鸡血清对人恶性肿瘤细胞增殖能力的影响

目的：了解鸡血清对人恶性肿瘤细胞增殖能力的影响。方法：常规细胞培养后,以10％小牛血清为对照,以不同浓度的鸡血清为检测样品,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、丽丝胺罗丹明B（SRB）法及台盼蓝拒染活细胞计数法测定肿瘤细胞的增殖情况并相互比较;光学显微镜下观察肿瘤细胞形态变化,进行组织病理学评价。结果：MTT及SRB法结果显示肿瘤细胞增殖,而活细胞计数法结果（鸡血清抑制肿瘤细胞的增殖）与之相悖,组织病理学观察显示不同浓度的鸡血清对部分肿瘤细胞造成损伤并有细胞碎片形成,同活细胞计数法结果一致。结论：鸡血清作为一种异源血清对人肿瘤细胞具有杀伤作用,而MTT法和SRB法无法检测到这种杀伤作用。     

含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性

目的利用MTT法评价含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性。方法将制备好的含锶量分别为0％、1％、5％和10％的4种磷酸钙骨水泥材料的浸提液培养L929细胞，1、3和5d后采用MTT比色法和细胞形态直接观察法测定细胞与材料浸提液作用后的生长情况。结果细胞在不同含锶量的磷酸钙骨水泥材料浸提液培养条件下，其细胞相对增殖率在92.6％-103.1％之间，含锶磷酸钙骨水泥材料的细胞毒性评级为0级或1级；随着材料中掺锶量的增加其细胞毒性有略微增大的趋势。结论含锶量不同磷酸钙骨水泥材料具有较好的细胞亲和性，没有明显的细胞毒性。     

蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞毒性的实验研究

目的研究不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细袍的毒性及其影响细胞增殖的因素。方法采用组织块培养法体外原代培养鼠胚表皮细胞，用直接接触法和浸提液法体外培养鼠胚表皮细胞，MTT比色法检测其在不同蚕丝蛋白材料上的增殖活力和细胞相对增殖率，进行毒性分析；并用活细胞计数法观察不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞生长的影响。结果鼠胚表皮细胞在1、2、4、5、7、8、10号各型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力与细胞对照组相当（P〉0.05）；在3、6、9号化学交联或HY-823交联型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力均低于细胞对照组（P〈0．05）；而在11号蚕丝蛋白材料其增殖活力显著低于细胞对照组（P〈0．01）。1、7号丝胶材料细胞毒性分级为0级（无毒），2、3、4、5、6、8、9、10号各型蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为1级（轻微毒），而11号蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为2级（中度毒）。活细胞计数结果与MTT检测结果基本相一致。结论除11号蚕丝蛋白材料外，1～10号各型蚕丝蛋白材料无明显细胞毒性，能支持鼠胚表皮细胞正常生长，具有良好的细胞相容性。     

胃癌癌前状态细胞凋亡检测方法探讨

目的探讨胃癌癌前状态细胞凋亡的检测方法。方法胃镜取活组织标本经病理证实为胃癌癌前状态38例，将组织消化成单个细胞后，随机分别采用PI单染、TUNEL法、AnnexinV／PI双染后，再于流式细胞仪上检测细胞凋亡率。结果PI单染法细胞凋亡率（20．00±7．19）％，TUNEL法细胞凋亡率（39．00±12．17）％，AnnexinV／PI双染细胞凋亡率（28．00±10．62）％。任意两组比较均不同。结论三种检测方法中，AnnexinV／PI双染较为灵敏、准确、特异，另外两种方法均有缺点。     

硝酸铅对大鼠胚胎中脑神经细胞发育毒性的研究

目的：研究硝酸铅对胚胎中脑神经细胞分化和增殖的毒性作用。方法：利用大鼠胚胎中脑神经细胞进行原代微团培养，观察不同浓度(0．01、0．1、1．0、10．0、100．0mg／L)的硝酸铅对细胞分化、增殖的影响，并利用图象分析细胞形态变化及MTT测定细胞活性。结果：结果显示硝酸铅可抑制中脑神经细胞的增殖和分化，导致细胞形态的改变，表现为细胞集落数目、细胞表面突起和集落间的神经纤维束减少。并显示剂量一效应关系，其半数生长抑制浓度(ICV50)为23mg／L，而半数分化抑制浓度(ICD50)为3mg／L。结论：ICV50与ICD50比值为7．7，判断为硝酸铅可能具有体外细胞毒性及致畸作用，抑制细胞的分化和增殖可能是硝酸铅致发育危害的重要作用机理     

