丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞CyclinD1和CDK4的表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞CyclinD1和CDK4的表达的影响。方法建立同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔VSMC增殖模型,加入丹参酮ⅡA共同培养48 h,用流式细胞仪分析血管平滑肌细胞(VSMC)细胞周期变化及细胞周期调控因子CyclinD1和CDK4的表达。结果丹参酮ⅡA组和空白对照组各期细胞数比较无统计学意义(P0.05);丹参酮ⅡA组G0/G1期细胞数明显高于HCY组,S期、G2/M期细胞数明显少于HCY组(t=6.700~12.063,P0.05);丹参酮ⅡA组细胞CyclinD1、CDK4表达均显著低于HCY组(t=7.922、3.936,P0.05)。结论丹参酮ⅡA具有拮抗VSMC增殖的作用,有利于降低血管平滑肌细胞CyclinD1及CDK4的表达。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响及叶酸的拮抗作用

目的探讨不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和细胞周期分布的影响及叶酸对Hcy的拮抗作用。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为6组:空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、2005、00μmol.L-1)和叶酸治疗组(Hcy100μmol.L-1+叶酸30μmol.L-1)。应用MTT法及流式细胞仪检测各组VSMCs增殖率及细胞周期。结果随着Hcy浓度的增加VSMCs的增殖率增加;Hcy作用后VSMCs G0/G1期细胞数降低;S期和G2/M期细胞数增加,处于DNA合成期的细胞数明显增加,而叶酸治疗组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),叶酸治疗组与Hcy 100μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy可通过对细胞周期的影响促进VSMCs的增殖,并在一定时间和浓度范围内呈明显的剂量依赖关系;叶酸对Hcy有拮抗作用。     

益肾活血提取液对同型半胱氨酸所致的兔VSMCs增殖的抑制作用

目的：探讨益肾活血提取液（YSHXC）对同型半胱氨酸（HCY）诱导的兔主动脉平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法：组织贴块法体外原代培养兔VSMCs,建立HCY诱导的VSMCs增殖模型并分组：正常组、HCY刺激组、HCY+YSHXC组、HCY+叶酸组。采用MTT法检测细胞的增殖活度,免疫组化技术检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,并采用流式细胞术检测细胞周期。结果：YSHXC及叶酸均能降低PCNA的表达（P<0.01）,且中药组低于叶酸组（P<0.05）。细胞周期也有相应的变化,与HCY组相比,YSHXC组G0/G1期细胞比例显著升高,S期与G2/M期细胞显著降低（P<0.01）,基本接近正常对照组（P>0.05）。结论：YSHXC能抑制HCY诱导的VSMCs增殖,下调细胞内PCNA的表达,这可能与YSHXC推动细胞周期时相的改变有关。     

淫羊藿苷与葛根素对血管平滑肌细胞周期影响的对比研究

目的:对比研究淫羊藿苷(icariin,ICA)与葛根素(puerarin)对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导增殖的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞周期及增殖指数(proliferation index,PI)的影响。方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA及葛根素共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化。结果:ICA与葛根素组G0/G1期细胞数增多,S期细胞数明显减少,PI显著降低,与HCY组相比,差异显著(P0.01);ICA作用效果与其浓度呈正相关,葛根素作用效果则与其浓度关系不大。结论:ICA与葛根素均具有抑制VSMC增殖的作用,细胞周期阻滞是ICA与葛根素抑制VSMC增殖的机制之一。     

同型半胱氨酸和肾上腺髓质素在大鼠肺组织和气道平滑肌的相互作用

目的:探讨肾上腺髓质素(adrenom edullin, AdM)对同型半胱氨酸(homocysteine,H CY)诱导的气道平滑肌细胞增殖的影响和HCY对肺组织合成分泌AdM的影响.方法 :在培养的大鼠气道平滑肌细胞上,测定3H-TdR参入;用放免法测定肺组织和孵育液中AdM含量.结果: 0.5 mmol·L-1 HCY刺激气道平滑肌细胞(airwa y smooth muscle cells,ASMC)增殖 ,AdM(10-9,10-8,10-7mol·L -1)呈浓度依赖方式抑制 HCY 诱导的ASMC增殖;HCY(0.1,0.5,1.0 mmol·L-1)以浓度依赖方式诱导肺组织合成和分泌AdM,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)可抑制其作用.结论 :在肺HCY和AdM呈相互作用关系,HCY调节AdM的生成,而AdM影响HCY的生物学效应.     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞周期及P27和CyclinA表达的影响

