补肾益气活血方对实验性膝骨关节炎兔关节软骨组织形态学的影响

背景：目前治疗膝骨关节炎的药物主要是非类固醇类药，应用后可产生胃肠道副作用。研究表明，补肾益气活血方能明显改善膝骨关节炎患者关节疼痛和功能，并且副作用较小。目的：通过建立兔膝关节骨关节炎模型，探讨补肾益气活血方对兔病变膝关节软骨病理过程的影响。设计：以实验动物为研究对象，随机对照观察研究。单位：一所大学动物实验中心。材料：健康雄性新西兰兔36只，体质量2．0．3．0kg。方法：实验于2002-01／2003-01在广州中医药大学动物实验中心完成。新西兰兔36只，建立Hulth膝骨关节炎模型，术后随机分成3组：模型组、醋氨酚组和补肾益气活血方组。各组采取相应的处理方法，术后4，8和12周取材，进行组织病理学评估。主要观察指标：主要结局：各组关节软骨病理改变积分。次要结局：①各组关节软骨肉眼观察。②各组关节软骨光镜观察：结果：模型组、醋氨酚组、补肾益气活血方组关节软骨病理变化总积4周分别为(18．50&;#177;1．00)，(14．25&;#177;1．26)，(11．75&;#177;2．22)分；12周分别为(30．75&;#177;1．26)，(22．00&;#177;3．16)，(17．75&;#177;2．21)分。各组关节软骨病理变化总积分、软骨细胞病理改变积分和软骨表层病理改变积分依次为模型组&;gt;醋氨酚组&;gt;补肾益气活血方组。组问比较差异均有显著或非常显著性意义。结论：补肾益气活血方能延缓膝骨关节炎的病理过程，达到防治膝骨关节炎的作用。     

黄芪关节腔内注射后兔骨关节炎模型软骨退行性变及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性的变化

目的:观察关节腔内注射黄芪后,对兔前交叉韧带切断骨关节炎模型中软骨退行性变以及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量的影响。方法:实验于2005-08/2006-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院动物实验中心完成。①选用成年日本大白兔16只,随机数字表法分为模型对照组、黄芪治疗组,8只/组。②两组兔均行单侧前交叉韧带切断术建立骨关节炎模型。黄芪治疗组于术后1周开始,关节内注射黄芪0.3mL/次,1次/周,连续6周。模型对照组于同一时间点关节内注射0.3mL生理盐水。③术后第7周处死两组动物,采用关节软骨病理改变评分(0～4分,分数越高病理变化越严重)对比观察两组兔股骨髁关节软骨的大体变化;采用关节软骨退行性变Mankin’s评分(包括软骨结构、软骨细胞、臧红O染色、潮线的完整性4个指标)对比观察光镜下两组兔关节软骨的退行性变情况;并检测滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量。结果:16只兔均进入结果分析。①术后第7周关节软骨病理改变评分结果:黄芪治疗组软骨退行性变评分明显低于模型对照组(z=-2.595,P<0.05)。②术后第7周关节软骨退行性变Mankin’s评分结果:黄芪治疗组明显低于模型对照组[(5.9±1.46),(8.8±1.39)分,t=-4.039,P<0.05]。③术后两组滑膜组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的比较:与模型对照组比较,黄芪治疗组超氧化物歧化酶活性明显升高(t=8.206,P<0.05),而丙二醛含量明显降低(t=-4.039,P<0.05)。结论:黄芪能明显降低软骨退行性变的程度,并增加骨关节炎滑膜组织中超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的含量,有可能成为防治骨关节炎的良好药物。     