纳米羟基磷灰石单壁碳纳米管复合骨材料细胞毒性实验研究

目的探讨纳米羟基磷灰石单壁碳纳米管复合人工骨材料的细胞毒性研究。方法MTT法检测正常对照组、HA／SWNT组、及阳性对照组（含0．64％苯酚的培养液）的细胞活性。结果复合材料各浓度浸提液与阴性对照组在同一时间比较，结果显示差异无显著性意义（P〉0．05％），与阳性对照组比较差异有非常显著性意义（P〈0．01）。结论HA／SWNT复合材料细胞毒性均在Ⅰ级以下，符合国家医用生物材料的细胞毒性要求。     

急性非淋巴细胞白血病联合药敏试验对化疗效果的预示

目的：测定急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者对3种联合化疗方案药物的敏感性，探讨体外药敏结果与体内敏感性的关系。方法：采用MTT法测定39例ANLL初治或复发患者骨髓单个核细胞（BMMNC）对HA、DA、MA三个联合化疗方案的敏感性，随机选择三个联合方案之一进行1－2个疗程化疗，比较其体内外敏感性并进行相关分析。结果：39例患者，S／S19例，R／R11例，R／S3例，S／R6例。体外药敏与体内疗效总符合率为76．9％，阳性符合率为76％，阴性符合率为78.6%，敏感性86.4%，特异性64.7%。结论：MTT法敏感性高、特异性强、有很好的预示价值。     

评价细胞毒性方法的探讨

目的:探讨评价细胞毒性的方法.方法:分别采用MTT法、MTS法和传统的血球计数法比较医用高分子材料的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929)相对增殖率的影响.结果:采用3种测定方法测定此类医用高分子材料,均呈现出高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级,即无细胞毒性.结论:在常规细胞毒性测试法的基础上采用MTT法和MTS法,能更快捷准确地测定细胞的增殖反应.MTS法与MTT法相比较,其灵敏度更高,操作更简便.     

用MTT法进行白血病体外药物敏感性检测的临床意义

目的探讨使用MTT比色法进行白血病体外药物敏感性检测的可行性．为MTT法作为肿瘤药敏检测技术应用于临床提供理论依据。方法采用MTT比色法测定47例血液病患者外周血和骨髓白血病细胞对14种临床常用化疗药物的敏感性,并与化疗药物的实际疗效作对照。结果47例患者中,体外敏感／体内敏感（S／S）30例、体外敏感／体内耐药（S／R）7例、体外耐药／体内耐药（R／R）9例、体外耐药／体内敏感（R／S）例;体外药敏与体内疗效的总符合率为82．98％,阳性符合率为81.09％,阴性符合率90％。敏感度96．77％,特异度56．25％。结论采用MTT法预测化疗药物的敏感性,临床相关性好。     

人血清对大蒜新素细胞毒性及其抗人巨细胞病毒效应影响的实验研究

目的:探讨人血清干预对大蒜新素细胞毒性及其抗人巨细胞病毒(HCMV)效应的影响。方法:将系列浓度大蒜新素与不同浓度血清共同作用于人胚肺成纤维细胞，观察细胞增殖活力(MTT法)、细胞形态和超微结构及HCMV蚀斑抑制率的改变。结果:①不加血清时，细胞对大蒜新素最大耐受浓度(MTC)为9．6μg／ml；加入20％灭活血清后，MTC增至21μg／ml。②血清干预前，21μg／ml大蒜新素使60％细胞坏死，胞质与胞核疏松混浊、呈筛状，内质网、线粒体弥漫性肿胀空泡变明显，异染色质减少；血清干预后，细胞形态与超微结构均明显改善，尤其在干预后48h，细胞超微结构与正常细胞相似。③20％血清干预提高细胞对大蒜新素的最大耐受浓度，后者对HCMV抑制率由干预前的65．92％提高至82．98％。结论：20％血清干预可明显改善大蒜新素的细胞毒性、保护细胞超微结构；增加大蒜新素用量，进而提高其抗HCMV效应。     

白首乌甾体总苷的体外抗肿瘤作用

体外用细胞生长曲线法、ＭＴＴ试验、蛋白质含量测定法及形态学观察研究了白首乌甾体总苷（ＣＧ）的抗肿瘤作用。结果表明：ＣＧ对Ｈｃｅ－８６９３、ＰＣ３、Ｈｅｌａ、ＰＡＡ４种实体瘤细胞均有较强的体外细胞毒作用,且呈浓度依赖性。ＣＧ作用于Ｈｅｌａ细胞４ｄ,形态观察表现为细胞膜皱缩、细胞核固缩、浓聚。     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.     

