人抑制素α亚基单克隆抗体的初步研究

以化学合成的人抑制素α亚基（ＩＮＨα）肽段与载体（ＴＧ／ＢＳＡ）偶联复合物作免疫原，采用Ｂ－淋巴细胞杂交瘤技术，建立了分泌抗人ＩＮＨαＭｃＡｂ细胞株７Ａ２，１Ｇ６，１Ｇ１０，并鉴定其免疫学持性，表明ＭｃＡｂ有特异性，敏感性和实用性。     

人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备及鉴定

目的　建立分泌抗人卵泡刺激素 (FSH) β亚基 5 1～ 6 0片段单克隆抗体细胞株 ,并对单抗进行免疫学鉴定。 方法　以人工合成的FSHβ蛋白抗原决定簇多肽为免疫原 ,采用脾内包埋法免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0小鼠骨髓瘤细胞融合 ,杂交瘤细胞用人工合成的人FSHβ亚基 5 1～ 6 0片段包被、间接ELISA法筛选。结果　获得稳定分泌抗人FSHβ片段单抗细胞 1株 (F1C)。ELISA检测腹水效价为 1∶1.6× 10 4 ,与黄体生成素 (LH)、促甲状腺素 (TSH)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等无交叉反应 ,免疫印迹 (Westernblot)显示该单抗特异性强。结论　本实验所制备的单抗具有良好的灵敏性、特异性和实用性 ,可用于酶免疫检测方法的建立 ,为检测试剂盒的研制及其临床应用提供了有力的依据     

人卵泡休止素放射免疫测定法的建立

采用亲和层析纯化的人天然卵泡休止素，建立了特异的Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ放射免疫测定法，其最小检出是每管５０ｐｇ／０．１ｍｌ，组间变异系数为２．９％，批间变异系数为４．４％，血清内添加Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ其回收率在９０％，且与Ａｃｔｉｖｉｎ、ＡＣＴＨ、ＦＳＨ等无明显交叉反应，采用此法测得的健康成年人外周血Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ水平在６．６～８．１ｎｇ／ｍｌ，男、女间无明显差异。     

人卵泡林止素放射免疫测定法的建立

采有亲和层析纯化的人天然卵泡休止素，建立了特异的Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ放射免疫测定法，其最小检出是每管５０ｐｇ／０．１ｍｌ，组间变异系数为２．９％，批间变异系数为４．４％，血清内添加Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ其回收率在９０％，且与Ａｃｔｉｖｉｎ，ＡＣＴＨ，ＦＳＨ等无明显交叉反应，采用此法测得的健康成年人外周血Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ水平在６．６～８．１ｎｇ／ｍｌ，男，女间无明显差异。     

卵泡抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒的构建及表达

目的：构建高免疫原性的抑制素真核表达载体。方法：通过PCR扩增pCMV-S基因中的S基因片段，然后将抑制素α(1-32)片段与S的融合基因克隆到真核表达质粒peDNA13．1(-)：酶切、测序鉴定后，采用脂质体包裹法将重组质粒转染Hela细胞，用SDS-PAGE和ELISA对其表达产物进行检测。用抑制素融合表达质粒免疫大白鼠，ELISA检测血中抗抑制素抗体水平。结果：酶切鉴定和序列分析表明，融合基因的表达质粒pClS构建成功。表达质粒在HeLa细胞中获得了表达，融合蛋白的分子量约为29kD，融合蛋白具有抑制素免疫原性。重组质粒免疫使大白鼠产生了抗抑制素抗体。结论：高免疫原性的抑制素表达质粒的构建为利用抑制素基因免疫技术诱导单胎动物生多胎奠定了基础。     

颗粒细胞上促卵泡素受体与体外受精-胚胎移植的相关研究

目的探讨颗粒细胞上促卵泡素(FSH-R)的含量与体外受精胚胎移植(IVF-ET)结果的关系.方法在38个IVF周期中,将受精后获得的颗粒细胞,采用流式细胞测定仪测定其表面FSH-R的含量,并与IVF结果进行比较.结果颗粒细胞上FSH-R的含量与获卵个数无显著的相关关系(P>0.05).受精率、卵裂率随颗粒细胞上FSH-R的含量增加而增加(r=0.57 P<0.01,r=0.61 P<0.01).妊娠组与非妊娠组的颗粒细胞上FSH-R含量有显著性差异(P<0.0001).结论卵泡液中FSH与颗粒细胞膜上FSH-R相互作用共同促进卵母细胞的成熟和发育.     