应用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞混合移植修复兔膝关节实验性软骨缺损区

背景应用异体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的研究较多,但其可引起免疫反应.由于胚胎细胞具有较低的抗原性和较强的增殖能力,期望其能为组织工程研究与应用开辟新的载体材料.目的采用兔胚胎软骨细胞培养移植修复关节软骨缺损,并对其组织形态学进行观察.设计随机分组观察对比实验.单位广西医科大学组织胚胎学试验室.材料孕4周新西兰大白兔1只;成年新西兰大白兔24只,雌雄不限,体质量2～2.5 kg .方法实验于2000-12/2002-06在广西医科大学组织胚胎学试验室完成.在成兔股骨内侧髁作关节软骨缺损模型,实验组采用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞相混后,植入兔膝关节实验性软骨缺损区,对照组不做任何处理或单纯用生物蛋白胶移植修补,分别于术后4,8,12周观察关节软骨缺损修复的情况,并按改良Pineda方法对其进行组织学评分,标准为细胞形态、基质染色、表面平整、软骨厚度、宿主结合5项,0分表示正常,分值越高表示改变越严重.主要观察指标①兔膝关节标本大体观察结果.②兔膝关节标本组织学观察结果.③关节软骨组织学半定量计分结果.④关节软骨缺损修复区进行疗效评价结果.结果24只兔均进入结果分析.①兔膝关节标本大体观察结果胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组缺损区颜色接近正常软骨,质韧弹性好,与周围软骨界限消失;纤维蛋白封闭剂组与未处理组始终未愈合,但创面略小,有白色纤维组织充填.②兔膝关节标本组织学观察结果胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组优势组织为透明样软骨,深方为骨组织,表面略凸或平整,基质着色正常,与周围软骨完全结合分界不清,组织中未发现淋巴细胞浸润;纤维蛋白封闭剂组与未处理组为纤维组织,部分有残留明显的凹陷性瘢痕,与周围组织接合或部分接合.③关节软骨组织学半定量计分结果按改良自Pineda方法,12周胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组评分显著低于纤维蛋白封闭剂组和未处理组[(0.50±0.76),(7.88±1.13),(8.13±1.36)分,P＜0.05],而单纯用纤维蛋白封闭剂修补组在4周与未处理组比较有显著性差异(P＜0.05),在8,12周则无差异.④关节软骨缺损修复区进行疗效评价结果12周时胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组完全修复8膝,纤维蛋白封闭剂组不完全修复1膝,未修复7膝,未处理组未修复8膝.结论胚胎软骨细胞移植组所产生的修复组织接近正常软骨组织,明显优于纤维蛋白封闭剂组和未处理组,该方法作为关节软骨缺损修复是可行的.     

维药买朱尼对膝骨性关节炎大鼠关节软骨中Fas及FasL mRNA表达的调节效应

目的:观察维药买朱尼对膝骨关节炎大鼠模型膝关节软骨细胞Fas,FasL表达的调节作用。方法:实验于2005-05/2006-03在上海中医药大学动物中心实验室完成。选择雄性1月龄SD大鼠30只,饲养1周后使用简单随机法分为3组,即正常对照组、膝骨关节炎模型组及维药买朱尼干预组,每组10只。除正常对照组外,其余两组大鼠均进行膝骨关节炎模型制备,术后第4天开始驱赶动物每天在跑台上奔跑30min,连续2周。维药买朱尼干预组大鼠自造模第2周开始灌胃给予维药买朱尼(由巴旦杏仁、阿月浑子、肉豆蔻、毛坷子、余甘子、西红花等各15g组成,以上药物均由新疆中医药大学附属医院制剂中心提供),10.31mg/(kg·d),2次/d,连续4周;膝骨关节炎模型组大鼠自造模第2周开始灌服等量生理盐水;正常对照组不做处理。干预4周后,脱椎处死动物。无菌条件下,切取右膝股骨远端和胫骨近端软骨,应用反转录-聚合酶链反应检测Fas,FasLmRNA的表达强度。结果:30只大鼠全部进入实验结果分析,无脱失。各组大鼠膝关节软骨细胞Fas,FasLmRNA的表达水平比较:膝骨关节炎模型组大鼠Fas,FasLmRNA的表达水平均显著高于正常对照组[1.683920±0.166276,1.149241±0.147730;0.076379±0.017214,0.278898±0.015563(P<0.01)];维药买朱尼干预组大鼠Fas,FasLmRNA的表达水平均显著低于膝骨关节炎模型组[0.252332±0.068695,0.385160±0.072566,P<0.01]。结论:维药买朱尼能够下调膝骨关节炎大鼠膝关节软骨细胞Fas,FasLmRNA的表达水平。     

