促红细胞生成素对急性脑损伤的保护作用

目的观察重组人促红细胞生成素(r-Epo)对大鼠急性脑损伤后脑细胞凋亡及脑水肿的影响。方法30只大鼠分为A、B、C 3组,B、C 2组用自由落体打击器制作脑外伤模型,C组r-Epo预处理,48 h后断头取脑。制作石蜡切片,TUNEL法检测细胞凋亡,同时用干湿重法测定各组大鼠脑组织含水量。结果与B组比较,C组外伤侧脑组织含水量明显降低(P<0.01),细胞凋亡数明显减少(P<0.01)。结论r-Epo能显著降低急性脑损伤后脑水肿,减少水肿区神经细胞凋亡,对急性损伤后脑组织有良好的保护作用。     

神经节苷脂GM1对大鼠脑液压伤后行为和记忆的影响

目的:探讨大鼠脑液压伤后GM1与学习记忆、脑内一氧化氮、突触素和细胞凋亡的关系.方法:液压损伤法建立大鼠脑损伤模型,随机分为治疗组、损伤组和对照组.观察伤后学习记忆改变,检测一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、突触素和海马、皮质及基底节区细胞凋亡指数.结果:治疗组学习记忆成绩高于损伤组,NOS、NO明显降低,治疗组海马CA1区突触素显著增多,皮质、海马和基底节的凋亡细胞数明显减少.结论:GM1能减少海马和皮质细胞凋亡,可能有利于促进脑损伤后神经行为和记忆的恢复.     

神经节苷脂GMl对大鼠脑液压伤后行为和记忆的影响

目的探讨大鼠脑液压伤后GM1与学习记忆、脑内一氧化氮、突触素和细胞凋亡的关系.方法液压损伤法建立大鼠脑损伤模型,随机分为治疗组、损伤组和对照组.观察伤后学习记忆改变,检测一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、突触素和海马、皮质及基底节区细胞凋亡指数.结果治疗组学习记忆成绩高于损伤组,NOS、NO明显降低,治疗组海马CA1区突触素显著增多,皮质、海马和基底节的凋亡细胞数明显减少.结论GM1能减少海马和皮质细胞凋亡,可能有利于促进脑损伤后神经行为和记忆的恢复.     

FK506对大鼠脑液压伤后神经行为和记忆的影响

目的 研究FK506对大鼠脑液压伤后神经行为和记忆的影响。方法 通过液压损伤法建立大鼠脑损伤模型,随机分为损伤组、治疗组和对照组(每组8只)。采用免疫组化方法和图象分析技术,检测突触素在皮质、海马和基底节的表达,并用流式细胞仪法检测上述部位的凋亡细胞数。结果 治疗组神经行为与记忆实验成绩高于损伤组。治疗组海马CA1、CA3区突触素表达显著增高(P<0.01)。海马、基底节和皮质的凋亡细胞数较损伤组明显减少。结论 FK506能促进突触素表达,减少海马和皮质细胞凋亡,有利于促进脑损伤后神经行为和记忆的恢复。     

黄体酮对创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的 观察黄体酮对脑外伤后神经细胞凋亡的影响,探讨其对脑外伤(TBI)继发性脑损伤是否存在保护作用.方法 雄性Wistar 大鼠随机分为无脑损伤的假手术(sham)组、脑损伤(TBI)组、脑损伤后注射黄体酮治疗(P-TBI)组及注射二甲基亚砜(DMSO)溶剂(D-TBI)组,每大组24 只,再分1 d、3 d、5 d 和7 d 四个小组,每小组6 只.采用Freeney 法造成鼠脑挫裂伤模型,在伤后四个不同时相点用TUNEL 染色法分别检测四组大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况.结果 创伤性脑损伤后凋亡细胞数量在TBI 第1 d 明显增加,TBI后第7 d 神经细胞凋亡达到高峰.伤后注射黄体酮治疗组神经细胞凋亡指数明显下降(P ＜0.05).结论 大鼠TBI 后周围脑组织神经细胞凋亡在伤后持续增加,注射黄体酮能抑制细胞凋亡,对脑组织有一定保护作用.     

