白噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶活性的影响

采用硫辛酰胺脱氢酶组织化学方法及图象分析技术，研究白噪声暴露后豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶（ＮＯＳ）神经元及ＮＯＳ活性的变化与听阈的关系，探讨豚鼠耳蜗核ＮＯＳ神经元在白噪声损伤过程中可能的作用。结果表明，白噪声暴露后耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元的数量及染色强度明显增加，２周达到高峰，３￣４周持续高表达，至５周有所恢复，仍高于正常水平。白噪声暴露后７ｄ以内，耳蜗核ＮＯＳ活性与ＡＢＲ阈值有分离现象，７ｄ后，ＮＯＳ     

噪声刺激对耳蜗一氧化氮合酶的影响

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在噪声性聋发病中的作用。方法：用中高频连续稳态噪声制作噪声性聋的动物模型,用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学、原位杂效和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法,观察噪声刺激对耳蜗一氧化氮合酶（ＮＯＳ）表达的影响。结果：组织化学法显示ＮＯＳ主要分布于内外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞;原位杂效法发现ＮＯＳｍＲＮＡ在内外毛细胞、螺旋神经节细胞胞浆内均可见阳性染色,但血管纹边缘细胞无阳性染色     

一氧化氮合酶抑制剂和神经营养因子3对噪声暴露下豚鼠耳蜗的保护作用

目的观察一氧化氮合酶抑制剂——N-硝基左旋精氨酸甲酯（N^G-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME）和神经营养因子3（neurotrophin 3，NT3）对噪声性听力损失的保护作用。方法80只雄性杂色豚鼠按区组随机分为非噪声组（n=20）和噪声暴露组（n=60），噪声暴露组又分为生理盐水组（n=20）、L-NAME组（n=20）、L-NAME＋NT3组（n=20）。L-NAME组和L-NAME＋NT3组动物在噪声暴露（4kHz倍频程、声压级115dB，5h）之前2d和噪声暴露前30min给予L-NAME 10mg／kg（腹腔注射），生理盐水组动物给予等体积的生理盐水。NT3（10μg／ml）在噪声暴露前4d经微量渗透泵（200μl，0．5μl／h）输入到L-NAME＋NT3组动物的右侧耳蜗鼓阶，持续到噪声暴露后10d。噪声暴露前和暴露后10d测试听性脑干反应（auditory brainstem response，ABR），暴露后3d测试耳蜗组织一氧化氮（nitric oxide，NO）水平，最后一次ABR测试后计数耳蜗毛细胞的存活率。结果无噪声暴露组动物无明显的听力改变和毛细胞缺失；生理盐水组动物的ABR阈移、毛细胞缺失率及耳蜗组织NO水平均高于L-NAME组和L-NAME＋NT3组，差异有统计学意义（P值均〈0．01）；与L-NAME组相比，L-NAME＋NT3组豚鼠的ABR阈移减小，差异有统计学意义（P〈0．01），而耳蜗组织NO水平和毛细胞缺失率差异则没有统计学意义（P=0．197及P=0．095）。结论与单独给予L-NAME相比，联合使用NT3可以更大程度减轻噪声对豚鼠耳蜗的损伤。     

诱生型一氧化氮合酶在豚鼠庆大霉素损伤后内耳前庭中的表达

目的 检测庆大霉素损伤后诱生型一氧化氮合酶在豚鼠内耳前庭中的表达。方法 实验组豚鼠皮下注射庆大霉素造成前庭损伤，对照组豚鼠皮下注射等量生理盐水。用免疫组织化学的方法检测诱生型一氧化氮合酶在前庭中的表达。结果 诱生型一氧化氮合酶在实验组前庭的表达呈阳性，在对照组前庭的表达则为阴性。结论 诱生型一氧化氮合酶在庆大霉素损伤的豚鼠前庭中呈阳性表达，提示一氧化氮在前庭损伤中起重要作用。     

