对溴氰菊酯抗性和敏感淡色库蚊不同发育阶段的抗性水平

对室内选育的淡色库蚊（对溴氰菊酯抗性品系和敏感品系）用浸渍法测定了Ⅱ龄、Ⅲ龄和Ⅳ龄幼虫，用接触筒法测定了早期、中期和晚期成虫；并观察了增效醚（ＰＢ）、磷酸三苯酯（ＴＰＰ）和杀虫脒与溴氰菊酯混用后的增效效果。结果表明：（１）淡色库蚊各发育阶段对溴氰菊酯的抗性水平，在敏感品系由高至低依次为中期、晚期、早期成虫、Ⅳ龄、Ⅲ龄和Ⅱ龄幼虫；在抗性品系则为早期、中期、晚期成虫、Ⅳ龄、Ⅲ龄和Ⅱ龄幼虫。（２）ＰＢ和杀虫脒均有明显增效作用，提示抗性可能与氧化代谢增强和靶标部位不敏感有关。其中似乎幼虫阶段以氧化代谢增强为主要抗性机制；在成虫阶段，氧化代谢增强和靶标部位不敏感性均在抗性中起重要作用     

沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性关系初步研究

目的 目的 探讨沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性间的相关性。 方法 方法 以PCR鉴定本实验室饲养的淡色库 蚊体内的沃尔巴克氏体, 采用实时定量PCR技术 （qRT?PCR） 测定并比较淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中沃尔巴克 氏体表达差异。 结果 结果 本实验室饲养的淡色库蚊体内含有沃尔巴克氏体。淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系卵、 一龄蚊、 二 龄蚊、 三龄蚊、 四龄蚊、 雌蚊、 雄蚊体内沃尔巴克氏体表达水平分别是敏感品系的18.42、 3.69、 4.43、 3.96、 6.31、 1.55、 3.76 倍, 差异均有统计学意义 （P均< 0.05）, 而抗性品系和敏感品系蛹中沃尔巴克氏体表达水平差异无统计学意义 （P > 0.05）。南京江心洲溴氰菊酯抗性雌蚊体内沃尔巴克氏体表达水平是敏感雌蚊的2.64倍。 结论 结论 沃尔巴克氏体可能与 淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性有关。     

嗜人按蚊不同发育阶段溴氰菊酯敏感性分析

目的 研究嗜人按蚊不同发育期溴氰菊酯敏感性动态变化。方法选用室内选育的嗜人按蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系，以浸渍法测试幼虫溴氰菊酯敏感性，以WHO推荐的接触筒强迫接触法测试成蚊溴氰菊酯敏感性。结果幼虫期，溴氰菊酯敏感品系和抗性品系对杀虫剂的敏感性由低至高依次均为Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ龄幼虫；成蚊期，两种品系的敏感性均以早期成蚊最低，中期成蚊次之，晚期成蚊最高。结论嗜人按蚊两品系不同生长期溴氰菊酯敏感性消长相似，敏感性水平随幼虫的发育而上升，随成蚊蚊龄增长而下降。     

淡色库蚊对溴氰菊酯抗性的遗传分析

目的：对室内选育的淡色库蚊抗溴氰菊酯品系（抗性系数５１８）进行遗传分析。方法：采用ＬＣ－Ｐ值分析法研究淡色库蚊溴氰菊酯抗性的形式遗传。采用抑制剂增效试验探讨抗性机制。结果：正交和反交Ｆ１代的抗性系数分别为１５４．８和１５９．２。Ｆ１代的ＬＣ－Ｐ线靠近抗性亲本一方，Ｄ＝０．６２５；ＢＣ代在死亡率５０％处、Ｆ２代在死亡率２５％和７５％处未出现明显平坡，ＢＣ和Ｆ２的实测曲线和理论曲线均存在较大差异，Ｐ均＜０．０１；ＰＢ、ＤＥＦ和ＴＰＰ对抗性品系的增效比分别为２７．１３、１．２２和１．０５。结论：淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性为多基因遗传，其主要基因为不完全显性，多功能氧化酶是抗性的主要因子。     

