蛋白激酶C对原代培养神经元诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨PKC参与缺血性神经元损伤的可能机制。方法：采用SD大鼠大脑皮层神经元原代培养为模型，观察PKC刺激剂PMA对培养神经元的毒性率、凋亡及神经元内iNOS表达的影响。结果：PMA可以明显地促进神经元内iNOS的表达，增加神经元的毒性率，诱导神经元凋亡。结论：PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内iNOS的表达而实现的。     

乳酸升高对体外原代培养大鼠皮质神经元存活率的影响

背景:中枢疲劳机制目前不完全清楚,乳酸蓄积可能在中枢疲劳中发挥重要作用,乳酸蓄积是否影响神经元功能?目的:观察乳酸对原代的皮质神经元存活率的影响。设计:单一样本观察。单位:解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所细胞生物学实验室。材料:新生(第1天)Wistar乳鼠40只(解放军军事医学科学院实验动物中心)。方法:实验于2003-10/2004-05在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所细胞生物学实验室完成。体外原代大鼠大脑皮质神经元,将神经元分为两部分:①添加不同浓度乳酸(0,5,10,20mmol/L)使培养液pH值分别降至7.35,7.15,6.95和6.00,观察神经元存活率。②添加不同浓度乳酸(0,5,10,20mmol/L)后,保持培养液pH值为7.35,分别观察神经元存活率,分析乳酸对神经元的作用是通过下调pH值还是乳酸本身的作用。主要观察指标:①不同浓度乳酸调节pH值的变化对神经元存活率的影响。②不同乳酸浓度,相同pH值对神经元存活率的影响。③乳酸下调pH与乳酸本身对神经元的毒性作用比较。结果:①神经元存活率随pH降低而降低,pH值为7.35,7.15,6.95和6.00神经元存活率由100%分别降至68%,69%,53%(P<0.05)。②当乳酸浓度分别为0,5,10,20mmol/L,pH值均为7.35时,神经元存活率由100%降至88%,82%,81%。与对照组相比差异明显(P<0.05)。③pH下调组神经元存活率显著低于相应乳酸作用组。结论:乳酸升高造成pH降低与神经元存活率关系密切,过量乳酸亦可不依赖下调pH值的作用发挥神经毒性。     

丙泊酚麻醉对老龄大鼠认知功能和海马神经元γ-氨基丁酸A受体表达的影响

目的 观察丙泊酚麻醉对老龄大鼠认知功能及海马神经元γ-氨基丁酸A(GABA)受体表达的影响.方法 50只SD老年大鼠随机分为丙泊酚组和对照组,每组25只.丙泊酚组大鼠腹腔注射1％丙泊酚中/长链脂肪乳注射液6 mL/kg,对照组腹腔注射等体积的生理盐水.麻醉后1d进行Morris水迷宫实验,分别采用HE染色和尼氏体染色观...     

维生素C及E联合作用对体外大鼠胚胎中脑神经细胞分化和增殖的影响

目的:观察维生素C,维生素E和维生素C 维生素E联合后对胚胎中脑神经细胞生长发育的影响。方法:实验于2006-03/04在江苏大学医学院研究中心细胞培养室完成。采用16d大鼠胚胎中脑神经细胞体外培养方法,观察不同剂量的维生素C(5,10,25,50μmol/L),维生素E(10,25,50,100μmol/L)和维生素C、维生素E联合作用(维生素C25μmol/L 维生素E50μmol/L,维生素C50μmol/L 维生素E100μmol/L),培养10d后收集细胞,并利用图像分析细胞形态的变化、蛋白质、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性指标。结果:①维生素C、维生素E和维生素C 维生素E联合能促进体外培养中脑神经细胞突起生长,集落数增多。②与正常对照组比较,维生素C10,25μmol/L组、维生素E10,25,50μmol/L组、维生素C25μmol/L 维生素E50μmol/L组神经细胞总蛋白相对含量明显增加。③与正常对照组比较,维生素C10,25μmol/L组、维生素E25,50μmol/L组、维生素C25μmol/L 维生素E50μmol/L组神经细胞超氧化物酶活性增加,丙二醛含量降低。④维生素C50μmol/L组、维生素E100μmol/L组和维生素C50μmol/L 维生素E100μmol/L组超氧化物酶活性低于正常对照组,丙二醛含量高于正常对照组。结论:维生素C、维生素E和维生素C 维生素E联合剂量在一定范围内能够明显提高中脑神经细胞的抗氧化能力,同时能促进胚胎中脑神经细胞分化和增殖作用。     