碱性成纤维细胞生长因子转染兔关节软骨细胞的研究

背景软骨细胞体外培养困难和表型难以维持是软骨组织工程研究的一大难题.目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)基因转染兔关节软骨细胞后对培养的关节软骨细胞形态、分裂增殖及代谢等方面的影响.设计完全随机对照实验研究.地点和方法实验在解放军第一军医大学热带军队卫生学系完成,对象为兔软骨细胞(3周龄新西兰新生兔购于第一军医大学实验动物中心).干预将bFGF基因克隆于真核表达载体pHβ0AP-1中,构建重组真核表达载体pHβ-bFGF,转染兔关节软骨细胞.G418筛选阳性克隆,检测阳性细胞bFGF基因的表达水平.测定培养软骨细胞的DNA含量、糖醛酸含量、软骨细胞增殖情况及进行细胞周期分析.主要观察指标DNA含量、糖醛酸含量、软骨细胞增殖情况及细胞周期分析.结果bFGF基因转染软骨细胞表型未见显著变化;bFGF基因转染组、载体对照组、空白对照组DNA含量分别为(77.37±6 21),(40.39±4.33),(33.77±4.25)μg/瓶(P＜0.01),糖醛酸含量分别为(308.8±10.2),(77.9±8.7),(80.2±10.5)μg/瓶(P＜0.01),软骨细胞G1期分别为59.3±2.1,69.5±4.0,73.1±3.9(P＜0.05).结论bFGF转染关节软骨细胞后,可显著促进细胞分裂增殖并缩短细胞周期,为软骨组织工程研究提供新的技术路线及理论基础.     

电针对实验性兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/Smad1表达的影响

目的:观察电针(EA)治疗兔膝骨关节炎(KOA)模型关节软骨中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Smad1表达的变化,探讨电针治疗KOA的作用机制。方法:制作兔膝关节炎模型,将建模成功的新西兰兔纳入模型对照组;正常组和模型组行常规饲养,不行治疗;电针组行电针治疗20d。实验结束后,分别观察各组兔行为学评分、右膝关节宽度、软骨大体形态及组织学评分、软骨BMP-2、Smad1免疫组化及实时荧光定量PCR的变化。结果:电针组与模型组在行为学评分、软骨大体形态及组织学评分(Mankin评分)方面差异均无显著性(P0.05),电针组兔右膝关节宽度小于模型组(P0.05)。各组BMP-2免疫组化结果无显著差异,电针组较模型组Smad1蛋白质表达降低。模型组和模型对照组BMP-2 m RNA表达水平较正常组上调,差异无显著性意义(P0.05),模型组Smad1m RNA表达水平较模型对照组和正常组均显著上调(P0.05),电针组BMP-2及Smad1 m RNA表达水平较模型对照组和模型组均显著下调(P0.05)。结论:电针可能通过下调早期兔膝骨关节炎软骨BMP-2/Smad1的表达抑制骨赘形成,延缓膝骨关节炎的病理进程。     

益气化瘀利水方干预后兔膝骨关节炎软骨中转化生长因子β1的变化

目的：观察益气化瘀利水方对实验性兔骨关节炎软骨中转化生长因子β1的影响。 方法；实验于2003-07／12在上海中医药大学脊柱病研究所完成。取雄性6月龄新西兰大白兔20只，随机分为正常组、模型组、益气化瘀利水方组、氨糖美辛组。每组5只。按Colombo法建立家兔膝骨关节炎模型，术后第5～8周给药。益气化瘀利水方组给予益气化瘀利水方0．09g/（kg&;#183;d），氨糖美辛组给予氨糖美辛O．09g/（kg&;#183;d），正常组及模型组均未给药。各组于术后第9周取材，取右胫骨平台关节软骨，采用免疫组织化学方法进行染色，光镜下观察，并利用图象分析测定其转化生长因子β1表达的积分吸光度。 结果：20只白兔均进入结果分析。①各组关节软骨光镜观察结果：模型组和氨糖美辛组，关节软骨损伤严重，转化生长因子β1主要在发生簇集的软骨细胞胞膜和胞浆内表达，益气化瘀利水方组软骨损伤较氨糖美辛组明显减轻。②各组关节软骨切片转化生长因子β1染色强度的积分吸光度图像分析：正常组与益气化瘀利水方组无明显差异（6．64&;#177;1．59，5．49&;#177;3．09，P〉0．05）；模型组与氨糖美辛组无明显差异（23．16&;#177;9.38，20．09&;#177;9．17，P〉0．05）；模型组较正常组和益气化瘀利水方组明显增高（F=8．96。P〈0．01）。 结论：益气化瘀利水方可抑制骨质增生，其作用机制之一可能是通过调控转化生长因子β1而达到的。     

