黄芪注射液对高糖所致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究黄芪对高糖所诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法采用人脐静脉血管内皮细胞株EVC-304,在培养液中加入不同浓度的黄芪,孵育24h,高糖诱导损伤,再培养4h后,终止培养。观察细胞形态学变化并检测细胞活力、蛋白质含量,检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果正常对照组及黄芪各剂量组细胞活力、蛋白质含量均高于高糖损伤对照组,差异有显著性(P<0.05)。高糖明显抑制VEGF的活性和表达,黄芪则有明显的修复作用。结论黄芪可以减轻高糖对血管内皮细胞的损伤,具有一定保护作用。     

黄芪在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞Apelin/APJ表达的影响

目的  观察黄芪在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs )Apelin/APJ mRNA表达的影响,探寻黄芪对HUVECs的作用机制。方法  原代培养HUVECs,根据实验要求分为：对照组、高糖组、低浓度黄芪组（0.1g/L浓度黄芪+高糖）、高浓度黄芪组（0.2g/L浓度黄芪+高糖）,用不同浓度的葡萄糖和黄芪注射液培养24h后,用细胞增殖活力实验(CCK-8)检测HUVECs的增殖活力;在倒置相差显微镜下观察HUVECs的形态变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Apelin/APJ mRNA的表达。结果  经过24h培养,与对照组相比,高糖组细胞增殖活力明显降低(P＜0.05),镜下可见细胞形态改变,Apelin/APJ mRNA的表达减少(P＜0.05)。与高糖组相比,黄芪干预组细胞增殖活力升高(P＜0.05),镜下可见细胞形态明显改善,Apelin/APJ mRNA的表达增高(P＜0.05)。结论  黄芪可减轻高糖对内皮细胞的损伤,亦可通过升高Apelin/APJ 对HUVECs起保护作用。     

银杏叶提取物对高糖环境下ECV304细胞的保护作用

目的：探讨银杏叶提取物对高糖环境下人脐静脉内皮细胞（ECV304）的保护作用及机制。方法：体外培养的ECV304细胞分为高糖组、银杏叶保护组、甘露醇高渗对照组（甘露醇组）和正常细胞组,在35 mmol•L^-1高糖条件下培养ECV304细胞24 h后,分别收集不同处理组的细胞,检测细胞产生羟自由基（•OH）、超氧阴离子（O^-₂）、丙二醛(MDA)水平,同时测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用不同处理组的细胞制作扫描电镜图片,观察细胞及线粒体形态的改变。结果：高糖组细胞产生•OH、O^-₂和MDA水平高于银杏叶保护组（P<0.05）,SOD活性低于银杏叶保护组（P<0.05）。甘露醇组细胞产生•OH、O^-₂、MDA水平显著低于高糖组（P<0.05）。电镜下可见银杏叶保护组线粒体形态完好,线粒体内嵴清晰可见;高糖组线粒体肿胀,线粒体内嵴消失,坏死细胞增多。结论：银杏叶提取物对高糖导致的ECV304细胞损伤具有保护作用。     

红景天苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的观察红景天苷对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法实验于2017年2月—2017年11月在青海大学高原医学研究中心实验室进行。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株贴壁后,以MTS法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响,根据糖浓度分组。糖浓度5.5 mmol/L作为正常对照组,糖浓度45 mmol/L作为模型组,以不同红景天苷浓度(1×10~(-5)mol/L、5×10~(-5)mol/L、1×10~(-4)4mol/L、2×10~(-4)4mol/L)作用于模型损伤组,并通过MTS法观察细胞活力,WST-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,观察红景天苷对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果与模型损伤组比较,细胞培养24 h、48 h,红景天苷5×10~(-5)mol/L、1×10~(-4)4mol/L、2×10~(-4)4mol/L组细胞活力均明显增加(F=5.111、16.330,P<0.01),细胞内MDA含量均明显下降(F=22.567、28.382,P<0.01),细胞内SOD活力均明显增加(F=23.388、82.244,P<0.01);培养48 h,红景天苷1×10~(-5)mol/L组细胞活力与模型损伤组比较显著增加(P=0.04)。结论红景天苷可以降低高糖损伤的HUVEC的氧化应激水平,从而对高糖损伤的血管内皮细胞提供一定的保护作用。     

