Identifiler & STRtyper-10F/G系统在单亲亲子鉴定中的应用分析

目的应用AmpFISTR IdentifilerTM和STRtyper-10F/G PCR扩增试剂盒,检测195例亲子鉴定案例,分析2个系统在单亲亲子鉴定中的应用价值。方法采用Chelex-100法提取全血基因组DNA,通过IdentifilerTM和STRtyper荧光标记试剂盒对24个STR基因座进行检测,判定基因分型。结果 195例单亲亲子鉴定中,认定亲生血缘关系182例(93.33%),累计PI值大于或等于10 000,RCP>99.999 9%。排除亲生血缘关系13例(6.67%),排除STR位点数5~16范围。在IdentifilerTM检测系统中,1个案例的vWA出现一步突变,1/182(0.55%),其他基因座检测结果均符合遗传规律。结论应用Identifiler和STRtyper系统的24个STR基因座进行DNA亲权鉴定,能准确地提高亲子鉴定判断结果,有效力地避免错误判性发生。     

Penta D、 Penta E和SE33位点基因分型在二联体亲子鉴定中的应用

摘要：目的 研究增加Penta D、 Penta E和SE33位点基因座的检测后,对二联体亲子鉴定RCP值的影响。 方法 对二联体亲子鉴定案例除了进行ABI公司提供的AmpFISTR IdentifilerTM试剂盒中的15个STR位点检测以外,增加美国Promega公司的Penta D、 Penta E和SE33试剂盒复合扩增STR位点的检测,并计算增加检测位点前后的亲子关系指数（PI）和亲子关系相对机会（RCP）。 结果 135例二联体亲子鉴定案件中有109例常染色体RCP值大于99.99%,频率为80.74%。26例RCP值小于99.99%,频率为19.26%。增加Penta D、 Penta E和SE33位点基因座检测后有83.33%的家系由原来的RCP值小于99.99%转变为RCP值大于99.99%。 结论 增加遗传标记物的检测可以有效的提高二联体亲子鉴定的RCP值,从而提高鉴定的准确性。     

短串联重复序列检测法在江苏地区亲子鉴定的应用

目的:分析短串联重复序列(STR)基因座在江苏汉族人群亲子鉴定的应用.方法:取在本中心进行亲权鉴定的1 016个案例共2558份样本,提取DNA.用PCR特异性扩增出18个STR基因位点,聚丙烯酰胺凝胶电泳分型检测.以亲子关系指数(RCP)≥99.99%为认定亲权关系,以≥3个基因位点不符为排除亲权关系.结果:1016个案例中,认定亲权关系为758例,占75%,排除亲权关系为258例,占25%.19例表现出1个STR基因座突变现象.结论:STR基因检测位点多,多态性高、分布广泛、灵敏度高、易检测.联合使用多个STR位点进行检测可作为亲子鉴定的主要技术手段.     

亲权鉴定判定标准可靠性的进一步确认

【目的】进一步确认我室确定的亲子鉴定判定标准的可靠性。【方法】分析本鉴定中心近几年亲子鉴定案例的结果，利用国内外群体相关基因频率资料对标准进行统计学分析并通过实践检验。【结果】利用15个常染色体STR位点分型作亲子鉴定时，判定被鉴定人之间是否具有亲生关系，对于双亲案，若符合孟德尔遗传规律，且亲权概率能够达到0．999以上，则认定被鉴定人之间具有亲生关系。若检测系统中有1个或2个位点出现矛盾，则分别增加检测位点至18个或24个，没有发现新的矛盾位点时，计算父权概率，超过0．999以上，则认定有亲生关系。只有在所检测位点中有3个或3个以上的STR位点违反孟德尔遗传规律时，才可以否定被检者之间具有亲生关系。对于单亲案，在不违反孟德尔遗传规律的前提下，只能下不排除亲生关系的结论，若有3个以上位点矛盾时，才下排除的结论。【结论】实验结果证明本中心制定和使用的判定亲权关系的标准是一个合理、可靠和实用的标准。     