不同固定液对大鼠耳蜗一氧化氮合酶表达及透射电镜观察的影响

目的 探寻用于观察大鼠耳蜗诱生型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)表达及透射电镜检查最适合的固定液配比,简化实验手段.方法 将正常大鼠6只(12耳,正常组)和庆大霉素耳中毒模型大鼠6只(12耳,模型组)各分为A、B两组(每组各3只,6耳),A组给予2.5％多聚甲醛-2.5％戊二醛、B组给予4％多聚甲醛-0.5％戊二醛混合液心内灌注耳蜗固定处死,然后进行耳蜗免疫组化染色及透射电镜观察,比较两组耳蜗的染色和电镜固定效果.结果 正常组与模型组大鼠的耳蜗外毛细胞、螺旋神经节等均有iNOS阳性表达;但正常组及模型组的A组耳蜗组织免疫组化染色有轻度溶解,背景染色不佳,B组耳蜗组织细胞染色清晰,对比度及透明度好,背景无明显着色.正常组及模型组中A、B两组电镜下耳蜗细胞器等微结构清晰.结论 4％多聚甲醛-0.5％戊二醛混合液心内灌注的方法既能较好地固定大鼠耳蜗细胞器的结构,也能较好的保留iNOS抗原.     

iNOS在链霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹的表达

目的探讨链霉素（streptomycin,SM）耳中毒过程中豚鼠耳蜗诱生型一氧化氮合霉（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的表达.方法 20只豚鼠随机分为正常对照组、SM组,每组10只,SM组每日腹腔注射硫酸链霉素150 mg/kg,正常对照组每日腹腔注射等量生理盐水,用药10天后处死.以听性脑干反应（ABR）为监测指标,结合电镜、免疫组化及图像分析技术,检测链霉素耳中毒过程中耳蜗血管纹iNOS的表达及形态学改变.结果用药10天后,SM组ABR阈值明显高于正常对照组,有统计学差异（P〈0.01）,电镜下可见SM组血管纹损伤严重;免疫组化结果表明,SM组血管纹iNOS的表达明显高于正常对照组.结论 SM耳中毒时ABR阈值升高,血管纹iNOS表达增强.     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶的分布

目的 用组织化学法,通过观察NADPH-黄递酶的活性了解一氧化氮合酶在豚鼠耳蜗内分布。方法 经4％多聚甲醛心脏灌注固定后,取出耳蜗,经3％依地酸脱钙后,作厚10μm冰冻切片,用辅酶Ⅱ孵育液在37℃条件下孵育l小时。结果 发现在耳蜗内、外毛细胞底部与耳蜗神经末梢接头处及毛细血管球内皮细胞有明显NADPH-黄递酶活性,此外在内、外柱细胞、支持细胞、血管纹及螺旋神经节细胞也有NADPH-黄递酶活性反应。结论 NO在维持耳蜗正常神经传导及毛细血管张力中起着重要作用。     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶异型体的定位

目的研究一氧化氮合酶(NOS)的异型体在豚鼠耳蜗的定位分布,以探讨一氧化氮(NO)在内耳听觉生理和病理生理机制中的作用。方法使用特异性NOS异型体抗体,采用ABC免疫组化染色法,观察NOS异型体在正常豚鼠耳蜗的定位表达。结果NOS Ⅰ主要分布在内骨膜、螺旋神经节的核周体、螺旋韧带和Corti's器的细胞。NOSⅢ是耳蜗的主要NOS异型体免疫染色,其主要免疫染色分布于耳蜗神经、螺旋神经节核周体、螺旋韧带和耳蜗毛细血管球的内皮细胞,也见于Corti's器的细胞和神经纤维。NOS Ⅱ在正常豚鼠耳蜗内不表达。 结论结构型NOS(cNOS)表达在耳蜗的多个部位,表明NO参与内耳的正常生理功能,包括神经突触的神经传导、耳蜗血流的调节和耳蜗的骨代谢。     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶异型体的定位

