荧光定量PCR法和显色培养法检测孕妇生殖道无乳链球菌感染阳性率比较

目的比较荧光定量PCR法和显色培养法检测孕妇生殖道无乳链球菌(GBS)感染阳性率,了解检测效果,分析两种方法的优缺点,选择合适的检测方法,提高GBS检出率,保护易感人群。方法应用荧光定量PCR法和显色培养法检测998例妊娠女性孕晚期生殖道GBS感染阳性率,与原有血平板培养法比较,评价这两种检测方法的结果。结果在998例样本中,血平板培养法检测出阳性标本28例,阳性率为2.81%,显色培养法检测出阳性标本61例,阳性率为6.11%,荧光定量PCR法检测出阳性标本84例,阳性率为8.42%。荧光定量PCR法与显色培养法检测GBS阳性率与血平板培养法比较差异均有统计学意义(P<0.05),荧光定量PCR法和显色培养法检测GBS阳性率比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论显色培养法和荧光定量PCR法检测GBS的检出率明显高于血平板培养法,其中荧光定量PCR法检测阳性检出率高于显色培养法。筛查孕妇生殖道GBS带菌情况可指导临床医生对该菌进行预防性治疗,更好地保护易感人群,选择荧光定量PCR法更具优势。     

孕产妇生殖道无乳链球菌的血清型分布及耐药基因分析

目的 了解孕产妇生殖道分离的无乳链球菌(GBS)血清型分布及耐药基因,为临床防治GBS感染和合理使用抗菌药物提供参考依据。方法 选择2020年1月—2021年6月入住某院妊娠晚期且生殖道分泌物检出GBS的孕产妇为研究对象,采用多重聚合酶链式反应(PCR)及基因测序的方法对分离培养的GBS进行基因分型及耐药基因检测。结果 共分离GBS 62株,GBS的血清型分别为Ⅲ型(30株,48.4%)、Ⅰa型(16株,25.8%)、Ⅰb型(8株,12.9%)、Ⅴ型(6株,9.7%)、Ⅵ型(2株,3.2%)。GBS药敏试验结果显示,GBS对四环素、红霉素、克林霉素有着较高的耐药性,耐药率分别为77.4%、71.0%、67.7%,对氨苄西林、青霉素G、喹奴普丁/达福普汀、利奈唑胺、万古霉素等均不耐药。GBS耐药菌株：四环素耐药基因tetM、tetO、tetL携带率分别为75.0%(36/48)、33.3%(16/48)、8.3%(4/48);红霉素耐药基因ermB、mefA/E、ermA、ermTR携带率分别为72.7%(32/44)、22.7%(10/44)、18.2%(8/44)、13.6%(6/4...     

无乳链球菌的临床感染分布及耐药性分析

目的为了解无乳链球菌临床感染分布及耐药性,探究无乳链球菌临床抗菌药物的选择,以指导临床医师治疗。方法收集2010-2012年医院临床7 356例患者送检的标本,对其进行常规培养鉴定,采用纸片扩散法对分离出的无乳链球菌进行药敏试验,并对红霉素耐药、克林霉素敏感的菌株进行D试验检测,分析其耐药状况。结果 96株无乳链球菌中46株来自尿液,占47.92%,21株来自阴道分泌物,占21.88%,12株来自前列腺液,占12.50%;无乳链球菌对万古霉素、利奈唑胺、青霉素和头孢曲松均未发现耐药株,其中仅青霉素和头孢曲松出现中介菌株,中介率分别为20.83%和18.75%;左氧氟沙星的耐药率较低为6.25%;红霉素和克林霉素耐药率较高,分别为55.21%和43.75%;对11株红霉素耐药而克林霉素敏感和中介无乳链球菌D试验检测发现4株阳性,D试验阳性率为36.36%。结论医院无乳链球菌主要分离自泌尿道和生殖道系统,非泌尿系统和生殖系统分离株比例逐渐上升,对青霉素、氨苄西林和头孢菌素类抗菌药物的敏感性较高,而对大环内酯类和克林霉素的耐药性较强,此外,加做D试验可有效避免临床不合理使用克林霉素。     