脑损伤后N-乙酰天冬氨酰谷氨酸肽酶抑制的神经保护

目的 探索颅脑损伤后N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(NAAG)肽酶抑制的神经保护效应.方法 将20只SD大鼠随机分成4组后制作中度液压颅脑损伤模型.伤后3个时间点(即时,8 h,16 h)分别经腹腔注射新型NAAG肽酶抑制剂ZJ-43(各组剂量:0,50,100,150 mg/kg).伤后24 h处死动物取脑组织行Fluoro-Jade B组织荧光染色以及GFAP免疫组化染色.通过立体细胞计数着重观察大鼠海马CA2/3区退变神经元及正常胶质细胞的数量变化.结果 ZJ-43能显著减少颅脑损伤后的神经元退变(P＜0.01),其中小剂量处理组(50 mg/kg)保护作用最佳,还能同时显著减少儋颅脑损伤后的胶质细胞丢失(P＜0.05).结论 阻断NAAG肽酶活性能有效放大内源性递质NAAG的神经保护作用,从而阻断谷氨酸兴奋毒性的病理进程,有望成为治疗颅脑损伤的新策略.     

[Gly14]-Humanin减轻大鼠颅脑外伤后氧化应激及细胞凋亡

目的探讨[Gly14]-Humanin(HNG)对大鼠颅脑外伤后脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和细胞凋亡的影响。方法 135只SD大鼠分为空白组(n=45)、对照组(n=45)及HNG组(n=45),其中对照组及HNG组建立颅脑外伤模型后前者予右侧股静脉注射生理盐水2 m L/kg,后者则予HNG 2μL/kg,此后各组每24 h予1次等量生理盐水/HNG,直至大鼠被处死;而空白组不予任何处理。根据处死时间随机分为1 h、3 d和7 d共3个亚组,每亚组各15只。比较损伤灶周围脑组织MDA、SOD、GSH含量水平及细胞凋亡情况。结果 HNG组大鼠脑组织中MDA含量水平及凋亡细胞计数在损伤后1 h即升高,3 d达到最高值,后开始降低,但7 d时仍高于损伤后1 h水平,均显著低于同一时间点的对照组及空白组(P均0.05);相反,SOD活性在损伤后迅速降低,3 d达到最低值,随后逐渐上升,但7 d时仍低于损伤后1 h水平,均显著高于同一时间点的对照组及空白组(P均0.05);GSH变化规律与SOD基本一致,与各时间点的对照组比较亦有显著性(P均0.05);HNG大鼠脑组织损伤后MDA含量水平与细胞凋亡数呈正相关(r=0.720,P0.05),而SOD及GSH的含量与细胞凋亡数呈负相关(r=-0.702,P0.05;r=-0.674,P0.05)。结论颅脑外伤后HNG抑制氧化应激反应,进一步减少细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。     

海马神经元兴奋性毒性模型的建立及其意义

目的探讨不同浓度谷氨酸对海马神经元的损伤作用,流式细胞仪在建立理想的兴奋性毒性模型中的应用。方法在体外原代培养10d的海马神经元中分别加入不同浓度的谷氨酸(100、200、400、600、800μmol/L),24h后相差显微镜下观察细胞形态变化,用MTT法检测存活率和流式细胞仪检测凋亡率以评定谷氨酸对海马神经元的损伤程度。结果不同浓度的谷氨酸组与对照组的细胞存活率差异有显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性,随着谷氨酸浓度的升高,神经元的存活率降低;谷氨酸终浓度(100、200、400μmol/L)组的细胞凋亡率与对照组比较差异有显著性(P<0.01);600和800μmol/L谷氨酸组的细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性(P>0.05),但细胞凋亡率随着谷氨酸浓度的增加而降低。结论过高浓度的谷氨酸导致细胞急性坏死而非迟发性凋亡,运用流式细胞仪检测体外培养海马神经元凋亡率是一种特异性高的检测方法,值得推广。     

