SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究

目的探讨SPAK-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原对诊断卡氏肺孢子虫肺炎的价值。方法采用SPAELISA检测免疫抑制大鼠模型在不同时期肺泡灌洗液(BALF)和血清中肺孢子虫(PC)抗原，以及造血干细胞移植并发肺炎患者痰液和血清抗原，并与病原学检查结果比较。结果感染大鼠于用药后第4周，BALF中PC抗原，以及肺组织印片和BALF涂片包囊检查开始出现阳性，但前者阳性率(60％)高于后者(20％和40％)，而且全部阳性达到的时间(8周)也早于后者(10周)。第10周有2只鼠血清抗原阳性，但此后又转阴。30例肺炎患者痰液抗原阳性8例，阳性率为26．67％，8例抗原阳性患者中只有3例发现包囊，符合率为37．5％。血清抗原检测全部阴性。结论SPA—ELISA检测痰液和肺泡灌洗液抗原比病原学检查敏感性高，而检测血清抗原不适用于诊断卡氏肺孢子虫肺炎。     

聚合酶链反应检测卡氏肺孢子虫

特殊染色方法检测卡氏肺抱子虫（PC），需技术人员有较高的识别虫体能力，虫体量较少时易漏诊。我们应用聚合酶键反应（PCR）检测PC虫体并探讨其可行性，评估其敏感性和特异性。材料与方法雌性清洁级SD大鼠60只，体重180－220g，采用皮下注射可的松方法诱导PC肺炎。3－4个月后处死并解剖，支气管肺泡灌洗（BAL）法参照文献[1]。BAL液（BALF）行细菌及真菌培养，离心沉渣涂片行吉姆萨染色查找PC虫体。4％甲醛溶液固定肺脏，肉眼观察无明显病变则两肺各取3块肺组织，若肉眼见明显异常改变则在病变处取材，同时另一侧取3块肺组织行病…     

卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究

目的 研究卡氏肺孢子虫包囊抗原的纯化方法。方法 肌肉注射地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎，瑞姬氏染液复合染色法获肺组织中的肺孢子虫包囊，用改进的胶原酶消化法，Percoll不连续密度梯度离心分离，超声粉碎纯化卡氏肺孢子虫包囊抗原。结果 采用浓度为0．05％胶原酶消化2次，30min/次，在1.030g/ml密度层可获得相对纯净与而而完整的卡氏肺孢子虫包囊抗原。结论 本研究可提价蒿纯度卡氏肺孢子虫抗原，为进一步建立对卡氏肺孢子虫肺炎的有效诊断方法具有十分重要的意义。     

卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究

目的　研究卡氏肺孢子虫包囊抗原的纯化方法。　方法　肌肉注射地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎 ,瑞 -姬氏染液复合染色法检获肺组织中的肺孢子虫包囊 ,用改进的胶原酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心分离、超声粉碎纯化卡氏肺孢子虫包囊抗原。　结果　采用浓度为 0 .0 5 %胶原酶消化 2次 ,30 min/次 ,在 1.0 30 g/ ml密度层可获得相对纯净而完整的卡氏肺孢子虫包囊抗原。　结论　本研究可提供高纯度卡氏肺孢子虫抗原 ,为进一步建立对卡氏肺孢子虫肺炎的有效诊断方法具有十分重要的意义。     

PCR技术检测卡氏肺孢子虫的研究现状

本文简述了近年来多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)在卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carrini,P.c.)检测中的研究现状。重点阐述了PCR的引物、取材对检测结果的影响,同时也探讨了简化样品制备和改良PCR对其在临床广泛应用的促进作用。     

PCR技术检测卡氏肺孢子虫的研究现状

本文简述了近年来多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）在卡氏肺孢子虫（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｉｔｉｓｃａｒｒｉｎｉ，Ｐ．ｃ．）检测中的研究现状，重点阐述了ＰＣＲ的引物，取材对检测结果的影响，同时也探讨了简化样品制备和改良ＰＣＲ其在临床广泛应用的促进作用。     

用PCR扩增技术检测卡氏肺孢子虫DNA

本文报道了用ＰＣＲ扩增技术检测卡氏肺孢子虫感染大鼠的肺组织，支气管灌洗液和外周血病原体ＤＮＡ，并和肺印片结果进行比较。共检测了实验感染鼠３４只及正常大鼠６只，肺印片阳性者１８例，ＰＣＲ检测肺组织样品出现特异的扩增条带者１９例，检测支气管灌洗液样品出现特异的扩增条带者１６例，外周血样品全部阴性。根据实验结果，认为引法用于检测卡氏肺孢子虫病原体ＤＮＡ有很好的应用前景。     

