尿流式细胞术联合MALDI-TOFMS技术鉴定尿标本病原菌的应用

目的探讨尿流式细胞术联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定尿标本病原菌的应用。方法收集2017年1-10月住院及门诊泌尿系统感染患者送检的清洁中段尿阳性标本234份。所有样本均通过尿流式细胞仪(UF-1000i)进行菌量计数;根据主要病原菌不同浓度的菌量,由MALDI-TOF MS判断分值来判定结果的可靠性。MALDI-TOF MS技术直接鉴定中段尿标本中大肠埃希菌(UF-1000i细菌计数10~5个/ml)与Biotyper数据库中的大肠埃希菌最佳匹配图谱进行比较。MALDI-TOF MS技术鉴定血琼脂平板上与中段尿不同菌量计数的大肠埃希菌的光谱比较。结果 MALDI-TOF MS直接法鉴定大肠埃希菌为可靠鉴定的最低菌量浓度为6×10~4个/ml,铜绿假单胞菌最低菌量浓度为1×10~5个/ml,金黄色葡萄球菌最低菌量浓度为3×10~5个/ml,粪肠球菌最低菌量浓度为5×10~5个/ml。MALDI-TOF MS技术直接鉴定中段尿标本中大肠埃希菌(UF-1000i细菌计数10~5个/ml),鉴定分值为2.245。利用MALDI-TOF MS直接鉴定与Vitek2-Compact全自动细菌鉴定进行对比,鉴定结果一致率为90.39%(207/229);中段尿培养为2种菌时,MALDI-TOF MS直接鉴定法鉴定结果为不可靠。MALDI-TOF MS直接法鉴定结果中鉴定到种水平207例占90.39%(207/229),鉴定到属水平216例94.32%(216/229),5.68%(13/229)MALDI-TOF MS未提供可靠的鉴定结果。结论尿流式细胞术与MALDITOF MS技术联合直接鉴定尿液中病原菌,是一种可靠细菌鉴定的新方法,其快速准确的鉴定,可为临床治疗提供病原学依据,具有一定的临床价值。     

通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统直接快速鉴定阳性血培养

目的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在临床微生物实验室的应用,为阳性血培养中微生物鉴定提供了革命性的新方法,我们报告一种改良的利用MALDI-TOF质谱直接鉴定阳性血培养的方法。方法 2011年10月-2012年10月共收集312瓶阳性培养物,细菌分别属于12个不同属和32个种,MALDI-TOF质谱鉴定的细菌同时进行了常规生化法鉴定,其中不符合的部分通过序列分型明确。结果 200株革兰阳性菌中,161株(80.5%)准确鉴定到属以上水平,121株(60.5%)准确鉴定到种;112株革兰阴性菌中,101株(90.2%)准确鉴定到属以上水平,81株(72.3%)准确鉴定到种水平;MALDI-TOF质谱鉴定革兰阴性菌,在属以上水平和种水平上,准确率均高于革兰阳性菌。结论通过这种方法能在1h内快速、鉴定阳性血培养中的常见细菌,如果将此项技术常规应用于临床,将显著增加菌血症患者在24h内得到最佳抗菌药物治疗的比例。     

通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统直接快速鉴定阳性血培养北大核心CSCD

目的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在临床微生物实验室的应用,为阳性血培养中微生物鉴定提供了革命性的新方法,我们报告一种改良的利用MALDI-TOF质谱直接鉴定阳性血培养的方法。方法 2011年10月-2012年10月共收集312瓶阳性培养物,细菌分别属于12个不同属和32个种,MALDI-TOF质谱鉴定的细菌同时进行了常规生化法鉴定,其中不符合的部分通过序列分型明确。结果 200株革兰阳性菌中,161株(80.5%)准确鉴定到属以上水平,121株(60.5%)准确鉴定到种;112株革兰阴性菌中,101株(90.2%)准确鉴定到属以上水平,81株(72.3%)准确鉴定到种水平;MALDI-TOF质谱鉴定革兰阴性菌,在属以上水平和种水平上,准确率均高于革兰阳性菌。结论通过这种方法能在1h内快速、鉴定阳性血培养中的常见细菌,如果将此项技术常规应用于临床,将显著增加菌血症患者在24h内得到最佳抗菌药物治疗的比例。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对血流感染病原菌的快速鉴定及直接药敏结果的对比研究