透明质酸钠不同给药途径干预早期骨关节炎兔软骨细胞的凋亡

目的:观察前交叉韧带横断造成兔早期骨关节炎软骨细胞凋亡的变化,以及应用关节内和静脉注射透明质酸钠对软骨细胞凋亡的影响。方法:实验于2006-04/09在华中科技大学同济医学院协和医院骨科实验室完成。共选取36只新西兰兔,随机数字表法分成正常组、骨关节炎组、关节内注射透明质酸钠组、静脉注射透明质酸钠组,每组9只。正常组不做任何处理,作为对照;骨关节炎组仅行前交叉韧带横断术;关节内注射透明质酸钠组行前交叉韧带横断术后给予关节腔内注射透明质酸钠;静脉注射透明质酸钠组行前交叉韧带横断术后给予静脉内注射透明质酸钠。所有实验动物在术后8周处死。应用苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理学变化,原位末端标记法标记凋亡细胞,在前交叉韧带横断术前、术后6,8周分别进行血液检测。观察各组动物的组织学检查、Mankin评分、凋亡指数和血液检测结果。结果:纳入新西兰兔36只,均进入结果分析。①所有动物的血液检查包括红细胞、白细胞、血小板计数以及血尿素氮、肌酐、电解质,结果均在正常范围内。②应用透明质酸钠干预的关节内注射透明质酸钠组和静脉注射透明质酸钠组与未用透明质酸钠干预的骨关节炎组相比较,前者组织病理学改变明显轻于后者。③骨关节炎组的Mankin评分与其他三组差异有显著性[(8.97±1.02),(0.00±0.00),(5.62±0.86),(6.13±0.64)分,P<0.05]。④各组均发现软骨细胞凋亡,并且骨关节炎组的凋亡指数显著高于其他三组[(27.38±3.46)%,(5.17±1.06)%,(12.47±2.13)%,(14.51±2.87)%,P<0.05],正常组的凋亡指数与其他三组差异有显著性意义(P<0.05)。结论:前交叉韧带横断所致兔早期骨关节炎的软骨细胞凋亡明显增加,关节内和静脉内注射透明质酸钠均能有效抑制其软骨细胞凋亡。     

低频脉冲超声干预膝骨关节炎模型兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达

背景:研究表明,低频脉冲超声能促进全层关节软骨缺损修复,延缓实验性早期骨关节炎的病变进展。水通道蛋白3存在于关节软骨及滑膜上,并在骨关节炎的发病机制中发挥重要作用。目的:探讨低频脉冲超声对实验性膝骨关节炎兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3表达的影响。方法:成年新西兰兔左后膝关节用管型石膏固定于伸直位制动6周制备实验性兔膝关节骨关节炎模型,造模成功后随机分为两组:实验组予以低频脉冲超声治疗(频率为1MHz,功率为2.0W),1次/d,15min/次;对照组不接受超声治疗。分别于治疗后2,4,8周,采用免疫组织化学方法观察兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达。结果与结论:随着造模后时间的延长,各组兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达均有所增加;与对照组比较,实验组兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3表达明显降低(P<0.01)。说明低频脉冲超声能降低实验性兔膝骨关节炎关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达,从而缓解关节肿胀,延缓软骨及滑膜的退变,具有软骨及滑膜保护作用。     

体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察体外冲击波(ESW)对兔膝骨性关节炎软骨白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法将30 只新西兰大白兔随机分为对照组、模型组和治疗组,每组各10 只。模型组和治疗组采用改良伸直位固定6 周,制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后立即给予ESW治疗1 次,能流密度0.1 mJ/mm2,冲击次数1000 次。各组分别于治疗后4 周处死,观察大体标本形态学变化,采用免疫组织化学法检测各组关节软骨中IL-1β和TNF-α的水平。结果治疗组IL-1β 和TNF-α的表达较模型组明显下调(P<0.01)。结论ESW能下调兔膝骨关节炎软骨细胞IL-1β、TNF-α的表达。     

