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相似文献
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1.
目的 观察结直肠癌细胞株趋化因子受体CXCR4的表达及其趋化实验,探讨CXCR4在结直肠癌转移中的作用.方法 培养结直肠癌细胞株HT-29、SW480,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色、Western blot检测结直肠癌细胞株的趋化因子受体CXCR4表达.采用SDF-1诱导的趋化实验模型检测两种结直肠癌细胞株的趋化活动.结果 免疫组织化学检测每100个HT-29或SW480细胞表达CXCR4蛋白的阳性率分别为48.7%和52.6%,RT-PCR和Western blot检测显示CXCR4呈阳性表达;趋化实验表明区化因子SDF-1处理组的细胞移动计数(HT-29:27.6±3.9;SW480:25.3±4.4)显著高于空白对照组(HT-29:9.6±2.5;SW480:9.8±2.1)和抗体处理组(HT-29:9.1±3.1;SW480:9.3±2.0).结论 结直肠癌细胞株可表达CXCR4,趋化因子SDF-1可以趋化结直肠癌细胞.  相似文献   

2.
目的探究微小RNA 562(miR-562)调控成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响。方法选取2019年10月至2020年10月十堰市人民医院(湖北医药学院附属人民医院)25例行手术切除术的结直肠癌患者, 获取其结直肠癌组织及肿瘤边缘>5 cm处正常癌旁组织样本。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测癌旁组织、结肠癌组织、人正常结直肠细胞(FHC细胞)和人结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HT29及HCT116细胞)中miR-562的表达。将SW480细胞分为对照组、miR-NC组、miR-562 mimics组、miR-562 mimics+pcDNA3.1组、miR-562 mimics+pcDNA3.1-FGFR1组。CCK-8法检测SW480细胞增殖;Transwell法检测SW480细胞侵袭迁移;双荧光素酶报告基因检测miR-562和FGFR1靶向关系;Western blot检测SW480细胞中FGFR1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达情况。结果与癌旁组织相比, 结肠癌组织中miR-5...  相似文献   

3.
目的 探讨多种MAGE基因在结直肠癌组织中的表达及意义.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MAGE-A1,MAGE-A3,MAGE-A4和MAGE-A10基因在56例结直肠癌配对癌组织、癌旁组织及四种(SW620,HCT116,HT-29,SW480)结肠癌肿瘤细胞系中的mRNA表达.统计学方法利用SPSS13.0统计软件,采用X2检验分析.结果 MAGE-A1,MAGE-A3,MAGE-A4和MAGE-A10基因在结直肠癌癌组织中的表达分别为5%(3/56),52%(29/56),63%(35/56)和34%(19/56),在癌旁组织中不表达.结肠癌细胞系SW620,HCT116和HT-29分别表达3种MAGE基因,结肠癌细胞系SW480表达2种MAGE基因.89%(50/56)和50%(28/56)的结直肠癌组织分别表达至少一种和两种MAGE基因.MAGE-A4和MAGE-A10基因在TNM Ⅲ+Ⅳ期结直肠癌组织中的表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P=0.02和P=0.042,P值均<0.05).结论 MAGE-A3,MAGE-A4和MAGE-A10基因有可能成为结直肠癌免疫治疗的候选靶点;MAGE-A4和MAGE-A10基因可能是结直肠癌的预后标志物.  相似文献   