川芎嗪对原代培养大鼠海马神经元L型钙通道电流和胞浆内钙浓度的影响

目的研究川芎嗪(TMP)对海马神经元细胞膜L型钙通道电流(Ica.L)作用和对神经细胞内钙([Ca2 ]i)的影响.方法取新生24h内大鼠进行原代海马神经元培养,使用全细胞膜片钳技术联合激光扫描共聚焦显微镜观察TMP对神经元Ica.L和[Ca2 ]i的影响.结果①膜片钳证实, 10、30、100 μmol/L的TMP组能显著抑制Ica.L峰值,分别与对照组的(454.2±31.4)pA比较降至(276.4± 17.1、209.3±14.2和(135.8±16.0 pA,P＜0.05),使I-V曲线上移,且具有浓度依赖性,但对最大激活电位无明显影响.②激光扫描共聚焦显微镜测量发现,细胞外液有钙液时,10、30和100μmol/L TMP组能显著抑制60 mmol/L的KCL引起的细胞内钙荧光峰值(Fi)增加,与对照组的(1749.4±61.0)比较降至(1227.1±36.2、998.2±23.9和745.9±20.6,P＜0.05);在细胞外液无钙时,30 μmol/L TMP组也能显著抑制60 mmol/L KCL引起的[Ca2 ]i)库释放,与对照组(965.3±82.5)比较降至(789.6±75.6,P＜0.05).结论TMP具有对海马神经元钙通道Ica.L和[Ca2 ]i库释放的双重抑制作用,使[Ca2 ]i水平降低,这可能是其神经保护机制原因之一.     

原代培养人单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达与阿托伐他汀的干预

背景：阿托伐他汀作为过氧化酶体增殖体激活受体γ的激动剂,不仅可以调节脂质代谢,而且能够抑制炎症递质生产,减轻缺血性炎症损伤,但其具体作用机制尚不明确。目的：观察原代培养的人单核细胞中阿托伐他汀对过氧化物酶增殖体激活受体的影响和抗炎作用。方法：将原代培养的人单核细胞随机分为对照组,10,1,0.1μmol/L阿托伐他汀组和抗过氧化酶体增殖体激活受体γ抗体组;预先被肿瘤坏死因子α激活的人单核细胞随机分为对照组,0.1,1,10μmol/L阿托伐他汀组,分别和不同浓度的阿托伐他汀共同孵育24h,通过电泳迁移率变化分析抗过氧化酶体增殖体激活受体γ蛋白的表达情况,通过酶联免疫吸附实验测定肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1、明胶酶B的水平,并且通过氧电极法测定细胞氧耗量。结果与结论：在未被肿瘤坏死因子α激活的单核细胞中,阿托伐他汀可以呈浓度依赖性激活抗过氧化酶体增殖体激活受体γ,降低单核细胞趋化蛋白1、降低明胶酶B的水平,但对肿瘤坏死因子α的水平没有明显影响。而在预先被肿瘤坏死因子α激活的单核细胞中,阿托伐他汀使抗过氧化酶体增殖体激活受体γ上调的作用并不明显,但仍可浓度依赖性降低肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1和明胶酶B的水平,同时阿托伐他汀呈浓度依赖性降低细胞氧耗量达41%。说明阿托伐他汀具有确切的抗炎效果,但这种作用并不完全依赖于过氧化物酶体增殖体激活受体γ途径。     

原代培养人单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达与阿托伐他汀的干预

背景:阿托伐他汀作为过氧化酶体增殖体激活受体γ的激动剂,不仅可以调节脂质代谢,而且能够抑制炎症递质生产,减轻缺血性炎症损伤,但其具体作用机制尚不明确。目的:观察原代培养的人单核细胞中阿托伐他汀对过氧化物酶增殖体激活受体的影响和抗炎作用。方法:将原代培养的人单核细胞随机分为对照组,10,1,0.1μmol/L阿托伐他汀组和抗过氧化酶体增殖体激活受体γ抗体组;预先被肿瘤坏死因子α激活的人单核细胞随机分为对照组,0.1,1,10μmol/L阿托伐他汀组,分别和不同浓度的阿托伐他汀共同孵育24h,通过电泳迁移率变化分析抗过氧化酶体增殖体激活受体γ蛋白的表达情况,通过酶联免疫吸附实验测定肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1、明胶酶B的水平,并且通过氧电极法测定细胞氧耗量。结果与结论:在未被肿瘤坏死因子α激活的单核细胞中,阿托伐他汀可以呈浓度依赖性激活抗过氧化酶体增殖体激活受体γ,降低单核细胞趋化蛋白1、降低明胶酶B的水平,但对肿瘤坏死因子α的水平没有明显影响。而在预先被肿瘤坏死因子α激活的单核细胞中,阿托伐他汀使抗过氧化酶体增殖体激活受体γ上调的作用并不明显,但仍可浓度依赖性降低肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1和明胶酶B的水平,同时阿托伐他汀呈浓度依赖性降低细胞氧耗量达41%。说明阿托伐他汀具有确切的抗炎效果,但这种作用并不完全依赖于过氧化物酶体增殖体激活受体γ途径。     

