应用单克隆抗体检测蚊体内幼丝虫的实验观察

以马来丝虫感染期幼虫为靶抗原制备多株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）从中筛选出１Ｇ１、１Ｈ１单克隆抗体，检测人工感染马来丝虫的中华按蚊。当中华按蚊吸食含马来微丝蚴的兔血后，分别解剖，同时以ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测饲养不同时间的中华按蚊。结果显示，饲养９ｄ的按蚊马来丝虫幼虫阳性率，人工解剖为８６．６％，ＥＬＩＳＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法分别为８２．２％和７７．８％。经统计学处理，人工解剖与单抗检测无显著性差异，其灵敏度为每只蚊０．５条幼虫。实验证明，此ＭｃＡｂ与牛腹腔指状丝虫、猪肺丝虫抗原无交叉反应，显示了一定的特异性。     

应用DNA探针检测蚊体内丝虫幼虫的研究

本文用人工合成的寡核苷酸探针，经斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。可测到丝虫和微丝蚴２ｎｇ的ＤＮＡ量，不与其它动物丝虫标本发生交叉反应。将单个蚊直接压于硝酸纤维素膜上进行检测，感染蚊中含有１条感染期幼虫不可出现了性反应。将一组蚊虫在裂液中研磨集体检测时，在２０只蚊虫中有１只感染蚊即可检出。显示该探针可用于马来丝虫地区的蚊媒监测。     

应用DNA探针检测蚊体内丝虫幼虫的研究

本文用人工合成的寡核苷酸探针，经斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。可测到丝虫和微丝蚴２ｎｇ的ＤＮＡ量，不与其它动物丝虫标本发生交叉反应。将单个蚊直接压于硝酸纤维素膜上进行检测，感染蚊中含有１条感染期幼虫就可出现阳性反应。将一组蚊虫在裂解液中研磨集体检测时，在２０只蚊虫中有１只感染蚊即可检出。显示该探针可用于马来丝虫地区的蚊媒监测。     

中华按蚊感染马来丝虫幼虫后生殖,生殖营养周期...

Under the experimental conditions of 26 +/- 10 degrees C, relative humidity 70-80%, 100 +/- 20 Lux and photoperiod 16 hours/day and using a membrane feeding method, the development of filarial larvae and the variations in reproductive capacity, gonotrophic cycle and longevity of An. sinensis infected with microfilariae of Brugia malayi were observed. The infection rate and infection intensity of filarial larvae in An. sinensis increased with the microfilarial density in the blood meal from 50 to 150 mf/20 microliters. The mature rate and IEI decreased when the density rose to 200 mg/20 microliters. The concentration ratio of mf in blood by An. sinensis was 1.2-1.4. In the 3rd gonotrophic cycle, the feeding ratio of infected mosquitoes became lower when the mf density rose to 150 mf/20 microliters, but the infection of filarial did not affect the number of oviposition, the regularity of egg-production activity and the hatching rate of eggs, while the quantity of egg-production increased when the mf density was 150 mf/20 microliters. The egg-production rate, and gonotrophic cycle were not basically influenced by filarial larvae infection. The multifeeding ratio was 16.7-48.4% in An. sinensis. The longevity of An. sinensis was extended by infection with mf density of 100 mf/20 microliters and shortened in infection with mf density of 200 mf/20 microliters. The authors conclude that "Brugia malayi-Anopheles sinensis" is a highly adapted "pathogen-vector" system.     

聚合酶链反应检测蚊体内马来丝虫幼虫的实验

目的　建立一种特异、灵敏和简捷的聚合酶链反应 (PCR)检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。方法　在应用一种新的模板纯化处理技术 (Microcon 10 0 )基础上 ,采用适应于检测我国马来丝虫的两套DNA扩增引物(P1、P2与P3、P4) ,对实验感染马来丝虫的中华按蚊进行扩增检测。结果　两套引物均可检出蚊体内不同发育期幼丝虫 (L1、L2 和L3) ,其灵敏度达 1只蚊体内 1/ 6 4条L1和 2 0 0只群体蚊中含有 1只感染蚊 (体内有 1条L3)的水平 ,而对犬恶丝虫及未感染蚊却不能扩增出特异条带。结论　初步建立特异、灵敏和简捷的PCR检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。     