不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶（NSE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力在不同品系淡色库蚊（Cules pipiens pallens）各发育阶段的变化，为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫NSE和AChE活力，结果显示，敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育阶段有变化，I－Ⅲ龄幼虫较低，Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊较高，在各发育阶段均是DDVP抗性品系NSE活力最高，残杀威抗性品系次之，敏感品系最低，其中Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊阶段三个品系间NSE活力差别更明显；三个品系淡色库蚊AChE活力在I－Ⅳ龄幼虫和蛹期较低，3日龄雌成蚊较高，三个品系间AChE活力稍有差异，从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫NSE活力判断抗药性可选择Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄未吸血雌成蚊；测定蚊虫AChE不敏感性判断抗药性可选择3日龄未吸血雌成蚊；蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫阶段施药。     

嗜人按蚊不同发育阶段溴氰菊酯敏感性分析

目的研究嗜人按蚊不同发育期溴氰菊酯敏感性动态变化。方法选用室内选育的嗜人按蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系,以浸渍法测试幼虫溴氰菊酯敏感性,以WHO推荐的接触筒强迫接触法测试成蚊溴氰菊酯敏感性。结果幼虫期,溴氰菊酯敏感品系和抗性品系对杀虫剂的敏感性由低至高依次均为Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ龄幼虫;成蚊期,两种品系的敏感性均以早期成蚊最低,中期成蚊次之,晚期成蚊最高。结论嗜人按蚊两品系不同生长期溴氰菊酯敏感性消长相似,敏感性水平随幼虫的发育而上升,随成蚊蚊龄增长而下降。     

8种植物提取物对2种不同品系淡色库蚊的敏感性研究（英文）

目的研究开发有效的天然植物杀虫剂。方法按照WHO推荐的蚊幼虫敏感性测定方法,用8种植物的叶、茎、果和皮等提取物,对野生和敏感2个品系淡色库蚊进行敏感性测定。结果银杏外果皮提取物对淡色库蚊2个品系杀虫效果最强,其次为三尖杉和水杉,其他5种植物（重阳木、乌桕、香椿、杜仲和山茱萸）杀虫效果较弱。随后用银杏外果皮提取物对淡色库蚊卵、幼虫、蛹进行毒力测定,结果表明,Ⅰ龄幼虫最敏感,其次为Ⅱ龄、Ⅲ龄和Ⅳ龄幼虫。银杏外果皮提取物对敏感品系Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄和Ⅳ龄的LC50分别为2.52、8.62、3.3和18.6mg/L;对野生品系Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄和Ⅳ龄的LC50分别为7.4、15.2、19.2和25.0mg/L,明显高于敏感品系。银杏外果皮提取物在5～100mg/L浓度范围内不影响卵的孵化,在100mg/L以上时,影响蛹的羽化。结论8种植物提取物对淡色库蚊的敏感性各不相同,银杏外果皮提取物有明显的杀幼效果,值得进一步研究和开发。     

淡色库蚊抗性品系生态习性的探讨

实验观察淡色库蚊敏感品系的化蛹率显著高于抗DDVP品系及抗氯氰菊酯系 (χ2值为25.98和20.64,P＜0.05),而抗性品系幼虫历期略短于敏感品系;亚致死剂量氯氰菊酯对抗氯氰菊酯品系及敏感品系的Ⅲ～Ⅳ龄淡色库蚊幼虫化蛹有显著影响,抗性品系蚊虫寿命略有延长.表明长期使用单一的杀虫剂蚊虫易产生抗性.     

用核酸探针检测淡色库蚊溴氰酯抗性

目的：用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核针检测淡色库蚊溴氰菊抗性。方法：用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中中胰蛋白酶的表达差异，用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northern blot检测淡色库蚊的抗药性。结果：逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的4．33倍。以其为探针Northern blot检测显示，胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达，抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的3．90倍。结论：作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法，胰蛋白酶核酸探针可用于区分抗药性品系和敏感品系。     

微板法测定抗药性酯酶检测淡色库蚊抗药性的研究

目的 研究简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术。方法 以β-乙酸萘酯为底物，坚固蓝B盐为显色剂，用酯酶微板法测定实验室和现场单个淡色库蚊体内非特异性酯酶活力。结果 实验室5个品系淡色库蚊以抗DDVP品系非特异性酯酶活力水平最高，其次为抗残杀威品系和抗DDVP降解品系，抗氯氰菊酯品系较低，与敏感品系相近；3个现场淡色库蚊种群对DDVP抗性为4．15～9．36倍，对残杀威抗性为1．02～3．8l倍，其非特异性酯酶活力水平均较高。结论 酯酶微板法测定非特异性酯酶能够检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平，能够早期预测抗性发展趋势，便于制订抗药性克服对策。     