目的 研究一氧化氮合酶(NOS)的异型体在豚鼠耳蜗的定位分布，以探讨一氧化氮(NO)在内耳听觉生理和病理生理机制中的作用。方法 使用特异性NOS异型体抗体，采用ABC免疫组化染色法，观察NOS异型体在正常豚鼠耳蜗的定位表达。结果 NOS Ⅰ主要分布在内骨膜、螺旋神经节的核周体、螺旋韧带和Corti’s器的细胞。NOS Ⅲ是耳蜗的主要NOS异型体免疫染色，其主要免疫染色分布于耳蜗神经、螺旋神经节核周体、螺旋韧带和耳蜗毛细血管球的内皮细胞，也见于Corti’s器的细胞和神经纤维。NOS Ⅱ在正常豚鼠耳蜗内不表达。结论 结构型NOS(cNOS)表达在耳蜗的多个部位，表明NO参与内耳的正常生理功能，包括神经突触的神经传导、耳蜗血流的调节和耳蜗的骨代谢。     

噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元及其基因表达的…

NADPH-diaphorase (NADPH-d) histochemistry method and semiquantitative polymerase chain reaction (PCR) technology were adopted to study nitric oxide synthase (NOS) neurons and to investigate the content change of NOS mRNA and the relationship between it and auditory threshold and to explore the possible role of NOS neurons in cochlear nuclei of guinea pigs after exposed to white noise. The results showed that the quantity and staining intensity of positive NOS neurons in cochlear nuclei increased obviously after exposed to noise. It reached the peak 2 week later and remained 5 week than normal. The regulation of NOS mRNA was consistent with that of morphological observation. NOS mRNA content in 2 w group was the highest and was 4.02 times higher than normal. After exposed to noise, ABR threshold shift was in positive correlation with NOS mRNA content in cochlear nuclei (r = 0.9655, P < 0.01). It is suggested that positive NOS neurons in cochlear nuclei might be involved in controlling injury and repair of cochlear nerves. The high expression of NOS gene might be an important factor in pathogenic mechanism of noise deafness.     

诱生型一氧化氮合酶在顺铂所致豚鼠耳蜗损伤中的表达

目的：检测诱生型一氧化氮合酶（iNOS）在顺铂所致豚鼠耳蜗损伤中的表达。方法：实验组豚鼠腹腔注射顺铂造成耳蜗损伤，对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。用免疫组织化学的方法检测iNOS在耳蜗中的表达。结果：iNOS在实验组耳蜗的表达呈阳性，在对照组耳蜗的表达呈阴性。结论：iNOS在顺铂损伤耳蜗中呈阳性表达，iNOS催化产生大量NO而致耳蜗损伤。     

蒙古沙鼠耳蜗一氧化氮合酶的胆碱能调节

目的　通过检测乙酰胆碱对蒙古沙鼠耳蜗中一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)的影响 ,初步探讨耳蜗中NOS的调节机制。方法　蒙古沙鼠耳蜗经还原型辅酶Ⅱ -黄递酶 (NADPH -黄递酶 )染色后行耳蜗铺片 ,分别以同一动物两侧耳蜗为实验组和对照组进行对比观察 ,检测乙酰胆碱 (ACh)对耳蜗NOS活性的影响 ,其染色深度的差异通过HPIAS - 10 0 0高清晰度彩色病理图像免疫组化测量系统判断。结果　蒙古沙鼠耳蜗外毛细胞基底部传出神经末梢呈现NADPH -黄递酶染色阳性反应 ,ACh处理后染色深度明显增强 ,其平均灰度值从 74.2 8± 11.71减低至 46 .5± 7.78(P <0 .0 1)。结论　蒙古沙鼠耳蜗外毛细胞基底部的传出神经末梢可见NOS分布 ,ACh能增强其活性 ,提示ACh通过第二信使分子一氧化氮在耳蜗生理调控机制中起重要作用     

