肾综合征出血热Vero传代细胞疫苗的研究

目的研究肾综合征出血热(HFRS)Vero传代细胞疫苗。方法将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z10(Ⅰ型)、Z37(Ⅱ型)适应到Vero细胞上进行连续传代，并用不同代次的Vero细胞适应株制备Vero传代细胞疫苗。结果Z10、Z37，株感染Vero细胞后第1代即可达到较高病毒滴度，并且在Vero细胞中持续传代适应，病毒滴度分别维持在6．25～6．75和6．50～7．00logTCID50／ml之间，较为稳定。用不同代次的Vero细胞适应株制备而成的HFRS Vero细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高，反向间接血凝效价从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的阴性上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的1：2上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64；疫苗病毒滴度(logTCID50／ml)从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的4．25上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的6．50，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的6．25上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的7．50。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论HFRS Vero传代细胞疫苗的生产，疫苗株在Vero细胞中的连续传代适应起关键性作用。     

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗接种效果观察

现已知我国半数地区间时存在着姬鼠和家鼠二种型别的肾综合征出血热(HFRS)的混合流行,因此,有必要研制能同时预防这二种型别的疫苗。目前我国用于生产疫苗的三株HFRS病毒,对同型各毒株均表现较好的中和作用,但对异型病毒的交叉中和作用较差。经人体免疫三针后,对同型病毒的中和抗体阳转率可达90%,而对异型病毒的阳转率仅30%左右。因而,在我国,研制双价HFRS疫苗的工作早已被提出来了。本文报道我们研制的双价HFRS沙鼠肾灭活疫苗免疫人体的结果。材料与方法一、疫苗:由杭州天元生物药业公司生产的双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗(批号双-4),制造疫苗的毒种为Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型),病毒在沙鼠肾原代细胞培养后,经β-丙内脂灭活,内含0.1%人血白蛋白和0.5mg/ml氢氧化铝佐剂,先分别制成Ⅰ型和Ⅱ型的单价疫苗,再按不同比例混合而成双价疫苗。     

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗免疫效果观察

目前我国用于生产疫苗的HFRS病毒，对同型各毒株均表现较好的中和作用，但对异型病毒的交叉中和作用较差。为此，我们研制了双价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗，并进行了免疫效果观察。1材料与方法1．1疫苗由杭州天元生物药业公司生产的权价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗，批号：双-4，制造疫苗的毒种为210（Ⅰ型）和237（Ⅱ型）。病毒在沙鼠肾原代细胞培养后，经卜丙脂灭活，内含0.1％入血白蛋白和0.5mg／ml氢氧化铝佐剂，充分别制成单价疲劳，再按不同比例混合而成。互．2接种对象为既往未患过HFRS的健康人群，年龄在16～32岁之间，男26入，女3…     

HFRS病毒Z37株在绿猴肾传代细胞的病变作用和传代适应

[目的]研究肾综合征出血热（HFRS）病毒39疫苗株在绿猴肾传代细胞（vero,vero-E6)上的病变和传代适应增殖情况,为应用vero细胞研制出血热疫苗提供科学依据。[方法]将肾综合征出血热疫苗株Z37适应在绿猴肾传代细胞（vero,vero-E6)上,对细胞进行细胞病变（CPE）的动态观察,并于不同的时间取样,测定病毒滴度,比较静置培养、转瓶培养滴度的差异情况。[结果]Z37株不使vero-E6细胞产生病变,用HEPES诱导,3d可见明显病变现象。Z37株不使vero细胞产生病变,用HEPES诱导病变现象未获成功,Z37株在vero细胞中可高滴度繁殖,滴度达到10^7/ml,转瓶培养病毒滴度略高于静置培养。[结论]应用vero细胞研制HFRS疫苗是可行的。     

肾综合征出血热Ⅱ型沙鼠肾灭活疫苗人群接种反应及免疫学效果观察

为观察肾综合征出血热(HFRS)Ⅱ型沙鼠肾细胞灭活疫苗(Ⅱ型疫苗)对人群接种反应及免疫学效果，山东省疾病预防控制中心与中国药品生物制品检定所于1999—2003年共同进行了Ⅱ型疫苗人群接种反应及免疫学效果观察。Ⅱ型疫苗为天元生物药业生产，新药临床研究批件(1999)制申体第6号，批号：980526、980623、980609，所用毒株为Z37；另设该公司HFRS双价疫苗(批号：990307)为对照组。     

肾综合征出血热疫苗的纯化与人体观察

肾综合征出血热(HFRS)足由汉滩病毒引起的急性传染病,世界各地均有发生.用长爪沙鼠肾原代细胞培养HFRS病毒,经β-丙内脂灭活病毒,研制成功汉坦型、汉城型及汉坦型加汉城型三种疫苗,已取得很好的预防效果[1,2].为使产品的质量进一步提高,进行了疫苗纯化的研究.     

