锂的神经元保护作用及对铅神经毒性的拮抗效应

目的　探讨铅的神经毒性、锂的神经元保护作用以及锂对铅神经毒性的拮抗效应 ,研究不同浓度氯化锂和醋酸铅对原代培养皮层神经元生长及存活的影响。方法　建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术 ,通过加入不同浓度氯化锂、醋酸铅及同时加入 5mmol L的氯化锂和不同浓度醋酸铅 ,显微镜下观察神经细胞的生长和存活情况 ,目镜测量神经元突起长度 ,噻唑蓝 (MTT)还原法检测细胞生长活力。结果　各浓度氯化锂均可促进神经元突起生长 (P <0 0 5 ) ,1 2 5mmol L以上浓度的氯化锂可使神经元生长活力降低 (P <0 0 5 ) ;醋酸铅 (≥ 10 - 7mol L)能抑制神经元生长 ,其神经元突起长度明显短于对照组 (P <0 0 1) ,各浓度的醋酸铅均可使神经元生长活力降低 (P <0 0 1) ;5mmol L浓度的锂对染铅神经元有明显的保护作用和促生长作用 ,表现为铅浓度为 10 - 6 mol L与 10 - 5mmol L组的神经元突起长度较单纯染铅组长 (P <0 0 1) ,使铅浓度为10 - 8～ 10 - 5mol L的神经元生长活力提高 (P <0 0 1)。结论　锂有神经元保护作用 ,而铅对神经元表现出毒性效应 ;锂对染铅神经元有一定的保护作用     

不同浓度醋酸铅对大鼠原代培养大脑皮层神经元的影响

目的　研究不同浓度铅对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法　建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术 ,通过不同浓度醋酸铅染毒 ,观察神经细胞的生长和存活情况。结果　终浓度为 10 - 8mol L的醋酸铅即可抑制神经元突起生长 ,使细胞生长活力下降甚至死亡。随着醋酸铅的终浓度进一步加大 ,对神经元的损伤逐渐增强。结论　铅能够抑制原代培养皮层神经元生长和存活。     

牛磺酸拮抗铅对原代培养皮层神经元的影响

目的:研究牛磺酸拮抗铅对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法:通过建立新生大鼠皮层神经元原代培养,用不同浓度醋酸铅染毒和给予牛磺酸干预,观察神经细胞的生长和存活情况。结果:终浓度为10-8mol/L的醋酸铅即可抑制神经元突起生长,导致细胞生长活力下降,终浓度为1.6×10-3mol/L的牛磺酸能够抑制这种损害作用,促进神经元生长。结论:牛磺酸能够拮抗铅抑制神经元生长和存活的毒性。     

不同浓度牛磺酸对原代培养皮层神经元的影响

目的研究不同浓度牛磺酸对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术，加载不同浓度牛磺酸对培养皮层神经元进行干预，观察神经细胞的生长和存活情况。结果适当浓度的牛磺酸能够促进培养的皮层神经元存活，突起生长，促进神经元间网络的形成。结论牛磺酸能够促进原代培养皮层神经元生长。     

铅硒联合作用对原代培养海马神经元影响

目的观察铅、硒对原代培养的海马神经元生长及存活的影响，研究硒对铅的神经细胞生长抑制的拮抗作用。方法建立新生Wistar大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过PbCl2，Na2SeO3单独及联合作用，观察神经细胞的生长和存活情况。结果10^-5mol／L铅明显抑制了原代培养的海马神经元突起生长，引起神经元存活率下降；单独硒（2×10^-6mol／L）有明显促进海马神经元突起生长的作用．尤其在神经元突起生长早期；但对海马神经元存活率的影响不明显。铅和硒共同孵育时，培养早期硒能拮抗铅对神经元突起延伸的抑制．但随着培养时间延长，这种拮抗作用消失；从神经元存活率来看，在实验剂量下，未见硒能拮抗铅对神经元存活的抑制作用。结论铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。本实验剂量下的硒在细胞培养早期有促进神经元突起生长和拈抗铅对神经元生长和存活的抑制作用。     