亲权鉴定判定标准可靠性的进一步确认

[目的]进一步确认我室确定的亲子鉴定判定标准的可靠性.[方法]分析本鉴定中心近几年亲子鉴定案例的结果,利用国内外群体相关基因频率资料对标准进行统计学分析并通过实践检验.[结果]利用 15个常染色体 STR位点分型作亲子鉴定时,判定被鉴定人之间是否具有亲生关系,对于双亲案,若符合孟德尔遗传规律,且亲权概率能够达到 0.999以上,则认定被鉴定人之间具有亲生关系.若检测系统中有 1个或 2个位点出现矛盾,则分别增加检测位点至 18个或 24个,没有发现新的矛盾位点时,计算父权概率,超过 0.999以上,则认定有亲生关系.只有在所检测位点中有 3个或 3个以上的 STR位点违反孟德尔遗传规律时,才可以否定被检者之间具有亲生关系.对于单亲案,在不违反孟德尔遗传规律的前提下,只能下不排除亲生关系的结论,若有 3个以上位点矛盾时,才下排除的结论.[结论]实验结果证明本中心制定和使用的判定亲权关系的标准是一个合理、可靠和实用的标准.     

云南人群1199例亲子鉴定案件基因突变分析

目的 观察和分析PowerPlex(R) 21 System试剂盒20个短串联重复序列(STR)基因座在云南人群亲子鉴定中的突变现象.方法 采用PowerPlex(R) 21 System试剂盒对1199例结论为“肯定”的亲子鉴定案件进行基因分型,对基因座存在不符合遗传规律者,判断突变等位基因类型及来源,分析基因座突变率及特点.结果 1199例亲子鉴定中,共观察到39例突变,其中38例有1个STR基因座发生突变,2个STR基因座同时突变的观察到1例.在被研究的20个常染色体STR基因座中17个基因座观察到基因突变现象,突变率在0～0.29％之间,父源与母源突变比为2.8∶1.结论 获得了云南人群20个常染色体STR基因座的突变率,本结果不仅为司法鉴定服务案件中突变情况下的亲权指数计算提供了数据支持,而且为法医学遗传标记的选择提供了客观依据.     

亲子鉴定常用 STR 基因座突变的特点

目的：探讨亲子鉴定中常用STR基因座突变的特点。方法检测华南地区3097例肯定亲权关系的亲子鉴定案例,观察STR基因座等位基因突变情况,统计各STR基因座突变率,分析突变来源、突变规律和突变特点。结果共发现94例突变案例,101个突变STR基因座。5个家系中出现2个STR 基因座位点同时突变。STR基因座突变率在0.0199％～0.1994％之间,Penta E基因座突变率最高。来源于父系突变与母系突变比例为4.2∶1。突变符合逐步突变模式,1步突变88例,占突变案例总数的93.6％。结论亲子鉴定检测中STR基因座等位基因突变的现象并不罕见,对鉴定结果分析有重要影响。对于突变的STR基因座,增加检测其他STR基因座位点的同时,应结合突变STR基因座亲权指数值的计算方法,计算得到累计亲权指数,从而得出正确的鉴定结论。     

短串联重复子DNA多态性及其法医学应用研究

调查云南汉族人群18个常染色体和性别染色体STR基因座遗传多态性,获得18个基因座的群体遗传学数据,并探讨该18个STR基因座的法医学应用价值。709份EDTA抗凝血（男456、女253份）来自昆明地区无血缘关系汉族个体,法医案件及亲子鉴定标本取自本教研室的检案,各种动物血痕取自动物中心。应用酚-氯仿法或Chelex-100法提取DNA,STR-PCR、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带分析技术和377测序技术对上样本进行分析。709例样本中18个基因座观察到的等位基因数分别为4-15;累积个人识别率（TDP）为0．9999999999925334;累积非父排除率（CCE）为0．999962106。18个STR基因座在群体遗传学研究和法医学个人识别、亲子鉴定中均有较高的应用价值。     