4.
目的 观察CXC趋化因子受体-5(CXCR5)及其特异性配体CXCL13在结直肠癌组织中的表达,探讨其与临床病理特征、预后的关系.方法 用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测25对结直肠癌及13例结直肠腺瘤冰冻新鲜标本中CXCR5及CXCL13 mRNA的表达,应用免疫组织化学法(IHC)检测153例结直肠癌及相对应的癌旁组织、62例结直肠腺瘤标本中CXCR5及CXCL13蛋白的表达,分析其与临床病理特征、术后生存率的关系.结果 CXCR5及CXCL13mRNA及蛋白表达在结直肠癌组织中的表达率均高于癌旁组织及结直肠腺瘤组织(P均<0.05).CXCR5与CXCL13的mRNA及蛋白表达呈正相关(PCR:r =0.681,P<0.01;IHC:r =0.196,P<0.05).CXCR5-CXCL13蛋白表达与肿瘤的淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期及复发相关;在有淋巴结转移、有远处转移、中晚期患者及出现复发的患者中阳性率都明显较高(P<0.05).此外,CXCL13阳性表达与结直肠癌的组织分化程度相关,分化越差组阳性率越高(P<0.05).CXCR5-CXCL13表达与其他临床病理特征无关(P>0.05).CXCR5及CXCL13阳性表达患者的5年复发率和5年生存率明显差于其阴性表达的患者(5年复发率:CXCR5:48.6%比14.8%,CXCL13:41.5%比22.7%;5年生存率:CXCR5:55.6%比91.4%,CXCL13:61.5%比84.1%)(P<0.05);CXCR5及CXCL13阳性表达患者的中位复发时间和中位生存时间明显短于其阴性表达的患者[中位复发时间:CXCR5 (13.0±1.3)个月比(45.0±7.8)个月,CXCL13(13.0±1.3)个月比(29.0±11.2)个月;中位生存时间:CXCR5(17.0±1.1)个月比(55.0±14.4)个月,CXCL13(17.0±1.9)个月比(25.0±11.2)个月](P<0.05).结论 CXCR5及CXCL13在结直肠癌的发生、发展和转移、复发中可能起着重要的作用,可作为预测结直肠癌转移和复发的有价值指标.  相似文献   

5.
目的 筛选与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的长链非编码RNA(lncRNA).方法 将HT29、SW480、RKO、Lovo和HCT116等5株结直肠癌细胞梯度照光后行克隆形成实验,通过细胞存活率(SF2值)来检测5株细胞的放疗敏感性差异;利用高通量lncRNA芯片筛选在SW480、RKO和Lovo细胞株中两两比较表达差异均大于2倍的lncRNA,并通过实时定量PCR进一步检测所选lncRNA在5株结直肠癌细胞中的表达差异.结果 5株结直肠癌细胞放疗敏感性由低至高(即SF2值由高至低)依次为HT29 (0.83±0.03)、SW480 (0.69±0.02)、RKO (0.53±0.02)、Lovo (0.47±0.05)和HCT116(0.32±0.03)(P<0.01).lncRNA芯片筛选得到5种与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的lncRNA基因,其中R05532、NR_015441和NR_033374基因表达水平与细胞放疗抵抗呈正相关(均P<0.01),而NR_073156和AA745020基因表达水平与细胞放疗抵抗无明显相关性(均P>0.05).结论 R05532、NR_015441和NR_033374三种lncRNA可能成为结直肠癌细胞放疗敏感性的预测分子,其高表达提示放疗抵抗。  相似文献   

6.
目的 探讨血管性血友病因子(vWF)对人结直肠癌细胞生长、黏附和迁移能力的影响.方法 体外培养人结直肠癌细胞株SW480,采用免疫细胞化学方法检测SW480细胞中vWF的表达情况.用vWF抗体对其进行处理,采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞增殖活性和对细胞外基质成分--Ⅳ型胶原黏附能力的变化;Transwell法检测细胞迁移能力的改变.结果 SW480细胞能够表达vWF,染色部位主要位于细胞核,细胞质亦有轻微表达.vWF抗体能够显著抑制SW480细胞的生长,该抑制作用呈剂量及时间依赖性(P〈0.05);20 ms/L vWF抗体处理48 h后,SW480细胞的黏附力明显下降(P〈0.05);迁移能力明显减弱[穿膜细胞数(54.60±11.01)比(97.27±10.01),P〈0.01].结论 人结直肠癌细胞能够表达vWF;vWF对人结直肠细胞的生长、黏附、迁移过程中起重要促进作用.  相似文献   