用核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性

目的　用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。方法　用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中胰蛋白酶的表达差异 ,用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northernblot检测淡色库蚊的抗药性。结果　逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的 4 33倍。以其为探针Northernblot检测显示 ,胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达 ,抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的 3 90倍。结论　作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法 ,胰蛋白酶核酸探针可用于区分抗药性品系和敏感品系     

抗DDVP和敏感淡色库蚊不同发育期非特异性酯酶活力变化的研究

目的 研讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE）活力在抗DDVP和敏感品系淡色库蚊不同发育期的变化,为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。方法 以β－乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,用微量滴定板法测定蚊虫NSE活力。结果 敏感品系和抗DDVP品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育 变化,Ⅰ-Ⅲ龄幼虫较低,Ⅳ龄幼虫最高,蛹期略下降,成虫期较高,各发育期抗DDVP品系NSE活力均高于敏感品系,Ⅳ龄幼虫期二者差别明显。结论 测定NSE检测蚊虫抗药性可选择Ⅳ龄幼虫或3日龄未吸血雌成蚊;蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫期施药。     

淡色库蚊细胞色素P450基因的克隆、序列分析及表达差异的鉴定

目的克隆淡色库蚊细胞色素P450（CYP6F1）基因并进行表达差异的鉴定。方法采用RT—PCR技术和RACE策略，从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系4龄幼虫中克隆细胞色素P450基因（CYP6F1），用相应的软件进行生物信息学分析，并用实时定量PCR和RT—PCR分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定。结果成功克隆出CYP6F1基因，基因全长1639bp，开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸（GenBank登录号：AY662654）。序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因（AB001324）有99％的同源性，并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征，1个膜锚定信号、2个还原酶结合位点、1个典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等。实时定量PCR和半定量RT—PCR结果表明，CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系，且CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。结论CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关，并且在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。     

淡色库蚊氯菊酯抗性品系和敏感品系的生物学特性

目的　比较淡色库蚊氯菊酯抗性品系和敏感品系生物学特性的差异。　方法　在实验室观察淡色库蚊氯菊酯抗性品系及敏感品系的吸血、繁殖和发育等生物学特性 ,构建实验种群生命表。　结果　淡色库蚊氯菊酯抗性品系吸血率低于敏感品系 ,卵、幼虫和蛹的发育历期及成虫寿命均长于敏感品系 ,卵期死亡率高于敏感品系。以上各项 ,两种品系间差异均具有显著性意义 (P <0.01)。抗性品系相对于敏感品系的适合度为 0.58。　结论　淡色库蚊氯菊酯抗性品系表现出对生长发育和繁殖的不利性。     

淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初步鉴定

[目的 ]探讨淡色库蚊细胞色素P45 0与溴氰菊酯抗药性的关系。 [方法 ]采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录 聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段 ,T/A直接克隆法筛选阳性克隆 ,对新序列进行cDNA芯片和逆Northern分析。 [结果 ]从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得 112个阳性克隆 ,其中 2 4个阳性克隆测序后显示为细胞色素P45 0新序列 ,由GenBank登录上网 ;经国际细胞色素P45 0命名委员会鉴定分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ;2 4个CYP4cDNA片段中 ,来自敏感品系的 2个片段(NYDS3和NYDS5 )和来自抗性品系的 4个片段 (NYDR6、NYDR9、NYDR15和NYDR17)在两品系间存在差别 ,cDNA芯片信号亮度值均是抗性品系大于敏感品系 ,倍数在 3 .1～ 9.7范围内 ;NYDR17仅与抗性探针杂交 ;逆Northern再鉴定 ,获得了与cDNA芯片一致的结果。 [结论 ]淡色库蚊CYP4与溴氰菊酯抗性相关 ;在淡色库蚊溴氰菊酯抗性机理中 ,可能存在P45 0基因点突变而导致的特异表达。     

