甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞骨架作用的研究

目的 通过观察N－甲基－N－硝基－N－亚硝基胍（MNNG）诱导日本血吸虫培养细胞后骨架的改变,研究MNNG对培养细胞转化、增殖的作用。方法 将日本血吸虫成虫培养细胞接种于小盖玻片上,培养1周时用浓度为3mg/L的MNNG处理48h,然后用RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗菌素的培养基培养2周,再换用RPMI－1640含5％小牛血清的培养基继续培养,用考马斯亮兰染色法和鬼笔环肽荧光染色法显示培养细胞骨架。结果 MNNG诱导后,在培养第4、5周时部分培养细胞骨架排列紊乱,微丝集聚于细胞边缘。结论 MNNG有一定诱导日本血吸虫成虫培养细胞转化、促进其分裂的作用。     

MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察

目的　观察甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化 ,确定培养细胞发生转化进而增殖的最佳诱导时间。　方法　将 2 3～ 2 8d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液 ,接种于小盖玻片上 ,培养于含 2 0 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 164 0常规培养基中。将接种培养第 4、5、6、7、8d的细胞分别设为 5个实验组及其相应的对照组。实验组用含终浓度为 3 μg/mlMNNG的常规培养基处理 48h ,对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间 ,嗣后换用常规培养基培养 4周 ,再改用含 5 %小牛血清的培养基继续培养。MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样 ,每组随机取 3张小盖玻片进行电镜扫描观察 ,连续取样 11周。　结果　经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构 ,既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞 ,也有表面光滑如玻璃珠状的细胞 ,还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞 ;实验 1组培养至第 5周即出现大量分裂细胞。　结论　MNNG诱导培养第 4d的日本血吸虫成虫细胞培养至第 5周可发生转化而出现分裂、增殖。     

MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察

目的 观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化，确定培养细胞发生转化进而增殖的最佳诱导时间。方法 将23～28d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液，接种于小盖玻片上，培养于含20％小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。将接种培养第4、5、6、7、8d的细胞分别设为5个实验组及其相应的对照组。实验组用含终浓度为3μg／ml MNNG的常规培养基处理48h，对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间，嗣后换用常规培养基培养4周，再改用含5％小牛血清的培养基继续培养。MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样，每组随机取3张小盖玻片进行电镜扫描观察，连续取样11周。结果 经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构，既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞，也有表面光滑如玻璃珠状的细胞，还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞；实验1组培养至第5周即出现大量分裂细胞。结论 MNNG诱导培养第4d的日本血吸虫成虫细胞培养至第5周可发生转化而出现分裂、增殖。     

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性的影响。方法 将虫龄26d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上，在RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第7天时，随机分为实验组和对照组，实验组用含浓度为3μg/mlMNNG的常规培养基处理48h，对照组用不含MNNG的常规培养基处理同样时间，随后换用常规培养基培养3周，当再换用含5％小牛血清的培养基培养1周时，分别用Gomori钙钴法和Gomori硫化铅法对两组培养细胞进行AKP和ACP细胞化学染色，用实验组培养细胞的AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性（P＜0．01）。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞AKP、APC的活力，对培养细胞有促生长或／或诱导其转化的作用。     

MNNG对日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性作用的初步研究

目的　观察 N-甲基 - N-硝基 - N-亚硝基胍 MNNG)诱导后日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶 ODC)活性的变化。　方法　将日本血吸虫成虫剪碎后 ,收集成虫细胞 ,培养 1wk后依次用 3μg/ ml的 MNNG处理 4 8h,用 RP-MI- 16 4 0加 10 %小牛血清及常量抗生素的培养基清洗数次并继续培养。对照组不用 MNNG处理。分光光度法测定ODC活性。　结果　 MNNG诱导后第 2、3周 ODC活性显著增高。　结论　日本血吸虫成虫细胞内存在 ODC活性 ,MNNG具有增强 ODC活性的作用     

EGF对用或未用MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞生长？…

目的 研究表皮生长因子（ＥＧＦ）对用或未用甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）诱导的日本血吸虫成虫培养细胞的促生长、增殖作用。方法 将联合法接种培养至第３天的日本血吸虫成虫培养细胞，一部分在含ＥＧＦ终浓度分别为０、０．５、１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８ｎｇ／ｍｌ的附加２０％小牛血清及常量抗菌素的ＲＰＭＩ－１６４０培养基中培养；另一部分，先用含ＭＮＮＧ终浓度为３μｇ／ｍｌ附加２０％小牛血清和常     

