人肾癌细胞原代培养方法比较及其生长特性观察

目的:分析比较三种方法分离人肾癌组织原代培养肾癌细胞及其传代能力,探讨建立理想的人肾癌细胞体外实验模型。方法:分别采用组织块贴壁法、机械分散法及差速贴壁分离法、混合酶消化法及差速贴壁分离法进行人肾癌细胞的体外培养,并从细胞形态学、表型、增殖生长曲线和细胞活力曲线等方面进行对比研究。结果:三种方法均可获得原代肾癌细胞,采用组织块贴壁法可获得较多数量的肾癌细胞,采用混合酶消化加分步贴壁后培养情况最好,数量较多,形态完整,第4代后肿瘤细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期,且与肾癌细胞系769-P细胞具有相似的表面抗原表达。结论:采用混合酶消化加分步贴壁法可获得较纯的肿瘤细胞,培养生长时间短,成功率高,适宜体外原代培养。     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

人子宫肌瘤细胞分离培养及其体外雌孕激素受体的表达

目的:探讨一种短时间内在体外获得大量子宫肌瘤细胞的方法,并对其进行生物学特性鉴定.方法:应用胶原酶消化法分离获得人子宫肌瘤细胞,体外培养扩增,免疫组织化学法对肌瘤细胞进行鉴定,并比较雌孕激素受体(estrogen receptor,ER;progesterone receptor,PR)在体外培养的肌瘤细胞、肌瘤组织及正常平滑肌组织中的表达情况.结果:应用胶原酶消化法体外分离培养并获得大量的纯度较高的子宫肌瘤细胞;镜下观察,体外培养生长良好的子宫肌瘤细胞呈梭形或不规则三角形,呈放射状或旋涡状生长;RT-PCR结果显示,与同源子宫肌瘤组织相比(ER0.91±0.30;PR 0.60±0.11),培养4代的肌瘤细胞ER(0.92±0.24),PR(0.62±0.14)的表达水平无显著差异(P＞0.05),而与正常平滑肌组织(ER 0.64±0.31;PR 0.46±0.16)相比则有显著提高,P＜0.05.结论:成功建立人子宫肌瘤细胞有限细胞系,且在体外培养的子宫肌瘤细胞和人体内肌瘤细胞相似的生物活性,为子宫肌瘤的研究提供了快速有效地实验模型.     

在体外软琼脂不贴壁生长和裸鼠体内发瘤的表型差异

体外培养的肿瘤细胞,一个重要的标准是能在适宜宿主体内发生肿瘤。广泛应用的动物是无胸腺裸鼠。但体外实验方法更为简便迅速。这些实验基于肿瘤细胞的一些生长特性,主要是能在软琼脂上贴壁生长。正常细胞和未转化细胞不能贴壁生长。因而,研究细胞贴壁生长能力和在动物体内发生肿瘤的关系,可以证明体外培养的肿瘤细胞生长特性对肿瘤的发生是不是必需的问题。本文报告了一例鳞状上皮癌LT-2细胞系在体外软琼脂上不贴壁生长和能在裸鼠体内发生肿瘤,这两     

人胎盘部位滋养细胞肿瘤细胞系的建立及其鉴定

背景与目的：胎盘部位滋养细胞肿瘤(placental site trophoblastic tumor,PSTT)是一种特殊类型的妊娠滋养细胞肿瘤。该研究旨在建立人PSTT细胞系,鉴定其基本特性。方法：通过手术切除的PSTT组织标本原代培养,纯化并传代,建立人PSTT细胞系。鉴定方法包括：观察细胞形态,CCK-8法绘制细胞生长曲线,进行染色体核型分析,细胞与肿瘤组织短串重复序列(short tandem repeat,STR)分析,以及免疫组织化学染色。结果：建立稳定传代的人PSTT细胞系PSTT-1。PSTT-1细胞单层贴壁生长,失去接触抑制性,呈多突起的纺锤形结构。体外培养生长良好,每5 d传代1次,目前已传至30余代。染色体核型分析结果为正常女性核型：46,XX。PSTT-1与肿瘤组织STR分析结果高度匹配。PSTT-1细胞表达β-catenin、CD146、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)、人胎盘生乳素(human placental lactogen,hPL)和Muc4。结论：该研究成功建立人PSTT细胞系PSTT-1,为PSTT的研究提供了体外实验模型。     