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)生长周期的变化特点及P27和细胞周期素A( CyclinA)表达的影响.方法 正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、200、500 uM)、叶酸治疗组(Hcyl00 uM+叶酸30 uM),总计6组.以MTT检测VSMCs的增殖率,流式细胞仪测定细胞周期,RT-PCR和Western blotting测定P27和CyclinA基因mRNA及蛋白水平.结果 不同浓度Hcy干预的VSMCs与空白对照组和叶酸治疗组相比:随着Hcy浓度的增加VSMCs增殖率增加,处于S及G0/M期的VSMCs比例亦逐渐增加:RT-PCR和Western blotting显示CyclinA mRNA与蛋白表达逐渐增加,P27 mRNA与蛋白表达逐渐降低;叶酸治疗组与空白对照组比所有结果均无明显变化.结论 Hcy可通过调节P27和CyclinA mRNA水平,影响细胞周期各时相分布,从而促进VSMCs的增殖:叶酸对Hcv有拮抗作用.     

mGluR6对大鼠胚胎神经干细胞生物学功能的影响

目的:探讨代谢型谷氨酸受体6(mGluR6)对大鼠胚胎神经干细胞生物学功能的影响。方法:利用MTT比色法分析mGluR6过表达载体、mGluR6siRNA在不同时间对大鼠胚胎神经干细胞活力的影响,神经球测量方法分析mGluR6对大鼠神经球增殖的影响,流式细胞术分析mGluR6对大鼠NSCs细胞周期及凋亡的影响。结果:MTT结果表明,在处理24h,48h和72h后,过表达mGluR6显著增强大鼠NSCs的细胞活力,促进NSCs增殖,神经球直径显著增大;mGluR6siRNA抑制大鼠NSCs的增殖。过表达mGluR6后,与对照组相比G1/G0期和细胞比率显著下降,S期细胞比率显著上升,促进了细胞G1到S期转换;沉默mGluR6后,G1/G0期和细胞比率显著增加,S期细胞比率显著下降,抑制了大鼠NSCs细胞G1到S期转换。应用流式细胞术显示,过表达mGluR6 48h后,大鼠NSCs细胞早凋和晚凋均显著下降;沉默mGluR6显著诱导大鼠NSCs的早凋和晚凋。结论:mGluR6可促进大鼠胚胎神经干细胞的增殖,抑制NSCs凋亡。     

罗格列酮抑制鼠动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的：探讨PPAR-γ合成型配体罗格列酮对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法：采用组织贴块法原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞并传代,根据细胞生长的形态特点和免疫细胞化学染色进行细胞鉴定.取第五代纯化细胞血清饥饿24h,然后用PDGF-BB或bFGF（20ng/ml）刺激24h,按实验分组在30min前加或不加入不同浓度（1～10umol/L）的罗格列酮进行预处理,应用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期分布.结果：镜下培养细胞呈典型的“谷峰状”生长,免疫细胞化学染色显示胞浆内特异的α平滑肌肌动蛋白阳性表达.PDGF-BB或bFGF均能诱导平滑肌细胞增殖,MTT中A490值增加,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.罗格列酮预处理能够抑制平滑肌细胞增殖,抑制细胞从G0/G1期向S期转变,且呈明显的剂量依赖关系.结论：罗格列酮能够抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞的增殖.     

