国产试剂盒GoldenEye~(TM)16BT的确证试验

目的测试国产GoldenEyeTM 16BT试剂盒的技术性能指标,评估其法医学应用能力。方法制定测试方案,从方法学验证、准确性、峰值均衡性、灵敏度、批次间试剂及稳定性测试、耐受性、不同检材的适应性与一致性、种属特异性、混合样本等9个方面进行测试。结果 GoldenEyeTM 16BT试剂盒阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥73%,同一荧光标志基因座间的均衡性≥57%,不同标志物间的均衡性≥81%;对阳性0.125 0 ng的DNA样本能检出全部短串联重复序列(STR)基因座分型和ABO血型基因型,不同批次间和反复冻融后试剂盒测试可以获得正确分型,对降解检材和混有抑制剂的样本等具有一定的耐受性,可对案件中多种检材进行分型且分型结果一致,具有一定的种属特异性和混合DNA样本检测的能力。结论国产试剂盒GoldenEyeTM 16BT可用于法庭科学的实际检案与建库。     

3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA方法的实验研究

目的对3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法进行实验研究和比较,以获得最佳的方法.方法分别采用Chelex-100小体系法、磁珠法、改良磁珠法法对脱落表皮细胞的DNA进行提取,并对检测结果进行分析比较,探讨提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法.结果磁珠法和改良磁珠法均能获得较高质量的细胞核DNA STR基因座分型,且后者的分型效果更好.Chelex-100小体系法的STR基因座分型效果不佳.结论磁珠法和改良磁珠法均能有效检测接触性检材脱落细胞DNA,故在法医检案中遇到接触性检材时考虑选择改良磁珠法.     

多种载体人体生物检材直扩方法在DNA数据库建库中的实验研究

目的研究适合基层法医DNA实验室建立DNA数据库的新产品和方法.方法采用国产Goldeneye 20A-M免提取试剂盒对3 977份多种建库人体生物检材进行检测,并对多种人体生物检材的结果进行比较.同时探索Whatman FTA卡的洗脱方法.结果直接用免提取试剂盒进行实验研究,检出率为99.4%,对保存了1 a的普通血滤纸、棉签血痕、纱布血痕、AuSBio卡、公安部物证鉴定中心监制的采血卡检出成功率高达100%,口腔拭子和FTA分别为97.1%和98.5%.Whatman FTA卡经过1%的Triton X-100洗脱1次,检出成功率可以达到100%.结论 Goldeneye 20A-M免提取试剂盒可以用多种载体人体生物检材做为直扩样本进行DNA建库,是一种简单、快捷的DNA建库方法.     

无毛囊发干遗传分析新标记的应用

 目的 解决法医检验工作中自然脱落的毛发、严重降解的骨骼及牙齿这类检材检验难度大且检出完整DNA分型的成功率低的问题。方法 应用一类特殊的DNA序列——逆转座子(retrotransponson,RE)进行检验鉴定,用作遗传分析的RE DNA片段长度多在60～125 bp,利用21个基因座组合的RE个体识别系统计算似然比(likelihood,LR),并计算亲缘关系鉴定中的累计非父排除率(combined paternity index,CPI)。 结果 本系统对无毛囊的发干、严重降解的生物检材有较高的检出成功率,LR值多在108～1012,完全能够达到同一认定的水平。计算CPI值后发现难以得出支持假设的结论,多个案例计算的CPI数值小于10 000。结论 21个基因座的RE系统可以用于个体识别鉴定,亲缘关系的鉴定仍需增加基因座。     

Y染色体短串联重复序列基因座荧光复合扩增体系的法医学应用

目的探讨Y染色体DYS456、DYS464、DYS527、DYS531、DYS709、DYS448和DYS522共7个短串联重复序列(STR)基因座(相当于11个位点)荧光复合扩增体系在法医学中的应用价值。方法提取法医学应用中生物检材的基因组DNA,复合扩增7个Y-STR基因座,然后采用毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测扩增产物。结果盲测试验结果正确;可作为"人"与"非人"的种属特异性检测工具;用同一个体不同组织所获得的分型结果一致;调查同一父系家庭的男性成员样品,未观察到变异;对强奸案混合斑的分析,可直接检出7个Y-STR基因型,协助确定嫌疑人。结论荧光复合扩增Y染色体7个STR基因座方法可靠,对混合斑和微量检材中男性DNA的分析具有较高的应用价值。     