用STR分型技术作亲权鉴定时判断标准的研究

【目的】 探讨STR分型技术作亲权鉴定时,判断是否存在亲生关系的标准｡ 【方法】 采用二项式分布定律P(m) = (1-π)n-m πm计算亲权鉴定时理论上应该检测的STR基因座数量,并用实际检案检验｡【结果】 确定以下的判断标准｡三联体案:在累积PI值超过10 000的前提下,①最少检测15个STR基因座(单个基因座非父排除率≥0.571 4),若争议父子之间没有发现不符合遗传规律基因座(简称为矛盾基因座,下同);或②检测19个基因座只出现1个矛盾基因座;或③检测28个基因座,只发现2个矛盾基因座;或④检测35个或更多基因座,只发现3个矛盾基因座,作出“肯定亲生关系”的结论;若出现4个矛盾STR基因座,则作出“否定亲生关系”的结论｡单亲案:在累计PI值≥10 000前提下,① 至少检测18个基因座(单个基因座非父排除率≥0.411),没有发现矛盾;或②检测29个以上,只发现1个矛盾基因座;或③检测41个或更多基因座,只有2个矛盾基因座,作出 “不排除亲生关系”的结论;如果出现3个或3个以上矛盾STR基因座,则作出“否定亲生关系”的结论｡本实验室实际检案表明合理｡ 【结论】 上述判断是否存在亲生关系标准符合科学､公正原则,值得推广应用｡     

三个STR分型体系在法医学中的应用

摘 要:【目的】 调查PowerplexTM 16 System?STRtyper-10F/G kit以及AGCU 21+1三个分型体系包含的45 个常染色体STR 基因座在中国广东汉族人群中的群体遗传学数据,评估其法医学应用价值?【方法】 采集256例中国广东汉族二代家系(包含512名无关个体)外周血样,提取样本DNA,对D3S1358等45个STR基因座进行扩增,使用ABI 3500XL遗传分析仪电泳扩增产物,GeneMapper ID-X软件进行基因分型,并用相关统计软件计算常用法医学参数并进行Hardy-Weinberg平衡及基因座间连锁不平衡的检验? 【结果】 经Bonferroni 法校正后,45个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡,不存在连锁不平衡现象?各基因座平均杂合度(Ho)为0.765,平均个体识别力(DP)为0.905,平均多态信息含量(PIC)为0.733?45个STR基因座的累积随机匹配概率(CMP)为9.48 × 10-50,二联体累积非父排除率(CPEduo)为0.999 999 999 94,三联体累积非父排除率(CPEtri)为0.999 999 999 999 999 990 4?【结论】 获得了广东汉族人群45个常染色体STR 基因座的群体资料,为广东汉族人群的法医个体识别和亲子鉴定提供了基础数据?联合应用PowerplexTM 16 System?STRtyper-10F/G kit和AGCU 21+1 系统可以满足突变?单亲?亲缘鉴定等疑难案件的需要?     

广西地区1786例亲子鉴定STR基因位点突变的观察与分析

目的：观察和分析17个STR基因位点在广西地区亲子鉴定案件中的突变特点。方法1786例“不排除”亲子关系的亲子鉴定案例中,三联体1430例,二联体356例,父母民族为汉族的有1001例,壮族2102例,其他民族113例。通过Chel-ex-100法提取DNA ,采用Power Plex?18D System试剂盒进行17个STR基因位点检测,筛查出含STR基因位点突变的案例,统计各STR基因位点突变的特异性、父源和母源特异性及突变率,分析突变的特点。结果17个被检测的STR基因位点中有16个位点观察到突变,共观察到75次突变,其中一步突变73次（97.34％）,二步突变1次（1.33％）,三步突变1次（1.33％）,T POX点位未观察到突变。突变率为0.0311％～0.4042％,平均突变率约0.1458％。父系来源突变与母系来源突变的比例约5.4：1.0,差异有统计学意义（P＜0.01）。汉族和壮族的突变率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 STR基因位点突变是亲子鉴定中较为常见的现象,应不断积累STR基因位点突变数据,选择其符合广西人群的遗传特点,及具有高鉴别能力的STR基因位点的遗传标记,以保证鉴定结果的准确可靠。     