亚低温抑制大鼠弥漫性脑损伤后细胞凋亡的研究

目的探讨大鼠不同程度弥漫性脑损伤后脑组织的凋亡变化过程及亚低温治疗对脑细胞凋亡的抑制作用.方法采用大鼠Marmarou颅脑创伤装置制作弥漫性脑损伤模型,然后将128只Wistar大鼠分为未损伤组(对照组)、重度损伤组、轻度损伤组和亚低温治疗组.通过电子显微镜、组织切片原位末端标记DNA片段(TUNEL染色)、琼脂糖凝胶电泳(DNA Ladder法)等方法,观察和比较不同程度脑损伤后,大鼠脑皮层及海马区凋亡细胞的形态、特点和数量.结果(1)损伤后24～48 h,皮层及海马区可见大量细胞皱缩、核碎裂、核不规则等细胞凋亡现象,48 h较24 h更为严重;亚低温治疗后24～48 h,电子显微镜观察皮层及海马区未见细胞皱缩、核碎裂等细胞凋亡现象.(2)TUNEL染色结果显示,随着损伤程度的加重凋亡明显加重,损伤后48 h达高峰,然后逐渐下降.轻度损伤组细胞凋亡主要限于海马CA2和CA3区;重度脑损伤组细胞凋亡涉及整个海马结构,同时还广泛累及额顶区皮质.损伤后第24、48、72 h,皮层及海马区的凋亡细胞数量较同期未治疗组明显减少.(3)重度损伤后48 h,海马和皮层区细胞琼脂糖电泳可见典型的DNA梯状带,其他时间未见梯状带.亚低温治疗组、轻度脑损伤组及未损伤组亦未见梯状带.结论轻度弥漫性脑损伤后,脑细胞凋亡多发生于海马CA2和CA3区;重度脑损伤后皮层及海马区细胞可发生广泛凋亡.细胞凋亡随着损伤程度的加重而加重,高峰位于伤后第2 d.亚低温治疗可有效地抑制大鼠弥漫性脑损伤后的细胞凋亡.     

大鼠脑损伤局部谷氨酸的异常释放对乳酸含量变化的影响

目的探讨谷氨酸(Glu)在大鼠脑损伤局部的异常释放以及其对乳酸(Lac)含量变化的影响。方法采用大鼠局部脑损伤动物模型,分为对照组、损伤组、干预组。伤前15min干预组注射Riluzole(一种Glu突触前释放抑制剂),损伤组注射等容量的生理盐水,对照组仅开骨窗不损伤脑。应用微透析技术检测各组伤后不同时间透析液中Glu含量([Glu]d)及Lac含量([Lac]d)变化。结果[Glu]d及[Lac]d在伤后15min、30min和45min干预组明显低于损伤组(P<0.05),而明显高于对照组(P<0.05);在伤后60min,损伤组仍明显高于对照组(P<0.05)。伤后不同时间[Glu]d和[Lac]d变化呈显著正相关(P<0.01)。结论脑损伤后受损脑组织细胞液中Glu水平的升高是Glu神经元末梢大量释放Glu所致,并继而引起了Lac的含量升高。     

糖尿病大鼠颅脑损伤早期CRP的动态变化及意义

目的 探讨糖尿病大鼠颅脑损伤早期血清CRP的变化及意义. 方法 42只SD大鼠根据是否脑损伤和糖尿病分5组,健康对照组6只,假损伤无糖尿病组6只,糖尿病无脑损伤组10只,单纯脑损伤组10只,脑损伤合并糖尿病组10只.用ELISA法测定各组大鼠血清1h、12h、24h、36h、48h、72h CRP的浓度.结果 糖尿病合并脑损伤组及单纯脑损伤组随时间不同血清中CRP含量持续增高,各时间段差异均有统计学意义(P＜0.01),糖尿病合并脑损伤组血清中CRP高于单纯脑损伤组及糖尿病组(P＜0.01).结论 CRP含量变化与颅脑损伤和糖尿病密切相关.糖尿病颅脑损伤后动态测定CRP对监测治疗效果、预后有重要意义.     