模拟高原低氧对大鼠皮质和海马神经颗粒素表达的影响

目的:分析高原低氧环境对大鼠大脑皮质、海马神经颗粒素表达的影响以及与学习记忆的关系。方法:实验于2005-01/07在中国协和医科大学基础医学院病理生理学系实验室进行。取成年健康雄性Wistar大鼠20只,随机分成对照组和模拟高原低氧组,每组10只。置于模拟海拔5000m高度的低压舱内4周,复制慢性高原低氧动物模型。低氧结束后进行Morris水迷宫实验,测试大鼠空间学习记忆能力的改变。采用反转录-聚合酶链反应和Westernblot方法分别检测皮质和海马中神经颗粒素mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:大鼠20只全部进入结果分析,无脱失值。①模拟高原低氧组的逃避潜伏期明显低于对照组,差异有显著性[(32.70±5.01),(51.30±7.11)s,t=6.76,P<0.01]。②神经颗粒素mRNA在大鼠皮质、海马中均有表达。与对照组相比,皮质组织中神经颗粒素mRNA在4周低氧后明显下降,差异有显著性[(1.39±0.19),(0.98±0.20),t=3.351,P<0.01],而海马中组织内神经颗粒素mRNA的水平与对照组接近,差异无显著性[(1.33±0.42),(1.16±0.27),P>0.05]。③两组大鼠皮质,海马的神经颗粒素均有表达,慢性低氧后模拟高原低氧组皮质中神经颗粒素比对照组明显降低,差异有显著性[(96.32±7.50),(57.23±13.41),t=7.307,P<0.01]。而海马中神经颗粒素在两组间未见明显变化[(53.29±8.33),(42.49±19.19)P>0.05]。结论:模拟高原低氧环境使大鼠空间学习记忆能力明显下降,大脑皮质中神经颗粒素mRNA水平和蛋白水平显著降低,而海马中则无明显变化。高原低氧环境下大鼠空间学习记忆能力的下降,可能与皮质中神经颗粒素表达的减少有关。     

低能量氦-氖激光照射对体外培养大鼠海马神经元微管结合蛋白表达的影响

目的探讨氦-氖激光照射对体外培养神经元微管结合蛋（MAP2）表达的影响。 方法采用无血清细胞培养方法,分离并体外培养新生大鼠海马神经元,并以低能量氦-氖激光对其照射,于培养后14d神经元生长旺盛时期取出各组培养皿内盖玻片进行MAP2免疫学组织化学染色,光镜下观察,拍照计数,与其他对照组比较,观察激光照射对神经元微管结合蛋白（MAP2）表达的影响。 结果将氦-氖激光照射组与对照组比较,阳性表达细胞轮廓清晰,照射后阳性表达MAP2的培养神经元数目为（15.85±2.79）个/高倍视野,明显高于对照组［（9.23±2.56）个/高倍视野］的数量,且组间差异有统计学意义（P<0.01）。 结论氦-氖激光照射能促进体外培养新生大鼠海马神经元MAP2的表达。     

阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的 观察阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响.方法 将45只大鼠随机均分为假手术组、模型组及阿托伐他汀组(阿乐组),后两组行左侧输尿管结扎术.阿乐组术前3 d开始给予阿托伐他汀(10 mg·kg-1·d-1)灌胃,其余两组予等量生理盐水灌胃.术后5、10和15 d分别处死各组5只大鼠,取左肾行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,动态观察肾脏病理改变,并用免疫组化方法检测肾小管间质中PPARγ的动态表达.结果 组织病理学显示,模型组呈现进行性肾小管间质面积增宽,纤微化程度加重.假手术组PPARγ主要表达于内髓集合管;模型组PPARγ表达则位于肾小管上皮细胞,半定量分析显示UUO后5 d PPARγ已经明显增高,梗阻后10 d达到峰值,15 d PPARγ已降低,但仍高于假手术组(P均＜0.01).阿乐组肾小管间质中PPARγ表达较同期模型组明显增加(P均＜0.01).结论 UUO模型大鼠肾小管间质PPARγ的表达量增加,并在肾小管部位出现PPARγ的表达;阿托伐他汀可增加PPARγ的表达,从而改善肾小管间质纤维化.     

