苗药羊耳菊中7个抗炎活性成分在Raw264.7细胞中含量测定方法的建立

目的: 建立同时测定Raw264.7细胞中羊耳菊提取物中7个抗炎活性成分木犀草苷（luteolin,LUT）、绿原酸（chlorogenic acid,CA）、新绿原酸（neochlorogenic acid,NCA）、隐绿原酸（cryptochlorogenic acid,CCA）、3,4-二咖啡酰基奎宁酸（3,4-dicaffeoylquinic acid,3,4-DCQA）、3,5-二咖啡酰基奎宁酸（3,5-dicaffeoylquinic acid,3,5-DCQA）、4,5-二咖啡酰基奎宁酸（4,5-dicaffeoylquinic acid,4,5-DCQA）含量的方法。方法: 以小鼠巨噬细胞Raw 264.7为研究对象，采用超高液相色谱—三重四级杆质谱联用仪（UPLC-MS/MS）建立同时测定Raw 264.7细胞中LUT、CA、NCA、CCA、3,4-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA等7个成分含量的方法，包括专属性、线性、基质效应、回收率、准确度、精密度和稳定性等。结果: 建立了一个快速稳定测量Raw264.7细胞中微量药物的分析方法，该方法的最低定量限为0.48~3.84 ng/mL，准确度为（90.78±5.30）%~（113.99±13.51）%，提取回收率为（87.19±5.33）%~（103.59±14.00）%，基质效应为（94.50±15.17）%~（112.77±7.02）%，稳定性为（91.71±11.70）%~（109.45±10.63）%，能够满足测量的要求。结论: 建立了快速、准确的同时测定Raw264.7细胞羊耳菊提取物中7个活性成分（LUT、CA、NCA、CCA、3,4-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA）含量的UPLC-MS/MS方法，为开展羊耳菊提取物的细胞药代动力学研究奠定基础。     

基于一测多评法测定银黄制剂中6种咖啡酰奎宁酸类成分的含量

[目的]建立测定银黄制剂中6种咖啡酰奎宁酸类成分(绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C)含量的一测多评(QAMS)方法.[方法]采用Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250.0 mm,5.0μm)色谱柱，以0.4%(体积分数)磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(流动速度为1.0 m L·min^-1，进样量10μL，检测波长327 nm，柱温30℃).以绿原酸(5-O-咖啡酰奎宁酸)为内参物，计算其他5种咖啡酰奎宁酸类成分的相对校正因子并计算该5种成分的含量，实现QAMS.同时采用外标法测定6种咖啡酰奎宁酸类成分的含量，并对两种方法测定的结果进行比较，验证QAMS法的可行性和准确性.[结果]在一定线性范围内，以绿原酸为内参，新绿原酸(3-O-咖啡酰奎宁酸)、隐绿原酸(4-O-咖啡酰奎宁酸)、异绿原酸C(4,5-O-二咖啡酰奎宁酸)、异绿原酸A (3,5-O-二咖啡酰奎宁酸)和异绿原酸B (3,4-O-二咖啡酰奎宁酸)5种成分的平均校正因子分别为1.224 3、0.956 9、0.814 1、0.8...     

5种有“味酸”药性的蔷薇科果实类药材中水溶性有机酸的测定与分析

目的通过测量5种蔷薇科果实类药材(山楂、木瓜、乌梅、金樱子和覆盆子)的p H值及水溶性有机酸含量,探索"味酸"药性下各药材含水溶性有机酸的异同。方法采用直接电位法和电位滴定法测定5种药材的p H值和可滴定总有机酸含量;采用反相高效液相色谱三波长切换法辨识并定量测定水溶性有机酸奎尼酸、苹果酸、莽草酸、柠檬酸、富马酸、原儿茶酸和绿原酸的含量。结果 5种药材p H值从低到高依序为乌梅(2.64)山楂(3.19)木瓜(3.28)覆盆子(4.33)金樱子(5.06)。可滴定总有机酸含量从高到低依序为乌梅(16.2%)山楂(8.39%)木瓜(7.19%)金樱子(3.97%)覆盆子(3.58%)。木瓜和乌梅含有检测的7种有机酸;金樱子未检出绿原酸;覆盆子未检出绿原酸和奎尼酸。各药材中含量较高的有机酸分别是柠檬酸(乌梅1.09%;山楂0.290%;覆盆子0.272%)、莽草酸(木瓜0.753%)和奎尼酸(金樱子0.277%)。数据分析显示,药材p H值与可滴定总有机酸含量呈现良好的负相关(Pearson correlation coefficient为-0.73,P0.01);5种药材中可滴定总有机酸与柠檬酸在含量高低变化上的表现趋向一致。比较5种药材中各有机酸的含量,呈现出单体有机酸谱变化各异。结论该实验对5种药材的水溶性有机酸类成分进行了较为全面分析,为"味酸"中药的重要物质基础系统表征和量化提供方法思路、积累实验资料;也为《中国药典》将柠檬酸作为乌梅、山楂药材的质量指标成分提供依据。     

灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位化学成分的研究

目的研究灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位化学成分。方法采用硅胶柱色谱及制备液相色谱等分离方法进行分离纯化,经核磁共振等波谱技术进行化合物结构鉴定。结果从灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位中分离得到6个化合物,分别鉴定为原儿茶醛(1)、咖啡酸丁酯(2)、3-O-咖啡酰奎尼酸丁酯(3)、3,5-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯(4)、3,4-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯(5)、β-谷甾醇(6)。结论化合物1和2为首次从灰毡毛忍冬中分离得到。     

双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱及含量测定研究

目的 建立双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱,并同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、连翘苷7种活性成分的含量.方法 采用Agilent 1290超高效液相色谱仪,以黄芩苷为参照物在210 nm波长下建立双黄连吸入溶液指纹图谱;在324 nm波长下对新绿...     

金银花提取物的质量评价研究

【目的】采用特征图谱、绿原酸与木犀草苷含量测定、山银花检查等综合方法,评价市场金银花提取物的质量。【方法】高效液相色谱(HPLC)特征图谱及绿原酸含量测定以Kromasil 100-C18为色谱柱,流动相为乙腈—0.4%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为327 nm,柱温为35℃,流速为1.0 m L·min~(-1)。木犀草苷HPLC含量测定以ZOBAX SB-Phenyl为色谱柱,流动相为乙腈—0.5%(体积分数)冰乙酸(梯度洗脱),检测波长为350 nm,柱温为25℃,流速为0.9 m L·min~(-1)。山银花HPLCELSD检查方法,以Kromasil 100-C18为色谱柱,流动相为乙腈—0.4%(体积分数)冰乙酸(梯度洗脱),流速为1.0 m L·min~(-1)。【结果】13批市售金银花提取物特征图谱均检出6个酚酸类特征峰,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。金银花与山银花药材均检出6个酚酸类特征峰,但药材与提取物相对峰面积差异较大,提示提取物制备过程中发生酚酸类成分异构体的转化。13批样品中有6批样品检出山银花的灰毡毛忍冬皂苷乙特征峰,提示这些样品为山银花提取物伪品或掺假山银花提取物。样品中绿原酸与木犀草苷含量分别为1.56~45.61 mg·g~(-1)、0.038~0.734 mg·g~(-1),山银花提取物伪品或掺伪品的绿原酸含量相对较高,而木犀草苷含量明显较低,不同厂家的正品金银花提取物绿原酸含量差异也较大,提示可能与金银花原料质量、制备工艺方法及辅料加入量的不统一有关。【结论】市场上金银花提取物质量差异很大,山银花假冒金银花或掺伪金银花现象严重,应加强原料质量控制、确定稳定的制备工艺,以保障提取物质量的稳定性。     

灯盏细辛药材的薄层色谱鉴别

目的建立灯盏细辛的薄层色谱鉴别方法。方法采用适当的方法提取灯盏细辛中的4种有效成分即3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、野黄岑苷、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸和咖啡酸,鉴别时采用薄层色谱进行。结果在供试品溶液的薄层色谱图上出现与对照药材溶液、对照品溶液色谱相应位置上相同颜色的斑点。结论薄层色谱操作简便、专属性强,可用于灯盏细辛药材的定性鉴别。     