Evaluation of a rapid tetrazolium-based colorimetric assay for selecting anticancer drugs

A rapid colorimetric microtiter assay was used in this study to analysis drug cytotoxicity. Through the reduction of tetrazolium salt, MTT [3-(4, 5-dimethyl-thiazol-2-yl) 2,5-diphenyl tetrazolium bromide], by living cells to form a blue formazan product. The level of MTT cleavage by viable cells of various origins was found to be in direct proportion to the number of cells (between 500-10,000 cells/well). By MTT methods, the growth profile and chemosensitivity of 4 human tumor cell lines (KB, Hep-2, HA22T, and CoLo205) to 4 anticancer drugs (adriamycin, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurine and cyclophosphamide) were assessed. Results from this assay were compared with data assimilated simultaneously by dye exclusion and clonogenic assay. In general, good correlation was observed among the clonogenic, dye exclusion and MTT assays for continuous drug exposures, yet the MTT assay was more rapid in testing in vitro chemosensitivity against human tumor cell lines. The dye exclusion assay was the most sensitive, followed by the clonogenic and then the MTT assays. The ID50 values obtained from the MTT assay were approximately 3 to 5 times lower than those from the other two methods. Based on these studies, MTT assay appears to be a rapid, convenient, economical and reasonable tool in the initial-stage screening of large number of the in vitro anticancer drugs.     

In Vitro Cytotoxicity of Polyphosphoester as a Novel Injectable Alveolar Replacement Material

The aim of this study was to investigate the in vitro cytotoxicity of polyphosphoester polymer used as a novel injectable alveolar bone substitutes for controlled delivery of tetracycline. Cell culture medium was exposed to the polymer （0.01-10 mg/mL） for 24 h. The L-929 mouse fibro- blasts were then exposed to the treated cell culture medium for 24 h. Finally, cell viability and growth were assessed by using MTT assay and Alamar Blue assay. No significant cytotoxicity of the polyphosphoester against L-929 mouse fibroblasts was observed at a concentration up to 10 mg/mL （P〉0.05）. The two evaluation methods showed no significant differences （P〉0.05）. This study suggests that polyphosphoester does not demonstrate any significant toxic effects to cells in vitro and has the potential to be used both as a medical device and as scaffolds in tissue engineering applications.     

MTT法和LDH法检测T—AK细胞活性的研究

采用ＭＴＴ比色分析法和ＬＤＨ释放法检测了ＣＤ３单克隆抗体和白细胞介素－２共同激活的Ｔ－ＡＫ细胞的杀伤活生，并对检测方法进行了改良。     

NK／LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

OBJECTIVE: To understand the relation between cytotoxic activity of immunologic effector cells and multidrug resistance of the tumor cells. METHODS: Continuous observation of the morphological changes and MTT colorimetry were employed to evaluate the cytotoxic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells and natural killer (NK) cells against multidrug-resistant (MDR) human oral carcinoma cell line-KBV200 (before and after reversal of MDR) and parental drug-sensitive cell line KB. The morphologic changes of LAK cells and the 3 target cell lines were observed continuously under inverted microscope 3 h after co-culture of LAK cells with one of three target cell lines respectively. The lysis rates of three tumor cell lines in response to co-culture with LAK or NK cells were determined using MTT colorimetry. RESULTS: In comparison with the parental drug-sensitive cell line KB, both KBV200 and its reserved cell line by verapamil (KBVV) showed earlier adherence and greater number of cells lysed by LAK. In MTT colorimetry assay, the cytotoxicity of both LAK and NK cells against the 3 cell lines was associated with the effector-to-target (E/T) cell ratio; the lysis rates of KBV200 and reversed KBV200 cells by verapamil in response to LAK and NK cells were higher than that of KB cells (P<0.05), but KBV200 and KBVV did not significantly differ (P>0.05). At the same E/T ratio, LAK cells possessed stronger cytotoxicity than NK cells against all the tumor cell lines (P<0.05). CONCLUSIONS: Immunologic effector cells possess strong cytotoxic activity against multidrug-resistant cell line KBV200. Modulation of MDR does not decrease the cytotoxic activity of the immunologic effector cells. The results of this study suggest that adoptive cell immunotherapy with immunologic effector cells may be of value in controlling the progress of MDR tumors.     