浙江省肾综合征出血热灭活疫苗的研究

目的　通过对分离到的汉坦病毒 (HV)免疫原性及病毒滴度的选育 ,选择出疫苗毒株及筛选出不破坏病毒血凝抗原的灭活剂和疫苗基质细胞 ,提高疫苗的规模化生产技术 ,生产出副反应轻 ,免疫原性和现场防病效果好的各种剂型的疫苗 ,满足人群免疫预防的需要。方法　分离到的HV株 ,应用多种方法进行免疫原性和动物保护试验选育 ;疫苗灭活剂筛选通过与甲醛灭活效果比较 ,观察对血凝素抗原的影响 ,以此作为判断指标 ;疫苗基质细胞建立主要通过观察病毒在各种细胞上的增殖滴度、基质细胞的贴壁时间及收液次数等方法 ,选择基质细胞。结果　从 45株病毒株中成功选育出Z10 (汉滩型 )和Z3 7(汉城型 )疫苗病毒株 ,两株疫苗免疫原性好、病毒滴度高 ;成功选择出 β 丙内酯作为疫苗灭活剂 ,它不破坏病毒的血凝素抗原 ,接种反应轻 ;建立的长爪沙鼠肾原代细胞作为疫苗基质 ,不仅病毒滴度高 ,而且贴壁效果好 ,可以做到多次收液的目的。结论　我们研制的疫苗无论是单价的Ⅰ型、Ⅱ型疫苗 ,还是双价 (Ⅰ型和Ⅱ型混合 )疫苗 ,接种人体后副反应轻 ,免疫效果好 ,现场防病效果也很理想 ,是目前控制肾综合征出血热流行最有效和经济的手段和措施 ,值得大力推广。     

3株肾综合征出血热病毒的分离和鉴定

目的了解浙江省肾综合征出血热（HFRS）流行特点及汉坦病毒（HV）型别，为防治提供科学依据。方法鼠肺HV抗原检测采用直接免疫荧光法（DFA），病毒分离采用阳性鼠肺研磨液接种幼龄长爪沙鼠，再经vero-E6细胞传代，用单克隆抗体DFA定毒株及分型。结果从捕自浙江省龙泉地区的8份阳性鼠肺中分离到3株HV，经DFA鉴定均为汉滩型（Ⅰ型）病毒，3株病毒在Vero-E6细胞中的感染滴度为10^4.75～10^5.25CCID50／ml。结论从鼠类肺组织中分离到3株汉滩型HV，毒株均能在Vero-E6细胞中较好增殖，有可能成为HFRS疫苗后备毒株。     

肾综合征出血热病毒持续感染细胞的建立

已经发现多种细胞或细胞株对HFRSV有敏感性,如绿猴肾传代细胞(Vero-E6),人肺癌传代细胞(A549,人胚肺二倍体细胞(2BS)及大白鼠肺原代细胞,长爪沙鼠肾原代细胞,地鼠肾原代细胞等,但未见HFRSV在地鼠肾传代细胞(BHK 21)上呈持续感染状态,现将HFRSV浙37株病毒在BHK21细胞上连续传代的结果报道如下.\     

肾综合征出血热疫苗后备毒株的分离和生物学特性研究

目的从肾综合征出血热(HFRS)疫区阳性鼠肺中分离汉坦病毒(HV),并对分离到的病毒进行型别鉴定和生物学特性研究,为HFRS疫苗后备毒种库的建立打下基础。方法疫区阳性鼠肺研磨液接种长爪沙鼠分离病毒,并将分离到的HV经乳沙鼠脑内连续传代,采用直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验,检查毒株的型别,研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度和抗原滴度。结果从疫区32份阳性鼠肺中分离到9株HV,经单克隆直接荧光血清检查6株为汉滩病毒株,3株为汉城病毒株,经乳沙鼠脑内连续传代,其中4株毒株的病毒滴度和抗原滴度较高,汉滩和汉城毒株的病毒和抗原滴度最高分别达106.50、106.00和1∶5120、1∶5120。结论4株毒株的病毒滴度和抗原滴度均较高,可作为HFRS疫苗后备毒种的筛选毒株。     