睾酮干预雄兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的表达

背景：睾酮对骨关节炎的作用尚无一致的观点,其调节软骨代谢的作用鲜有文献报道。目的：观察睾酮对膝骨关节炎雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1表达的影响。方法：24只雄兔随机分成4组,采用改良Hulth法建立右膝骨关节炎模型;假去势组不切除睾丸,其余3组切除双侧睾丸。第8周末处死假去势组和去势8周组兔取材。第9周开始,激素组肌注生理剂量十一酸睾酮（6mg/kg,2周1次）,去势16周组正常喂养,并于16周末处死并取材。结果与结论：大体和组织学观察显示各组兔膝关节软骨的病变程度为假去势组优于去势8周组,激素组优于去势16周组。免疫组化染色显示胰岛素样生长因子1在所有兔膝关节软骨中均有表达,阳性细胞个数假去势组高于去势8周组（P〈0.05）,激素组高于去势16周组（P〈0.05）,去势8周组与去势16周组差异无显著性意义（P〉0.05）。说明睾酮可通过上调去势雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1的表达,延缓软骨退变。     

健膝强骨丸对膝骨关节炎家兔模型关节软骨病理改变的影响

背景：膝骨关节炎的病理学改变不可逆转,属中医“痹证”范畴,治疗目的是缓解或解除症状,延缓关节退变。健膝强骨丸方是武汉大学基础医学院荆州市第三人民医院的经验方,可补益肝肾,祛风散寒,除湿通络,强骨健膝。目的：观察健膝强骨丸对膝骨关节炎兔模型膝骨关节软骨的保护作用,及其对软骨细胞骨形态发生蛋白7表达的影响。方法：36只新西兰兔随机分为3组,每组12只,分别运用改良Hulth术制备兔膝骨关节炎模型。造模后第6周,给药组予健膝强骨丸0.1 g/kg 灌胃,模型组和正常对照组予等量生理盐水灌胃。给药4周后通过软骨Mankin’s 评分方法行兔膝关节软骨评分,电镜下观察软骨形态,免疫组化法检测膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白7表达情况。结果与结论：给药组兔膝关节软骨病理退变程度较其他2组轻,膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白7的表达量较其他2组高,差异有显著性意义（P＜0.05）。提示健膝强骨丸可增强膝骨关节炎模型兔关节软骨细胞骨形态发生蛋白7的表达,从而促进膝关节软骨再生,减少软骨变形坏死,达到治疗关节炎的目的。     

长针透刺膝骨关节炎模型大鼠滑膜组织中基质金属蛋白酶3的变化

背景:研究表明基质金属蛋白酶3在关节软骨退变和破坏中有重要意义。目的:观察长针透刺与透明质酸钠治疗大鼠膝骨关节炎后,大鼠化膜组织中基质金属蛋白酶3含量变化。方法:SD大鼠通过膝关节腔内注射1.6%木瓜蛋白酶溶液并驱赶大鼠活动建立膝骨关节炎模型。造模2周后随机分为3组,长针透刺组用直径0.30mm、长125mm规格的毫针透刺大鼠犊鼻穴和膝眼穴;药物治疗组关节腔内注射透明质酸钠;模型组不干预。并设立不造模的正常组。结果与结论:治疗4周后,模型组大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶3含量较正常组显著升高(P<0.05),长针透刺组、药物治疗组基质金属蛋白酶3含量较模型组显著降低(P<0.05),长针透刺组与药物组相近(P>0.05)。证实长针透刺疗法能有效纠正膝骨关节炎模型大鼠化膜组织中基质金属蛋白酶3的异常表达,这也可能是长针透刺治疗膝骨关节炎的作用原理之一。     