10个STR座位的法医学应用回顾

选用Ｄ１９Ｓ２５３、ＴＰＯＸ、Ｄ８Ｓ１１７９、ＣＹＰ１９、ＴＨ０１、ＬＰＬ、ＰＬＡ２Ａ、ｖＷＡ、ＦＯＬＰ２３、ＧＡＢＲＢ１５共１０个ＳＴＲ座位,采用相同热循环参数同步扩增、分步加样电泳及银染方法,完成实际案例２１３例,其中,亲子鉴定１５９例,不同检材个人识别５４例。结果：１０个ＳＴＲ座位累积非父排除概率（ＣＣＥ）为９９．９３％,总个人识别能力（ＴＤＰ）大于０．９９９９。证明本方法鉴定效率高,符合“快速、灵敏、可靠”的办案要求。     

24 个常用STR基因座的突变观察与分析

 【目的】 观察24个常用STR基因座等位基因突变的现象及特点&;#65377; 【方法】 对5 084例肯定亲权关系的案例进行分析,筛选等位基因突变事件,确定突变等位基因的来源,统计各STR基因座的突变率,分析突变的规律及其特点&;#65377; 【结果】 在24个STR基因座中共观察到172个突变事件,STR基因座的突变率介于0 ~ 0.492%&;#65377;每个突变案例的突变基因座数目为1 ~ 3个&;#65377;突变模式符合逐步突变模式,最多突变步数为四步&;#65377;父系突变与母系突变比例为3.55:1&;#65377; 【结论】 STR基因座等位基因突变现象较为常见&;#65377;当出现STR基因座突变时,应结合突变的STR基因座信息计算PI值&;#65377;     

常染色体STR突变率的研究

【目的】 观察10 000例肯定亲子关系的三联体案例中STR基因座的突变事件,获取STR基因座的突变率资料?【方法】 采用PowerPlexTM 16系统进行15个STR基因座的检测,从10 000例肯定亲子关系的三联体案例中筛查出包含STR基因座突变的案例,确定突变等位基因的来源和步数,统计各STR基因座特异性?父源和母源特异性及等位基因特异性的突变率及其95%置信区间,分析突变的特点? 【结果】 10 000例三联体亲子鉴定中检出368例发生突变的案件,共计379个突变事件?突变案件的发生率为3.68%,15个STR基因座的突变率为0.10 × 10-3 ~ 2.30 × 10-3,平均突变率为1.26 × 10-3?各基因座的父源和母源突变率分别为0.05 × 10-3 ~ 1.35 × 10-3和 0.05 × 10-3 ~ 0.70 × 10-3?统计FGA?vWA和D18S51等三个基因座一步突变的等位基因突变率分别为5.0 × 10-5 ~ 40.0 × 10-5?5.0 × 10-5 ~ 50.0 × 10-5 和5.0 × 10-5 ~ 35.0 × 10-5?15个基因座的父源/母源突变比值为1.3 ∶ 1 ~ 17.0 ∶ 1,平均为3.57 ∶ 1?【结论】 STR基因座突变现象普遍存在于亲子鉴定中,各基因座的突变率?父源和母源的突变率?各等位基因的突变率均存在差异,获取这些数据资料对于更准确地评判亲子鉴定结果非常必要?     