不同浓度黄芪总黄酮对高糖诱导人脐静脉系内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨不同浓度黄芪总黄酮对高糖诱导人脐静脉系内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。方法将HUVECs随机分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖模型组(30mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)及黄芪总黄酮高剂量组(2mg/mL黄芪总黄酮+30mmol/L葡萄糖)、黄芪总黄酮中剂量组(1mg/mL黄芪总黄酮+30mmol/L葡萄糖)、黄芪总黄酮低剂量组(0.5mg/mL+30mmol/L葡萄糖)。37℃,5%CO2培养箱中培养24h后,检测各组HUVECs的一氧化氮(nitric oxide,NO)及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)水平、病理学改变、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)mRNA及蛋白表达水平。结果培养24h后,与正常对照组比较,高糖模型组NO、T-SOD水平明显降低,细胞数量明显减少,ET-1mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。与高糖模型组比较,黄芪总黄酮高、中、低剂量组NO、T-SOD水平明显升高,细胞数量明显增加,ET-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);且黄芪总黄酮高剂量变化最为显著(P<0.05)。     

马齿苋总黄酮对氧化应激损伤血管内皮细胞的影响

目的 观察马齿苋总黄酮对过氧化氢诱导人血管内皮细胞氧化损伤的保护作用.方法 采用体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,实验分为5组：正常对照组、过氧化氢损伤组、马齿苋总黄酮低、中、高剂量组.MTT法测定各组细胞活力,荧光分光光度计测量各组细胞线粒体膜电位水平.结果 与正常对照组比较,过氧化氢损伤组血管内皮细胞活力、线粒体膜电位显著降低（P＜0.01）;与过氧化氢损伤组比较,马齿苋总黄酮干预组血管内皮细胞活力、线粒体膜Ratio值明显升高（P〈0.05）,且存在明显的剂量依赖关系.结论 马齿苋总黄酮对氧化应激诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、维持线粒体膜电位有关.     

肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响.方法 体外培养细胞,通过高糖(25mmol/L)诱导细胞凋亡模型,并给予肌肽(20 mmol/L)建立高糖加肌肽组,同时设立正常糖对照组和正常糖加肌肽组.应用电镜观察细胞超微结构;AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况.结果 电镜显示25 mmol/L葡萄糖诱导细胞呈凋亡早期形态,流式细胞仪检测高糖组细胞凋亡率显著高于正常糖组(P<0.05),而高糖加20mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著抑制细胞凋亡的作用(p<0.05).结论 肌肽能够抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡.     

白藜芦醇对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞增殖、 迁移及管腔形成的影响

目的 观察白藜芦醇(RSV)对高糖培养条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和管腔形成的影响.方法 将体外培养的HUVEC细胞随机分为空白对照组、甘露醇对照组(30 mmol/L甘露醇)、模型组(30 mmol/L D-葡萄糖)和白藜芦醇低、中、高剂量组.30 mmol/L高糖诱导,并用不同浓度的白藜芦醇(20、40、60μmol/L)干预内皮细胞24 h,分别设置为白藜芦醇低、中、高剂量组.采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室及划痕实验检测细胞迁移,基质胶(Matrigel)法检测细胞管腔形成能力.结果 模型组的细胞增殖率、迁移数、划痕愈合率及管腔形成分支点数均明显高于空白对照组及甘露醇对照组(P<0.05).与模型组相比,白藜芦醇干预后,高糖诱导的HU-VEC细胞成管作用减弱,白藜芦醇低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移数、划痕愈合率及管腔形成分支点数均明显低于模型组(P<0.05),且与白藜芦醇浓度呈剂量依赖性,当白藜芦醇浓度为60μmol/L时,HUVEC细胞的增殖率、迁移数、划痕愈合率及管腔形成分支点数不仅低于模型组,且低于空白对照组和甘露醇对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇可以抑制高糖条件下HUVEC细胞增殖、迁移和管腔形成,提示白藜芦醇对高糖诱导的HUVEC细胞损伤具有一定的保护作用,可抑制病理刺激条件下血管生成.     

褪黑素减轻高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的机制

目的 探究褪黑素(MLT)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能的分子机制。方法 培养HUVEC并分为3组：对照组、模型组和治疗组。对照组用葡萄糖浓度为5.5 mmol/L的DMEM培养基处理,模型组用高糖(葡萄糖浓度为30 mmol/L)的DMEM培养基处理,治疗组用含有100μmol/L MLT的高糖DMEM培养基处理。MTT法检测高糖及MLT对HUVEC增殖的影响,试剂盒法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,流式细胞术检测活性氧(ROS)的生成,Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡和坏死情况,Western blot检测高糖及MLT对HUVEC内质网应激和细胞焦亡相关蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,模型组的细胞增殖水平下降;细胞培养上清液中LDH释放量增加;HUVEC中ROS生成增加;双染试验显示,蓝色荧光和红色荧光增加,GRP78、ATF4、CHOP、IRE1α、PERK、ATF6α、NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β蛋白表达量增加。与模型组相比,治疗组的细胞增殖水平升高;细胞培养上清液中LDH释放量减...     