三七总皂甙对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧为模型,观察三七总皂甙对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:流式细胞术检测凋亡细胞百分率,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca2 浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞LDH的释放。结果:神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧3h时,细胞凋亡百分率明显增高,为19.06%(P<0.01),细胞坏死百分率为6.83%(P<0.01),细胞内Ca2 浓度为169.32nmol/LCa2 浓度(P<0.01),LDH的释放率为27.63%(P<0.01);神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧24h时,细胞凋亡百分率为49.85%(P<0.01),细胞坏死百分率为11.49%(P<0.01),细胞内Ca2 浓度为298.11nmol/L(P<0.01),LDH的释放率为60.35%(P<0.01)。三七总皂甙(25,50mg/L)能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内Ca2 浓度,减少LDH的释放,三七总皂甙的作用随剂量增加而作用增加。结论:三七总皂甙对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2 浓度有关。     

灯盏花素干预体外培养大鼠脑皮质神经元的存活与生长

背景：神经生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化,促进其生长、发育,维持其功能方面具有不可替代的作用。 目的：观察灯盏花素对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响,并初步探讨其机制。 方法：取新生SD大鼠胚胎,取其大脑皮质后,对神经元进行原代培养,随机分为3组,其中灯盏花素组加入10 g/L灯盏花素,对照组加入等量生理盐水,正常组不作任何处理,各组又分为24 h、48 h亚组。对24孔板中各组细胞各时间点采集图像,之后采用RT-PCR技术检测神经生长因子、酪氨酸激酶A mRNA的表达变化。对96孔板中各组细胞不同时间点采用MTT检测神经元生长活力。 结果与结论：正常组和对照组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异（P〉0.05）,但正常组及对照组均有随时间点延长,3个指标均上调（P0.05）,灯盏花素组各时间点较正常组和对照组上调（P〈0.05）。提示灯盏花素促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长,其机制可能是通过上调神经生长因子及其受体TrkA的表达发挥作用。     

Potential effect of mechano growth factor E‐domain peptide on axonal guidance growth in primary cultured cortical neurons of rats

Establishing appropriate synaptic connections and plasticity is a critical need in neuronal regeneration and development. Mechano growth factor (MGF) and its C‐terminal E‐domain peptide with 24 amino acids, MGF‐Ct24E, are potential neuroprotective agents. Our preliminary study indicates that Netrin‐1 can guide axonal growth and its expression is sensitive to MGF, but how MGF regulates the expression of Netrin‐1 and its receptor DCC is still unclear. Here, we investigate the effect of MGF‐Ct24E on the expression of Netrin‐1 and DCC in primary cultured cortical neurons in vitro and the adult rat brain in vivo. MTT assay shows that MGF‐Ct24E can significantly protect primary cortical neurons against nerve injury. There is a significant increase in axonal elongation after MGF‐Ct24E treatment at concentrations of 0.5 and 1.0 μg/ml. Real‐time polymerase chain reaction assay indicates that MGF‐Ct24E can effectively promote the expression of Netrin‐1 and DCC in primary cultured cortical neurons. To identify the certain mechanism of MGF‐Ct24E on neuronal guidance and growth, adult rats are subjected to intramuscular injection of MGF‐Ct24E after traumatic brain injury. Rats injected with MGF‐Ct24E start eating and drinking within 14 days, indicating that MGF‐Ct24E can promote rehabilitation. HE staining and immunohistochemistry assays of brain section slices reveal that MGF‐Ct24E treatment can significantly inhibit the haemorrhage of traumatic brain injury and promote expression of Netrin‐1. Further investigation of protein expression by Western blot assay shows that MGF‐Ct24E promotes expression of Netrin‐1 and DCC after nerve injury. MGF‐Ct24E can effectively improve axonal guidance through upregulation of Netrin‐1/DCC signalling in neuronal regeneration. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