班氏丝虫和马来丝虫感染期幼虫体外培养的进一步研究

在4种培养系统中,马来丝虫Ⅲ期幼虫在改良RPMI1640、20%小牛血清和人胚肾细胞系为饲养层的培养系统中生长发育良好,可以从Ⅲ期幼虫蜕皮2次发育到童虫,最长存活时间为54d。在单纯改良RPMI1640、TC199和20％小牛血清中培养,从Ⅲ期幼虫发育到童虫的最长存活时间为42d。班氏丝虫Ⅲ期幼虫在上述2种培养系统中,分别存活57和36d,从Ⅲ期幼虫蜕皮进入Ⅳ期幼虫和童虫。对马来丝虫幼虫体外培养蜕皮时间、虫体大小与沙鼠体内发育情况进行了比较。     

马来丝虫贵州株传代的实验观察

目的 观察马来微丝蚴贵州虫株传代现象。方法 分别用周期型马来丝虫贵州虫株f31和f25微丝蚴人工感染中华按蚊，在温度、相对湿度相同的条件下，观察幼丝虫在蚊体内发育情况。结果 贵州虫株f31在感染中华按蚊后24h解剖，仅在按蚊腹部和胃内可见脱鞘和未脱鞘的微丝蚴，第2～9d未发现各期幼丝虫，经6批次实验，结果相同。贵州虫株f25感染中华按蚊后24h解剖，蚊胃内未发现微丝蚴，在胸部可见早期腊肠期(L1)幼丝虫，第2～9d解剖可见各期发育中的幼丝虫。结论 贵州虫株f31马来微丝蚴经6批次传代失败，可能与同一地方单一虫株的多次传代发生遗传突变有关。     

抗体依赖细胞介导对马来丝虫L_3细胞毒作用的体外研究

在体外小鼠特异性抗周期型马来丝虫感染期幼虫(L_3)血清(AIMS)或正常小鼠血清(fNMS)存在时,中性粒细胞(Neu)、巨噬细胞(Mφ)和嗜酸性粒细胞(Eos)均可粘附于虫体表面,Neu和Mφ对L_3的杀伤作用明显高于Eos。Eos只是在AIMS存在时,才表现出弱的细胞毒作用。通过用羊抗鼠IgG血清或葡萄球菌A蛋白处理AIMS后发现细胞毒作用消失,提示参与该作用的抗体分子主要是IgG。IFAT表明L_3表面确实存在IgG分子。AIMS经56℃,30min可降低细胞毒作用,说明补体能增强该作用。该作用还可因加入EDTA而不是EGTA受到明显抑制,表明补体是通过激活替代途径参与了该反应。扫描电镜观察被细胞粘附的虫体表面出现损伤现象。     

马来丝虫微丝蚴在蚊体内的脱鞘和穿壁观察

用蚊消化道体外培养、活体蚊解剖等方法,发现周期型马来丝虫微丝蚴在中华按蚊体内的穿壁活动通常发生于感染后的75～150min,占所有穿过胃壁的80%。最早穿壁发生于感染后的40min,最迟的到感染后4h。穿壁发生于消化道的广泛部位,包括前肠的后段、中肠以及后肠的前段。多数微丝蚴于胃内脱鞘,穿出胃壁的微丝蚴有10%仍带有鞘膜,这些微丝蚴可在血腔中完成脱鞘,并能继续发育至感染期。微丝蚴在东乡伊蚊体内的脱鞘与穿壁活动与中华按蚊的相似。     

注射感染马来丝虫微丝蚴在蚊虫体内早期...

This paper reports the early development and variation of inoculated Brugia malayi microfilariae in 3 groups of mosquitoes, i. e. young Anopheles sinensis, young Culex quinquefasciatus and old Cx. quinquefasciatus. Significant differences were observed among these groups. Sixty hours after inoculation, the percentage of normally developing filarial larvae in young An. sinensis was 72.3%; the percentage of melanized microfilariae in young Cx. quinquefasciatus was 75.4% and the percentage of filarial larvae which developed abnormally or remained in diapause status in old Cx. quinquefasciatus was 67.1%, each being much higher than that in the other groups. It was suggested that the immune competence of the mosquitoes had influence upon the filarial development. The intensity of the immune response not only varied with the species, but also diminished with the aging of mosquitoes.     