肝基质与MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究

目的研究肝基质与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质的影响。方法日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片(实验1组)和铺敷有肝基质的小盖玻片上(随机分为实验2组和3组),培养于含20%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。培养第4d,实验1组和3组细胞分别在含3μg/ml MNNG的常规培养基中培养48h,彻底清洗后继续用常规培养基培养;实验2组细胞用不含MNNG的常规培养基处理相同时间。培养第4w,均换用含5%小牛血清的低血清培养基培养。培养第5~7w,每周取各组细胞进行高碘酸雪夫(PAS)染色和唾液淀粉酶处理后的PAS染色,观察培养细胞内糖类物质的含量及分布变化。取培养第6w(MNNG作用后第5w)的各组染色细胞,用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖含量的光密度,并作统计学分析。结果实验3组细胞与实验1、2组比较,PAS染色显示的四种类型细胞其着色均显著增强,淀粉酶处理后的PAS染色显示细胞内糖原含量增多,差异均具显著性(P<0.01)。培养过程中,第二类细胞数目逐渐增多,体积增大;分裂细胞增多。这种状况在MNNG处理后第5w最为明显。结论肝基质和MNNG联合可显著增强日本血吸虫培养细胞的糖代谢和分裂增殖能力,二者具协同作用能力。     

MNNG诱导对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响

目的观察甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱导后日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白（Ag—NORs）含量的动态变化,探讨MNNG诱导后培养细胞的增殖能力。方法将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,置于含20％小牛血清附加常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中培养;培养第4天,细胞随机分为实验组和对照组两组,实验组细胞以含3g／ml MNNG的常规培养基处理48h,对照组细胞则用不含MNNG的常规培养基作相同处理。细胞经彻底清洗后继续以常规培养基培养3周,然后换用含5％小牛血清的低血清培养基培养。MNNG处理后第1—9周,每周取实验组和对照组细胞采用略作修改的胶银法进行Ag—NORs染色,光镜下观察与拍照,HPIAS-2000图像分析仪测定代表培养细胞内Ag—NORs含量的吸光度（A）值,并进行统计学分析。结果培养过程中,对照组细胞着色逐渐变浅,MNNG组细胞除在第2周时着色变浅外,其余均逐渐加深,尤其在第6周（MNNG诱导后第5周）,细胞核呈深棕色,可见粗大的银染颗粒,核仁呈黑色,并观察到分裂细胞。第7—9周,两组细胞着色均逐渐变浅。定量分析发现,对照组细胞在培养初期Ag—NORs含量最高,随后逐渐降低;MNNG组的Ag—NORs含量在培养第2周时稍有降低,随后逐渐升高;在培养第6周即MNNG诱导后第5周时达到高峰,然后又逐渐下降。结论MNNG诱导可显著增强培养细胞的rDNA转录活性,提高细胞的分裂增殖能力,在MNNG诱导后第5周细胞增殖能力最强。     

日本血吸虫成虫培养细胞骨架系统的研究

目的：研究日本血吸虫成虫培养细胞的骨架系统。方法：将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,以RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗菌素的培养基培养,用考马斯亮蓝染色法和魁笔环肽荧光染色法显示培养细胞骨架。结果：考马斯亮蓝染色显示日本血吸虫成虫细胞骨架呈网络状结构,均钭分布于胞质中;用（NH4）2SO4抽提后考马斯亮蓝色显示细胞骨架无明显改变;鬼笔环肽荧光染色后可见细胞内有均匀荧光亮点。结论：日本血吸虫成虫培养细胞骨架呈致密网络状结构,以中间纤维为主,缺乏粗大的微丝束。     

日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究

本文报道日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究.结果表明:日本血吸虫的成虫细胞,在合成培养基RPMI-1640和5%的小牛血清、台成培养基TC-199和10%或20%的小牛血清培养液中,在附加常量抗菌素、pH值为7.2—7.4、培养温度为36℃一37℃条件下,其存活时间均可超过150d.另外,成虫细胞在未加抗菌素或附加一定量(常量或两倍于常量)抗菌素的培养液中的存活天数,没有明显差别.