肾综合征出血热灭活疫苗毒种浙37的纯毒试验

我国流行的肾综合征出血热(HFRS)病毒有汉滩病毒(Ⅰ型)和汉城病毒(Ⅱ型)二种血清型。因此,有必要研制能同时预防这二种型别的疫苗。目前,我国用于生产疫苗的三株HFRS病毒,对同型各毒株均表现较好的中和作用,但对异型病毒的交叉中和作用较差。经人体免疫三针后,对同型病毒的中和抗体阳转率可达90%,而对异型病毒的阳转率仅30%左右。过去我们在研制HFRS灭活疫苗时采用Ⅰ型毒株浙10作为毒种,为提高HFRS疫苗免疫效果,又筛选出Ⅱ型毒株浙37,将其用于HFRS双价灭活疫苗的研制。根据我国“临床观察用的HFRS试验性灭活疫苗的基本要求”中规定,用于HFRS疫苗的毒株应作纯毒试验。外源因子检查和中和试验是检查纯毒的重要方法。本文重点报告以细胞和动物二种方法用于检查浙37的纯毒试验。     

陕西省周至县司竹乡、马召镇2001-2004年接种肾综合征出血热疫苗免疫效果评价

周至县是陕西省肾综合征出血热(HFRS)高发病县之一。为了有效控制HFRS疫情,在周至县高发病的司竹乡、马召镇连续4年于HFRS发病高峰前,使用浙江天元生物药业公司生产的Ⅰ型及双价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗,对16～60岁人群开展集中普种,并对免疫效果进行了评价。1.材料与方法:①HFRS发病情况依据周至县传染病报告。②HFRS疫苗累计接种率来自周至县HFRS监测系统。③人口资料来源于周至县统计局。2.结果:①随着HFRS疫苗集中普种工作的逐年开展,接种率逐步上升,司竹乡16～60岁人群疫苗全程接种率由集中普种的2001年的27.82%上升到2004…     

双价纯化肾综合征出血热疫苗临床观察

用沙鼠肾原代细胞培养肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)Ｚ10(Ⅰ型 )和Ｚ37(Ⅱ型 )病毒 ,经 β丙内脂灭活 ,已研制成Ⅰ型、Ⅱ型和双价 (Ⅰ型加Ⅱ型 ) 3种ＨＦＲＳ疫苗 ,均已取得新药证书和生产文号 ,并形成规模生产 ,经 10 0 0余万现场人群接种 ,取得了很好的预防效果[1 ] 。为使产品的质量进一步提高 ,达到副反应更轻 ,接种针次减少的目的 ,进行了纯化疫苗的研究。材料与方法1　疫苗制造　利用Ｚ10型 (Ⅰ型 )和Ｚ37(Ⅱ型 )毒种 ,分别接种沙鼠肾原代细胞 ,经培养和多次收液 (每次收液病毒滴度ＴＣＩＤ50 达 10 6 0 /ｍｌ以上 )后合并 ,用 10万分子…     

肾综合征出血热Ⅰ型灭活疫苗稳定性观察

我站于1993年研制成功HFRS沙鼠肾细胞1型单价灭活疫苗，经几年来的流行病学效果考核，证明安全有效，机体接种后中和抗体阳转率可达90％以上，无副作用。其稳定性经中国药品生物制品检定所检测，该疫苗经4℃保存18个月后，效力试验结果符合要求。现生产的疫苗有效期被定为1年。为进一步了解疫苗的稳定性，在实验室对几批疫苗进行了观察。1材料和方法1.1疫苗为杭州天元生物药品公司按文献方法生产，即病毒浙10殊感染沙鼠肾细胞，培养后收获议滩病毒，以什丙内脂灭活，加AL.（OH）3佐剂制成疫苗。经中国药品生物制品检定所检定符合要求。1…     

黑龙江省肾综合征出血热Ⅰ型灭活疫苗的免疫效果评价

黑龙江省为肾综合征出血热(HFRS)高发省,经多年疫源地、病原学及流行病学调查,确认为姬鼠型疫区。为此我们对讷河县永丰乡长兴村和虎林种畜场499人HFRS沙鼠肾Ⅰ型疫苗的免疫效果进行了观察,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IgG抗体。结果显示,1个月后全程免疫阳转率达84.89%(309/364)。说明疫苗近期防病效果很好,但免疫9个月后IgG抗体阳转率明显下降,可见,在基础免疫1年后进行加强免疫十分必要。     