膝关节镜下骨关节炎与大骨节病组织形态对照分析

背景骨关节炎和大骨节病两者的病理改变有相似之处,但大骨节病病因不清,破坏更严重.通过对二者病理改变的对照分析,希望利用骨关节炎的治疗经验,确立一种关节镜下治疗大骨节病的有效方法.目的通过对膝骨关节炎与大骨节病病变组织的形态进行对照,便于膝关节镜下对大骨节病的诊断和手术方法的选择.设计病例分析. 单位陕西省人民医院骨科.对象于1998-04/2000-09在陕西省人民医院骨科随机选取35例膝关节严重骨关节炎,需行关节镜手术的患者;2001-11在陕西省洛川县医院(疫区)随机选取31例大骨节病膝关节功能障碍的患者.方法两组病例均采用日本OLYMPUS全套彩色电视关节镜及手术系统施行膝关节手术,术中进行录像记录,术后剪辑、拍照及对照、分析.膝关节镜手术中观察两种疾病膝关节滑膜、髌骨、股骨、胫骨及半月板的病理改变.主要观察指标①大骨节病与骨关节炎患者膝关节滑膜损伤检查结果.②软骨损伤检查结果.③半月板损伤检查结果.结果对66例患者的观察结果全部进行了统计、分析,无样本脱落.①大骨节病与骨关节炎滑膜损伤检查结果损伤分级0级、1级、2级、3级,大骨节病与骨关节炎患者分别有0,3,5,23例和0,3,16,16例(P＜0.05).②软骨损伤检查结果大骨节病软骨损伤表现为大片软骨剥离,部分脱落致骨裸露,裸露骨面凹凸不平;骨关节炎软骨损伤表现为软骨磨损,在骨裸露处可残留软骨岛,骨裸露面不光滑有时见到纤维条带附着于表面.③半月板损伤检查结果大骨节病半月板损伤24例,应力点毛糙5例,形态为毛刺样破损19例,其中内外侧半月板均有损伤9例;骨关节炎半月板损伤16例,边缘磨损11例,破损5例.结论大骨节病较之骨关节炎患者膝关节的软骨损伤明显严重,尽管大骨节病发展的结局也是严重的骨关节损伤,但其病理形态与骨关节炎仍有差别,手术中要充分考虑大片软骨剥离的特殊性.     

补肾益智方拆方含药血清对阿尔茨海默病细胞模型的作用

背景中药补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模型学习记忆能力有一定的保护作用,该方含药血清也能减轻神经瘤细胞NG 108-15细胞对β淀粉样蛋白的神经毒性反应,为了进一步了解该方的作用机制及其配伍规律,需对该方进行拆方研究.目的研究补肾益智方拆方亚组的含药血清对阿尔茨海默病细胞模型生长、分化等方面的影响,从血清药理学的角度探讨该方的配伍规律.设计随机对照实验.单位广州中医药大学临床药理研究所DME中心.对象实验于2003-01/08在广州中医药大学临床药理研究所DME中心实验室进行.实验对象为3月龄SD雄性健康大鼠40只和冻存的NG 108-15细胞株.方法①制备药物血清将40只SD大鼠随机分为对照组、原方组(蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮、冰片)、补肾组(蛇床子、枸杞等)、益气养血组(人参、制首乌等)、去冰片组(蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮),每组8只.将各组中药浓缩液按按10 μL/g(相当于生药6 g/kg)分别进行灌胃,连续1个月,对照组灌等量生量盐水.各组大鼠最后1次灌胃2h,麻醉后心脏采血,分离血清备用.②细胞增殖、培养及分化将体外培养的NG 108-15细胞分为6组,对照组、模型组孔中的增殖培养液含正常大鼠血清,其余4组分别为原方组及3个亚组的大鼠含药血清;同时每个孔加淀粉样β蛋白25～35至终浓度5 umol/L(对照组除外),继续培养48 h.主要观察指标用MTT法测定细胞增殖数和存活率;同时检测分化突起细胞占总细胞数的比率及突起平均长度.结果①细胞增殖情况模型组A值显著低于对照组(0.520±0.022,0.665±0.037,P＜0.01),各含药血清组A值均高于模型组,但以去冰片组效果最显著(0.636±0.035,P＜0.01).②分化细胞存活率模型组显著低于对照组(58.4%,100%),各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著(75.8%,P＜0.01).③分化突起细胞占总细胞数的比率模型组显著低于对照组[(42.95±11.42)%,(58.75±12.84)%,P＜0.01],各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著[(58.20±8.40)%,P＜0.01].④突起平均长度模型组显著低于对照组[(356.0±109.0),(493.8±133.0)μm,P＜0.01],各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著[(486.8±79.2)μm,P＜0.01].结论补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制淀粉样β蛋白25-35对NG108-15细胞的损伤作用,但各组情况有所不同.各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组＞原方组＞补肾组＞益气养血组.故方中冰片的功效有待进一步研究.     

