利用多点胞内记录技术测量硬骨鱼Mauthner细胞的空间方位

<正> 对硬骨鱼Mauthner细胞(M细胞)进行神经生物学研究,常常需要比较准确地了解该细胞的空间构型,特别是其两条主要树突的空间走向。过去虽有作者利用形态学技术对M细胞做过经典的三维重构,但未能精确地测量该细胞在三维空间的伸展情况。最近,本实验室利用对鲫鱼M细胞胞体、外侧树突和腹侧树突进行多记录点胞内穿刺技术所获得的各记录点的三维坐标,结合投影几何作图方法,对M细胞的     

肌注士的宁对刺激迷走神经诱发的M细胞胞内反应的影响

发现肌注士的宁,可使刺激鲫鱼迷走神经所诱发的Mauthner细胞(M细胞)胞内反应的突触后电位(post-synaptic potentials,PSPs)的幅度增高、平均持续时间延长、峰值前移,并且可爆发2个以上的动作电位。提示刺激迷走神经所诱发的M细胞胞内反应中可能包含有抑制性成分,而抑制性与兴奋性成分的相互作用可能起到调节M细胞兴奋性的作用,从而使M细胞的活动与整体的活动协调一致。     

硝酸士的宁对刺激鲫鱼脊髓诱发的Mauthner细胞胞内电位变化的影响

目的 探索肌注硝酸士的宁对刺激鲫鱼脊髓所诱发的M细胞胞内电位变化的影响.方法 运用微电极穿刺技术记录M细胞的胞内电位变化.结果 肌注硝酸士的宁后逆向动作电位后突触后电位(PsPa)的幅度升高,持续时间增加,并可在此基础上暴发动作电位.结论 从脊髓到M细胞的传人通路中可能有抑制性递质甘氨酸的释放和相应受体的存在,其与兴奋性递质一起调节M细胞兴奋性,从而使M细胞的活动与整体一致.     

不同年龄小鼠脱髓鞘动物模型中脑内星形胶质细胞激活情况的观察

目的 观察星形胶质细胞在不同年龄(青壮年及中老年)cuprizone(CPZ)脱髓鞘小鼠模型中的激活特点,探讨星形胶质细胞激活与髓鞘脱失可能存在的内在联系.方法 选取6周龄(青壮年)及9月龄(中老年)雄性C57 BL/6小鼠建立CPZ导致的急性脱髓鞘动物模型,经0.2％ CPZ处理6周后,通过体质量测量及卢卡斯快蓝(luxol fast blue,LFB)染色观察模型建立是否成功,利用免疫组织化学染色检测实验组(CPZ)和对照组(CTL)小鼠胼胝体(corpus callosum,CC)及皮层( cortex,CTX)区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达变化,并通过Western blot方法进一步检测GFAP及MBP蛋白表达差异.结果 0.2％ CPZ处理6周后,青壮年CPZ小鼠于胼胝体及皮层区GFAP阳性细胞数显著增多(P＜0.01),同时伴有显著的MBP表达下降(P＜0.01);中老年小鼠于胼胝体区GFAP阳性细胞数增多较明显(P＜0.05),并伴有MBP表达明显下降(P＜0.05);GFAP阳性细胞数的增多和MBP表达下降均表现为青壮年组更加明显(P＜0.01).结论 星形胶质细胞的激活于青壮年小鼠更加明显,并与髓鞘损伤呈现出一定的正相关性,星形胶质细胞激活可能是参与髓鞘损伤的重要原因.     

高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素对体外培养视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响.方法 采用荧光探针技术,应用激光共聚焦显微镜动态、定量测定细胞外高钙、钙拮抗剂条件下,正常、高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的变化.结果 高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,在细胞外高钙条件下各组[Ca2+]i均降低,在细胞外钙拮抗剂条件下各组[Ca2+]i均再次下降.结论 高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素均能使视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,而钙拮抗剂通过干扰细胞外钙离子进入细胞来降低[Ca2+]i.     

制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法

目的介绍两种制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法。方法一种为差速贴壁分离法即消化后的ES细胞接种在明胶包被的平皿中，利用饲养层细胞与ES细胞贴壁速度的不同来分离ES细胞；另一种方法为冰水浴自然沉淀分离法，即消化后的ES细胞移入15ml离心管中冰水浴，利用细胞间自然沉淀的位置不同分离ES细胞。结果两种方法均可得到足够数量处于未分化状态的ES细胞。结论这两种方法都可以应用于制备嵌合体小鼠实验中的ES细胞处理。     

Ca2+-CaM在M3R介导逼尿肌细胞收缩中作用的实验研究

目的探讨Ca2+-CaM在M3R介导逼尿肌细胞收缩中作用.方法将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组,接种于6孔培养板上培养,加入10-4mol/L carbachol 和methoctramine ,采用Ca2+浓度和CaM活性检测试剂盒分别测定Ca2+浓度和CaM活性.结果实验组中,[Ca2+]i和CaM的平均通道荧光对数值分别为(3.26±0.38)和(2.87±0.34),与对照组[分别为(2.06±0.12)、(2.14±0.24)]相比,均有显著性的升高(P<0.05).结论 Ca2+-CaM信号传导途径参与了M3R介导逼尿肌细胞收缩调节过程.     