噪声暴露对豚鼠耳蜗内毛细胞谷氨酸样免疫反应的影响

目的：了解噪声暴露对豚鼠耳蜗内毛细胞谷氨酸样免疫反应的影响，探讨噪声暴露引起耳蜗传入神经损伤的谷氨酸兴奋毒机制。方法：采用免疫组织化学方法结合计算机图像分析，观察噪声暴露后不同时间豚鼠耳蜗内毛细胞谷氨酸样免疫反应的改变。结果：在噪声后8小时，豚鼠耳蜗内毛细胞谷氨酸样免疫反应减弱。结论：噪声可引起耳蜗内毛细胞传入神经递质谷氨酸的过度释放，继而对耳蜗传入神经产生兴奋毒损伤，这可能是噪声后耳蜗传入神经损伤的机制之一。     

Localization of Nitric Oxide Synthase Isoforms in the Human Cochlea

The location of nitric oxide (NO) in the structures of the cochlea is a topical issue. Nitric oxide synthase (NOS) has been detected previously in mammalian cochleae, but information on its presence in the human cochlea is still sparse. The location of NOS isoforms I, II and III in substructures of the human cochlea was studied by immunohistochemistry (fluorescein isothiocyanate technique) using monoclonal antibodies to NOS I, II and III. NOS I was the predominant isoform and staining could be observed in cells of the spiral ganglion (SG), in nerve fibres and in the outer hair cells (OHC). Furthermore, the supporting cells of the organ of Corti and the stria vascularis showed a fluorescent reaction to NOS I. Staining for NOS III was less intense and was located in the OHC, supporting cells and SG cells, while the stria vascularis remained unstained. By contrast, NOS II showed weak staining in a few neuron fibres only. The results imply that NO in the human cochlea could act as a neurotransmitter/neuromodulator at the level of neural cells and may be involved in the physiology of the supporting cells and stria vascularis. Moreover, because NO is both a mediator of excitotoxicity and a non-specifically toxic radical, it may also play a role in neurotoxicity of the human cochlea.     

噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin31表达的影响

目的观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin31(Cx31)表达的变化。方法选用成年雄性Balb/c小鼠44只,随机分为噪声组和对照组,每组22只。两组小鼠均在实验前检测听性脑干反应(ABR),随后应用声刺激器给予噪声组小鼠高强度白噪声(115dB SPL,6h/d,共2天),并在噪声暴露结束后1h再检测噪声组小鼠ABR。对照组不予噪声刺激。于噪声暴露后4h,每组各取4只小鼠耳蜗做冰冻切片,其余18只小鼠提取耳蜗外侧壁组织总RNA,通过免疫荧光染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx31蛋白的表达,荧光实时定量PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx31mRNA的表达。结果对照组小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx31特异性荧光,血管纹处未见阳性荧光;噪声组小鼠耳蜗外侧壁免疫荧光染色阳性反应较对照组减弱,Cx31mRNA表达量明显低于对照组。结论噪声能下调Cx31在小鼠耳蜗外侧壁组织的表达,Cx31可能参与了噪声性聋的发病机制。     