小鼠乳腺癌细胞系Ca761-03的建立及其生物学特性研究

目的：建立体外培养的小鼠乳腺癌细胞系，明确其生物学特性。方法：利用乳腺癌移植瘤组织，进行体外原代培养，并对其纯化和反复传代，进行生长曲线，倍增时间，软琼脂集落形成，细胞周期，染色体众数，免疫组织化学染色及体内成瘤率，转移率等鉴定。结果：建立了一个小鼠乳腺癌细胞系，命名为Ca761-03。其生长迅速，呈贴壁生长。倍增时间为25．98h；平均软琼脂克隆形成率为5．39％；G1期31.8％，S期57.3％，G2＋M期10．9％；CK染色为阳性，ER，PR均为阴性；体内移植成瘤率100％，肺转移率100％，未见淋巴结转移。结论：成功建立了小鼠乳腺癌细胞系．并对其生物学特性进行了较系统的观察与研究。     

人脊索瘤细胞系CM-3l9的建立及其生物学特性的观察

目的 建立人脊索瘤细胞系，为脊索瘤研究提供实验型。方法 取经病理证实的新鲜脊索瘤手术标本，进行体外原代组织块培养。对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、细胞周期检查、染色体分析、电镜观察、异种移植和体外侵袭实验等。结果 建成细胞系CM-319，经近两年的体外培养，已连续传代百余次，其形态学表现、组织化学染色、电镜观察和异种移值等均符合脊索瘤细胞特征。细胞倍增时间为33h。细胞周期测定显示：G1期为55．6％，G2期为21．9％，S期为22．5％，G2／G1为1．90。染色体具有亚三倍体核型。异种移植成瘤率100％，具有侵袭性。结论 CM-319是一株人脊索瘤细胞系，可用于对脊索瘤的研究。     

人上颌窦癌体外细胞培养初步报告

我们将11例人上颌窦低分化鳞状细胞癌进行体外细胞培养,除1例未生长外,其余10例均见生长。培养人癌细胞存活时间。最长者达18天零3小时,最短苦为8天。其中1例在作直接培养的同时,取部分组织先经裸小鼠体内移植生长后,再作体外细胞培养,培养细胞最长存活时间达27天,最短存活时间为10天。实验表明,体外培养人上颌窦癌细胞在一定时间内生长良好,可望建立单纯稳定的细胞系,并为进一步探讨上颌窦癌的生物学特性及进行药物筛选研究提供有利条件。     

肺癌细胞系XWLC-05的建立及其生物学特性研究

背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在建立云南宣威女性肺腺癌细胞系,为肺癌高发区的防治研究提供理想的体外实验模型.方法:以手术切除的肺癌组织标本进行原代培养,通过光镜观察、电镜观察、绘制生长曲线、计算倍增时间、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体及其显带分析、肿瘤标志物检测、异体移植实验及免疫组化检测等对其生物学特性进行分析鉴定,建立细胞系.结果:体外培养细胞生长稳定,细胞形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征,染色体数目分布在55～69之间,众数为60～63;小鼠接种成瘤率为100%,瘤细胞形态与原患者的病理切片相似,命名为XWLC-05(Xuanwei Lung Cancer-05).结论:该细胞系符合建系标准,是一株新建的人肺腺癌细胞系.     

SMMC-7721人体肝癌细胞系和SL-795人体淋巴母细胞样细胞系

SMMC-7721人体肝癌细胞系是第二军医大学于1977年8月开始培养建立,材料取自二军大第一附属医院的一例肝癌手术标本。至今在体外连续传代培养已46个月,液氮低温冻存37个月。该细胞系的生长较为迅速而稳定,每隔7～10天可传代一次,细胞形态以上皮型为主,其亚微结构符合肝癌细胞的特征。本细胞系在第15代时甲胎蛋白和白蛋白的间接免疫荧光反应阳性,同时用放射免疫法测得培养液中的甲胎蛋白为31毫克/毫升。本系细胞培养220天时,染色体数目为44～107个,主流范围在54258个,占总数的70％,染色体核型分析,增加的大部属A、B、C,E和F群,其中C、E群的增加和G群的减少较突出。本系细胞乳酸脱氢酶同功酶谱符合肝癌细胞的一般     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡模型的建立

目的建立肝癌细胞凋亡模型,为进一步研究细胞凋亡分子机理打下基础。方法用抗癌药阿霉素诱导培养的人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡,用四唑盐比色试验（ＭＴＴ法）检测。结果研究发现,０．５μｇ／ｍｌ放线菌素Ｄ可明显抑制２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素对肝癌细胞凋亡的诱导作用。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素作用肝癌细胞３小时,换培养液继续培养１２小时后,肝癌细胞ＤＮＡ结构断裂,电泳呈梯状带型。肝癌细胞形态学改变出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征。用流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,凋亡细胞占７２．１％。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素诱导肝癌细胞凋亡后,细胞周期Ｇ１期、Ｓ期和Ｇ２期分别为７５．９％,２４．１％和０％,肝癌细胞活细胞率为３５．５％。结论用抗癌药阿霉素成功地诱导人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡,该细胞凋亡模型的建立,将有助于进一步探讨肝癌细胞凋亡的分子机制。     