Endogenous adult neurogenesis and cognitive function recovery following traumatic brain injury in the rat hippocampus

BACKGROUND:Endogenous neural progenitor cells play a beneficial role for cognitive recovery following traumatic brain injury.However,there are few classification-control studies aimed at varying graded brain trauma.OBJECTIVE:To observe the effects of adult endogenous neurogenesis on cognitive function repair and regeneration of neural progenitor cells following varying graded traumatic hippocampal injury to determine the significance of endogenous neurogenesis in the repair of brain injury.DESIGN,TIME AND SETTING:A randomized,controlled,animal experiment was performed at the Key Laboratory of Injuries,Variations and Regeneration of Nervous System,Tianjin Medical University General Hospital,from February to October 2009.MATERIALS:Mouse anti-rat 5-bromodeoxyuridine (BrdU) and neuronal nuclei (NeuN) monoclonal antibodies were purchased from Millipore Corporation,USA.METHODS:A total of 45 Wistar rats were randomly assigned to three groups.Mild and severe injury groups were respectively subjected to (182 ± 2) kPa and (284 ± 4) kPa lateral fluid percussion to establish models of brain injury,and the control group was subjected to surgery with no lateral fluid percussion.MAIN OUTCOME MEASURES:Cognitive function was estimated using the Morris water maze.Proliferation,survival,and differentiation of newly generated cells in the injured hippocampus were observed through the use of immunofluorescent staining.RESULTS:At 7 days post-injury,the number of BrdU+ cells in the hippocampal dentate gyrus significantly increased in the mild and severe injury groups compared with the control group (P<0.01).At 61 days post-injury,the number of BrdU7NeuN+ cells in the hippocampal dentate gyrus was significantly greater in the mild injury group compared with the severe injury and control groups (P< 0.01).In addition,the control group exhibited the greatest proportion of surviving cells that differentiated into mature neurons compared with the injury groups (P< 0.01).Moreover,at 61 days post-injury,cognitive function in rats with mild injury recovered to normal levels,whereas the severe injury group exhibited cognitive deficits (P< 0.01).CONCLUSION:Traumatic brain injury may be a stimulation factor for proliferation of neural progenitor cells in the adult hippocampus but severe brain trauma does not lead to an increased number of newly generated cells.Endogenous adult neurogenesis repairs neurological functions to an extent.However,recovery of neurological function remains limited following severe traumatic brain injury.     

依达拉奉对颅脑损伤病人脑水肿及预后的影响

目的探讨依达拉奉对颅脑损伤病人脑水肿及预后的影响。方法采用随机双盲平行对照试验,98例急性颅脑损伤的病人随机分成治疗组50例和对照组48例,对照组按照急性脑损伤常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上给予依达拉奉注射液30mg加入生理盐水注射液100ml中静滴,bid,共14d。2组在治疗后3、7、14、28d做头部CT检查,根据脑CT显示脑水肿最大层面的长×宽测算脑水肿面积表示脑水肿的程度,观察脑水肿的变化。于治疗前和治疗后28d分别进行格拉斯哥昏迷评分(GCS)。结果2组病人伤后脑水肿均逐渐加重而至第7d达高峰期,在第7d前2组脑水肿变化比较无统计学意义(P>0.05)。从第14～28d2组病人均明显减轻,但治疗组脑水肿减轻程度明显优于对照组(P<0.01);2组在第28dGCS评分均有提高,但治疗组GCS评分明显高于对照组(P<0.05)。依达拉奉治疗期间未发现明显不良反应。结论依达拉奉可以减轻颅脑损伤病人脑水肿,并能改善预后,无明显不良反应。     