离体豚鼠耳蜗灌流一氧化氮供体对耳蜗组织中环磷酸鸟苷含量的影响

目的 通过对离体的豚鼠耳蜗即刻灌流一氧化氮供体（DEA－NO）及可溶性鸟苷酸环化酶（sGC)抑制剂（ODQ），来改变耳蜗组织中环磷酸鸟苷（cGMP）含量，以便进一步研究一氧化氮／环磷酸鸟苷（NO／cGMP)途径在耳蜗中的调节作用。方法 24只纯种白色雄性豚鼠完全随机分为三组，分别灌流人工外淋巴基础液、DEA－NO／人工外淋巴基础溶液、ODQ＋DEA－NO／人工外淋巴基础溶液，收集耳蜗组织标本；用放射免疫的方法测定耳蜗组织中cGMP的含量。结果 向离体耳蜗中灌注1mM DEA-NO溶液可以引起耳蜗组织中cGMP含量的显著增加，先灌注ODQ，后灌注1mM DEA-NO，耳蜗组织中cGMP合成量明显少于单独灌注1mM DEA-NO，但仍高于对照组。结论 对离体的豚鼠耳蜗即刻灌流一氧化氮供体（DEA－NO）及可溶性鸟苷酸环化酶（sGC)抑制剂（ODQ），可以作用于NO／cGMP途径，改变耳蜗组织中cGMP含量，同时用放射免疫测定耳蜗组织中cGMP含量的方法是可行的。     

一氧化氮对豚鼠耳蜗外毛细胞L-型钙通道电流影响的实验研究

目的观察一氧化氮(NO)供体L-精氨酸(L-Arg)对豚鼠耳蜗外毛细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法以40只杂色或白色豚鼠为研究对象,采用急性酶分离方法分离豚鼠耳蜗外毛细胞,根据溶液中加入的L-Arg浓度分为0.5×10-6 mol/L组(A组)、1.0×10-6 mol/L组(B组)、1.5×10-6 mol/L组(C组),采用全细胞膜片钳技术分别记录不同浓度L-Arg组外毛细胞L-型钙通道电流。结果低浓度的NO供体L-Arg可以抑制ICa-L,此作用具有电压依赖性,对反转电位无明显影响。在指令电压0mV时,峰值电流密度增幅最大值A组为-2.12%,用药前后差异无统计学意义(P>0.05);B组增幅为-30.69%,用药前后差异有统计学意义(P<0.01);C组增幅为-65.08%,用药前后差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度的NO可以抑制ICa-L。     

丹参注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗一氧化氮生成的影响

目的　研究丹参注射液对庆大霉素 (GM)耳中毒豚鼠耳蜗一氧化氮 (NO)生成的影响 ,探讨丹参注射液对GM耳蜗毒性的防护作用及其作用机制。方法　豚鼠随机分成正常对照组、GM组、GM +丹参组和丹参组 ,应用改良镀铜镉还原法测定豚鼠耳蜗组织中NO含量 ,同时结合听性脑干反应 (ABR)测试 ,观察用药前后听阈变化。结果　GM +丹参组豚鼠耳蜗NO含量和ABR阈值均明显低于GM组 (P <0 .0 1) ;且各组NO含量变化与ABR阈值高度相关 (r正常对照 =0 .96 5 ;rGM=0 .990 ;rGM +丹参 =0 .880 ;r丹参 =0 .980 ;P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论　丹参注射液可通过抑制GM引起的NO过量生成 ,以减轻GM的耳毒性损伤 ,从而改善听功能。这可能也是丹参注射液拮抗GM耳蜗毒性的作用机制之一。     

噪声暴露后豚鼠耳蜗电生理和超微结构的改变

目的 观察豚鼠噪声暴露后其耳蜗电生理与毛细胞超微结构的改变,探讨哺乳动物在毛细胞受损后能否自我修复.方法 将30只豚鼠分为四组,正常对照组5只,噪声暴露后0.5 h组5只,7天组10只,3周组10只,后三组豚鼠暴露于 120 dB SPL白噪声中2 h,分别于结束暴露后0.5 h及7天、3周后检测听性脑干反应(auditory brainstem response, ABR)及40 Hz听觉相关电位(40 Hz-AERP),扫描电镜观察耳蜗超微结构的变化.结果 豚鼠噪声暴露后7天组、3周组ABR及40 Hz-AERP较0.5 h组有所恢复,但未恢复至正常水平,差异仍具有统计学意义.扫描电镜观察噪声暴露后耳蜗毛细血管内的红细胞随时间延长逐渐增加,外毛细胞倒伏现象有改善.结论 噪声暴露后外毛细胞可能有自我修复功能.