C—erbB2、PCNA、ER、PR在126例乳腺癌中的表达及临床意义

目的：研究C—erbB2、PCNA、ER、PR在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床、病理因素之间的关系。方法：采用免疫组化SP法检测126例乳腺癌组织CerbB2、PCNA、ER、PR蛋白的表达。结果：C—erbB2、pCNA、ER、PR在乳腺癌阳性表达率分别为：36．5％,95．2％,65．1％,54％。C—erbB2、pCNA、ER、PR蛋白阳性表达率和表达强度与乳腺癌患者的年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、pTNM分期差异性无统计学意义（P〉0．05）。C—erbB2、PCNA与组织学分级差异具有统计学意义（P〈0．05）。C—erbB2与ER、PR均呈负相关（r=-0．344,P=0．000;r=-0．226,P=0．011）。结论：C—erbB2,PCNA过表达者预后差,可以作为判断乳腺癌患者预后的有效指标。     

ER和PR在子宫颈的分布及其与宫颈鳞癌的关系

目的 :检测雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)在正常子宫颈的分布 ,并探讨ER和PR的表达状态与宫颈鳞癌的发生发展及预后的关系。方法 :采用SP免疫组化方法对 2 1例正常宫颈 ,40例宫颈上皮内瘤变 (CIN)及 71例浸润性宫颈鳞癌进行ER、PR检测。结果 :正常宫颈ER、PR主要在鳞状上皮、腺上皮及间质细胞核表达 ,且三者表达状态基本一致 ,CIN鳞状上皮及浸润性宫颈鳞癌ER、PR核表达率明显降低。结论 :ER、PR核表达下调或缺失可能是宫颈鳞癌发生的一重要机制。     

Steroid hormone receptor expression and proliferation in rat mammary gland carcinomas induced by 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine

2-Amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine (PhIP) is a mammary gland carcinogen present in the human diet. Herein, the expression of estrogen receptor alpha (ERalpha), estrogen receptor beta (ER beta) and progesterone receptor (PR) was examined in mammary gland carcinomas induced by PhIP in female Sprague-Dawley rats. Quantitative real-time polymerase chain reaction demonstrated that ER alpha, ER beta and PR were statistically elevated by 3-, 4- and 8-fold in carcinomas compared with normal mammary glands. By immunohistochemistry, carcinomas showed statistically higher nuclear expression of all three steroid receptors with the majority of carcinomas showing at least 10% of epithelial cells stained for ER alpha (49/55, 89%), ER beta (41/55, 75%) and PR (48/55, 87%). Furthermore, the level of expression of the three steroid hormone receptors was positively correlated with each other across the bank of carcinomas (Spearman analysis, P < 0.05). The expression of ER alpha in carcinomas was associated with tumor grade, extent of nuclear pleomorphism and cellular proliferation as measured by proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and phospho-Rb immunostaining (Spearman analysis, P < 0.05). Confocal microscopy was used to measure the percentage of epithelial cells showing nuclear colocalization of receptors, PCNA, and cyclin D1. Colocalization of the receptors, and the colocalization of the receptors with PCNA and cyclin D1 was strikingly higher in carcinomas than in the normal mammary gland. In carcinoma cells, 37% of ER alpha positive epithelial cells were colocalized with PCNA in contrast to just 0.25% of cells in the normal mammary gland. The findings from this study indicate that ER alpha, ER beta and PR were co-upregulated and nuclear localized in epithelial cells from rat mammary carcinomas compared with normal mammary glands, and that the co-upregulation was positively correlated with proliferation and cell cycle progression in carcinomas.     

贲门腺癌雌孕激素受体及PCNA表达相关性初探

目的 :比较贲门腺癌增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)及雌激素受体(ER)、孕激素受体 (PR)检测结果 ,探讨PCNA及ER、PR与贲门癌发生发展和预后的关系。方法 :应用免疫组化法对 66例贲门癌进行PCNA和ER、PR检测。结果 :高分化腺癌PCNA阳性率高 ,ER、PR低 ;低分化腺癌PCNA阳性率低 ,ER、PR高。说明PCNA、ER、PR表达与肿瘤分化程度有相关性 (P <0 0 5 )。结论 :ER、PR、PCNA与贲门癌发生、发展有关 ,可能是反映贲门癌生物学行为和预测预后的重要指标。其检测具有实际临床意义 ,对临床治疗有参考价值     

人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及其生物学特性

目的:介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系的建立,研究其生物学特性.方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系.通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,对其生物学特性进行研究.结果:首次建立一株人卵巢肉瘤样癌细胞系,命名为BUPH:OVSC-1,现已传至100余代.其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;染色体为假二倍体,染色体丢失,且有三条标记染色体;具有集落形成能力;裸鼠皮下种植瘤生长快,与原组织形态相似;组织化学奥辛蓝过碘酸雪夫氏反应、免疫组化角蛋白7及波形蛋白染色均阳性.结论:BUPH:OVSC-1为一株高度恶性人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型.     