卡氏肺孢子虫p55抗原片段免疫原性的研究

目的 研究卡氏肺孢子虫p55基因片段重组质粒表达产物的免疫原性。 方法 原核表达质粒pGEX-570的表达产物融合蛋白GST-p55/570,经谷胱甘肽（GST）琼脂糖凝胶纯化后,十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察。将33只BALB/c小鼠随机分为3组（每组8~13只）,分别用GST?鄄p55/570（50 μg/只）、GST（50 μg/只）和PBS免疫,每2周1次,共4次。末次免疫后7 d,分离小鼠脾细胞,用噻唑蓝（MTT）法检测淋巴细胞增殖反应;分别于免疫前和初次免疫后14、28、42和49 d,采血分离血清,ELISA检测血清中GST-p55/570抗体水平。用GST-p55/570组初次免疫后49 d的血清分别与GST-p55/570和GST反应,进行蛋白质印迹（Western blotting）分析。 结果 表达产物GST-p55/570的相对分子质量（Mr）约为47 000。MTT法结果显示,GST-p55/570组小鼠淋巴细胞的刺激指数（2.063 0±0.160 2）显著高于GST组（1.134 5±0.073 5）和PBS组（1.124 8±0.041 6）（P值均<0.01）。免疫后14~49 d,GST-p55/570组小鼠的血清抗体水平均显著高于GST组和PBS组（P值均<0.01）。Western blotting结果显示,免疫后血清能与GST-p55/570发生特异性反应。 结论 融合蛋白GST-p55/570能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫。     

卡氏肺孢子虫肺炎

本文就卡氏肺孢子虫肺炎的病原体 ,感染途径 ,临床表现 ,诊断治疗及预防等方面作一概述 ,为卡氏肺孢子虫肺炎的预防控制提供参考。     

PCR技术对大鼠卡氏肺孢子虫DNA的检测

目的　探讨诊断卡氏肺孢子虫感染的最佳方法。方法　建立大鼠动物模型,肺涂片用吉氏染色法查肺孢子虫包囊,支气管灌洗液、肺组织和血液标本,用ＰＣＲ技术进行卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的检测,共计实验组大鼠１２ 只及对照组８ 只。结果　实验组大鼠,吉氏染色法卡氏肺孢子虫包囊检出率为６６－７％ ,ＰＣＲ技术支气管灌洗液、肺组织和血液标本,卡氏肺孢子虫ＤＮＡ检出率分别为８１－８ ％ 、５０％ 和５０％ 。比肺印片提前２ 周检出。对照组大鼠,吉氏染色法未检出卡氏肺孢子虫包囊,在支气管灌洗液和血液标本中,ＰＣＲ技术测出了卡氏肺孢子虫ＤＮＡ。结论　在血液标本中ＰＣＲ的成功应用,为卡氏肺孢子虫感染的流行病学调查及人类卡氏肺孢子虫肺炎的诊断,提供了一种有用的、非创伤性的方法。     

卡氏肺孢子虫虫体负荷与肺损伤的关系研究

为研究卡氏肺孢子虫 (Pneumocystis carinii,PC)虫体负荷与肺损伤的关系 ,采用清洁级 Sprague- Dawley(SD)大鼠 (5 0只 )每周两次皮下注射醋酸可的松 ,连续 8～ 12 wk,建立卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)模型。共计 14只大鼠 PCP诱导成功。测定支气管肺泡灌洗液 (BAL F)细胞计数及分类、总蛋白 (TP)、白蛋白 (AL B)、碱性磷酸酶(AL P)、乳酸脱氢酶 (L DH)、 型胶原酶 (MMP- 2、MMP- 9)等肺损伤的活性指标。并根据病理组织观察计数虫体累及肺泡数多少 ,将 PC虫体负荷分为轻度组 (每 10 0个肺泡中被虫体累及肺泡数 <2 5 % ,A组 ,n=6 ,)和中重度组(每 10 0个肺泡中被虫体累及肺泡数≥ 2 5 % ,B组 ,n=8) ,比较 PC虫体负荷与肺损伤的关系。 6只清洁级 SD大鼠作为正常对照组 (C组 )。结果在 PC虫体负荷中重度组的 BAL F中白细胞总数 (6 .8× 10 6 /L± 1.7× 10 6 /L)较轻度组 (3.8× 10 6 /L± 1.2× 10 6 /L)明显增加 ,但分类差异不明显。中重度组 BAL F中 AL B为 (892 .7± 46 8.9) μg/ml,较轻度组的 (2 6 2 .2± 16 9.3) μg/ml明显为高 (P<0 .0 1) ;正常对照组仅为 (2 6 .3± 2 1.0 ) μg/ml。中重度组 TP为(175 5 .6± 70 5 .6 ) μg/m l、L DH为 (2 5 .8± 5 .5 ) U/dl,显著高于轻度组 [TP(783.5± 5 5 3.0 )     

卡氏肺孢子虫感染的实验研究

为探索卡氏肺孢子虫肺炎的发病机制，将大鼠分为实验组和对照组。给予实验组大鼠肌注地塞米松以诱发肺孢子虫肺炎。每周剖杀，光镜及电镜下对其两组大鼠肺组织进行病原学和病理学观察。对照组大鼠健康，第８ｗｋ后体重增加４５％，肺组织未见病理改变，亦未观察到卡氏肺孢子虫。实验组大鼠慢性发病，第８ｗｋ后体重比原来减少约２６％。电镜下第４ｗｋ、光镜下第５ｗｋ开始查见卡氏肺孢子虫，第７～８ｗｋ达重度感染，阳性率为６６．７％。该虫在肺泡腔内多见，肺间质中少见，在中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内也见到。肺组织在实验前４ｗｋ几乎没有什么改变，第５～６ｗｋ有少量虫体附着于肺泡壁，第７～８ｗｋ表现为卡氏肺孢子虫肺炎的典型组织病理学改变。大滋养体伸出丝状伪足与Ⅰ型上皮细胞粘连，该处上皮细胞发生变性改变，Ⅱ型上皮细胞发生凋亡。     