人成熟卵泡液对不同期未成熟人裸卵体外培养的影响研究

目的探讨人成熟卵泡液对不同时期未成熟人裸卵体外成熟的影响。方法收集卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗周期中未成熟GV期和MI期裸卵,随机分为Ⅰ组(不含成熟卵泡液),Ⅱ组(含成熟卵泡液)组进行体外培养(invitro maturation,IVM),观察不同期裸卵的成熟率,比较不同培养液的体外培养效果。结果 MI期卵与GV期卵相比,24h成熟率(65%比29%)和总成熟率(85%比64.5%),前者均高于后者,有统计学意义(P0.05)。48h成熟率(61.5%比55%),虽然前者高于后者,但差异无统计学意义(P0.05)。两种培养液Ⅱ组与Ⅰ组相比,总成熟率(90.3%比65%)和24h成熟率(64.5%比37.5%),前者均高于后者,有统计学意义(P0.05);48h成熟率(72.7%比44.0%),虽然前者高于后者,但无统计学意义(P0.05)。结论 IVM培养液中添加成熟卵泡液有益于提高未成熟裸卵的体外成熟率,但随着体外培养时间的延长,促进作用可能会减弱。     

人卵泡液氨基酸谱影响卵母细胞发育潜能的初步研究

目的分析体外受精（IVF）患者单卵泡液氨基酸谱含量与卵母细胞发育潜能的相关性。方法利用高效液相色谱（HPLC）分析技术检测49份IVF患者优势卵泡的单卵泡液氨基酸谱,并追踪所获卵母细胞发育结局。依据取卵后第三天（D3）胚胎评分分为可用胚胎组（A组）与不可用胚胎组（B组）,比较两组氨基酸谱含量差异。结果①两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素及用药支数均无统计学差异（P〉0.05）;②A组患者的取卵数、受精率及卵裂率略高于B组,但无统计学意义（P〉0.05）;A组患者的可用胚胎数及可用胚胎率（7.41±4.64、65.15%）显著高于B组（5.00±3.38、49.75%）（P〈0.05）;③A组卵泡液中丙氨酸（Ala）含量（335.86±70.79μmol/ml）明显高于B组（293.56±67.30μmol/ml）（P〈0.05）,其余氨基酸含量无统计学差异（P〉0.05）。④利用ROC曲线确定卵泡液中Ala含量预测可用胚胎形成的临界值为325.4μmol/ml,灵敏度63%,特异度81.8%。结论优势卵泡的发育可在一定程度上反映IVF患者的总体情况,卵泡液中Ala含量可作为预测卵母细胞受精后早期胚胎发育的参考指标之一。     

小鼠抗人肿瘤抑制素2(ST2)单克隆抗体的制备及应用

目的 制备针对人肿瘤抑制素2(ST2)的小鼠源性单克隆抗体,并进行功能和应用的初步鉴定.方法 用真核表达的重组人ST2分子免疫BALB/c小鼠,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗ST2单克隆抗体,并鉴定其在Western blot法、免疫组织化学染色和流式细胞术中的应用价值;建立检测可溶性ST2的夹心ELISA,检测热射病...     

抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗人ＭＡｄＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）。　方法以重组人ＭＡｄＣＡＭ－１胞外区蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备ｍＡｂ。结果获得１０株可分泌特异性ｍＡｂ的杂交瘤细胞，其腹水ｍＡｂ的效价为３．２×１０５～１．９×１０６，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧ１，其中，８株ｍＡｂ的轻链属κ型，２株为λ型。应用于免疫组化染色法，检测表明，正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在ＭＡｄＣＡＭ－１阳性表达的血管内皮细胞。结论　成功地研制出抗人ＭＡｄＣＡＭ－１的ｍＡｂ，为进一步研究ＭＡｄＣＡＭ－１在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂。     