促红细胞生成素抑制大鼠创伤性脑水肿形成

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠创伤性脑水肿的影响及其的潜在分子机制。方法取SD大鼠90只,随机分为假手术组,创伤组和EPO组。创伤组:制作改进式Feeney's脑创伤模型;EPO组:伤后给大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素(5000 IU/kg)。伤后24 h,72 h和120 h,使用平衡木法评定各组大鼠行为学评分。伤后72 h时,检测各组大鼠脑含水量,脑组织胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的磷酸化水平、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)mRNA和蛋白表达水平。结果在伤后各时间点,EPO组大鼠神经功能障碍的行为学评分也较创伤组有明显降低(均P<0.05)。伤后脑组织含水量由假手术组的78.76%±0.65%上升至创伤组的81.26%±0.40%(P<0.01),EPO组脑含水量则降低至79.71%±0.59%(与创伤组比较P<0.01)。与假手术组比较,创伤组ERK磷酸化的水平在伤后72 h明显上升(P<0.01),EPO组伤后ERK磷酸化水平则明显低于创伤组(0.369±0.046 vs.0.815±0.127,P<0.01);AQP4 mRNA和蛋白在伤后的表达水平均较假手术组明显增高(均P<0.01),EPO组AQP4 mRNA和蛋白的表达水平较创伤组均显著下降(均P<0.01)。结论EPO可抑制大鼠脑创伤后ERK信号通路的过度激活及下游AQP4的过表达,减轻大鼠的创伤性脑水肿。     

盐酸纳洛酮治疗大鼠急性颅脑损伤的药效学观察

目的观察盐酸纳洛酮(金尔伦)在大鼠急性颅脑损伤实验模型中促进神经功能恢复的治疗作用,并做量效分析。方法SD大鼠250只,采用Feenly自由落体撞击法建立颅脑损伤模型,随机分成六组,于损伤后30min开始给药。前四组每天分别给予金尔伦0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg和9mg/kg腹腔注射;阳性对照组:给予胞磷胆碱钠2mg/只腹腔注射;阴性对照组:给予0.5ml/只生理盐水腹腔注射。每天进行MNSS神经功能评分,最长疗程为14d。伤后2d和4d每组随机取8只大鼠,通过干—湿重法计算脑组织的含水量。结果金尔伦治疗组大鼠的神经功能恢复情况明显优于其他两组(P<0.01)。金尔伦1、3、9mg/kg三组的情况优于0.3mg/kg组(P<0.05),而这三组之间没有显著性差异(P>0.05)。金尔伦治疗组大鼠的脑含水量明显低于对照组(P<0.05);金尔伦内部各实验组之间,0.3mg/kg组的脑含水量高于其他三组(P<0.05),其他三组之间无显著性差异(P>0.05)。结论金尔伦能够降低大鼠急性颅脑损伤后的脑水肿,对大鼠的神经功能恢复有明显的促进作用,并在一定范围内随着剂量的增加效果更显著。     

葛根素通过Nrf2-ARE信号通路抵抗氧化应激对创伤性脑损伤的神经保护作用

目的 探讨葛根素对创伤性脑损伤(TBI)模型大鼠的神经保护作用及脑组织红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)一抗氧化反应原件(ARE)信号通路参与的机制。方法 选择健康成年雄性大鼠体重250～300 g构建TBI模型,将大鼠分为4组:创伤组(A组)、假手术组(B组)、葛根素治疗的创伤组(C组)和葛根素治疗的假手术组(D组); 通过采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能,脑组织干湿重称量法评价脑水肿,Nissl染色,TUNEL染色评价脑损伤体积和神经元的凋亡,使用酶活试剂盒检测损伤48 h后抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性以及氧化应激产物MDA和NO的水平,最后使用western blot和RT-PCR的方法检测Nrf2-ARE信号通路及其下游分子HO-1,NQO1的表达水平。结果 TBI手术后损伤组mNSS评分明显增高(P<0.05),葛根素治疗组能够明显降低mNSS评分(P<0.05)。TBI手术后损伤组脑水肿加重及神经元凋亡增加(P<0.05),葛根素治疗组能够明显挽救脑水肿及神经元凋亡(P<0.05)。TBI手术12 h后损伤组脑内抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性增加及氧化应激产物MDA和NO的水平升高(P<0.05),葛根素治疗组能够明显降低抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性以及氧化应激产物MDA和NO的水平(P<0.05)。western blot和RT-PCR显示葛根素不改变Nrf2的翻译和表达,但是RT-PCR显示葛根素能够明显促进Nrf2-ARE信号通路下游分子HO-1,NQO1的表达。结论 葛根素可能通过Nrf2-ARE信号通路抵抗氧化应激对创伤性脑损伤发挥神经保护作用。     