从延边地区患病的家兔中分离出肾综合征出血热病毒

[目的 ]证明家兔对肾综合征出血热 (HFRS)病毒具有敏感性。 [方法 ]取病兔的肺、肾、肝脏 ,常规制备悬液 ,接种于小白鼠乳鼠脑腔 ,经 3次传代见出现特异症状或死亡的乳鼠 ,常规方法分离病毒 ,并对其中 3株系统鉴定 ,用间接免疫荧光 (IFAT)试验检测分离病毒株的抗原特性。 [结果 ]与分离病毒株的IFAT试验结果 ,病兔恢复期血清滴度≥ 4倍增长 ,正常人、非HFRS病人血清与呼肠弧病毒Ⅰ～Ⅲ型血清不发生反应。分离病毒株与HFRS病人血清、HFRS病毒单克隆抗体均为阳性反应。 [结论 ]从家兔分离出的JR1 、JR2 和JR3 株病毒是汉坦型HFRS病毒     

评价肾综合征出血热疫苗效果的攻击毒株的选择

肾综合征出血热（HFRS）是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。我国占全球发病总数的90％，病死率约为3％-10％，波及全国30个省市和自治区。在各种预防HFRS的措施中，疫苗是一种最特异和最有效的预防手段。迄今为止。本实验室已经研究出HFRSⅠ型、Ⅱ型和双价及双价纯化沙鼠肾灭活疫苗，并已取得正式生产号，为预防HFRS起到了重要的作用。而HFRS疫苗质量的好坏，对HFRS疫区的防病效果起很大的影响。考核HFRS疫苗免疫效果最常用的方法是中和抗体效价的检测。但家兔经疫苗免疫后活毒攻击，检查家兔小肠的病毒抗原是考核疫苗免疫效果最直接、方便、稳定的方法。本课题组从2001—2002年HFRS毒株浙江分离株中筛选出一株攻击家兔后小肠荧光抗原最强的矾株作为今后考核HFRS疫苗效果的攻击毒株。     

我国肾综合征出血热疫苗的研究进展

肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)又称流行性出血热 (epjidemic hemorrhagic fever,EHF),是一种由汉坦病毒(HV)感染引起的,以发热、出血及肾损害为特征的一类全球性的自然疫源性疾病.我国是受HFRS病毒危害最严重的国家,每年约发生5～8万例,占全世界病例的90%[1].HFRS在我国分布广泛,除青海、新疆未发现病例外(但新疆从褐家鼠检出HV),其余各省(自治区、直辖市)均曾有过HFRS病例报告.HV属病毒根据其抗原基因组分子结构的不同,至少可分为10个血清型(基因型),其中的Ⅰ型(HTN)和Ⅱ型(SEO)在中国的流行和造成的危害最为严重.韩国于1978年和我国1981年相继分离到HFRS病原后,我国学者在汉坦病毒的研究和防治上做了大量研究,研制出多种安全有效的疫苗,为我国乃至世界HFRS的防治做出了重要的贡献.笔者就我国HFRS疫苗的研究进展予以综述.……     

福建省2011年肾综合征出血热流行病学调查分析

目的 掌握福建省肾综合征出血热(HFRS)疫情动态,为防治工作提供科学依据.方法 对全省疫情报告进行统计分析;采用笼夜法捕鼠,计算鼠密度及鼠种构成,应用间接免疫荧光法(IFA)对鼠肺进行汉坦病毒抗原检测及分型.结果 2011年福建省HFRS报告病例259例,发病率为0.70/10万.疫情分布于64个县(市、区),但主要集中在南平、宁德、福州和泉州4个市.松溪和周宁县发病率位居全省县(市、区)前2位.啮齿动物监测显示,室内平均鼠密度为8.22％,褐家鼠为主要鼠种,携带汉城型病毒(Ⅱ型).混合型疫区野外平均鼠密度为6.53％,针毛鼠为主要鼠种,其次是黑线姬鼠,携带汉滩型病毒(Ⅰ型).首次从德化县褐家鼠中检出HFRS病毒抗原.结论 福建省HFRS的主要宿主动物仍以褐家鼠为主,闽东北混合型疫区野外主要宿主动物为黑线姬鼠.2011年福建省HFRS疫情有明显上升,松溪和周宁县HFRS发病率超过中发县水平,应切实做好灭鼠工作,对重点人群推广使用HFRS双价疫苗,减少发病,严防疾病暴发流行.     

凤台县肾综合征出血热防治研究评析

为掌握我县肾综合征出血热 (HemorrhageFeverWithRenalSyndrome .HFRS)的流行规律 ,控制我县肾综合征出血热流行。我们开展了调查、收集整理全县人口资料和HFRS发病情况及鼠密度 ,运用间接免疫荧光技术 ,检测疑似病人、健康人和鼠血HV抗体及鼠肺HV抗原。根据监测结果指导我县以防鼠、灭鼠和接种HFRS疫苗为主的综合防治措施 ,降低了我县本病的流行强度和发病率。