Calphostin C对培养神经元缺氧后Bcl-2表达及神经元凋亡的研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)对神经元缺氧凋亡的影响及作用机制.方法建立体外培养孕Wister大鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,在此基础上观察神经元存活率、Bcl-2和凋亡DNA表达的规律;然后用3种不同浓度的PKC催化亚基特异性抑制剂CalphostinC预孵育培养神经元后进行缺血处理,观察神经元上述指标的改变.结果随着缺氧时间的延长和CalphostinC浓度的增加,培养神经元的存活数显著下降、Bcl-2免疫组化阳性细胞数明显减少、TUNEL荧光染色平均荧光强度显著升高.结论(1)PKC和Bcl-2均参与了缺氧神经元凋亡;(2)PKC抑制剂CalphostinC可加重缺氧神经元凋亡;(3)PKC的激活在缺氧神经元的凋亡中起保护作用,且该作用可能是通过促进Bcl-2表达实现的.     

缺血预处理对大鼠皮质神经元缺血耐受性和Bcl-2表达的影响

目的：观察缺血预处理对大鼠原代培养神经元缺血耐受性的影响，并探讨缺血预处理对bcl-2表达的影响。方法：体外培养的原代神经元分为对照组和预处理组，对照组给予类缺血30min复氧复糖培养24h；预处理组经类缺血10min预处理后复氧复糖培养24h后，再给予致死性的类缺血30min复氧复糖培养24h，两组细胞均用TUNEL法检测神经元凋亡，并计算存活和凋亡神经元所占百分率。同时用免疫组化法观察两组细胞bcl-2的表达。结果：对照组神经元的凋亡率明显高于预处理组，对照组bcl-2的表达明显低于预处理组，差异有统计学意义。结论：缺血预处理能够诱导神经元的缺血耐受性，预处理可能通过激活bcl-2增加其表达发挥神经保护作用。     

高压氧对大鼠海马神经元Bcl-2蛋白表达的影响

背景高压氧是治疗急性一氧化碳中毒的首选方法.但是,高压氧治疗急性一氧化碳中毒的机制,尤其是治疗一氧化碳中毒迟发性脑病的机制,目前还不清楚.目的观察急性一氧化碳中毒大鼠海马区神经元病理改变,研究高压氧治疗对一氧化碳中毒大鼠海马区神经元Bcl-2蛋白表达的影响.设计以实验动物为研究对象,完全随机设计,对照实验研究.单位一所军医大学医院的急诊科、一所市级医院的检验科和一所军医大学的高压氧治疗中心.材料实验在解放军第四军医大学航空航天医学系高压氧治疗中心实验室进行,选择60只雄性SD大鼠.干预60只大鼠随机分成3个组(正常对照组、一氧化碳中毒组、一氧化碳中毒高压氧治疗组),每组20只,各组大鼠分别暴露在空气或一氧化碳气体(体积分数为3.2×10-3)中60 min,对一氧化碳中毒高压氧治疗组大鼠行高压氧治疗.制备大鼠海马区脑组织病理切片行常规苏木精-伊红染色和Bcl-2染色,观察一氧化碳中毒后第1,,5和7天大鼠海马区神经元损伤和Bcl-2蛋白表达变化的特点.主要观察指标病理形态学改变和Bcl-2蛋白表达变化.结果一氧化碳中毒组大鼠海马可见大量变性坏死神经元,高压氧治疗组海马区神经元变性坏死减少,cl-2蛋白表达增多,尤以染毒后3和5 d明显(P＜0.05).结论高压氧治疗可以促进急性一氧化碳中毒大鼠海马区神经元Bcl-2蛋白表达,具有保护神经元的作用.     

TGFβ1反义寡核苷酸对人腹膜间皮细胞增殖和纤维连接蛋白的影响

目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防治腹膜纤维化寻找有效途径。方法①人腹膜间皮细胞原代培养,第三代用于实验;②合成特异性针对TGFβ1mRNA转译起始区ASON及正义、错义寡核苷酸,并和阳离子脂质体形成复合物;③将合成的寡核苷酸与第三代腹膜间皮细胞共同孵育24、48h,分为对照组(F12培养基组)、TGFβ1反义寡核苷酸组、TGFβ1正义寡核苷酸组和TGFβ1错义寡核苷酸组,采用MMT法观察细胞增殖,ELISA法测定细胞上清液内FN蛋白含量以及RT-PCR测定FNmRNA表达。结果①TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后,其细胞增殖率明显低于其它各组(P均<0.05);②TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后其上清液中FN蛋白质的含量明显降低;TGFβ1正义寡核苷酸组明显升高(P<0.05);③正义、反义和错义各组寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24h时FNmRNA表达与对照组比较,正义组上调22%,而反义组和错义组分别下调22%和11%。结论TGFβ1反义寡核苷酸能够抑制人腹膜间皮细胞增殖和FN的过度表达。     