溴氰菊酯和倍硫磷混用、轮用对谈色库蚊抗性发展的影响

目的：观察杀虫剂不同用药方式对淡色库蚊抗性发展的影响。方法：以淡色库蚊（Culex pipiens pallens)为试虫,用溴氰菊酯和倍硫磷混剂和单剂隔代轮用进行抗生选育,以溴氰菊酯和倍硫磷单剂作为对照。结果：淡色库蚊经16代处理,其抗性系数在溴氰菊酯和倍硫磷混用为14．65;两者轮用为17．74（溴氰菊酯）和2．77（倍硫磷）,单剂连用则分别为729．08和24．73,结论：两种作用机制不同的杀虫剂混用或轮用均能延缓害虫对杀虫剂抗性的发展。     

淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初 …

「目的」探讨淡色库蚊细胞色素Ｐ４５０与溴氰菊酯抗药性的关系。「方法」采用一对昆虫细胞色素Ｐ４５０简并引物，以反转录－聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段、Ｔ／Ａ直接克隆法筛选阳性克隆，对新序列进行ｃＤＮＡ芯片和逆Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析。「结果」从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得１１２个阳性克隆，其中２４个阳性克隆测序后显示为细胞色素Ｐ４５０新序列，由ＧｅｎＢａｎｋ登录上网；经国际细胞色素Ｐ４５     

冰冻储存对淡色库蚊成虫乙酰胆碱酯酶活性的影响

-20℃冰冻0、7、14、21和28d的残杀威抗性品系和敏感品系淡色库蚊3d龄雌成虫AChE活性均无显著变化。表明-20℃冰冻不影响淡色库蚊AChE活性。因此可将现场采集的蚊虫带回实验室冻存后集中测定AChE。     

酯酶滤纸法检测淡色库蚊抗药性的研究

为探讨简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术,以α-乙酸萘酯为底物,坚硬固蓝B盐为显色剂,用滤纸法测定实验室和现场淡色库蚊（Cx.pipien pallens)酯酶活力,结果显示三个抗性品系淡色库蚊以抗DDVP品系抗性个体频率最高,其次为抗残杀威品系,抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近;三个现场淡色库蚊均对DDVP和残杀威产生不同程度抗性,其抗性个体频率均较高,表明酯酶滤纸法可用于检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平,该方法操作简便快速,观察结果直观灵敏,具有实用价值。     

安徽省中北部淡色库蚊对多种杀虫剂抗性及其kdr基因突变研究

目的 目的 了解安徽省中北部地区淡色库蚊对多种杀虫剂的抗药性现状及其kdr基因突变情况。方法 方法 2014年 6-9月在淮北市、 蚌埠市和滁州市3地采集淡色库蚊幼虫, 带回实验室饲养至成虫, 采用WHO成蚊接触筒药膜滤纸接触 法对其进行0.05%溴氰菊酯、 5%马拉硫磷、 0.1%噁虫威、 4%DDT抗性生物测定。以PCR扩增经溴氰菊酯抗性测定的库蚊 抗性相关kdr基因并进行测序, 统计L1014位点突变情况。结果 结果 上述3个地区淡色库蚊对溴氰菊酯、 马拉硫磷、 噁虫 威、 DDT 4种杀虫剂都产生了不同程度的抗药性, 对DDT产生的抗性较高; 虽然3地淡色库蚊接触DDT后的死亡率差异 无统计学意义 （F = 1.027,P > 0.05）; 但接触溴氰菊酯、 马拉硫磷、 噁虫威后的死亡率差异均有统计学意义 （F = 23.823、 33.955、 128.841, P均< 0.01）。3地淡色库蚊种群的kdr基因1014位点均存在L1014F、 L1014S 这2种非同义突变; L1014F 突变频率与溴氰菊酯抗性水平呈正相关 （r 2 = 0.718, P < 0.01）。结论 结论 安徽省中北部地区淡色库蚊对溴氰菊酯、 马拉硫 磷、 噁虫威、 DDT均产生了较强的抗性, kdr基因L1014F突变频率与溴氰菊酯抗性水平呈正相关; 各地区卫生部门需加强 对媒介蚊虫抗性的动态监测。