（P <0.05）。结论 在体外实验中，利用BMSCs肿瘤迁徙的特异性，将BMSCs作为基因载体，可提高TRAIL对U251胶质瘤细胞的靶向抑癌作用。     

Genistein对胶质瘤细胞株U251MG作用的研究

目的探讨Genistein对胶质瘤细胞株U251MG的作用。方法采用光镜和倒置显微镜观察Genistein对胶质瘤细胞株U251MG生长的影响,并用流式细胞仪检测Genistein对U251MG细胞凋亡的影响。结果 Genistein在25μg/mL和50μg/mL作用48 h后,对U251MG细胞生长均有抑制作用,凋亡率均较对照组显著增加（P〈0.01）,并呈剂量依赖性。结论 Genistein既可以抑制U251MG细胞增殖,又可以诱导其凋亡。     

番茄红素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的探讨番茄红素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用CCK-8法检测不同浓度番茄红素作用于U251细胞24h、48h及72h后细胞的存活率;应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果番茄红素能抑制人脑胶质瘤U251细胞的生长,呈量-效及时-效关系（P〈0．01）;FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0／G1期;番茄红素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．01）,具有浓度依赖性。结论番茄红素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

TRAIL联合化疗药物诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合化疗药物治疗神经母细胞瘤（NB）的作用及其可能机制。方法：不同浓度的TRAIL、化疗药物或TRAIL和化疗药物联合处理NB细胞株SMS-KCNR，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒作用，应用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果：KCNR细胞对TRAIL不敏感，对化疗药物相对敏感，存在剂量依赖性细胞毒效应；TRAIL与亚毒性浓度的化疗药物联用对细胞的杀伤作用显著增强：透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论：KCNR对TRAIL不敏感，但TRAIL与亚毒性浓度化疗药物联用可增强杀伤效应，这种细胞毒作用主要由凋亡介导。     

热休克蛋白B1在U251细胞株及其干细胞中的差异性表达对肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨热休克蛋白B1(heat shock protein B1,HSPB1)在U251细胞株及其干细胞中差异性表达对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用无血清培养基培养U251细胞,获得U251干细胞;应用细胞免疫荧光染色法检测CD133和nestin鉴定胶质瘤干细胞;应用iTRAQ技术对U251细胞株及其干细胞进行HSPs差异性分析;应用MTT法、Western blot和RT-PCR观察经卡莫司汀干预后,肿瘤细胞凋亡与HSPB1蛋白、基因表达变化的关系。结果在未经卡莫司汀干预的胶质瘤与胶质瘤干细胞的HSPB1的蛋白比值为0.523;经卡莫司汀干预U251及其干细胞后,HSPB1蛋白含量分别升高了1.4、3.3倍,HSPB1 mRNA分别升高1.5、3.6倍,经相同浓度的卡莫司汀干预后的U251细胞生长受到抑制,而U251干细胞无明显抑制。结论 HSPB1参与U251胶质瘤干细胞化疗抵抗过程,对肿瘤细胞增殖、凋亡起着重要的调控作用。     

大蒜素增强脑胶质瘤细胞株U87对TRAIL敏感性的机制研究

目的 研究大蒜素是否能通过增加脑胶质瘤细胞U87对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）的敏感性来促进U87细胞的凋亡及其相关机制的研究。方法 采用MTT法检测大蒜素联合TRAIL对U87细胞活性的影响;流式细胞术（Annexin V/FITC）评估大蒜素联合TRAIL对U87细胞凋亡的影响;Transwell实验进一步检测大蒜素联合TRAIL对U87细胞的侵袭能力的影响;Western-blot、RT-PCR和Q-RT-PCR方法检测大蒜素联合TRAIL对与U87细胞凋亡相关的基因和蛋白的表达影响。结果 与其他组比较,大蒜素联合TRAIL明显降低U87细胞活力和侵袭能力,促进U87细胞凋亡。在分子水平上,与单独作用组比较,联合作用组明显增加DR4、DR5、Caspase-3和Caspase-8的活性,而AKT、pFKHR、MMP-2和MMP-9的活性明显被抑制。结论 大蒜素能增强脑胶质瘤细胞U87对TRAIL的敏感性,从而促进U87凋亡。     