低剂量铅对原代培养的海马神经元的影响

目的 研究低剂量铅对原代培养的海马神经元生长及存活的影响。方法 建立新生大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过不同浓度PbCl2染毒后，于不同时间点观察神经细胞的生长和存活情况。结果 极低浓度的铅(10^-7mol／L)即可引起神经元出芽延迟，突起长度缩短，细胞存活率下降，随剂量增加和时间延长，毒效应越严重。结论 低剂量铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。     

铜锌对大鼠神经元细胞色素氧化酶活力的影响

目的 观察铜锌对原代培养的神经元细胞色素氧化酶(COX)活力的影响，以探讨其对神经元能量代谢的作用。方法 用神经元与胶质细胞分离式原代培养的方法进行大鼠大脑皮质神经元培养，以硫酸铜0．05、0．16、0．5mmol／L，醋酸锌0．05、0．16、0．5mmol／L进行染毒，以及铜锌3x3联合染毒，用细胞化学方法，图象处理定量分析细胞色素氧化酶的活力。结果 铜组，0．16、0．5mmol／L时，COX活力降低，与对照组差异有显著性，单独染锌组COX活力与对照组之间差异无显著性。铜锌联合染毒时，交互作用无显著性。结论 铜能明显降低神经元能量代谢关键酶—COX的活力，将对神经元能量活动产生损伤作用，但在本实验暴露水平下，铜锌未能显出明显的交互作用。     

鱼藤酮对大鼠中脑原代培养细胞的毒性

目的 研究植物杀虫剂鱼藤酮(Rotenone)对大鼠中脑原代培养细胞的毒性作用.方法 采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法,用0.01、0.10、1.00μmol/L鱼藤酮对体外培养中脑原代培养细胞染毒24h,通过免疫细胞化学的方法观察神经细胞的存活数及形态学改变.结果 与对照(0μmol/L)组比较,0.10和1.00μmol/L鱼藤酮染毒组多巴胺神经元数目明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);1.00μmol/L鱼藤酮染毒组星型胶质细胞数目明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).随着鱼藤酮染毒浓度的升高,存活的多巴胺(DA)能神经元体积变小,突起减少、变短或断裂.结论 多巴胺神经元对鱼藤酮的毒性作用更敏感.     

大鼠海马神经细胞在含硒介质中的生长及存活研究

目的 研究硒对大鼠海马神经细胞生长、存活及突起发育的影响。方法 利用新生大鼠海马神经细胞原代培养技术,培养液内加入不同浓度的硒（62．5、125．0、187．5μg／L）和碘加硒,观察有血清和无血清条件培养下海马神经细胞的生长、存活数;同时还测量了接种后4个不同观测点的平均最长突起长度。结果 硒不仅对海马神经细胞早期突起生长有显著的促进作用,在接种16、24、36、48h后有明显突起伸长趋势,咯硒组与对照组相比平均增加15－20μm,而且无论有无血清,硒均能延长神经细胞存活时间,提高存活率。结论 硒对海马神经细胞的早期突起生长、存活有重要作用。     

氯化铝对原代培养大鼠大脑皮层神经细胞的毒性作用

目的 研究铝对体外培养神经细胞的毒作用,探讨铝的神经毒性和毒作用机制.方法分别应用浓度为10、100、1 000 μmol/L的AlCl3对原代培养大鼠皮层神经细胞染毒24、48 h,检测AlCl3对皮层神经细胞形态的影响,吖啶橙-溴乙锭染色判断皮层神经细胞存活率;Hoechst 33258染色判断皮层神经细胞凋亡.结果 AlCl3可造成皮层神经细胞突起萎缩,细胞胞体增大变圆,细胞数量减少,并且细胞界限不清;同时随着AlCl3浓度增加和染毒时间延长而加重.AlCl3对皮层神经元生长有明显的抑制作用,与对照组相比具有明显时间剂量-反应关系（P＜0.05）;AlCl3可使神经细胞核明显固缩、凝集或断裂,发生典型的凋亡改变,随着染毒时间延长和Al3＋浓度增加,凋亡发生率也明显增加.结论 铝可对原代培养皮层神经细胞产生细胞毒性,可引起细胞结构改变,抑制皮层神经细胞生长,并可诱导细胞凋亡.     