卡氏肺孢子虫的超微结构观察

采用皮下注射醋酸可的松和低蛋白饲养方法诱发SD大鼠自然感染卡氏肺孢子虫后,取其肺组织,按常规方法进行透射电镜的系统观察。结果除为Yoshida提出的卡氏肺孢子虫生活史的有性增殖和无性增殖循环的最新设想提供了某些形态学依据外,还继Vossen等之后再次发现该病原在1型肺泡上皮细胞内寄生的情况。本文最后就卡氏肺孢子虫对宿主的致病机理进行了讨论。     

卡氏肺孢子虫肺炎动物模型的实验研究

本文通过给大鼠高蛋白质食物，皮下注射醋酸考的松及其饮水中加入四环素的方法，建立了卡氏肺孢子虫大鼠模型。与传统方法比较，证明该方法能使动物模型的病死率降低，成活率提高和寿命延长。     

卡氏肺孢子虫感染大鼠脾微量元素的测定

目的　探讨卡氏肺孢子虫 (PC)感染对大鼠脾脏中 6种微量元素 (Ca+ + 、Mg+ + 、Fe+ + 、Cu+ + 、Zn+ + 、Mn+ + )的影响。　方法　将 30只 SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每只大鼠皮下注射地塞米松 1mg/次 ,每周 2次 ,诱导 PC感染。10周后将大鼠处死 ,取脾脏 ,用原子吸收分光光度计测定各组微量元素的含量。　结果　与对照组相比较 ,PC感染组脾脏中 Zn+ +、Cu+ +的含量 (2 3.82 μg/ g干重、18.31μg/ g干重 )明显低于对照组 (45 .4 9μg/ g干重、2 6 .35 μg/ g干重 )(P<0 .0 5 ) ,Ca+ + 、 Mg+ + 、Fe+ + 、Mn+ + 的含量 (2 18.5 5μg/ g干重、2 34.78μg/ g干重、2 17.96μg/ g干重、0 .96μg/ g干重 )变化不明显。　结论　卡氏肺孢子虫感染大鼠脾脏中微量元素发生了变化。     

卡氏肺孢子虫病实验与临床研究 Ⅲ．抗卡氏肺孢子虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建株及鉴定

从感染肺孢子虫肺炎大鼠模型中分离纯化肺孢子虫包囊并免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术，获得１株能长期稳定分泌抗人源性肺孢子虫单克隆抗体杂交瘤细胞株４Ｄ７。其染色体众数为８２，分泌ＩｇＧ１亚型抗体。该单抗可识别５４ｋＤａ肺孢子虫包囊蛋白区带，并能准确识别肺孢子虫包囊，其灵敏性与特异性可达１００％（１１／１１）；并与正常人体组织、肺炎双球菌、白色念珠菌和新型隐球菌无交叉反应。     

瑞-姬氏染液复合染色法诊断卡氏肺孢子虫肺炎的研究

目的　制作颜色鲜明 ,结构清晰 ,易于观察的卡氏肺孢子虫包囊和滋养体染色标本。　方法　采用瑞 -姬氏染液复合染色法。　结果　染色后肺孢子虫包囊中的囊内小体有呈紫红色的细胞核和呈蓝色的细胞质 ,囊壁薄 ,淡蓝色 ,包囊各部分结构清晰可辨。滋养体有紫红色的细胞核和蓝色的细胞质。　结论　瑞 -姬氏染液复合染色法可在临床诊断和教学中推广应用     

卡氏肺孢子虫感染的免疫诊断研究

目的：探讨肺泡灌洗液、血清抗原及血清抗体检测诊断卡氏肺孢子虫感染的价值。方法：利用免疫抑制大鼠模型及双夹心ELISA法检测不同时期感染大鼠肺泡灌洗液和血清中肺孢子虫抗原，用IFA法检测血清中的肺孢子虫IgG抗体，并与病原学检查结果进行比较。结果：感染大鼠肺泡灌洗液的抗原检测于免疫抑制6－8wk后均呈阳性，而对照组大鼠均呈阴性；大多数感染大鼠血清抗原检测为阴性；正常大鼠血清中有低滴度肺孢子虫IgG抗体，感染大鼠抗体滴度轻度升高或不升高，但中止免疫抑制后血清抗体滴度明显升高，而肺泡灌洗液中抗原逐渐阴转。结论：肺泡灌洗液抗原检测可用于肺孢子虫感染的诊断，但血清中很难检出这种抗原；血清IgG抗体的上升并不表示为现症感染.