鲫鱼迷叶与Mauthner细胞关系的电生理研究

刺激鲫鱼的迷叶，在Ｍａｕｔｈｎｅｒ细胞内记录到潜伏期不同的两类动作电位。第１类潜伏期较长（０．４～０．５ｍｓ），动作电位发生前首先引起分级兴奋性突触后电位（ＥＰＳＰ），当刺激强度增大到一定程度时爆发动作电位；第２类动作电位潜伏期短（０．２～０．３ｍｓ），动作电位发生前记录不到ＥＰＳＰ。实验结果揭示：迷叶与Ｍ细胞之间可能存在双向神经纤维联系，一种是迷叶发出的神经纤维与Ｍ细胞构成突触联系，另一种是Ｍ细胞发出的神经纤维与迷叶发生突触联系。     

Mauthner细胞脊髓EPSP前电位起源分析

用单个方波脉冲刺激鲫鱼脊髓，逆向激活Ｍ细胞轴突，同时刺激脊髓内的上行传导通路。用玻璃微电极在延髓Ｍ细胞胞体进行细胞内记录。结果发现，Ｍ细胞逆向动作电位的降支上虽然经常出现错折，但错折与逆向动作电位本身并无必然联系。用阳极阻滞方法显露出来的错折电位呈尖峰状，与后继的低幅度去极化反应联系紧密，不可分离，共同构成一复合ＥＰＳＰ。它比脊髓ＥＰＳＰ的潜伏期短、幅度小、阈值更低，经常与Ｍ细胞的轴突同时被激活。将其称为脊髓ＥＰＳＰ前电位，简称前电位。     

镉及茶多酚对大鼠心肌细胞动作电位的影响

目的：探讨氯化镉（CdCl2）及茶多酚（TP）对大鼠心室肌细胞动作电位（AP）的影响．方法：用常规微电极方法记录心室肌细胞AP．结果：不同浓度的CdCl2可使心肌细胞动作电位幅度（APA）值降低,最大除极速率（Vmax）降低,复极化时程（APD）明显缩短．CdCl2 0．005mmol／L组APA从74．9±4．8降至66．5±6．7;Vmax从15．3±2．3降至16．1±2．5;CdCl2 0．01mmol／LAPA降至50．3±2．4;Vmax降至9．3±0．9．0．015mmol/L APA降至46．2±3．1;Vmax降至3．7±0．6．结论：CdCl2能够抑制心肌细胞的AP,TP可减轻镉对心肌细胞AP的影响．     

钩藤碱对蟾蜍坐骨神经动作电位和大鼠心电图的影响

钩藤碱对蟾蜍坐骨神经动作电位具剂量依赖性抑制作用，其半数有效浓度为49.2mmol／L，弱于奎尼丁。钩藤碱（2．5～25mg／kgiv）明显减慢大鼠心率，延长心电图P－R，Q－T间期及增宽QRS波，作用相似奎尼丁。     

M细胞腹侧树突内复合性突触后电位的抑制性成分

目的探查Mauthner细胞腹侧树突的复合性突触后电位的抑制性成分。方法电刺激鲫鱼皮肤,用微电极记录诱发的Mauthner细胞腹侧树突的突触后电位。分别改变刺激频率和刺激强度,经负向电流向腹侧树突内电泳Cl-,延髓表面滴加士的宁,观察电位变化。结果突触后电位具有频率和强度依赖性,同时具有氯离子浓度依赖性。滴加士的宁后,突触后电位幅度增加,甚至在原有去极化的基础上爆发动作电位。结论从皮肤到M细胞腹侧树突的通路由多突触组成;抑制性成分不仅投射到胞体还投射到腹侧树突,释放的递质可能是甘氨酸。     

Relationship between action potential duration of ventricular cells and heart rate in dog under natural breathing

Summary The ECG and transmembrane action potentials of the ventricular cells of 12 mongrel dogs at various heart rates under pentobarbital anesthesia and spontaneous breathing were simultaneously recorded. After statistical analysis of the records of 139 units, quantitative relationship between action potential durations (APDs) and heart rate, between QT intervals and heart rate, and between APD₉₀ and QT interval were recognized and regression equations were worked out by linear regression. The regression coefficients indicated that the relationship between APD₉₀, APD₅₀, QT interval and heart rate and that between APD₉₀ and QT interval were highly significant. In order to eliminate the effect of heart rate on APDs and QT interval, the correction formulas for heart rate on APDs and QT interval were worked out. After correction, the effect of heart rate on APDs and QT interval could be eliminated. This paper presents a practical method for the study of the effect of different agents on the APDs of ventricular cells and QT interval under spontaneous breathing.     