无乳链球菌引起前列腺炎1例

患者,男,38岁,尿急、尿频、排尿不畅、尿道口红肿有灼热感、下腹部不适、性功能下降等症状1年余,期间曾到当地几家医院和诊所诊疗,效果欠佳。2010年10月12日来笔者所在医院就诊,自述有不洁性交史。查体：包皮过长,尿道口潮红,肛门指检可触及前列腺肿大,质较硬,触痛明显。前列腺液常规检查：WBC15～20／HP,脓细胞偶见成堆,卵磷脂小体（＋）。用无菌操作取前列腺液进行培养,可见无乳链球菌生长,以敏感抗生素青霉素治疗1周后,尿急、尿频、尿痛等症状消失,复查前列腺液常规正常,前列腺液培养无细菌生长。     

新生儿无乳链球菌败血症临床分析

目的:探讨新生儿无乳链球菌败血症的临床特点及耐药性。方法:对11例新生儿无乳链球菌败血症患儿的临床资料和治疗结果进行回顾性分析。结果:2012年确诊新生儿败血症25例中无乳链球菌感染占44.0%,其中早发败血症7例,晚发败血症4例;临床表现发热6例,黄疸5例,肺炎5例(早发感染占4例),颅内感染4例(晚发感染占3例);所有血培养对青霉素、头孢类抗生素和万古霉素均无耐药性,对四环素耐药100.0%,对克林霉素耐药72.7%。结论:无乳链球菌败血症早发感染临床以呼吸道表现为主,晚发感染常合并颅内感染,需注意完善脑脊液检查。治疗上首选青霉素、头孢菌素,克林霉素耐药性高不宜临床选用。     

实时荧光定量PCR检测胃癌组织Twist基因的结果分析

目的分析实时荧光定量PCR检测胃癌组织Twist基因的临床意义。方法用实时荧光定量PCR的方法检测正常胃黏膜、胃癌原发灶、胃癌转移灶组织中TwistmRNA的表达含量。并以Twist基因和18stRNA含量的比值作为评价Twist表达水平的指标,组间进行配对t检验。结果Twist／18stRNA（10g比值）正常组为0．139±0．003;原发组为0．304±0．046;转移组为0．654±0．015。原发性胃癌组织及转移组织中Twist基因表达水平与正常胃黏膜组织比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;转移组与原发组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Twist基因在正常胃黏膜组织中表达量较低,在胃癌及其转移组织中表达水平较高,而且Twist基因的表达水平与胃癌转移程度存在一定相关性。可以辅助诊断和观察胃癌术后疗效。     

荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染方法的建立

目的 建立Taqman探针法荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法.方法 针对肺炎链球菌自溶素基因设计引物及探针,建立荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链球菌感染.采用肺炎链球菌标准株,构建质粒,用质粒构建标准品,扩增标准品,绘制标准曲线并检验新建荧光定量PCR的敏感性,采用本实验冻存其他菌DNA样本,检测其特异性;采集2015年9月至2015年12月份北京地区家5家医院儿童门诊或病房,诊断为呼吸道感染患儿的咽拭子标本133例,对新建荧光定量PCR法进行临床样本的验证.结果 绘制了荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链菌感染的标准曲线;新建荧光定量PCR可检测的肺炎链球菌最低拷贝数为10copies/μL;新建荧光定量PCR可成功区分几种病原体DNA,具有较好特异性;采用新建荧光定量PCR检测临床样本132例,其中肺炎链球菌阳性25例,阳性率为18.94%.结论 新建立的荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床样本的检验.     

孕晚期妇女定植无乳链球菌的三种筛查方法比较

目的探讨妊娠晚期孕产妇生殖道/直肠内B族链球菌的定植情况,并通过比较常规普通细菌培养、显色培养及聚合酶链反应3种检测方法鉴定无乳链球菌(GBS)的特异性及灵敏度。方法选择2016年1月1日-2016年3月31日医院就诊469例孕晚期妇女,于35~37孕周产前检查时或早产孕妇在入院时,取阴道下段1/3处分泌物及直肠拭子采用常规培养鉴定、显色培养鉴定及聚合酶链反应3种方法进行GBS检测,比较3种方法的GBS检测阳性率与特异性及灵敏度,数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。结果 469例孕晚期妇女经普通细菌培养检测阳性30例,阳性率为6.4%,增菌后的显色培养检测阳性41例,阳性率为8.7%,增菌后的聚合酶链反应检测阳性45例,阳性率9.6%,增菌后的显色培养和聚合酶链反应检测阳性率高于普通细菌培养检测阳性率,差异有统计学意义(P<0.05),而增菌后的显色培养和聚合酶链反应检测阳性率之间相比,差异无统计学意义。结论通过针对不同检测方法的比较,找到方法学之间的差异,增菌后的显色培养和聚合酶链反应检测方法对于GBS的筛查有更高的阳性率和灵敏度,在临床上可选择使用该种方法进行筛查,更利于GBS的检出,降低新生儿感染率。     