7.
目的 探讨胃泌素(GAS)对体外培养的人大肠癌SW480细胞株增生的影响,以及与STAT3信号转导通路的关系.方法 通过体外对大肠癌SW480细胞株的培养,分别运用MTT法观察细胞增生活力改变情况,确立胃泌素和丙谷胺处理SW480细胞的最佳浓度;流式细胞仪检测各组最佳药物浓度作用下细胞增生指数的变化;RT-PCR检测各组最佳药物浓度作用下STAT3 mRNA表达水平的变化以及应用SP法检测各组最佳药物浓度作用下SW480细胞PCNA、STAT3蛋白表达水平的变化.结果 5-肽胃泌素在一定范围内(6.25-100μg/mL)能促进大肠癌SW480细胞的增生,且当浓度达25 μg/mL时为最佳浓度(P<0.01);胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对大肠癌SW480细胞增生无明显影响,但丙谷胺在一定范围内(8~128 μg/mL)能明显拮抗5-肽胃泌素促进SW480细胞的增生作用,其最佳浓度为32 μg/mL(P<0.01).5-肽胃泌素组细胞增生指数(37.54±5.17)%显著高于对照组(27.72±5.00)%和联合用药组(27.31±5.76)%(P<0.01).STAT3 mRNA及蛋白表达在5-肽胃泌素组(0.65±0.03,0.19±0.03)明显高于对照组(0.46±0.05,0.12±0.02)及联合用药组(0.48±0.09,0.13±0.03)(P<0.01).结论 5-肽胃泌素对体外大肠癌SW480细胞有促增生作用,但能够被其受体拮抗剂丙谷胺抑制.STAT3信号转导通路参与了胃泌素对大肠癌细胞增生的调控.  相似文献   

8.
目的 观察趋化因子受体CXCR4在结直肠癌组织中的表达及其临床意义,探讨基质衍生因子SDF-1(CXCL12)-CXCR4生物学轴在结直肠癌侵袭转移中的作用.方法 免疫组织化学法检测53例结直肠癌组织及27例正常黏膜组织中CXCR4的表达及分布,并分析高表达CXCR4与结直肠癌患者临床病理特征的关系.反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法检测27例结直肠癌肿瘤组织、正常黏膜及5例肝转移灶内CXCR4 mRNA表达及CXCR4蛋白表达水平.结果 53例结直肠癌组织中CXCR4表达阳性率为73.6%,高表达率(表达超过50%细胞)为45.3%;有淋巴结转移组CXCR4高表达率(65.4%)明显高于无淋巴结转移组(25.9%)(P<0.01),并与肿瘤血管淋巴管浸润有关.随着临床分期的增加,肿瘤组织中CXCR4高表达率有升高趋势.但差异无统计学意义(P>0.05).CXCR4的表达与患者肿瘤部位、大小、浸润深度无关(P>0.05).27例新鲜结直肠癌组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达水平明显高于相应的正常黏膜组织(P<0.01);5例肝转移灶组织中CXCR4表达显著高于对应的原发灶(P<0.01).结论 趋化因子受体CXCR4是一类参与结直肠癌病程进展的重要分子.CXCL12-CXCR4信号通路有望成为结直肠癌治疗的新靶点.  相似文献   

9.
目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620, 同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用两样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降, 其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍, t=7.783, P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍, t=15.72, P<...  相似文献   

10.
目的:研究趋化因子受体CXCR4在结肠直肠癌中的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR法检测8种结肠直肠癌细胞株中CXCR4mRNA表达,应用蛋白印迹法检测细胞株中CXCR4蛋白表达。应用免疫组化染色法、结合组织芯片检测正常结肠直肠黏膜组织54例、结肠直肠癌组织49例中之CXCR4蛋白表达情况,并探讨其与结肠直肠癌临床病理特征的关系。结果:在8种结肠直肠癌细胞株中,CXCR4基因在HT29中表达水平最高。COL0205及SW480次之,HCTll6最低。CXCR4蛋白在结肠直肠癌组织中的表达高于结肠直肠正常黏膜组织,差异具有统计学意义(P=0.000);在伴发转移的结肠直肠癌组织中,其表达比未发生转移者增强,差异具有统计学意义(P=0.024)。结论:CXCR4表达与结肠直肠癌转移存在密切关系,可能成为结肠直肠癌转移潜在治疗靶点。  相似文献   