威灵仙干预体外培养兔膝关节软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因的表达

背景:有研究显示,威灵仙能够维持和促进软骨细胞合成蛋白多糖与Ⅱ型胶原,并可能通过抑制自细胞介素1水平的增高保护关节软骨,延缓骨关节炎的发展.目的:在以往研究基础上,观察中药威灵仙对体外培养兔膝关节软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制.方法:取新西兰白兔膝关节软骨,剪碎后,采用酶消化法原代分离培养软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定后,取处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0 g/L威灵仙培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养.倒置显微镜下观察原代培养的软骨细胞形态变化及甲苯胺蓝染色鉴定,MTT法检测不同质量浓度威灵仙对软骨细胞增殖影响,RT-PCR法检测转化生长因子β1 mRNA表达.结果与结论:原代软骨细胞呈圆球形,悬浮状态,24 h后大部分细胞贴壁;传代后软骨细胞生长速度加快,融合成片,外观呈典型"铺路石"状;传4代后逐渐出现长梭形软骨细胞,传代培养至6代时,呈成纤维细胞样外观,生长速度明显减慢,传代周期延长.软骨细胞经甲苯胺蓝染色后细胞外基质可见蓝色异染颗粒,细胞核染成深蓝色.不同质量浓度威灵仙均能促进软骨细胞增殖,尤以0.5 g/L增殖效果明显,且增殖高峰出现在威灵仙干预后的第3天.0.05,0.1,0.5,1.0 g/L威灵仙均能促进软骨细胞转化生长因子β1 mRNA表达,4组组间比较差异无显著性意义(P＞0.05),但作用的高峰为0.5g/L组.威灵仙能促进软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA的表达,提示这可能是其治疗骨关节炎的作用及可能机制之一.     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞的影响

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后，观察细胞形态变化，检测细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端合成，从而抑制胃癌细胞的增殖。     

针刺预处理诱导全脑缺血大鼠海马CA1区即刻早期基因c-fos mRNA及其蛋白的表达

目的:观察针刺预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区c-fosmRNA及其蛋白表达的影响,并与缺血预处理的效果进行比较。方法:实验于2005-02/09在黑龙江中医药大学神经电生理实验室完成。①选用健康Wistar大鼠120只,雄性,体质量(250±20)g。采用随机数字表法将120只Wistar大鼠随机分为5组,每组24只:正常对照组:正常饲养,不干预。假手术组:暴露4条血管,不造模;脑缺血组:四动脉阻断法全脑缺血10min制作大鼠全脑缺血模型;脑缺血预处理组:预全脑缺血3min,再灌注24h后再次全脑缺血10min;针刺预处理组:术前7d给予针刺,双侧足三里、曲池穴,双侧连接全能脉冲电疗仪,频率为1Hz,电压为2V,30min/次,针刺百会30min/次,1次/d,7d后全脑缺血10min。②每组分别于术后12,24,48和72h麻醉状态下取材,每个时间点6只大鼠。免疫组织化学法检测海马CA1区c-Fos蛋白阳性细胞数,原位分子杂交技术检测大鼠海马CA1区c-fosmRNA表达。③计量资料差异比较采用单因素方差分析,两组间比较采用Newman-Keulsq检验。结果:120只大鼠均进入结果分析。①脑海马CA1区c-Fos阳性细胞数:正常对照组和假手术组无;脑缺血组少量表达,术后48h为高峰眼(23.35±7.68)个/mm2演,而脑缺血预处理组和针刺预处理组术后24,48,72h比较,差异不明显,但均明显高于脑缺血组(P<0.05)。②脑海马CA1区c-fosmRNA阳性细胞数:正常对照组和假手术组无;脑缺血组少量表达,术后72h为高峰眼(20.87±6.67)个/mm2,而脑缺血预处理组和针刺预处理组术后24,48,72h比较,差异不明显,但均明显高于脑缺血组(P<0.05)。结论:针刺预处理和脑缺血预处理均可能通过上调c-fosmRNA表达而减轻严重缺血后细胞凋亡,促成脑缺血耐受的产生。