灰毡毛忍冬抑制表皮生长因子受体激酶活性及活性部位UPLC-Q-TOF/MS分析

应用高通量药物筛选技术,筛选发现具有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)激酶抑制活性的中药提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)对其活性部位进行分析和鉴别。灰毡毛忍冬药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个相应的提取部位。采用均相时间分辨荧光(HTRF)法检测抑制EGFR激酶活性,于波长为620和665 nm 处测定荧光信号的变化及信号值,计算提取物对EGFR激酶的抑制率。采用Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,210~400 nm 扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据。结果显示,灰毡毛忍冬的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR激酶抑制活性,IC₅₀为2.027 μg/mL。Q-TOF/MS测定的一级、二级质谱信息及结合文献鉴定灰毡毛忍冬乙酸乙酯提取物中11个化合物,其中7个分别是:咖啡酸(caffeic acid),七叶内酯(esculetin),槲皮素(quercetin),3,5-二咖啡酰奎尼酸(3,5-O-dicaffeoylquinic acid),扁柏黄酮(hinoki flavone),绿原酸(chlorogenic acid),β-谷甾醇(β-sitosterol)。3,5-二咖啡酰奎尼酸、咖啡酸、扁柏黄酮为灰毡毛忍冬的主要成分,灰毡毛忍冬中含有的酚酸类和黄酮类化合物可能是抑制EGFR激酶活性的主要成分。     

岗梅根中酚类化学成分研究

目的 研究岗梅根的酚类化学成分.方法 采用大孔树脂柱层析、反相硅胶生柱层析和凝胶柱层析等方法分离纯化岗梅根的化学成分,并根据波谱数据鉴定化合物的结构.结果 从岗梅根的乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为咖啡酸(Ⅰ)、咖啡酸甲酯(Ⅱ)、绿原酸(Ⅲ)、隐绿原酸(Ⅳ)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸甲酯(Ⅴ)、丁香醛(Ⅵ).结论 化合物Ⅱ～Ⅵ为首次从该植物中分离得到.     

基于指纹图谱和网络药理学的苍耳子质量标志物预测分析

目的 基于指纹图谱和网络药理学预测苍耳子质量标志物,为其质量控制和药效研究提供依据。方法 选择10批不同产地苍耳子饮片,采用超高效液相色谱系统Waters Acquity UPLC H-Class建立其UPLC指纹图谱,通过对照品指认确定其共有峰并初步预测其候选Q-Marker;运用网络药理学构建“核心成分-靶点-通路”网络,进一步预测苍耳子Q-Marker及核心靶点,再用分子对接方法预测分析苍耳子Q-Marker生物活性。结果 建立了10批苍耳子饮片的指纹图谱,确认了18个共有峰,通过苍耳子对照品指认了其中8个峰,分别为原儿茶醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸。经网络药理学分析,以上8种成分关联29个核心靶点与20条关键通路,与苍耳子抗炎、抗肿瘤等作用密切相关,可作为苍耳子药效活性成分。分子对接结果显示该8种成分与其对应的核心靶点之间均有较好的结合能力,表明苍耳子候选QMarker拥有较好的生物活性。结论 通过UPLC指纹图谱和网络药理学分析,预测出苍耳子的Q-Marker,为其质量及药效学的进一步研究提供了...     

高效液相色谱法同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量*

[目的]采用梯度洗脱方法建立金银花中绿原酸和木犀草苷含量测定的高效液相色谱(HPLC)法。[方法]色谱柱:Xterra@RP185;检测器:Waters2998二级管阵列检测器(DAD);工作站:Waters Empower;流动相:0.5%冰乙酸-乙腈;线性梯度洗脱0:～15 min(90∶10-80∶20),15～30 min(80∶20-75∶25),30～40 min(75∶25-65∶35),40～45 min(65∶35-90∶10);流速:1 mL/min;检测波长:350 nm。[结果]在此色谱条件下两种成分分离完全。[结论]该方法简便,准确,快速易行,可同时检测金银花中两种成分的含量。     

微粉化技术对金银花溶出度的影响

目的：考察微粉化技术对中药材金银花溶出度的影响。方法：以绿原酸含量为指标,采用薄层色谱法对中药材金银花进行定性鉴别,用紫外分光光度法测定金银花中绿原酸的含量。结果：随着粉碎粒度的变细,金银花有效成分绿原酸的提出量明显提高,超微粉（10μm）〉160目筛细粉〉120目筛细粉〉80目筛细粉〉60目筛细粉,超微粉有效成分含量比60目筛细粉提高14.4%。结论：微粉化技术对金银花溶出度影响明显。     

HPLC法同时测定中药金银花中咖啡酸和木犀草苷的含量

目的建立高效液相色谱（HPLC）方法同时测定中药金银花中咖啡酸及木犀草苷的含量。方法采用Agilent C18色谱柱（250mm×4.6mm,5.0μm）,流动相采用甲醇：0.1%的磷酸水溶液,按照梯度洗脱方式,流速为1.0ml/min,进样量为15μl,检测波长为338nm,柱温为25℃。结果咖啡酸与木犀草苷分别在8.1-82.0μg/ml、2.1-42.0μg/ml范围内线性关系良好,线性回归方程分别为Y=37.71X-265.77（R=0.9997）,Y=15.56X＋3.98（R=0.9995）。结论采用HPLC方法测定金银花中的有效成分咖啡酸、木犀草苷,方法简单、分离效果好,重复性好,是一种较好的检测金银花药材质量的方式。     