磁珠法和Chelex法在微量或腐败检材DNA检验中的效果对比及探讨

在日常的法医物证工作中,常规检材,如血样、口腔拭子等我们用Chelex法提取DNA能够得到比较理想且完整的实验结果,而像牙刷、饮水瓶等微量检材和腐败的尸体检材,如腐败尸体指甲等亦十分常见,为使法医物证工作能顺利展开,一般可以使用ML-超微量磁珠法DNA提取试剂盒提高DNA检验水平,本次实验主要探讨磁珠法和Chelex在微量或腐败检材DNA检验中的效果差异。     

微量接触DNA的浓缩与回收

目的对纯化后的微量DNA进行进一步浓缩,提高DNA检验成功率。方法将30ml（约600pg）纯化后的微量DNA,分别采用Amicon离心超滤管和DNAClean＆ConcentratorTM-5试剂盒进行浓缩回收,用Identifiler试剂盒进行PCR扩增及分型检测,比较STR分型图谱的平均峰高、峰面积和等位基因丢失率。检验24枚白纸上的汗潜指纹,比较浓缩前后的检验效果。结果经过Amicon离心超滤管回收后,STR分型平均峰高85．3RFU,平均峰面积为1130．8,等位基因丢失率为66．13％。经过DNAClean ＆ ConcentratorTM-5试剂盒回收后,STR分型平均峰高147．5RFU,平均峰面积为1960．2,等位基因丢失率为35．14％。汗潜指纹的DNA检验通过DNAClean＆concentralor^TM-5试剂盒纯化浓缩,获得有效分型的数量由浓缩前的9枚提高为20枚。结论DNAClean＆C0ncentrator^TM-5试剂盒可以明显提高微量DNA检材的检验成功率,效果优于Amicon离心超滤管。对白纸上的指纹,DNAClean＆Concentrator^TM-5试剂盒浓缩后检验成功率升高。     

Y-STR分型在侦破案件中的应用

目的为Y-STR基因分型技术应用于案件侦破提供依据。方法对1例系列抢劫强奸盗窃独居老年妇女案和1例抢劫杀人案进行回顾性分析。结果案例1中梁姓家族男性的Y-STR基因分型与嫌疑人一致,经DNA基因分型测序检验结果证实梁某检材的STR基因分型与案件的遗留精斑基因分型一致。案例2中根据现场路面提取的生物检材经过Y-STR基因分型测序检验,被认定为死者潘某的同宗潘姓男子所留,对本村潘姓村民的生物检材样本经DNA基因分型测序检验证实潘某某的STR基因分型与现场犯罪嫌疑人遗留生物检材的基因分型一致。结论 Y-STR分型技术可以为案件侦破指明侦查方向,为案件侦破提供重要科学技术支撑。     

异基因干细胞移植患者基因状态研究

目的：应用PCR-STR技术,研究干细胞移植患者外周血、口腔黏膜上皮细胞及毛根的基因型变化。方法：对44例干细胞移植患者的血液、口腔拭子及毛根进行分型。结果：44例患者移植后外周血检出单一供者基因分型,毛根均检出单一受者基因分型,口腔黏膜上皮细胞有16例检出单一受者的基因分型,28例检出供者、受者的混合基因分型。结论：移植后外周血干细胞可以转变为口腔黏膜上皮细胞,这对干细胞治疗各种血液恶性疾病及法医学应用具有较高的参考价值。     