11.
目的筛选细胞表面趋化因子受体(CXCR4) RNA干扰高效序列,探讨其对SW480细胞生长的影响。方法采用RT-PCR和Western blot方法选择最有效的CXCR4 RNA干扰序列,流式细胞术分析转染该序列后SW480细胞生长情况。结果 sihCXCR4-3序列可使CXCR4 RNA相对含量仅为SW480组的5.4%,CXCR4蛋白相对表达量为18.95%。sihCXCR4-3组细胞数[(0.92±0.06)×105]低于SW480细胞组[(1.38±0.04)×105,P=0.0050]及NCsihCXCR4组[(1.28±0.05)×105,P=0.0256];相对SW480组和NCsihCXCR4组,sihCXCR4-3组的抑制率分别为33.03%及28.00%。sihCXCR4-3组G1期百分率明显低于SW480细胞组[(59.5±0.57)%vs.(74.11±0.54)%,P=0.0167];S期百分率高于SW480组[(23.85±0.24)%vs.(14.62±0.46)%,P=0.0305]和NCsihRNA组[(17.63±0.48)%,P=0.0013]。结论 sihCXCR4-3序列可高效沉默CXCR4基因表达,抑制SW480细胞生长。  相似文献   

12.

Background

Cancer stem-like cells (CSCs) in colorectal cancers (CRC) may account for the failure of treatments because they are resistant to many current anticancer therapies. Salinomycin, a potassium ionophore, was recently identified as a selective inhibitor of breast CSCs.

Methods

The human CRC cell lines HT29 and SW480 were treated with salinomycin and oxaliplatin. Cell viability was determined with cell counting kit 8. Fraction of CD133+ cell subpopulations was assessed by Flow Cytometric analysis. Clonogenecity and migration were determined with soft agar and Boyden chamber assays. Molecular changes were assessed by immunofluorescence staining, RT-PCR, and Western blot analysis.

Results

We report that salinomycin reduces the proportion of CD133+ subpopulations in human CRC HT29 and SW480 cells. Furthermore, salinomycin treatment decreases colony-forming ability and cell motility in HT29 cells. Moreover, salinomycin downregulates the expression of vimentin and induces the E-cadherin expression in HT29 cells.

Conclusions

This study demonstrates the ability of salinomycin to selectively target “CD133+” cell subpopulations and decrease the malignant traits in colorectal cancer lines.  相似文献   

13.
目的 检测具有不同转移能力的结肠癌细胞亚系中皮层肌动蛋白的表达,探讨皮层肌动蛋白的差异表达与结肠癌转移的相关性.方法 本实验应用具有不同肝转移能力的结肠癌细胞系SW1116、人结肠癌皮下5代细胞系(SW1116_5)、人结肠癌肝转移细胞系1代(CRCLM1)和人结肠癌肝转移细胞系3代(CRCLM3).4种细胞在皮下成瘤后再原位种植到裸鼠结肠观察其肝脏转移能力的差异,用Western blotting和real time-PCR检测皮层肌动蛋白表达的差异,同时行体外迁移侵袭实验检测癌细胞的侵袭转移能力的差异,免疫组化方法分析临床86例结肠癌组织中皮层肌动蛋白的表达情况及其与临床病理特征之间的关系.结果 Western blotting和real time-PCR均证实在4种细胞中皮层肌动蛋白表达自SW1116、SW1116_5、CRCLM1、CRCLM3逐渐增高,四者两两比较差异有统计学意义,均P<0.05;动物实验证实CRCLM3(100%)和CRCLM1(89%)与SW1116(40%)和SW1116_5(44%)相比具有较强的转移能力,免疫组化提示皮层肌动蛋白表达在86例中57例(66%)为强阳性,29例(34%)为阴性.结论 皮层肌动蛋白差异表达与结肠癌的转移以及临床分期呈正相关,皮层肌动蛋白有可能成为结肠癌临床分期以及肿瘤转移的判断指标.  相似文献   