端粒酶抑制剂联合辐射对人胶质瘤细胞存活的影响

目的 :观察端粒酶抑制剂AZT联合60 Coγ 射线对人脑胶质瘤细胞U2 5 1端粒酶活性及细胞存活的影响 ,探讨AZT的放射增敏作用。方法 :实验分 4组 :A、空白对照组 ;B、放射组 ;C、加药组 ;D、加药放射组。用克隆形成分析法观察AZT对U2 5 1细胞放射敏感性的影响 ,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERD0 、SERDq、SERSF2 。用端粒重复序列扩增 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) PCR ELISA方法检测端粒酶活性的动态变化。结果 :照射前经 0 .8mmol·L-1AZT处理 2 4h明显降低了 2Gyγ 射线照射后U2 5 1细胞的存活分数 ,SERD0 、SERDq、SERSFM2 分别为 1.2 94 ,1.2 5和 1.36 5 ;表明AZT具有放射增敏的作用 (P <0 .0 5 )。端粒酶活性分析显示A、B、C、D组细胞的端粒酶活性分别为 1.5 6 3± 0 .0 2 2 ,1.92 3± 0 .188,1.0 5 7± 0 .12 6 ,1.2 0 9± 0 .15 3,各组之间差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :AZT能明显抑制 2Gy照射诱导的U2 5 1细胞端粒酶活性升高 ,并显著增加U2 5 1细胞的放射敏感性 ;AZT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关。     

钩吻素子对神经胶质瘤细胞U251生长抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨钩吻素子体外对神经胶质瘤细胞U251的生长抑制作用及诱导凋亡的作用.方法：利用MTT法和台盼蓝拒染法观察钩吻素子对神经胶质瘤细胞U251生长抑制作用.应用激光共聚焦、流式细胞仪、电子显微镜检测钩吻素子诱导U251细胞的凋亡作用.结果：MTT结果显示钩吻素子在（5-50mg/L）的浓度范围内对人神经胶质瘤U251细胞具有显著的抑制作用.生长曲线结果显示药物的各个浓度对U251的抑制作用呈时间依赖性.流式细胞仪可以观察到明显的＂亚G1期＂峰（凋亡峰）,且凋亡率达到22.4%.激光共聚焦显微镜可以观察到典型的凋亡核形,如核固缩和核碎裂等.透射电子显微镜下见到典型的早期凋亡形态学表现.结论：在一定的浓度范围内,钩吻素子可以抑制U251细胞的生长,并呈剂量和时间依赖效应.其抗肿瘤的特性与引起肿瘤细胞的凋亡有关.     

去泛素化酶USP9X对胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响

目的:通过检测放疗对胶质瘤细胞β-catenin及去泛素化酶USP9X表达的影响,以期了解去泛素化酶USP9X与胶质瘤细胞放射敏感性的关系。方法:培养胶质瘤细胞U251细胞株,通过不同放疗剂量照射后,Realtime PCR法检测细胞中USP9X与β-catenin基因表达,Western Blotting法检测USP9X与β-catenin的蛋白表达,流式细胞仪检测不同放射剂量处理后U251细胞凋亡水平。结果:Real Time PCR结果显示在1Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平最高,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin基因表达成下降趋势,WesternBlotting结果显示USP9x、β-catenin的蛋白表达量与基因表达水平成正相关,凋亡实验结果显示细胞凋亡率与放射剂量成正相关。结论:在1Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平最高,证明小剂量放疗可提高U251细胞的放射抵抗,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin的表达成下降趋势,证明USP9x与胶质瘤细胞的放射后凋亡水平相关。     

白介素-24抑制胶质瘤细胞生长的体内外实验研究

目的探讨白介素-24基因转染对胶质瘤生长的影响。方法将载有人白介素-24eDNA的新型重组腺病毒（Ad5F35-IL24）感染人胶质瘤细胞系U251,体外观察Ad5F35-IL24对该细胞系生长的影响;建立人胶质瘤动物模型,瘤内注射Ad5F35-IL24,观察肿瘤生长情况;用流式细胞仪检测其凋亡和Bax／Bel-2的表达情况。结果Ad5F35-IL24感染U251细胞和肿瘤组织后,IL-24蛋白高表达,U251细胞和组织的生长受到明显抑制,其凋亡率明显升高,Bax／Bel-2也明显升高。结论白介素-24具有抑制人胶质瘤细胞系U251生长和诱导凋亡作用。Ad5P35-IL24转导白介素-24基因可能是一种有效的胶质瘤基因治疗途径。