2,5-己二酮对大鼠运动及感觉神经元神经生长因子表达的影响

目的　研究正己烷的代谢产物2 ,5 己二酮对大鼠神经系统运动、感觉神经元内源性神经生长因子(NGF)表达的影响。方法　采用原代培养的大鼠背根神经节(DRG)感觉神经元和培养的大鼠脊髓前角运动神经元瘤细胞系VSC4 - 1细胞,用相差显微镜观察细胞形态,同时用免疫组化方法分析不同浓度2 ,5 HD(2 . 5、5 . 0、10 . 0、2 0 . 0mol L)染毒2 4小时后DRG、VSC4 1细胞内NGF含量的变化。结果　与对照组相比,2 ,5 己二酮染毒剂量为5 . 0、10 . 0、2 0 . 0mmol L时,皆可使DRG细胞及VSC4 1细胞NGF表达量显著下降(P <0 . 0 5 ) ;各剂量组间两两比较发现随着染毒剂量增高,两类细胞NGF表达水平的下降有愈为明显的趋势。结论　2 ,5 己二酮可降低大鼠DRG感觉神经元和脊髓前角运动神经元(VSC4 . 1细胞)、内源性NGF的表达水平,并进一步抑制了两类细胞的生长与存活。     

氯化镧对原代培养的星形胶质细胞的氧化损伤作用

目的研究氯化镧(lanthanum chloride,LaCl3)对原代培养的星形胶质细胞的氧化损伤作用。方法原代培养的星形胶质细胞经0、0.25、0.5、1.0 mmol/L LaCl3处理24 h后,采用MTT法和Alamar Blue还原法检测星形胶质细胞的存活率,并测定星形胶质细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxydase,GSH-Px)活性。结果各LaCl3处理组星形胶质细胞的存活率均显著低于对照组,且具有一定的剂量-反应关系。0.25 mmol/L LaCl3组星形胶质细胞的GSH含量和GSH-Px活性显著低于对照组;0.5 mmol/L LaCl3组星形胶质细胞的GSH含量和GSH-Px活性显著低于对照组和0.25 mmol/L LaCl3组;1.0mmol/LLaCl3组星形胶质细胞的GSH含量和GSH-Px活性分别降低至对照组的66%和43%,均显著低于对照组、0.25和0.5 mmol/L LaCl3组。此外,各LaCl3组星形胶质细胞的MDA含量均显著高于对照组,且随...     

神经生长因子对2,5-己二酮致运动神经元线粒体功能损伤的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对2,5-己二酮所致运动神经元细胞线粒体功能损伤的影响。方法用10mmol/L和20mmol/L2,5-己二酮给运动神经元VSC4.1细胞处理12h后,检测VSC4.1细胞活性,NGF的蛋白表达以及线粒体膜电位的变化;20mmol/L2,5-己二酮与VSC4.1细胞作用12h后,去除2,5-己二酮加入不同浓度的NGF,检测细胞活性和线粒体膜电位的变化。结果10mmol/L和20mmol/L2,5-己二酮与运动运动神经元VSC4.1细胞共同培养12h后,细胞活性分别下降了17%和23%;VSC4.1细胞内NGF的表达分别下降了33.5%和34%;线粒体膜电位由39.36分别下降到29.57和23.80。VSC4.1细胞与2,5-己二酮作用12h后用50ng/ml和100ng/mlNGF处理,细胞的活性增加了6.38%和23.40%;细胞线粒体膜电位也由26.03增加到30.18和31.50(P<0.05)。结论NGF可以通过改善线粒体膜电位来修复2,5-己二酮导致的运动神经元线粒体功能损伤。     