目的比较血培养阳性标本中病原菌经血平板孵育通过VITEK基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)检测的准确率、根据质谱鉴定结果同步进行直接药敏试验结果的准确率。方法新方法:对2018年6月-12月单细菌报阳的60瓶血培养标本-分离胶促凝管联合3 h血平板孵育,使用VITEK MALDI-TOF MS直接对菌膜鉴定,鉴定出菌属/种的细菌立即通过VITEK 2 Compact进行药敏试验;常规方法:对血培养报阳标本进行常规转种、质谱鉴定和药敏分析。比较2种方法对细菌鉴定及药敏的准确率。结果新方法对细菌属或种水平鉴定的准确率为95%。抗菌药物敏感性测试结果:细菌-抗菌药物组合数总体一致性为98. 7%。结论新方法对报阳血培养的细菌鉴定及抗菌药物敏感性试验结果比常规方法提前至少24 h,且操作简单和无需添加额外试剂,对于及时指导临床用药具有重要意义。     

显色培养基对酵母菌 MALDI-TOF MS 鉴定结果的影响评估

目的评估真菌显色培养基及培养时间对假丝酵母菌和新型隐球菌在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定结果的影响。方法收集医院2017年1月-2018年3月临床分离的酵母菌104株,甲酸萃取法提取菌体核糖体蛋白,MALDI-TOF MS法获得其在真菌显色琼脂平板、血琼脂平板及沙保罗琼脂平板培养24 h、48 h、72 h的鉴定结果,记录质谱分值并分组,应用SPSS 20.0统计软件进行数据处理与分析。结果除光滑假丝酵母在血琼脂平板培养24 h生长欠佳而难以获取质谱分值外,受试菌株在3种培养基无论何种培养时间经MALDI-TOF MS均得到准确鉴定。显色琼脂平板和血琼脂平板上培养24 h、48 h、72 h鉴定分值一致,比较差异无统计学意义(χ~2=0.541,1.857,0.084;P=0.462,0.173,0.772);显色琼脂平板与沙保罗琼脂平板培养经MALDI-TOF MS鉴定,24 h、48 h鉴定分值一致,但在72 h时鉴定分值比较差异有统计学意义(χ~2=12.888,P<0.001),表现为热带假丝酵母和新型隐球菌在显色琼脂平板的鉴定结果优于沙保罗琼脂平板(χ~2=7.000,9.167;P=0.008,0.002)。结论真菌显色培养基上生长菌落对MALDI-TOF MS鉴定结果无影响,适于临床常规应用。     

评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对葡萄球菌属的鉴定能力

目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在临床鉴定常见葡萄球菌属的能力。方法采用MALDI-TOF MS对2011-2013年收集的151株葡萄球菌属进行分析比较;对鉴定结果不一致的菌株,用16SrRNA测序方法进行最后鉴定,评价MALDI-TOF MS的鉴定能力。结果 151株葡萄球菌属用MALDI-TOF MS与VITEK-2鉴定结果一致的有135株,符合率为89.4%,两种鉴定方法对39株金黄色葡萄球菌、34株表皮葡萄球菌及1株施氏葡萄球菌的鉴定符合率为100.0%;对16株结果不一致的随即用16SrRNA作进一步分析,其中15株鉴定结果与MALDI-TOF MS结果一致,MALDI-TOF MS与16SrRNA测序法对葡萄球菌属的鉴定能力符合率更高。结论与传统的VITEK-2鉴定方法比较,MALOT-TOF MS具有简便、快速、敏感、准确等优点,可用于葡萄球菌属的鉴定。     