唾液斑口腔上皮细胞端粒长度变化在法医学实践中的应用研究

目的：探讨人类唾液斑中口腔上皮细胞端粒长度变化与年龄的相关性及其稳定性,探讨2种方式提取的检材及其不同放置时间后口腔上皮细胞端粒长度是否有差异,拟为法医学通过微量易得检材推断年龄提供依据。方法：选取40例不同年龄段健康人唾液,分为童年组（0～6岁）、少年组（7～17岁）、青年组（18～40岁）、中年组（41～65岁）、老年组（>66岁）5个年龄组,每组8人,分别制成新鲜口腔拭子和不同时间段（1、7、14、28 d）的唾液斑,用磁珠法提取样本中的DNA,通过荧光PCR（聚合酶链反应）相对定量法检测端粒DNA限制性酶切段长度变化。结果：不同组间端粒长度有明显差异（F=7.138,P=0.018）,年龄回归方程：Y=-75.006X+101.193,端粒TRF平均长度随年龄增加而逐渐缩短,并呈不均衡趋势。检材提取方式及检材新旧程度对检测到的TRF结果没有显著影响（P=0.740,P=0.740,P=0.958,P=0.324）。结论：唾液斑中口腔上皮细胞端粒长度随年龄增加而缩短,并且呈规律性改变;2种方式采集的样本及其不同放置时间后的样本端粒长度无明显差异,说明唾液斑中口腔上皮细胞端粒长度具有一定的稳定性,故可通过唾液斑中口腔上皮细胞端粒长度推断个体年龄。     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。     

二联体亲子鉴定中常染色体STR基因座检测

目的：探讨常染色体STR基因座检测在二联体亲子鉴定中的应用价值。方法：应用PCR同步扩增24个常染色体STR基因座,PAGE电泳分型,完成二联体亲子鉴定66例。结果：认定亲生关系38例(57．58％),排除亲生关系28例(42．42％)。结论：经24个常染色体STR基因座检测,能确切地认定或排除亲生关系,得出正确的鉴定结论。     

血浆游离DNA的STR分型检测研究

目的：探讨利用血浆中游离DNA进行短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测,解决法医学个体识别和亲权鉴定问题的可行性。方法采集36例无关健康个体EDTA-Na2抗凝血样,分离血浆,采用经典酚-氯仿法分别处理血浆和血细胞,对提取的DNA进行15个STR基因座常规PCR扩增和荧光标记复合扩增,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测2种STR分型方法进行检测。结果常规PCR扩增银染检测和荧光标记复合扩增毛细管电泳检测两种STR分型方法的结果表明,同一个体的血浆游离DNA和血细胞DNA STR分型一致,且分型效果接近。结论血浆游离DNA可作为一种有效的生物学样本进行STR分型检测,应用于法医个体识别和亲权鉴定。     

10个STR座位的法医学应用回顾

选用Ｄ１９Ｓ２５３、ＴＰＯＸ、Ｄ８Ｓ１１７９、ＣＹＰ１９、ＴＨ０１、ＬＰＬ、ＰＬＡ２Ａ、ｖＷＡ、ＦＯＬＰ２３、ＧＡＢＲＢ１５共１０个ＳＴＲ座位,采用相同热循环参数同步扩增、分步加样电泳及银染方法,完成实际案例２１３例,其中,亲子鉴定１５９例,不同检材个人识别５４例。结果：１０个ＳＴＲ座位累积非父排除概率（ＣＣＥ）为９９．９３％,总个人识别能力（ＴＤＰ）大于０．９９９９。证明本方法鉴定效率高,符合“快速、灵敏、可靠”的办案要求。     

皖南地区汉族人群21号染色体上3个STR位点的多态性分析

目的:研究人类短串联重复序列D21S11、D21S1409和D21S1414在唐氏综合征基因诊断中的应用;比较聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染分型技术与毛细血管电泳STR分型技术对同样标本分型的差异性。方法:采用聚合酶链反应、毛细血管电泳技术和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对100例皖南地区汉族无亲缘关系的个体DNA样本进行STR分型。结果:D21S11、D21S1409和D21S1414在安徽皖南地区人群中的观察杂合度分别为:0.7600、0.6600和0.7800。结论:D21S11和D21S1414位点杂合度高,可以作为皖南地区唐氏综合征产前诊断的筛查位点,D21S1409可以作为唐氏综合征产前诊断的辅助筛查位点。毛细血管电泳分型技术在STR分型中较聚丙烯酰胺凝胶电泳技术准确性高,可以用于唐氏综合征的快速产前筛查和诊断。     