恒磁场对人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制效应

目的　探讨恒磁场对离体人脐动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响 .方法　将培养至 3～ 10代的人 VSMC,分别置于磁感应强度为 10 ,5 0 Gs的恒磁场中培养 48h,用MTT法和3 H- Td R掺入法检测实验组和对照组 VSMC的增殖数量 ,流式细胞仪分析细胞周期 .结果　在恒磁场的作用下 ,实验组人脐动脉 VSMC的增殖数量在 10 Gs(0 .5 6 5±0 .0 96和 34 9± 82 )和 5 0 Gs(0 .6 42± 0 .0 92和 387± 91)显著低于对照组 (0 .716± 0 .0 48和 42 7± 86 ) (P<0 .0 5 ) ,而且阻止平滑肌细胞由静止期 (G0 / G1 期 )进入 DNA合成期 (S期 )和有丝分裂期 (G2 / M期 ) .结论　平均磁感应强度为 10 ,5 0 Gs的恒磁场抑制人脐动脉 VSMC增殖 ,磁疗对 PTCA术后冠脉再狭窄可能具有防治作用     

钙库操纵的钙内流在转化生长因子-β1促进气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨钙库操纵的钙内流(SOCE)在转化生长因子-β1(TGF-β1)促进气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法:体外培养大鼠ASMCs,以Fluo-3/AM为细胞内钙离子浓度示踪剂,观察ASMCs在TGF-β1作用后,细胞内基础钙离子浓度、钙释放和SOCE的变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定TG...     

caveolin-1抑制转化生长因子-β1诱导的哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖

目的 探讨TGF-β1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的影响及caveolin-1在TGF-β1诱导的哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的抑制作用.方法 离体培养大鼠气道平滑肌细胞并进行分组,用CCK-8法检测1、10、100μg/L的TGF-β1作用后及ERK通路特异性抑制剂PD98059干预后各组ASMCs的增殖情况,用Western blot法检测PD98059及β-环糊精干预后caveolin-1、p-ERK1/2蛋白表达的情况.结果 10μg/L的TGF-β1刺激ASMCs增殖的作用最为显著（P＜0.05）,PD98059干预后,ASMCs增殖明显减少（P＜0.05）.TGF-β1刺激ASMCs增殖过程中,caveolin-1蛋白表达量减少,p-ERK1/2的表达增加（P＜0.05）;使用β-环糊精破坏微囊的结构后,caveolin-1表达量减少,而p-ERK1/2表达量增加（P＜0.05）.结论 caveolin-1可以抑制TGF-β1诱导的ASMC增殖,这种抑制作用可能是通过抑制ERK1/2通路来实现的.     

p21Ras对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的观察p21Ras对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响。方法 14只SD大鼠,随机分为哮喘组和对照组,建立大鼠哮喘模型,采用酶消化法培养气道平滑肌细胞,免疫组织化学鉴定为平滑肌细胞,透射电镜观察细胞形态,分别取第3代对照组及哮喘组细胞,各自分为以下4个处理组,即对照组分为:a.对照空白组:不加任何干预剂;b.对照干预组;哮喘组分为:c.哮喘空白组;d.哮喘干预组。加入10mMFPTIII干预,流式细胞仪分析细胞周期分布,经Lev-ene’s方差齐性检验,按α=0.05水准,4组总体方差齐,组间比较采用Bonferron法检验,结果通过p21Ras干预后,哮喘空白组G0/G1期气道平滑肌细胞细胞(AMSC)比例显著低于对照空白组及哮喘干预组(P0.05);S期和S+G2/M期ASMC比例显著高于上述两组(P0.05);对照空白组与对照干预组差别不显著(P﹤0.05)。结论 p21Ras影响哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期时相中G0/G1的比例,使其增殖受到抑制,提示p21Ras与哮喘气道平滑肌的增殖密切相关。     

宣肺定喘汤对大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察宣肺定喘汤含药血清对体外培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响.方法 原代培养大鼠ASMC,分为不同浓度的宣肺定喘汤组、地寒米松组及空白对照组,血清药理学方法 制备含药血清,MTT法测定含药血清对ASMC增殖的影响.结果 宣肺定喘汤含药血清能显著降低培养的大鼠ASMC MTT法OD值,与空白血清组比较有显著性差异(P＜0.01),与地塞米松组无显著性差异(P＞0.01).结论 宣肺定喘汤可以通过抑制ASMC增殖起到抗哮喘的作用,并存在一定的量效关系.     