实时荧光定量PCR法检测MTHFR C677T基因多态性方法的建立和应用

目的:建立一种准确、快速、自动化程度较高的检测亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的方法,并观察中国北方健康人群中MTHFR C677T基因频率。方法:应用MGB探针的原理建立MTHFR C677T基因多态的检测方法,与传统PCR-RFLP方法作对照,共检测标本88例,并计算各基因型频率。结果:荧光定量方法可以快速完成MTHFR C677T基因多态性的检测,检测结果得到传统PCR-RFLP方法的证实。88例北京汉族正常人群MTHFR基因的各种基因型频率为25％、42％和33％。结论:该方法准确、检测效率高,适用于临床实验室及流行病学调查研究。     

实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用

目的:建立一种快速、定量、特异、灵敏的PCR方法用于对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的早期诊断和疫情监测。方法:根据GenBank登录的IHHNV毒株序列,使用生物学软件进行序列比对,在IHHNV保守区序列设计特异性引物与Taqm an探针。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性、灵敏度、重复性,并与普通PCR进行盲样测试的比对。结果:本法线性范围5×102~5×107拷贝/ml,检出限5×101拷贝/ml,灵敏度超过普通PCR100倍,特异性高于普通PCR,重复性极好(S=0.035~0.39,CV=0.13%~1.05%),检测时间为普通PCR的1/5,现场盲样IHHNV检出阳性率高于普通PCR 26.00%。结论:本研究建立Taqm an实时荧光定量PCR用于对虾IH-HNV检测具有特异、灵敏、快速、定量、重复性好等优点。     

临床患者感染无乳链球菌分离株的耐药性分析

目的了解无乳链球菌感染的临床分布及耐药特点,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法无乳链球菌分离自2011年1月-2012年12月门诊及住院患者送检各类感染标本,采用纸片扩散法(K-B法)进行抗菌药物敏感性试验,红霉素和克林霉素双纸片协同试验(D试验)确定其耐药表型。结果分离的118株无乳链球菌主要分离自妇产科,占36.4%,标本主要来源于阴道分泌物,占36.4%;对红霉素和克林霉素的耐药率最高,分别为58.5%和53.4%,其中耐药表型以cMLSB型为主,对左氧氟沙星的耐药率次之,为22.0%;2011年分离的无乳链球菌对左氧氟沙星的耐药率28.6%,高于2010年的12.2%(P<0.05);其中未发现对青霉素、头孢曲松、头孢噻肟、万古霉素耐药菌株。结论青霉素仍可作为治疗无乳链球菌感染的首选药物;红霉素和克林霉素作为预防和治疗无乳链球菌感染的药物应用价值应重新评价,近年来喹诺酮类抗菌药物的耐药率较高应给予重视。     

快速PCR检测猪链球菌2型方法的研究及应用

目的建立可同时检测猪链球菌2型5种特异基因的快速PCR方法。方法根据已有的5对猪链球菌2型特异基因引物,运用高效聚合酶及优化反应程序,建立针对猪链球菌2型的16sRNA基因、荚膜多糖基因(cps-2J)、溶菌酶释放蛋白相关基因(mrp)、细胞外因子基因(ef)和溶血素基因(sly)的快速PCR方法。结果此法可在一台PCR仪上30min同时扩增猪链球菌2型的5种特异基因,敏感性和特异性与普通PCR无差别。对35株猪链球菌2型菌株的检出率为100%。结论所建立的检测方法具有便捷、快速的优点,可应用于人畜间猪链球菌2型突发疫情的实验室快速诊断。     

社区获得性泌尿生殖道无乳链球菌感染4年监测

目的 了解社区获得性泌尿生殖道无乳链球菌感染现状及耐药性分析,以指导临床合理用药.方法 对2007年1月-2010年12月送检的泌尿生殖道标本所分离的无乳链球菌,进行回顾性分析.结果 红霉素、克林霉素对无乳链球菌的耐药率呈逐年上升趋势,且增长速度很快;四环素与左氧氟沙星的耐药率4年间无明显差异;青霉素耐药率均＜10.0％;万古霉素及利奈唑胺未发现耐药;D试验阳性率为28.6％.结论 在诊治无乳链球菌感染的过程中,应尽量减少大环内酯类药物及克林霉素的使用,青霉素类抗菌药物已不能作为预防和经验治疗用药,临床医师应根据药敏结果合理选择抗菌药物.     