贵州毛南族人群CSF1PO,TPOX和TH01STR基因座基因频率调查

目的：调查贵州毛南族人群CSF1PO,TPOX和TH01STR基因座等位基因频率.方法：chelex-100提取法提取104名毛南族无关个体DNA,PCR复合扩增,变性PAGE分型,直接计数基因型,用modified-powerstats软件包计算各多态性指标,采用SPSS13.0统计软件包对贵州毛南族人群与广西两个毛南族群体相同基因座等位基因频率进行比较.结果：CSF1PO,TPOX和TH01STR基因座共检出等位基因数17个,等位基因频率范围在0.0288~0.4087之间;共检出基因型40种,各基因座基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P〉0.05）.3个基因座的杂合率（H）、非父排除率（PPE）、个体识别率（DP）、多态信息量（PIC）分别大于0.69,0.5,0.8,0.6,累积个体识别率（TDP）为0.99743.贵州毛南族人群和广西两个毛南族群体等位基因频率分布有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）.结论：CSF1PO,TPOX和TH01 3个STR基因座在贵州毛南族人群中有较高的遗传多态性,在群体遗传学和法医鉴定中有较高的应用价值.起源于古代同一族系的同一民族或不同民族,遗传结构有丰富的遗传多样性,其等位基因频率分布与地域呈平行关系.     

4个Y-STR基因座在海南岛黎族人群的遗传多态分布

目的:调查DYS3891、DYS390、DYS391和DYS393基因座在海南岛黎族群体中的分布状况。方法:应用多重PCR扩增后,用ABI377自动测序仪进行基因扫描分型。结果:在230名无亲缘关系的黎族男性个体中观察到黎族群体在4个基因座均有遗传多态性;DYS3891观察到4种等位基因;DYS390观察到5种等位基因;DYS391观察到4种等位基因;DYS393观察到5种等位基因。获得了黎族群体在4个Y-STR基因位点的等位基因频率、基因多样性和单体多样性数据。结论:4个Y-STR基因位点的单倍型检测在法医学个体识别和亲权鉴定及黎族的起源研究有较高的应用价值。     

慢性阻塞性肺疾病与DNA短串联重复序列的关联

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）与DNA短串联重复序列的关联性。方法应用第二代DNA遗传标记-短串联重复序列测定患者15个STR基因座,分析慢性阻塞性肺疾病基因座等位基因频率分布情况以及与正常对照组的差异。结果 COPD组与对照组15个基因座等位基因的频率分布有显著差异：D2S1338-25、FGA26频率比对照组明显降低;D12S391-19.3、FGA20.2频率比对照组明显升高。两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 FGA20.2和D12S391-19.3附近可能存在COPD危险STR,而D2S1338-25、FGA26附近可能存在COPD保护STR。     

孕妇血浆中胎儿DNA的提取及STR基因的检测

目的探索在孕妇血浆中提取胎儿DNA及STR基因的检测方法。方法提取10名健康孕妇（12～40周）血浆标本中胎儿游离DNA,对15个短串联重复序列（shorttandemrepeat,STR）基因位点和1个性别Amelogenin基因进行聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）扩增。同时,检测孕妇及其丈夫的基因组DNA,进行对照研究。结果经性别Amelogenin基因的检测,与胎儿实际的性别符合率为100%。经STR-PCR检测发现,所有10例孕妇血浆中均检测出父源性胎儿DNA的存在,检测数量为2.89±1.62。结论本实验采取的方法准确性较高,可作为符合国家法律规定范围内的一种无创性的产前诊断方法 。