Effects of mitochondrial ATP-sensitive K+ channel on protein kinase C pathway and airway smooth muscle cell proliferation in asthma

The effects of ATP-sensitive mitochondrial K + channel(mitoK ATP) on mitochondrial membrane potential(Δψm),cell proliferation and protein kinase C alpha(PKCα) expression in airway smooth muscle cells(ASMCs) were investigated.Thirty-six Sprague-Dawley(SD) rats were immunized with saline(controls) or ovalbumin(OVA) with alum(asthma models).ASMCs were cultured from the lung of control and asthma rats.ASMCs were treated with diazoxide(the potent activator of mitoK ATP) or 5-hydroxydencanote(5-HD,the inhibitor of mitoK ATP).Rhodamine-123(R-123) was used to detect Δψm.The expression of PKCα protein was examined by using Western blotting,while PKCα mRNA expression was detected by using real-time PCR.The proliferation of ASMCs was measured by MTT assay and cell cycle analysis.In diazoxide-treated normal ASMCs,the R-123 fluorescence intensity,protein and mRNA levels of PKCα,MTT A values and percentage of cells in S phase were markedly increased as compared with untreated controls.The ratio of G 0 /G 1 cells was decreased(P<0.05) in diazoxide-treated ASMCs from normal rats.However,there were no significant differences between the ASMCs from healthy rats treated with 5-HD and the normal control group.In untreated and diazoxide-treated ASMCs of asthmatic rats,the R-123 fluorescence intensity,protein and mRNA levels of PKCα,MTT A values and the percentage of cells in S phase were increased in comparison to the normal control group.Furthermore,in comparison to ASMCs from asthmatic rats,these values were considerably increased in asthmatic group treated with diazoxide(P<0.05).After exposure to 5-HD for 24 h,these values were decreased as compared with asthma control group(P<0.05).In ASMCs of asthma,the signal transduction pathway of PKCα may be involved in cell proliferation,which is induced by the opening of mitoK ATP and the depolarization of Δψm.     

主动脉平滑肌细胞的三维培养研究

目的研究主动脉平滑肌细胞(aortic smooth muscle cell,ASMC)在三维培养中是否仍能产生弹性蛋白。方法取一周龄SD大鼠胸主动脉,经原代、传代培养后,和胶原、血清及培养液混合形成ASMC胶原凝胶,进行三维培养;培养2周后用Comori醛复红弹性纤维染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,检测细胞胶原凝胶中所产生的弹性纤维,并进行电镜观察。结果传代细胞经α肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定,98％以上为ASMC。培养2周的ASMC胶原凝胶切片用二种染色方法均可显示有弹性纤维存在,电镜观察细胞超微结构呈典型的合成表型。结论 ASM在三难培养中能够产生弹性蛋白,并形成弹性纤维。     

MicroRNA-34a 对小鼠气道平滑肌细胞增殖和ORMDL3 表达的影响

目的 探讨支气管哮喘小鼠模型中microRNA-34a（miR-34a）对气道平滑肌细胞（ASMC）增 殖与血清类黏蛋白1 样蛋白3（ORMDL3）表达的影响。方法 以卵清蛋白（OVA）诱导复制的小鼠哮喘 模型和培养的ASMC 为研究对象,筛选与ORMDL3 密切相关的miRNA ;利用miR-34a-mimic 使miR- 34a 过表达;用苏木精- 伊红染色和MTT 法探究其对ASMC 增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应和 Western blot 检测ORMDL3 的表达变化。结果 OVA 诱导下小鼠气道组织中miR-34a 被抑制（P <0.05）。 miR-34a-mimic 可减少哮喘小鼠ASMC 异常增殖（P <0.05）;miR-34a-mimic 抑制ASMC 在490nm 下的光 密度值和相对细胞活性（P <0.05）;miR-34a-mimic 下调哮喘小鼠气道组织中ORMDL3 的表达,并抑制体 外培养ASMC 中ORMDL3 的表达（P <0.05）。结论 miR-34a 可抑制ASMC 的增殖和ORMDL 3 基因表达, 为今后哮喘发病机制的研究提供新的思路。