以关节不稳建立的大鼠骨关节炎模型

背景：骨性关节炎是一种复杂的多病因退变性关节疾病。早期进行骨性关节炎的防治尤其重要。但获取足量的适合研究的早期骨性关节炎的人类骨标本十分困难。目的：观察关节不稳方法建立骨关节炎模型大鼠的关节软骨组织学变化。方法：10周龄雄性SD大鼠随机分为2组：实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于术后1,2,4,6,8周取右膝关节标本,行病理组织学检查分析大鼠骨关节炎病程的变化情况。结果与结论：①术后2,4,6,8周,实验组关节软骨退变程度呈现轻度糜烂、溃疡磨损、严重磨损、骨赘形成等病理变化。②术后1,2,4,6,8周,实验组关节软骨评分均明显高于对照组（P〈0．05）。结果显示该实验采用内侧副韧带切断＋内侧半月板切除方法成功建立了大鼠膝关节骨关节炎模型,且造模后4周内的病理、形态学改变类似于人类早期膝关节骨关节炎表现,是研究早期骨关节炎的理想模型。     

木瓜蛋白酶诱导膝关节骨关节炎模型兔滑膜病理变化与药物注射时间的关系

背景:木瓜蛋白酶诱导兔膝关节骨性关节炎的造模方法可获得稳定的退行性关节炎模型。目的:观察兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶诱导骨关节炎后,滑膜炎性病理改变与药物注射时间的关系。方法:将木瓜蛋白酶水溶液分别在实验开始的第1,4,7天分别注射入15只西兰大白兔右膝关节腔内,建立膝关节骨性关节炎兔模型,于首次注射后第2,4,6周分别观察膝关节滑膜大体及组织病理学变化,每个时间点5只。结果与结论:木瓜蛋白酶首次注射后第2周,兔膝关节滑膜炎性反应最严重,表现为滑膜细胞增生最明显,下层疏松纤维及血管组织明显增生,可见较多淋巴浆细胞浸润,第4,6周时炎性反应逐渐减轻。说明兔膝关节首次注射木瓜蛋白酶后2周时滑膜炎性反应最严重。     

补肾益智方对老年性痴呆模型大鼠神经递质释放的影响

背景胆碱乙酰基转移酶活性水平的降低和神经递质囊泡膜蛋白的减少是老年性痴呆的主要生化指标,中药补肾益智方具有补肾、益气、生髓、养脑作用,其含药血清能有效地保护由淀粉样蛋白引起的这些改变.目的观察补肾益智方含药血清能否改善由淀粉样蛋白产物诱导神经细胞显示的老年性痴呆样病理损害,以此评价补肾益智方治疗老年性痴呆的作用.设计随机对照实验.单位广西中医学院第二附属医院神经科学研究所,广州中医药大学老年脑病研究所.材料实验于2003-09/2004-03在广西中医学院新药研究开发中心完成.选取健康清洁级3月龄Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组与中药灌胃组,各30只.补肾益智方主要由枸杞、蛇床子、人参、首乌、丹皮、冰片等组成,临用前配置为成药0.176 g/mL(生药1.13 g/mL)液体.方法①中药灌胃组每只大鼠每天灌胃成药液1.0～1.5 mL,连续灌胃1个月,于末次给药后4 h内,5 000 r/min离心5 min分离血清,无菌过滤,56℃灭活补体,即为含药血清.空白对照组给予等量生理盐水灌胃,同样方法提取分离血清.②对于NG108-15细胞,当淀粉样蛋白25～35片段在培养液浓度为5 μmol/L或淀粉样蛋白1-42的浓度为200 nmol/L时较为合适.③NG108-15细胞以Dulbecco改良的Eagle培养基在37℃,体积分数为0.1的CO2培养箱中培养1 d,然后加入浓度为5 μmol/L淀粉样蛋白25-35或200nmol/L淀粉样蛋白1-42片段,继续培养1 d后,即为老年性痴呆细胞模型.以含50g/L中药灌胃组血清或空白对照组血清的Dulbecco改良的Eagle培养基更换原培养液,仍加入上述浓度的淀粉样蛋白片段以维持老年性痴呆细胞模型,分化培养5 d后进行各项指标观察,并设立无淀粉样蛋白片段对照.④利用免疫蛋白印迹检查、免疫放射括性测定及电生理学测定方法观察补肾益智方含药血清处理NG108-15细胞老年性痴呆模型后的胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率.主要观察指标补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平、NG108-15细胞功能性突触形成、NG108-15细胞微小终板电位频率的影响.结果实验纳入大鼠60只,全部进入结果分析.①补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性的影响在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42最终浓度200 nmol/L时,中药灌胃组胆碱乙酰基转移酶活性均明显高于空白对照组[(1651.2±134.5),(1336.1±268.2);(1586.1±223.4),(1290.7±381.5)μmol/(g·h);P＜0.05].②补肾益智方含药血清对突触素蛋白水平的影响中药灌胃组突触素Ⅰ a和Ⅰ b积分吸光度总值在无淀粉样蛋白、淀粉样蛋白25-35、淀粉样蛋白1-42时分别为5.02,1.36和2.46,空白对照组分别为3.18,0.57和0.71,中药灌胃组分别是空白对照组的1.6,2.4,3.5倍.③补肾益智方含药血清对NG108-15细胞功能性突触形成的影响当无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组功能性突触形成水平均高于空白对照组[(90.6±6.0)%,(63.2±17.0)%;(58.0±13.1)%,(34.2±13.0)%;P＜0.05].④补肾益智方血清对NG108-15细胞微小终板电位频率的影响无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组微小终板电位频率均高于空白对照组[(9.28±4.1),(5.48±5.14);(5.55±5.85),(3.05±4.46)个/min;P＜0.01,P＜0.05].结论补肾益智方剂含药血清在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白存在的情况下均能提高胆碱乙酰基转移酶的活性,不仅能保护由淀粉样蛋白引起的细胞突触素水平降低,在无淀粉样蛋白的情况下还可以提高突触素蛋白的表达,提高功能性突触的形成率和递质含量的释放.表明该方能拮抗老年性痴呆的病理发展,并通过提高神经递质的释放能力发挥对老年性痴呆的治疗作用.     