MALDI-TOF MS在液体培养分枝杆菌菌种鉴定中的研究

目的研究基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对液体培养分枝杆菌菌种鉴定的能力。方法回顾性收集本院2017年10月-2018年10月液体培养分离到的结核分枝杆菌40株,非结核分枝杆菌85株,采用MALDI-TOF MS菌种鉴定,与传统生化鉴定方法和16S r DNA测序结果进行比较,以测序结果为金标准分析MALDITOF MS对分枝杆菌菌种鉴定的准确性,评价其应用价值。结果测序结果46株为结核分枝杆菌,40株符合初筛结果,另有6株初筛非结核菌株鉴定为结核分枝杆菌,78株为非结核分枝杆菌,1株奴卡菌。MALDI-TOF MS从46株结核分枝杆菌中正确鉴定出44株,正确鉴定率为95.65%;78株非结核分枝杆菌中,69株正确鉴定,1株奴卡菌正确鉴定,NTM正确鉴定率为88.46%(69/78);奴卡菌鉴定率为100.00%(1/1),另对常见堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌等非结核分枝杆菌均能正确鉴定。结论MALDI-TOF MS对液体培养分枝杆菌具有较高鉴定率,是一种快速、简便准确的鉴定方法,在临床应用中具有重要价值。     

血培养报阳时间及病原菌分布

目的了解血培养阳性标本的菌群分布及报阳时间,为实验室病原菌诊断及临床制定治疗方案提供依据。方法收集2015年5—11月某院临床各科室送检的血标本,记录血培养报阳时间并将所获得病原菌鉴定至菌种。结果从血培养标本中共分离157株病原菌,其中革兰阳性球菌占31.85%,革兰阴性杆菌占57.32%,真菌占10.83%。培养阳性病原菌及其报阳的中位时间分别为:肠杆菌科细菌0.50 d,非发酵菌0.63 d,肠球菌属0.60 d,链球菌属0.80 d,葡萄球菌属1.01 d,真菌1.44 d。结论血培养阳性标本报阳时间从早到晚依次是:肠杆菌科细菌、肠球菌属、非发酵菌属、链球菌属、葡萄球菌属、真菌。引起血流感染的病原菌均在4 d内仪器阳性报警,大多数病原菌在1 d内报阳性。     

HB&L微生物培养体系用于血流感染中革兰阴性菌快速鉴定及药敏试验的方法研究

目的评价HBL微生物培养体系对血培养阳性标本病原菌短期继代培养后,直接鉴定和药敏试验的准确性和时效性,为血流感染快速诊断提供新方法。方法收集2020年1-12月解放军总医院第六医学中心经常规方法鉴定的113份单一细菌的革兰阴性菌,置于HBL微生物培养体系继代培养并前处理后直接MALDI-TOF MS鉴定和Vitek-2 Compact系统药敏试验,结果以常规方法为参考。结果在113株革兰阴性菌中,鉴定到菌种的肠杆菌科和非发酵菌科分别占76.99%(87/113)和22.12%(25/113)。HBL微生物培养体系增菌所需时间在6 h之内,2~3 h居多。HBL微生物培养体系药敏试验标准符合率为96.01%,错误率分别为0.06%VME(1/1 578),0.95%ME(15/1 578),2.98%MIE(47/1 578),均在标准要求内。结论 HBL微生物培养体系能短期继代培养后直接快速细菌鉴定和药敏,且操作简单,成本适当,能快速准确地诊断血流感染并提供药敏结果,为临床抢先治疗提供依据。     

两种菌体前处理方法对MALDI-TOF MS鉴定临床分离菌效果的影响

目的评价2种不同前处理方法对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定临床分离菌效果的影响。 方法收集临床菌株43株,划线传代后,分别使用提取法和抹板法对微生物样本进行前处理,然后用MALDI-TOF MS鉴定比较两种处理方法的准确率和蛋白指纹图谱特征。 结果以16S rRNA/ITS RNA测序结果为参考标准,待测菌株经提取法处理后,MALDI-TOF MS鉴定革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌的种水平准确率分别为93.8%、100.0%和30.8%,待测菌株经抹板法处理后,MALDI-TOF MS鉴定革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌的种水平准确率分别为75.0%、100%和7.7%。提取法处理菌株后得到的蛋白指纹图谱中特征峰更多,信噪比更高,蛋白指纹图谱重现性更好。 结论推荐采用提取法为MALDI-TOF MS鉴定的常规前处理方法,其对建立标准的微生物检测流程,提高质谱鉴定的正确率,有重要价值。     