重组人血管内皮抑制素对荷瘤裸小鼠的治疗作用

观察了重组人血管内皮抑制素(YH-16)对人肝癌Bel7402细胞系、人宫颈癌Hela细胞系和人胃癌SGC7901细胞系在裸小鼠体内的抑制作用。试验采用每日尾静脉注射给药，YH-16的剂量分别为1.5、0.75、0.4mg/kg，共给药14次。结果表明YH-16对上述三种人癌细胞系有明显抑制作用，其抑制率Bel7402为45.67、43.08和40.00％；Hela为40.70、30.15和24.12％；SGC7901为51.89、44.34和35.85％。YH-16各给药组动物健康状况良好，无明显毒副反应。     

重组人血管内皮抑制素抗肿瘤效应的应用研究

目的探讨基因工程人血管内皮抑制素(endostatin)抑制黑素瘤在小鼠体内生长和转移的作用及其作用机制。方法接种黑素瘤细胞悬液(2×10     

抑制素受体的研究进展

有关抑制素(inhibin)的研究进行了近八十年的时间,但进展十分缓慢,中间一段时间几乎停止,关键在于它的作用机理(受体的研究)没有弄清晰,但随着澳大利亚和美国等,把抑制素A(inhibin-A)引用到唐氏征筛查中,以增加唐氏征     

人促卵泡生成激素IRMA法与RIA法对比的实验观察

IRMA法试剂盒采用两株单克隆抗体, 一株用于包被作为固相抗体, 另一株用于标记Na125I为标记物, 所用标准品与RIA法相同.结果显示, IRMA法试剂盒反应时间短, 不用加分离剂专门离心, 同时, IRMA试剂盒还具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点; 两种方法测值相关系数为0.9800.     

重组人血管内皮抑制素对荷瘤裸小鼠的治疗作用

观察了重组人血管内皮抑制素 (YH - 16 )对人肝癌Be174 0 2 细胞系、人宫颈癌Hela细胞系和人胃癌SGC790 1细胞系在裸小鼠体内的抑制作用。试验采用每日尾静脉注射给药 ,YH - 16的剂量分别为 1.5、0 .75、0 .4mg/kg ,共给药 14次。结果表明YH - 16对上述三种人癌细胞系有明显抑制作用 ,其抑制率Be174 0 2 为 45 .6 7、43.0 8和 40 .0 0 % ;Hela为 40 .70、30 .15和2 4.12 % ;SGC790 1为 5 1.89、44 .34和 35 .85 %。YH— 16各给药组动物健康状况良好 ,无明显毒副反应     

桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721抑制作用的初步研究

目的：探讨桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法：采用四唑盐（MTT）比色法观察不同浓度桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50;绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察桔皮素对其增殖的影响。结果：MTT结果显示不同浓度的桔皮素对SMMC-7721的生长均有一定的抑制作用,同一时间,各浓度组与对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）;桔皮素浓度为0．24—30μg·mL。时,对SMMC-7721细胞在药物处理72小时后抑制率为3．85％～93．59％,且72小时的IG50为14．69—21．11μg·mL^-1。生长曲线结果提示,桔皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论：桔皮素能抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖。     

人化SCID鼠的建立及在人单抗制备中的应用

人化联合免疫缺陷鼠(huSCIDmice)可作为人类免疫系统的模型,在检测人体免疫应答、揭示HIV感染、肿瘤以及自身免疫系统疾病等的发病机理和人单克隆抗体的制备等领域中得以广泛应用。本文概述了人化SCID鼠的构建过程,并总结了其在制备人单克隆抗体中的应用进展。     

抗人TNF-α单克隆抗体抗原识别表位的初步研究

目的：确定抗人肿瘤坏死因子－α（hTNF－α）单克隆抗体（Z8）识别的抗原表位所在区域。方法：分别构建缺失hTNF－α不同部位的重组质粒，用IPTG诱导表达融合蛋白，对表达产物进行SDS－PAGE蛋白电泳及Western blot分析。结果：Z8特异性识别含有hTNF－αC端92－157位氨基酸在内的融合蛋白，而不识别GST及其与hTNF－αN端1－91位氨基酸所形成的融合体，结论：Z8抗体识别的抗原表位位于hTNF－α 92－157区。