14.
目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。  相似文献   

15.
目的 探讨树突状细胞(DC)功能异常对结直肠癌肝转移的影响及其意义.方法 收集2008年1月至2010年6月健康成年人30例、结直肠癌术前、术后无肝转移者30例和术后肝转移30例患者外周血,分离单核细胞后分别加入GM-CSF(1000 U/ml)、IL-4(1000 U/ml)和'TNF-α(1000 U/ml)诱导分化成熟DC,通过加入HT29大肠癌细胞抗原处理(100 μg/ml)或不处理,DC∶T细胞为1∶10,培养7 d,用ELISA方法测定培养液中IFN-γ和IL-10水平,酶标仪测定CCK8和LDH光密度(OD)值,间接测定T细胞增殖和杀伤能力.结果 结直肠癌术后肝转移患者外周血DC在无肿瘤抗原刺激时与健康人T细胞混合培养液IL-10水平显著低于结直肠癌术前患者和健康人[(11.9±1.3)pg/ml比(29.6±9.7)pg/ml、(23.4±8.0)pg/ml,F=4.475,P<0.05].结直肠癌术后肝转移患者外周血DC经肿瘤抗原刺激与健康人T细胞混合培养液IFN-γ水平均显著高于结直肠癌术后和健康人[(34 ± 9)pg/ml比(26±12)pg/ml、(24 ±6) pg/ml,F=5.206,P<0.05].结直肠癌术后肝转移患者DC经HT29肠癌细胞抗原刺激后诱导健康人T淋巴细胞杀伤能力显著高于结直肠癌术前患者和健康成年人[(30.6 ±8.6)pg/ml比(12.1 ± 2.4)pg/ml、(14.9 ±1.7)pg/ml,F=4.147,P<0.05].结论 结直肠癌患者外周血DC在肿瘤抗原刺激下诱导T淋巴细胞产生IL-10,导致肿瘤免疫逃逸,发生肝转移;外源肿瘤抗原刺激能够提高T淋巴细胞杀伤能力.
Abstract:
Objective To observe the clinical significance and effect of dysfunction of dendritic cell( DC) in colorectal cancer with liver metastasis.Methods Peripheral blood were respectively collected from healthy adult donors (30 cases), preoperative and postoperative coloreatal cancer patients without liver metastasis (30 cases) , and 30 postoperative coloreatal cancer patients with liver metastasis from Jan 2008 to Jun 2010.Peripheral blood mononuclear cells were separated, GM-CSF( 1000 U/ml) , IL-4( 1000 U/ml) and TNF-α ( 1000 U /ml) were added into cell culture fluid to induce the mononuclear cells for mature dendritic cells.There were two subgroups, and in antigen processing subgroup the lysate of HT29 colonic carcinoma cells (100 μg/ml) were added into the cell culture fluid.The T lymphocytes from healthy adults were added into two subgroups by ratio of 1∶10 ( DCs∶ T cells) , cocultured for 7 days.The level of INF-γ and IL-10 in cell culture fluid was assayed with ELISA method.The optical density (OD) of CCK8 ans LDH was assayed with ELIASA to indirectly measure the reproductive activity and the killing efficacy of T lymphocytes.Results The IL-10 level in cocultured fluid of peripheral blood DCs in postoperative colorectal carcinoma patients with liver metastasis and T lymphocytes of healthy adults was significantly higher than that of preoperative patients of colorectal carcinoma and health adults without tumor antigenic stimulation(11.9±1.3) pg/ml vs.(29.6±9.7) pg/ml, (23.4±8.0) pg/ml, F =4.475, P <0.05).The IFN-γ level in cocultured fluid of peripheral blood DCs in postoperative colorectal carcinoma patients with liver metastasis and T lymphocytes of healthy adults was significantly higher than that of postoperative patients of colorectal carcinoma and healthy adults with or without tumor antigenic stimulation ( 34 ± 9) pg/ml vs.(26 ± 12 ) pg/ml, (24 ± 6) pg/ml, F = 5.206, P < 0.05).The killing activity of healthy adults T lymphocytes induced by HT29 colonic carcinoma cells in postoperative colorectal carcinoma patients with liver metastasis was significantly higher than that of preoperative patients of colorectal carcinoma and healthy adults (30.6 ±8.6) pg/ml vs.(12.1 ±2.4) pg/ml, (14.9 ± 1.7) pg/ml, F =4.147, P < 0.05).Conclusions T lymphocytes produce IL-10 when indued by DCs from patients with colorectal carcinoma under stimulation of tumor antigen leading to tumor immune escape and liver metastasis.The killing activity of T lymphocytes can be enhanced when stimulated by exogenous tmuor antigen.  相似文献   

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