壳寡糖对兔骨关节炎的治疗效果

目的 探讨关节腔内注射壳寡糖对兔骨关节炎的治疗效果及其作用机制.方法 新西兰兔12只,于右膝关节腔内各注射4 g/L的木瓜酶溶液0.3 mL,随机分为生理盐水对照组及20 g/L的壳寡糖实验组.自造模7 d后右膝关节开始给药,每周1次,共5周.于末次给药后7 d以空气栓塞法处死动物,关节软骨及滑膜组织以苏木精-伊红（HE）染色,光镜下观察其病理变化,免疫组织化学染色法检测膝关节软骨及滑膜组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达.结果 HE染色表明,实验组退变软骨及滑膜的病理变化轻于对照组,免疫组织化学染色法显示,实验组TNF-α的表达明显低于对照组.结论 壳寡糖能够明显降低骨关节炎滑膜、软骨组织中TNF-α的表达水平,延缓软骨的退变程度,可能成为一种新的骨关节炎治疗药物,值得进一步研究、开发和利用.     

少阳生骨方对大鼠在体软骨损伤关节液IL-1β及软骨修复组织Ⅱ型胶原影响的实验研究

目的应用少阳生骨方对大鼠在体软骨损伤进行干预,观察其对大鼠在体软骨损伤关节液中IL-1β水平及和修复组织中Ⅱ型胶原的影响。方法选用在相同条件下喂养的6～8周清洁级SD大鼠,制作成关节软骨损伤动物模型,按照组内均衡一致原则随机编为3组,即少阳生骨方组实验组（S组）、盐酸氨基葡萄糖胶囊组对照组（A组）和生理盐水空白对照组（K组）,每组9只。于造模完成后的第二天,开始灌胃药物,S组少阳生骨方灌胃,A组盐酸氨基葡萄糖胶囊灌胃,K组生理盐水灌胃。对比观察少阳生骨方及盐酸氨基葡萄糖胶囊对大鼠关节软骨损伤后不同时期（4周、8周、12周）关节液中IL-1β水平和修复组织中Ⅱ型胶原的影响。结果三组关节液中IL-1β水平检测,S组和A比较：第4、8、12周A组高于S组（P〈0．05）;第4、8、12周K组高于S组（P〈0．05）;第4、8、12周K组高于A组（P〈0．05）。治疗前后自身比较：S组第8周、第12周均低于第4周（P〈0．05）;A组第8周、第12周均低于第4周（P〈O．05）;K组第4周〉第8周〉第12周（P〈0．05）。组织学观察显示S、A组软骨缺损修复组织的数量及质量均优于K组,S组的修复效果强于A组。结论通过和解少阳的方法可显著降低关节液中导致软骨细胞损伤的炎性介质IL-1β水平,提高软骨损伤后修复组织中Ⅱ型胶原的表达,从而有助于软骨损伤的修复。