新生儿监护病房无乳链球菌临床分布及耐药性分析

目的了解医院新生儿监护病房无乳链球菌临床分布及采取耐药性,为抗菌药物的使用及采取干预措施提供参考依据。方法收集2010—2014年某院新生儿监护病房新生儿送检的标本,对新生儿分离的62株无乳链球菌来源科室和药敏试验结果进行分析。结果 62株无乳链球菌的科室分布以足月新生儿监护病房为主,占64.52%;标本来源以血为主,占90.33%,其次为脑脊液(6.45%)、痰和分泌物(均为1.61%)。无乳链球菌对四环素的耐药率最高,为79.03%;对红霉素和克林霉素的耐药率均为74.19%,对左氧氟沙星的耐药率为40.32%,对青霉素、氨苄西林100%敏感。结论无乳链球菌感染在新生儿监护病房中以足月新生儿监护病房为主,对多种抗菌药物有较高的耐药率,青霉素和氨苄西林可作为治疗无乳链球菌感染的优选药物。     

围产期孕妇生殖道分泌物无乳链球菌的分布及耐药分析

目的 分析围产期孕妇生殖道分泌物中无乳链球菌的分布情况及耐药性,为临床预防和合理使用抗生素提供依据.方法 对2016年1月-2019年12月本院产科围产期孕妇送检的24244例宫颈分泌物进行细菌培养鉴定和药敏试验,对分离出的无乳链球菌进行药敏分析.结果 从24244例围产期孕妇宫颈分泌物中分离细菌764例,阳性率为3....     

2011-2017年孕妇生殖道无乳链球菌检出及其耐药性变化

目的了解某地区孕妇生殖道无乳链球菌的感染及其耐药状况,为临床诊断与治疗提供依据。方法收集2011年1月—2017年12月广东省人民医院产科病区及门诊孕妇送检的生殖道分泌物培养的结果,比较分析各年份无乳链球菌检出情况及耐药率变化趋势。结果共送检31 569份生殖道分泌物标本,检出病原菌1 940株,其中无乳链球菌591株,占30.46%。无乳链球菌在生殖道分泌物标本中的检出率为1.87%;2011—2017年无乳链球菌药敏结果中,未发现对青霉素、氨苄西林、奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素耐药菌株;对环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素、红霉素的耐药率较高,分别为19.80%～28.97%、19.80%～28.95%、26.73%～39.29%、44.05%～66.34%;对四环素的耐药率最高,为80.37%～94.29%,但有逐年下降的趋势（P＜0.05）。结论无乳链球菌为孕妇生殖道感染的主要病原菌,分析其耐药性,合理、规范的使用抗菌药物,可减少孕妇及新生儿无乳链球菌感染的发生。     

广州地区ST17无乳链球菌的分子流行病学特征及快速鉴定

目的了解广州地区ST17无乳链球菌的分子流行病学特征,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(Matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)建立其快速筛查方法。方法收集侵袭性无乳链球菌98株,进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)和分子血清学分型,进行药敏试验并检测红霉素和克林霉素耐药基因(ermB、ermA/E、ermTR和linB基因),运用MALDI-TOF MS分析ST17菌株的特征质谱峰。结果所有菌株被分为10个ST,来源于7个克隆群,其中ST17占16.3%。ST17菌株均为血清学Ⅲ型。ST17菌株对红霉素与克林霉素耐药率分别为93.8%和87.5%,检出ermB和mefA/E两种耐药基因,阳性率分别为100.0%和20.0%,未检出ermTR和linB基因。ST17菌株与非ST17菌株对红霉素和克林霉素耐药性以及ermB和mefA/E携带率的差异均具有统计学意义(P<0.05)。10种ST中,仅ST17在7620 Da处有特征质谱峰。结论广州地区流行的侵袭性无乳链球菌具有较高遗传多样性。ST17/血清学Ⅲ型菌株是该地区流行的主要侵袭性菌株之一,对红霉素和克林霉素耐药率高,红霉素耐药主要由ermB介导。MALDI-TOF MS可用于ST17菌株的快速筛查。     