基于液相色谱-串联质谱结合多元统计分析盐胁迫下金银花代谢产物积累的变化

目的?探究盐胁迫下金银花中代谢产物积累的变化。方法?采用超快速液相色谱-串联三重四级杆飞行时间质谱（UFLC-Triple TOF-MS/MS）对金银花盐胁迫组与对照组样品进行分析,用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）进行数据处理,找出潜在的差异代谢物;通过一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合质谱数据库搜索、标准品比对及相关文献进行差异成分鉴定。然后用超快速液相色谱-三重四级杆线性离子阱串联质谱（UFLC-QTRAP-MS/MS）对15个目标差异成分进行测定,并作灰色关联分析（GRA）。结果?金银花盐胁迫组与对照组的样品得到有效区分,筛选并鉴定31个差异成分;15个目标差异成分呈现不同的变化规律,GRA分析初步表明适度的盐胁迫可促进金银花中药效成分的合成与积累。结论?为盐胁迫下金银花的质量评价及提高金银花的药用价值提供了新思路。      

川产灰毡毛忍冬金银花气相色谱指纹图谱研究

目的：建立川产灰毡毛忍冬金银花药材的气相色谱（GC）指纹图谱。方法：采用GC检测川产金银花药材中所含挥发性化学成分，以芳樟醇为参照物，按“中药指纹图谱研究的技术要求”计算相对保留时间及峰面积比值，标定共有指纹峰。结果：在全面方法学研究的基础上，先后对10批金银花药材供试品进行检测分析，从而建立了该药材的GC指纹图谱。结论：GC指纹图谱中共有18个共有峰，其相对保留时间及峰面积比值可作为川产灰毡毛忍冬金银花的质量控制之一。     

豫产金银花质量控制的研究

目的：探讨制定金银花质量的方法和指标。方法：用HPLC色谱法对河南不同产地金银花进行绿原酸的含量测定，并对其灰分、酸不溶灰分、砷盐及重金属进行检测。结果：含量测定和检测均获理想结果。结论：找到了较佳方法和指标，为道地药材金银花的质量控制提供参考。     

金银花抗氧化活性整合指纹图谱的建立及其在质量评价中应用

[目的]建立评价金银花抗氧化活性的方法,比较不同产地金银花药材抗氧化活性大小,确定抗氧化活性成分的贡献率。[方法]采用在线快速活性筛选高效液相色谱-二极管阵列检测器-1,1-二苯基-2-苦基肼(HPLC-DAD-DPPH)甲醇枸橼酸在线体系,建立金银花抗氧化活性指纹图谱。[结果]确定了绿原酸和异绿原酸A为其主要的抗氧化活性成分,以金银花中8个主要活性成分为抗氧化活性指标对不同产地金银花的质量进行控制,确定了广州野生金银花质量最佳。[结论]该方法简便可行,基于活性整合指纹图谱技术筛选药材中的抗氧化活性成分并以活性成分为指标,为全面有效评价中药质量提供了可借鉴的模式。     

石墨炉原子吸收分光光度法测定金银花中铅的不确定度分析

目的对石墨炉原子吸收分光光度法测定金银花中铅含量的不确定度进行分析,以期找出影响不确定度的因素,为评价检测报告提供科学依据。方法用石墨炉原子吸收分光光度法测定金银花中铅含量,并根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059-1999）有关规定分析不确定度的来源,利用回归方程进行不确定度的评定。结果本实验中金银花中铅的含量为2.45 mg.kg-1,扩展不确定度为0.25 mg.kg-1（包含因子k=2）。结论本实验的不确定度主要由重复测量所引入。     

产地加工方法对山银花药材品质的影响

目的 比较不同产地加工方法对山银花药材外观及其有效成分绿原酸含量的影响。方法采用HPLC法,测定6种产地加工方法的山银花含量。结果不同产地加工方法的药材中外观及其绿原酸含量相差悬殊,绿原酸的含量从高到低依次为烘烤法>蒸制干燥法>熏硫干燥法>炒制干燥法>生晒法>晾干法。结论烘烤法加工的药材外观质量最优,绿原酸含量最高,应广泛推广和应用。