Development of a new human breast cancer cell line Ia-270

Summary A new human breast cancer cell line (Ia-270) has been isolated from a malignant pleural effusion from a woman with metastatic infiltrating ductal carcinoma of the breast. This cell line contains cytoplasmic estrogen (ER) and progesterone (PR) receptors. Following estradiol (E₂) administration, PR synthesis is augmented and a higher level of saturation density is reached. In an athymic mouse, the cell line produced a tumor morphologically similar to the primary tumor. The results of isoenzyme and karyotype analyses demonstrate Ia-270 to be of human origin and free of HeLa cell contamination. The cell line has been maintained in continuous culture since April 1982 and may provide a usefulin vitro system for studying the biology of human breast cancer.Supported in part by the Iowa Cancer and Leukemia Research Foundation.     

Isolation and Characterization of an Undifferentiated Human Colon Carcinoma Cell Line (MIP-101)

An undifferentiated human colon carcinoma cell line was established from tumor tissue obtained from metastasis to the liver of colonic adenocarcinoma in a patient with fulminant Dukes D colorectal carcinoma. Histological analysis of the tumor biopsy from the liver confirmed the hospital pathology report of poorly differentiated colonic adenocarcinoma. Explants of this tumor tissue xenografted into a nude mouse were used to establish an epithelioid-like cell culture line, MIP-101. The cell line formed tumors in nude mice that hisologically appeared undifferentiated and did not stain for carcinoembryonic antigen (CEA). No CEA was present either by radio-immunoassay (RIA) of the culture supernatant or by immunoperoxidase staining of the tumors or monolayers. MIP-101 appears to be one of the most undifferentiated human colon carcinoma cells lines available. It should prove useful in the search for markers of undifferentiated colonic cancer and in studies of colonic cancer differentiation.     

小鼠子宫颈癌U14细胞系的建立及生物学特性研究

目的:建立小鼠宫颈癌肿瘤细胞系,观察其生物学特性。方法:采用肿瘤原代培养法对小鼠U14肿瘤进行体外传代培养,定期对培养细胞进行形态学观察,进行免疫组织化学鉴定、细胞周期检查、染色体检测、细胞生长测定,进行615、C57BL/c小鼠移植观察体内成瘤情况,并用pEGFP-N1质粒转染U14细胞。结果:细胞呈贴壁和悬浮混合生长,CK阳性特征。体外连续培养10个月,传代50代,细胞倍增时间为21.83小时,细胞周期测定G1期为34%,G2期为26.4%,S期为39.6%。培养U14细胞3-4天处于对数生长期,染色体为亚四倍体核型,众数为64～84条。615小鼠、C57BL/c小鼠移植成瘤率均为100%,无支原体污染。建立了GFP( )的U14-GFP单克隆细胞株。结论:成功建立了小鼠U14子宫颈癌细胞系及GFP标记的U14-GFP细胞株,体内移植可建立常规及带荧光标记的肿瘤模型,可用于体内体外相结合的肿瘤研究。     

Immunohistochemical analysis of estrogen receptors, progesterone receptors, Ki-67 antigen, and human papillomavirus DNA in normal and neoplastic epithelium of the uterine cervix.

To investigate the relationship between the sex steroid receptor (estrogen receptor [ER] and progesterone receptor [PR]) status and the cell proliferation kinetics during the menstrual cycle in normal and neoplastic epithelium of the uterine cervix, immunohistochemical localization of ER, PR, and cell proliferation-associated antigen, Ki-67, was investigated in 35 normal cervical specimens, 3 condylomas, 26 cervical intraepithelial neoplasia (CIN) samples, and 22 invasive squamous carcinoma samples. The presence of human papillomavirus (HPV) DNA was also studied. In the normal cervix, basal cells were usually ER positive, PR negative, and Ki-67 negative throughout the menstrual cycle. Parabasal cells were ER positive and PR negative in the follicular phase, but ER negative and PR positive, and Ki-67 positive in the luteal phase, and Ki-67-positive cells increased in number in the luteal phase. In contrast, PR positivity was observed in the cells of condyloma (2 of 2 cases), CIN (19 of 26 cases), and invasive squamous carcinoma (13 of 22 cases) irrespective of the menstrual phase. Moreover, most neoplastic cells containing HPV DNA type 16/18 were ER negative, whereas several lesions containing HPV DNA type 31/33/35 were weakly ER positive. Many Ki-67-labeled cells were observed in the neoplastic lesions. These results suggest that reduced ER expression and increased PR expression are associated with the proliferation of normal cervical squamous epithelium, and this proliferation-related receptor status, which is probably induced by HPV infection, is usually expressed in neoplastic cervical squamous cells.