2009—2013年儿童医院血培养病原菌构成及耐药性变迁

目的了解儿童医院血培养病原菌的构成及耐药性变迁,为儿科血流感染性疾病的治疗提供依据。方法将某院2009年1月-2013年12月住院患儿血培养分离病原菌按时间分成2009-2011年组和2012-2013年组,对病原菌构成及其药物敏感性进行分析。结果共采集48 455例患儿血培养标本,分离病原菌2 730株,阳性率5.63%。2009-2013年患儿血培养阳性率呈逐年下降趋势(χ2=415.30,P＜0.01)。2 730株病原菌中,革兰阳性（G+）菌2 194株（80.37%）,革兰阴性（G-）菌510株（18.68%）,真菌26株（0.95%）。两组病原菌构成比较,差异具有统计学意义（χ2=180.334,P＜0.001）。万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁对主要G+球菌始终保持高敏感性（敏感率达100%）,环丙沙星、复方磺胺甲口恶唑和四环素对凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的耐药性均有下降。亚胺培南、美罗培南和阿米卡星对主要G-杆菌均保持较高的敏感性（敏感率≥97.50%）,左氧氟沙星对于肺炎克雷伯菌保持较高敏感性（敏感率达100%）;头孢菌素中,除头孢他啶对大肠埃希菌,头孢吡肟对肺炎克雷伯菌敏感外,其他均保持较高的耐药率。结论2009-2013年儿童血培养病原菌构成发生明显变迁,病原菌对临床常用抗菌药物有较高的耐药性,临床应加强对血培养病原菌及其耐药性的监测。     

植绒转运拭子联合显色培养基对鼻腔金黄色葡萄球菌定植的快速筛查

目的 采用植绒转运拭子联合显色培养基对鼻腔金黄色葡萄球菌（SA）定植进行快速筛查，了解耳鼻喉头颈外科患者SA定植情况，为预防SA感染和医院感染防控提供依据。方法 采用eSwab植绒转运拭子采集某院耳鼻喉头颈外科门诊患者鼻前庭标本，以WASPLab微生物自动化系统接种于羊血琼脂培养基和MRSA/SA显色培养基，孵育培养16、40 h，自动拍摄、观察菌落，通过质谱（MALDI-TOF MS）、药敏试验和mecA基因检测对SA进行验证。结果 共采集200份鼻前庭标本，检出SA菌株48株，其中MSSA 23株（占47.9%），MRSA 25株（占比52.1%），鼻腔SA定植率为24.0%，MRSA定植率为12.5%。SA筛查阳性报告平均时间为（17.6±6.1）h。培养与质谱鉴定、耐药表型检测的符合率为100.0%，与mecA基因检测的符合率为97.9%。结论 基于植绒转运拭子联合显色培养基的快速检测方法准确度较高，报告时间较短，可以用于SA定植快速筛查。     

尿沉渣分析仪快速诊断尿路感染的价值分析与评估

目的:探讨尿沉渣分析仪快速诊断尿路感染的临床价值。方法:选择2018年2月~2019年4月本院接收的263例可疑尿路感染患者作为本次研究对象,采集患者中段尿分别进行定量尿培养与尿沉渣分析,对比两种检测方法的符合率与不符合内容。结果:173份尿培养阴性结果和尿沉渣结果中白细胞和细菌两项指标数值完全符合率是77.46%(134/173),白细胞与细菌计数的假阳性率分别是15.03%、7.51%;90份尿培养阳性结果和尿沉渣结果中白细胞和细菌两项指标数值完全符合率是80%(72/90),白细胞与细菌计数的假阴性率分别是8.89%、11.11%。结论:尿沉渣分析仪快速诊断尿路感染具有一定临床价值,可作为可疑尿路感染的初筛方法,但还存在一定假阳性结果,建议各实验室能制定自己医院的白细胞与细菌计数参考标准。     