三羟异黄酮对丙烯酰胺致大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨不同浓度三羟异黄酮(GEN)对丙烯酰胺(ACR)诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响。方法取新生5-7 d SD大鼠小脑皮质细胞培养,采用神经元特异性烯醇化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经元,将培养8 d的神经元进行随机分组,正常对照组、ACR染毒组(浓度为10 mmol/L)、GEN预处理组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(浓度为10、25、50、100μmol/L的GEN预先处理细胞12 h,再予ACR作用24 h)。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测神经元活性;相差显微镜及Hoechst33342染色分别观察细胞及其核形态学变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察神经元凋亡细胞数。结果 10μmol/L组及25μmol/L组GEN可拮抗ACR所致的大鼠CGNs凋亡,提高神经元活性,降低TUNEL阳性细胞数,减少ACR所致的神经元胞体皱缩、细胞核固缩等特征;而50μmol/L组及100μmol/L组对ACR引起的神经元凋亡没有保护作用。结论一定浓度范围的三羟异黄酮可以保护丙烯酰胺所致的大鼠CGNs凋亡。     

铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响

为观察铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响 ,对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后 ,采用 3× 3析因设计方法进行染毒实验 ,A组 :醋酸铅 0 0 2mmol L ;B组 :醋酸铅 0 1mmol L ;C组 :氯化镉 0 0 0 1mmol L ;D组 :氯化镉 0 0 0 4mmol L ;E组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;F组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L ;G组 :醋酸铅 0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;H组 :醋酸铅0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L。染毒时间为 6小时。经超声波粉碎细胞后 ,测定细胞内谷胱甘肽 (GSH)和丙二醛 (MDA)的含量 ,以及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)的活性。与对照组比较 ,联合染毒组GSH、GSH Px、SOD水平显著降低 ,MDA水平显著升高 ,析因分析表明 ,铅镉联合作用在对大鼠肾小管上皮细胞GSH、SOD、MDA改变方面有交互作用 (P <0 0 5 ) ,即铅镉联合作用呈现增毒作用 ;在对GSH Px改变方面未见交互作用     

氯化铝致原代培养小鼠神经细胞毒性作用及对mGluR3表达的影响

[目的]探讨铝对原代培养神经细胞的毒性作用及对代谢型谷氨酸受体3（metabotropic glutamate receptors,mGluR3）基因表达的影响。[方法]采用结晶氯化铝（AlCl3·6H2O）分别对原代培养昆明小鼠的神经细胞染毒,使其终浓度分别为0mmol/L（对照组）、0．5mmol／L（低剂量组）、1．0mmol／L（中剂量组）和2．0mmol／L（高剂量组）,染毒48h后,采用CCK培试剂盒,使用酶联免疫仪检测细胞活力,采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法测定mGluR3基因的表达。[结果]与对照组比较,高剂量组细胞活力明显下降（P〈0．05）;RT-PCR测定结果显示高剂量组相对于对照组mGluR3表达量明显降低（P〈0．05）。[结论]铝对原代培养的神经细胞产生细胞毒性可能与mGluR3基因表达降低有关。     

GM1 and NGF modulate Ca2+ homeostasis and GAP43 mRNA expression in cultured dorsal root ganglion neurons with excitotoxicity induced by glutamate

Monosialoganglioside (GM1) has been considered to have a neurotrophic factor-like activity. Nerve growth factor (NGF), a member of the neurotrophin family, is essential for neuronal survival, differentiation and maturation. The aim of the present study was to investigate whether co-administration of GM1 and NGF reverses glutamate (Glu) neurotoxicity in primary cultured rat embryonic dorsal root ganglion (DRG) neurons. DRG neurons were exposed to Glu (2 mmol/1), Glu (2 mmol/1) plus GM1 (10 microg/ml), Glu (2 mmol/l) plus NGF (10 ng/ml), Glu (2 mmol/l) plus GM1 (5 microg/ml) and NGF (5 ng/ml) and then processed for detecting intracellular concentrations of Ca2+ ([Ca2+] i) by confocal laser scanning microscopy and growth-associated protein 43 (GAP43) mRNA by RT-PCR. The fluorescent intensity in Glu plus GM1 and NGF incubated neurons was the lowest as compared with that in other groups. The expression of GAP43 mRNA in Glu plus GM1 and NGF incubated neurons was the highest as compared with that in other groups. These results implicated that GM1 and NGF have synergistic neuroprotective effects on DRG neurons with excitotoxicity induced by Glu in vitro.