PCR及PCR-ELISA法检测蚊体内马来丝虫幼虫

目的：建立一种检测蚊体内马来丝虫幼虫的灵敏、快速、特异的方法。方法：选择应用PCR及PCR－ELISA法检测马来丝虫幼虫DNA的最佳反应条件，并在该条件下分别以马来丝虫Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期幼虫各1条作模板，测定检测的灵敏度及检测实验室人工感染中华按蚊体内的马来丝虫幼虫。结果：PCR及PCR－ELISA法均能检测出1条Ⅰ期幼虫（L1），而PCR的检测下限为1／10条L1，PCR－ELISA检测下限为1／100条L1；将分离的感染期幼虫加阴性蚊媒进行粗提、扩增及电泳，结果未见明显的扩增条带，扩增产物作ELISA检测，全部为阴 性；个体解剖人工感染的中华按蚊120只，分别收集113只阳性蚊体内的幼丝虫，用两种方法检测，结果均为阳性。结论：初步建立了PCR及PCR－ELISA法检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。     

注射感染马来丝虫微丝蚴在蚊虫体内早期发育的观察

本文报告经注射感染的马来丝虫微丝蚴在幼龄中华按蚊、幼龄致倦库蚊和老龄致倦库蚊体内早期发育变化的情况。接种后60h,幼丝虫在这三类蚊虫体内的发育已有明显差异。幼龄中华按蚊体内正常发育的幼丝虫比例最高(72.3％);幼龄致倦库蚊体内黑化幼丝虫的比例最高(75.4％);而老龄致倦库蚊体内以滞育或畸形的幼丝虫比例最高(67.1％)。实验表明,蚊虫的免疫是影响幼丝虫发育的一个重要因素。免疫反应的强度在不同的蚊种间有显著差异,且随蚊虫日龄的增加而下降。     

中华按蚊感染马来丝虫幼虫后生殖力、生殖营养周期及寿命变化的实验研究

以膜饲法给中华按蚊饲以含不同密度微丝蚴的血食,蚊体内丝虫的感染率和感染度随血食中微丝蚴密度50、100、150和200mf/20μl的升高而上升。幼丝虫的成熟率和实验感染指数在血食中微丝蚴密度较高时(200mf/20μl)有所降低。微丝蚴密度为50～150mf/20μl时,对蚊的生殖力、生殖营养周期及寿命基本上无影响,甚至产卵量有所增加,寿命有所延长;密度为200mf/20μl时才有一定程度的影响。因而认为,“马来丝虫-中华按蚊”是相互适应的“病原-媒介”系统。     

感染马来丝虫微丝蚴的中华按蚊组织化学观察

中华按蚊碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、非特异性酯酶、乙酰胆碱酯酶、糖原及蛋白质等组织化学观察结果表明，感染马来丝虫微丝蚴后蚊体内的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、糖原及蛋白质含量均比未感染蚊明显降低。非特异性酯酶活性亦有一定改变，而乙酰胆碱酯酶活性则几无改变。     

人房内中华按蚊,嗜人按蚊自然感染牛腹腔丝虫的纵向观察

中华接蚊、嗜人按蚊均可感染牛腹腔丝虫和马来丝虫。在马来丝虫病流行区进行蚊媒调查，特别是在马来丝虫病防治后期的蚊媒监测中，蚊体内人、畜丝虫幼虫的鉴别尤为重要[1]。为了排除牛腹腔丝虫幼虫对马来丝虫病防治后期蚊媒监测的干扰，1987～1992年，1995～1996年，我们选定已无微丝蚴血症者的蔡金镇两个原马来丝虫病流行村，总人口1963人为观察区、先后共8年观察人房内中华接蚊和嗜人按蚊自然感染牛腹腔丝虫的情况。材料与方法1．牛腹腔丝虫自然传染原调查：上午抽采观察区村民饲养的水牛耳背静脉血各6大滴（约120μl），涂制成1．5×3．0…