猪链球菌2型多重PCR鉴定方法建立

目的建立猪链球菌2型多重PCR鉴定方法。方法根据猪链球菌种特异基因16S rRNA序列和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因cps2 J基因序列,设计和合成2对特异引物,通过条件和体系优化,建立多重PCR检测方法。结果猪链球菌2型参考株及18株分离株均扩增到清晰的目的条带,而6株非猪链球菌2型参考菌株不能扩增出目的条带。结论多重PCR可以用于猪链球菌2型检测,特异性和敏感性好,为该病的快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术方法。     

In silico analysis of candidate proteins sharing homology with Streptococcus agalactiae proteins and their role in male infertility

Leukocytospermia is a physiologic condition defined as human semen with a leukocyte count of >1 x 10⁶ cells/ml that is often correlated with male infertility. Moreover, bacteriospermia has been associated with leukocytospermia ultimately leading to male infertility. We have found that semen samples with >1 x 10⁶/ml leukocytes and/or bacteriospermia have oxidative predominance as evidenced by augmented protein carbonyl and lipid peroxidation status of the semen which is implicated in sperm dysfunction. It has been reported that Streptococcus agalactiae is present in bacteriospermic samples. Previous research has shown that human leukocyte antigen beta chain paralog (HLA-DRB) alleles interact best with the infected sperm cells rather than the non-infected cells. Little is known about the interaction of major histocompatibility complex (MHC) present on leukocytes with the sperm upon bacterial infection and how it induces an immunological response which we have addressed by epitope mapping. Therefore, we examined MHC class II derived bacterial peptides which might have human sperm-related functional aspects. Twenty-two S. agalactiae proteins were obtained from PUBMED protein database for our study. Protein sequences with more than two accession numbers were aligned using CLUSTAL Omega to check their conservation pattern. Each protein sequence was then analyzed for T-cell epitope prediction against HLA-DRB alleles using the immune epitope database (IEDB) analysis tool. Out of a plethora of peptides obtained from this analysis, peptides corresponding to proteins of interest such as DNA binding response regulator, hyaluronate lyase and laminin binding protein were screened against the human proteome using Blastp. Interestingly, we have found bacterial peptides sharing homology with human peptides deciphering some of the important sperm functions. Antibodies raised against these probable bacterial antigens of fertility will not only help us understand the mechanism of leukocytospermia/bacteriospermia induced male factor infertility but also open new avenues for immunocontraception.

Abbreviations: AA: amino acid; ASA: antisperm antibodies; GBS: group B streptococcus; HLA: human leukocyte antigen; HAS3: hyaluronan synthase 3: IEDB: immune epitope database; MAPO2: O⁶–methylguanine–induced apoptosis 2; MHC: major histocompatibility complex; ROS: reactive oxygen species; Rosbin1: round spermatid basic protein 1; S. agalactiae: Streptococcus agalactiae;SA: sperm antigen; SPATA17: spermatogenesis associated protein17; SPNR: spermatid perinuclear RNA binding protein; TEX15: testis-expressed sequence 15 protein; TOPAZ: testis– and ovary-specific PAZ domain–containing protein; TPABP: testis-specific poly–A binding protein; TPAP: testis–specific poly(A) polymerase; WHO: World Health Organization     

Serotype III Streptococcus agalactiae from bovine milk and human neonatal infections

Streptococcus agalactiae (group B streptococcus [GBS]) causes invasive human infections and bovine mastitis. This study examined the genetic relationship between bovine and human serotype III GBS by using molecular techniques that classify human serotype III GBS into four distinct phylogenetic lineages. Bovine serotype III GBS were largely contained in two lineages, which are distinct from the two major lineages (restriction digest types III-2 and III-3) that infect human neonates. One of the bovine lineages closely resembles the human III-1 lineage, whose members occasionally cause human neonatal infections. The bovine strains in the other lineage characteristically have an initiation factor IF2 gene (infB) H allele and multilocus sequence types that are not found in human GBS strains. Evidence suggests that this "H allele" lineage is related to the human III-3 lineage. These results support the assertion that human and bovine GBS are largely unrelated and provide further insight into the genetic relation between human and bovine GBS.