HLA与父子关系认定

通过检测HLA、ABO、MN和Rh血型,共进行父子关系认定16例。在不能排除的8例中,HLA检测所得的父权概率最低为90.52％,最高达99.8％,远高于其他三个血型系统。在通过HLA检测排除的8例中,ABO、MN和Rh检测仅能排除其中部份案例。     

染色体STR遗传标记在亲缘鉴定中的应用

目的：探讨染色体STR遗传标记在亲缘关系鉴定中的应用。方法：用Profiler plus及Cofiler试剂盒检测468例亲缘鉴定案,对其中STR基因座不符合遗传规律者,增加HLA等血型基因和“PowerPlex16TM体系试剂检测。必要时还增加Y-STR,X-STR基因座检测和HLA等位基因测序。结果：408例亲缘个体的亲权概率W>0.95,其中350例亲缘个体的W>0.9995;60例无关个体的W<0.8,其中48例W<0.27。经χ2检验,有亲缘关系的个体和无亲缘关系的个体间全相同和全不同的基因座数差异均有统计学意义（P<0.001）;半相同的基因座数差异无统计学意义（P>0.05）。结论：染色体STR遗传标记用于鉴定亲缘关系时,当两个体不同基因座个数≤1个,或全相同基因座数≥6个时,属亲缘关系。     

河南汉族人群11个STR基因座在排除父权方面的应用

目的 :分析 11个短串联重复序列 (shorttandemrepeats,STR)D12S391、vWA、D5S818、D16S5 39、D7S82 0、F13A0 1、D13S317、FESFPS、CSF1PO、TPOX、THO1在河南省汉族群体亲子鉴定事件中排除父权方面的应用价值。方法 :对 30 4例做亲子鉴定的河南汉族个体的DNA样本应用多位点复合PCR扩增技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳分型方法 ,结合PowerStatssoftware软件 ,分析上述 11个STR的观察杂合度 (Ho)、个体识别率 (DP)、多态性信息含量 (PIC) ,并计算其参与联合排除父权的比率。结果 :11个STR参与 36例联合排除父权的比率依次为 6 9.4 % ,5 2 .8% ,4 7.2 % ,4 7.2 % ,4 4 .4 % ,33.3% ,33.3% ,33.3% ,2 7.8% ,2 2 .2 % ,16 .7% ,其中 6个 (D12S391、D7S82 0、vWA、D5S818D13S317、D16S5 39)Ho>0 .7、DP >0 .9、PIC >0 .7。结论 :短串联重复序列D12S391、D7S82 0、D5S818、vWA、D16S5 39可作为亲子鉴定的首选基因座 ,在法医学应用和群体遗传学研究中有较高的价值     

浙江省汉族人群18-STR基因座的分型资料及其应用

【目的】 建立浙江地区汉族人群18个STR基因座(D8S1179&#65380;D21S11&#65380;D7S820&#65380;CSF1PO&#65380;D3S1358&#65380;TH01&#65380;D13S317&#65380;D16S539&#65380;D2S1338&#65380;D19S433&#65380;VWA&#65380;TPOX&#65380;D18S51&#65380;D5S818&#65380;FGA&#65380;PentaE&#65380;PentaD&#65380;SE33)的遗传多态性数据资料,并探讨18-STR鉴定分析系统在亲子鉴定&#65380;产前诊断等领域的应用&#65377; 【方法】 对浙江汉族598例无血缘关系个体,采用2组荧光标记STR-PCR复合扩增系统及毛细管电泳基因分型技术,获取18个STR基因座数据资料;在497个亲子鉴定案例中,比较18-STR与15-STR鉴定系统在亲子鉴定和产前诊断中的应用&#65377; 【结果】 18个STR基因座基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P > 0.05)&#65377;18个STR基因座的杂合度在0.630 ~ 0.942之间,累积个体识别力大于0.9999999999,基因型分布与中国其它地区汉族人群存在差异&#65377;与15-STR鉴定系统相比,18-STR鉴定系统更有利于二联体亲缘关系的认定及可疑突变的判断&#65377;在胎儿亲子鉴定中偶然发现的1例21三体胎儿在D21S11&#65380;PentaD两个STR基因座出现了特征性峰型&#65377; 【结论】 18个STR基因座在浙江汉族人群中呈高度多态性,对法医学亲子关系的认定或排除具有较大价值,部分STR基因座的检测也有助于非整倍染色体的产前诊断&#65377;