一氧化氮合酶拮抗剂对豚鼠听觉核团诱发电位及CAP的影响

目的：探讨听觉核团一氧化氮（ＮＯ）的可能作用．方法：用核团内微量药物注射及听觉电生理方法，研究一氧化氮合酶拮抗剂Ｎ－甲基－Ｌ－精氨酸（ＮＭＬＡ）对豚鼠核团内听觉诱发电位（ＡＥＰ）、耳蜗复合动作电位（ＣＡＰ）的影响．结果：听觉中枢各核团内分别注入ＮＭＬＡ后，核团内听觉诱发电位均明显增大．短声诱发的耳蜗核内ＡＥＰ（ＣＮ－ＡＥＰ）为（９８．６９±３．２８）μＶ，下丘内ＡＥＰ（ＩＣ－ＡＥＰ）为（１３６．３９±３．２４）μＶ，内侧膝状体内ＡＥＰ（ＭＧＢ－ＡＥＰ）为（１７２．４８±３．９６）μＶ，与注射ＮＭＬＡ前相差显著（Ｐ＜０．０５）．短纯音诱发的ＣＮ－ＡＥＰ以２５０Ｈｚ～１ｋＨｚ变化显著（Ｐ＜０．０１），其中５００Ｈｚ是正常对照的２．０１倍（Ｐ＜０．０１），ＩＣ－ＡＥＰ以２～４ｋＨｚ变化显著（Ｐ＜０．０５），ＭＧＢ－ＡＥＰ以４～６ｋＨｚ变化显著（Ｐ＜０．０５）．ＣＡＰＮ１波振幅降低，尤以ＣＮ内注射ＮＭＬＡ最为显著（Ｐ＜０．０１）．核团内ＡＥＰ潜伏期缩短．结论：听觉核团内的ＮＯ对听觉感受神经元的兴奋性及同步化有调节作用．可能直接或通过上橄榄复合体改变耳蜗神经的敏感性．     

Relationship between action potential duration of ventricular cells and heart rate of rabbit under natural breathing

Summary The ECG and transmembrane action potentials of the ventricular cells of 40 albino rabbits at various heart rates under natural breathing were simultaneously recorded. After statistical analysis of the records of 126 units, quantitative relationships between action potential durations (APDs) and heart rates were found and regression equations were obtained by linear regression. In order to eliminate the effect of heart rates on APDs, the correction formulas on APDs were also worked out. After correction the effect of sinus cycle length (SCL) on APDs could be eliminated. This study has provided a practical method for the study of the effect of different agents on the APDs of ventricular cells under more natural condition. Though the regression equations and correction formulas can only be applied in rabbits under natural breathing, this method might be adopted to work out the corresponding regression equations and correction formulas for other experimental animals. Therefore it has practical significance in a rather broad field.     

HCN4基因修饰大鼠MSCs体外诱导获得的心脏起搏样细胞动作电位检测

目的 探讨超极化激活及环化核苷酸调控的阳离子通道亚型4(hyperpolarization-activated cyclic nucleotidegated cation channel 4,HCN4)基因修饰大鼠MSCs体外诱导分化的心脏起搏样细胞的动作电位特性.方法 以HCN4基因修饰大鼠MSCs体外诱导获得的具有自发搏动的心脏起搏样细胞为实验组,同期培养的原代乳鼠窦房结细胞为对照组,采用全细胞膜片钳技术对两组细胞的动作电位进行检测.结果 心脏起搏样细胞及原代培养乳鼠窦房结细胞均可记录到具有舒张期自动去极化的动作电位,心脏起搏样细胞的动作电位特性与原代培养的乳鼠窦房结细胞相比,其静息电位、动作电位幅度及动作电位周期均无显著性差异(P＞0.05),但阈电位较原代培养的乳窦鼠房结细胞显著降低(P＜0.01).结论 从电生理角度证实,心脏起搏样细胞的特性与原代培养的乳鼠窦房结细胞相似.     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。