In vitro toxicologic study of chitin short fiber reinforced polycaprolactone composite

To investigate the cytotoxicity and cytocompatibility of chitin fiber reinforced polycaprolactone composite in vitro in order to provide useful scientific basis for clinical application. Methods: Cell morphology, observation,MTF and DNA assay were used to evaluate the influence of the composite on the morphology, growth and proliferation of cultured L-929 cells. Results: The composite did not impair the morphology of cultured cells in vitro. MTF and DNA assay demonstrated that the growth and proliferation of the cultured cells were not significantly inhibited by the composite. Conclusion: The composites have fine cytocompatibility and are safe for clinical use of reconstruction of chest wall defects.     

细胞凋亡荧光染色法在检测TIL细胞毒效应中的应用

细胞毒细胞杀伤肿瘤细胞主要通过细胞凋亡机制。用传统的ＭＴＴ法探讨了肿瘤浸润淋巴细胞ＴＩＬ细胞杀伤活性最佳条件，同时采用凋亡荧光染色法（ＡＦＳ）检测ＴＩＬ的生物学效应，结果发现ＡＦＳ法比ＭＴＴ法更能准确地反映ＴＩＬ对靶细胞的杀伤，杀伤率与效靶比呈良好的线性关系（ｒ＝０．８９），且该法简单，快速，敏感，重复性好，能同时观察了活细胞，凋亡及坏死三种细胞的形态特征。     

二乙酰己二胺诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡及其机制研究

目的体外研究二乙酰己二胺（CAHB）对人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞的作用以及可能的作用机制。方法用CAHB处理MUTZ-1细胞，光学显微镜下观察不同浓度的CAHB处理后MUTZ-1细胞形态的改变；利用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测CAHB对MUTZ-1细胞的增殖抑制作用；采用流式细胞仪分析细胞DNA含量分布变化；利用RT—PCR技术检测凋亡相关基因Survivin、Bcl-2的表达变化。结果CAHB能抑制MUTZ-1细胞的生长，具有浓度和时间依赖性：随着CAHB药物浓度的增加MUTZ-1细胞出现凋亡细胞的典型形态学特征改变；CAHB作用后，MUTZ-1细胞的DNA含量在细胞周期的分布有明显变化，G0／G1期细胞比例无明显变化，S期细胞减少，而GJM期细胞增多，细胞被阻滞在G：期，呈浓度依赖；在细胞凋亡过程中抗凋亡基因Bcl-2、Survivin基因下调。结论CAHB不但能抑制MUTZ-1细胞生长而且能诱导细胞凋亡，诱导细胞凋亡是其主要细胞毒作用之一。抗凋亡基因Bcl-2、Survivin基因下调可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

NK/LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

目的明确免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性是否与肿瘤的耐药性相关。方法采用连续形态学观察及MTT比色法,研究淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞及自然杀伤(NK)细胞,对人口腔癌耐药细胞株KBV200耐药性逆转前后及亲本敏感株KB的杀伤活性。(1)在肿瘤细胞与LAK细胞共育后3 h内连续在倒置显微镜下观察LAK细胞对上述3者的杀瘤效应;(2)采用MTT比色法检测NK及LAK对3株细胞的杀伤率。结果与KB细胞组相比,在KBV200和KBV200 维拉帕米组,LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早、数量多,伸出伪足的LAK细胞比率高,出现集落样细胞团块时间亦早。NK、LAK细胞对KBV200细胞株耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(P<0.05),而对耐药株耐药性逆转前后的杀伤率无统计学差异(P>0.05);LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(P<0.05)。结论免疫活性细胞对KBV200细胞株有较强的杀伤作用,逆转耐药性不降低免疫活性细胞杀伤活力,提示细胞过继免疫治疗可能成为控制化疗耐药病人病情发展的一个有效手段。