住院患者血流感染分离病原体及其耐药性

目的了解某院住院患者血培养分离病原体种类及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物和防控医院获得性血流感染（BSI）提供科学依据。方法对该院2012年1月1日-12月31日住院患者送检的16 428份血培养标本进行分离培养、细菌鉴定和药敏试验。结果5 546例住院患者送检血培养标本16 428份,血培养阳性者384例,病例阳性率为6.92%。检出病原体398株,其中革兰阳性（G+）菌94株（23.62%）,革兰阴性（G-）菌272株（68.34%）,真菌32株（8.04%）。61～80岁组患者阳性率（8.26%）最高;送检阳性率居前5位的科室分别是灼伤整形科、中医科、心外监护室、移植病区和创伤外科。 G+球菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺保持高敏感率,发现1株耐万古霉素屎肠球菌;G-杆菌中,肠杆菌科细菌对阿米卡星、碳青霉烯类药物敏感率高,其中鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药率分别为70.97%、35.90%。结论该院BSI病原体以G-菌为主,老年患者血培养阳性率高。医院应尽力提高血培养阳性检出率,并定期对病原体分布和耐药情况进行监测。     

植绒转运拭子联合显色培养基对鼻腔金黄色葡萄球菌定植的快速筛查

目的采用植绒转运拭子联合显色培养基对鼻腔金黄色葡萄球菌(SA)定植进行快速筛查,了解耳鼻喉头颈外科患者SA定植情况,为预防SA感染和医院感染防控提供依据。方法采用eSwab植绒转运拭子采集某院耳鼻喉头颈外科门诊患者鼻前庭标本,以WASPLab微生物自动化系统接种于羊血琼脂培养基和MRSA/SA显色培养基,孵育培养16、40 h,自动拍摄、观察菌落,通过质谱(MALDI-TOF MS)、药敏试验和mecA基因检测对SA进行验证。结果共采集200份鼻前庭标本,检出SA菌株48株,其中MSSA23株(占47.9%),MRSA25株(占比52.1%),鼻腔SA定植率为24.0%,MRSA定植率为12.5%。SA筛查阳性报告平均时间为(17.6±6.1)h。培养与质谱鉴定、耐药表型检测的符合率为100.0%,与mecA基因检测的符合率为97.9%。结论基于植绒转运拭子联合显色培养基的快速检测方法准确度较高,报告时间较短,可以用于SA定植快速筛查。     

血培养报阳时间在鉴别血流感染和采血污染中的应用

目的分析血培养中不同菌属细菌阳性报警时间在鉴别血流感染(BSI)和采血污染中的意义。方法采用回顾性方法,对2013年11月—2014年11月临床各科住院患者送检的血培养阳性患者临床资料及阳性报警时间进行比较,探讨血培养报阳时间对BSI鉴别诊断的价值。结果 2 605份血培养标本,137例血培养阳性,其中病原菌78例(56.93%),污染菌59例(43.07%),污染率最高的是凝固酶阴性葡萄球菌(75.76%),最低的是大肠埃希菌(12.50%)。病原菌组阳性报警时间为(13.86±8.19)h,短于污染组的报阳时间(40.72±20.96)h,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。病原菌组报阳时间最早的是肠球菌(10.20±8.00)h,其次是大肠埃希菌(11.12±3.91)h、金黄色葡萄球菌(12.22±5.08)h、肺炎克雷伯菌(14.72±10.45)h、其他革兰阴性菌(16.11±12.97)h和凝固酶阴性葡萄球菌(16.42±5.74)h,真菌最迟(29.04±3.67)h。革兰阴性菌报阳时间≤16.59 h,BSI的敏感性、特异性分别为84.09%、100.00%;革兰阳性菌报阳时间≤20.96 h,BSI的敏感性、特异性分别为96.77%、94.44%。结论结合血培养阳性报警时间与临床其他指标,对于早期判断检出菌为病原菌或污染菌具有一定的参考价值。     