不同时间窗高压氧治疗对脑外伤大鼠认知功能障碍改善的实验研究

目的 研究不同时间窗高压氧治疗对脑外伤大鼠认知功能障碍的治疗效果. 方法 将96只大鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、液压冲击脑外伤模型组(B组)、液压冲击脑外伤模型+常规治疗组(C组)、液压冲击脑外伤模型+常规治疗+高压氧治疗组(D组),每组24只;D组在模型建立后根据高压氧治疗的时间点(3、12、24、72 h)分为4亚组(D-3 h组、D-12 h组、D-24 h组和D-72h组,每亚组6只).B、C、D组采用大鼠侧位液压冲击构建脑外伤模型后分别进行不同处理.应用水迷宫试验对比评价各组大鼠模型脑外伤后认知功能障碍的改变. 结果 在相同时间点寻找水下平台的潜伏期方面,B组最长,其次为C组、D组、A组,且D组中D.72 h组最长,其次为D-24 h组、D-12h组、D-3h组;在穿过原平台区域的次数方面,A组最多,其次为D组、C组、B组,且D组中D-3 h组最多,其次为D-12 h组、D-24 h组、D-72 h组,与B组比较差异均有统计学意义(p<0.05). 结论 高压氧治疗可以改善颅脑损伤大鼠的学习能力,对神经功能具有保护作用,且这种高压氧治疗的时间最好在损伤后12 h内完成,并且宜尽早实施.     

高压氧对颅脑损伤大鼠脑组织水通道蛋白-4表达的影响

目的 通过研究高压氧治疗对颅脑损伤大鼠脑组织水通道蛋白-4(AQP-4)表达与脑水肿的影响,探讨高压氧治疗颅脑损伤的可能作用机制. 方法 将雄性SD大鼠按随机数字表法分成3组,即假手术组、外伤对照组和高压氧治疗组,其中外伤对照组和高压氧治疗组均分为致伤后12h、1 d、3d及5 d4组.采用自由落体法制作颅脑损伤模型.干湿比重法测定脑组织的含水量,免疫组化法测定AQP-4的表达.结果 高压氧治疗组脑组织含水量较外伤对照组明显减少,但较假手术组增多,比较差异均有统计学意义(P<0.05).AQP-4在各组大鼠脑组织中均有表达,假手术组呈低表达;颅脑损伤后12 h伤灶周围水肿区星形胶质细胞足突AOP-4表达开始增高,1 d达到高峰,3 d后降低;高压氧组治疗大鼠各时间点伤灶周围AQP-4的表达与外伤对照组相比明显减低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 高压氧治疗可能通过AQP-4表达的减少来减轻脑水肿的发生,从而保护病灶周围脑组织.     

纳洛酮联合亚低温综合治疗原发性脑干损伤的临床分析

目的探讨纳洛酮与亚低温联合治疗原发性脑干损伤的临床疗效。方法将100例原发性脑干损伤患者随机分为治疗组和对照组各50例,其中对照组仅给予常规治疗,治疗组除常规治疗外,还加用纳洛酮与亚低温联合治疗,比较2组患者疗效。结果治疗组治愈率和总有效率均高于对照组(P<0.01),病死率则低于对照组(P<0.01);清醒时间明显短于对照组(P<0.01),致残率也明显比对照组低(P<0.01)。结论应用亚低温与盐酸纳洛酮联合治疗,疗效肯定且无明显不良反应,可使该病的病死率明显降低,缩短昏迷时间,减少残存率。