环介导恒温扩增技术在检测儿童下呼吸道病原菌的临床应用分析

目的利用环介导恒温扩增技术探究儿童下呼吸道病原菌检测结果的临床分布特点,为实际临床工作提供参考。 方法收集2018年8月至2019年7月在天津市某儿童医院初诊为呼吸道病原菌感染的2517例患者,采集支气管肺泡灌洗液标本或深部痰标本,采用环介导恒温扩增芯片法检测下呼吸道的13种病原菌,并对检测结果进行分析。 结果应用环介导恒温扩增芯片法检测2517例下呼吸道感染住院患儿,共检出1771例病原菌阳性(痰液1174例(46.64%),肺泡灌洗液597例(23.72%))。芯片法检出的主要病原菌为肺炎支原体934例(37.11%)、肺炎链球菌557例(22.13%)、耐甲氧西林葡萄球菌397例(15.78%)、流感嗜血杆菌295例(11.72%)和金黄色葡萄球菌214例(8.50%)。不同季节感染呼吸道病原菌的阳性率不同,小儿肺炎支原体感染全年均有发生,以秋冬季多见,肺炎链球菌冬季多见,耐甲氧西林葡萄球菌春季多发,流感嗜血杆菌以春夏多发。单一病原菌感染1179例(46.84%),混合感染1338例(53.16%)。 结论对儿童检测下呼吸道病原菌感染,芯片法具有操作简单、快速、准确,明显缩短标准周转时间(TAT),且灵敏度更高、病原体覆盖面广等优势,能更好地服务于感染性疾病的快速诊断、抗生素的早期筛选以及合理使用。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在鉴定儿童血流感染少见苍白杆菌的应用及耐药情况分析

目的 快速鉴定和分析儿童血流感染少见苍白杆菌及其耐药情况分析。 方法 收集某儿童医院儿童血流感染的临床标本中分离的苍白杆菌26株,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术,对其进行检测,并结合测序结果分析确定菌株;根据药敏实验结果,用PCR法分析其耐药情况。 结果 26株实验菌株最后通过MALDI-TOF MS和16S rRNA基因测序技术,有25株被鉴定为解糖精假苍白杆菌,药敏结果显示它们对哌啦西林/他唑巴坦、喹诺酮类、氨基糖苷类和复方新诺明的耐药率为0.0%。而对氨曲南耐药率为100.0%,其他β-内酰胺类抗菌药物有不同的耐药率。AmpC和AmpR耐药基因检测均为阴性。 结论 MALDI-TOF MS能够快速鉴定临床少见苍白杆菌,儿童血流感染的解糖精假苍白杆菌不产头孢菌素酶,结合药敏分析结果及儿童用药特点,建议使用哌啦西林/他唑巴坦。     

外科送检伤口分泌物的细菌培养及药敏分析

目的对外科病人送检的伤口分泌物标本细菌培养分离出的阳性菌株的种类和药敏进行分析,为临床合理的抗感染治疗用药提供依据。方法使用DL-96细菌测定系统对伤口分泌物中病原菌进行鉴定及药敏试验,对实验结果进行回顾性统计分析。结果在送检的伤口分泌物检出病原菌中,革兰阳性球菌比率最高的是金黄色葡萄球菌（31.4%）;革兰阴性杆菌以大肠埃希菌（14.3%）、铜绿假单胞菌（8.6%）、阴沟肠杆菌（6.6%）为主。结论伤口分泌物的细菌培养中的阳性菌种类的多样化及其耐药性较严重,临床医生应在使用抗生素前或根据病情及时进行细菌培养,根据药敏实验结果合理选用有效抗生素,降低感染率的发生。