高压氧联合血红蛋白对高糖引起的血管内皮细胞损伤的作用

摘要:目的 探究高压氧(HBO)联合血红蛋白(Hb)对高糖诱导的血管内皮细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力的影响及其调控机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),CCK-8法检测不同剂量血红蛋白(2、4、6、8、10μmol/L)和高压氧(0.10、0.15、0.20、0.25Mpa)对 HUVECs细胞活力的影响。建立高糖诱导的 HUVECs细胞模型,分为6组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖处理48h),甘露醇组(27.5mmol/L甘露醇处理48h),高糖组(33mmol/L葡萄糖处理48h),高糖+0.25Mpa高压氧组,高糖+6μmol/L血红蛋白组,高糖+0.25Mpa高压氧+6μmol/L血红蛋白组。通过 CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测 LDH 水平;TUNEL 染色观察细胞凋亡情况;免疫印迹(Westernblot)法检测凋亡相关蛋白表达;划痕实验和 Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;小管形成实验检测血管生成;最后通过 Westernblot检测核因子 E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达。结果 随着血红蛋白或高压氧剂量的不断增加,HUVECs细胞活力未发生显著变化。与对照组相比,高糖组 HUVECs细胞活力、迁移、侵袭和 小 管 形 成 能 力 下 降,LDH 水 平 升 高,凋 亡 率 增 加,且 Bcl-2、Nrf2 和 HO-1 蛋 白 表 达 减 少,Bax 和 cleavedCaspase-3蛋白表达增加。与高糖组相比,高糖+0.25Mpa高压氧组和高糖+6μmol/L血红蛋白组细胞活力、迁移、侵袭和小管形成能力升高,LDH 水平降低,凋亡率下降,且 Bcl-2、Nrf2和 HO-1蛋白表达增加,Bax和cleavedCaspase-3蛋白表达减少;而高压氧和血红蛋白两者联合作用时,影响更为显著。结论 高压氧联合血红蛋白促进高糖作用下 HUVECs的细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力并抑制细胞凋亡,其机制可能与激活 Nrf2/HO-1通路有关。     

丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 (IL-6)、热休克蛋白70 (HSP70)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) 和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA的表达。结果 丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论 丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

氢气饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧生成和凋亡的影响

目的探讨氢气(H2)饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧(ROS)生成和凋亡的影响。方法细胞分为对照组、高糖组、高糖+H2饱和生理盐水组(H2组)3组,流式细胞仪检测细胞内ROS,Realtime PCP检测氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)mRNA,细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。结果 H2组内皮细胞内ROS较高糖组明显减少(2.75±0.37vs 6.35±1.29,P<0.01),而SOD和GSH-Px mRNA水平明显增高(SOD:0.74±0.06vs 0.26±0.03,P<0.01;GSH-Px:0.68±0.05vs 0.31±0.04,P<0.01),细胞凋亡水平明显降低(0.38±0.02vs 0.89±0.05,P<0.01)。结论 H2饱和生理盐水可减少高糖诱导的内皮细胞内ROS增多和抗氧化酶的消耗,并减少高糖诱导的细胞凋亡。     

罗格列酮对高糖环境下人脐静脉内皮细胞分泌NO及ICAM-1的影响

目的 研究在高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌NO及ICAM-1的量随时间的变化以及罗格列酮的干预作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为正常对照组、高糖组、罗格列酮干预组,加入相应培养液培养不同时间（0 h,24h,48 h,72 h,96 h）.用硝酸还原酶法测细胞上清液中NO^-3＋NO^-2含量,来反映NO水平;用酶联免疫吸附技术双抗体夹心法（ABC-ELISA）测定细胞上清液中ICAM-1水平.结果 与正常对照组相比,高糖组NO含量在24 h明显升高,在48 h显著降低,于72 h基本达底线水平,ICAM-1水平在各时间点均明显升高且呈时间依赖性;罗格列酮可显著抑制高糖引起的NO的变化及ICAM-1的增高.结论 罗格列酮可纠正高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,起到保护血管的作用.     

黄芪对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨黄芪对高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用及眼压对其保护作用的影响。方法采用烙闭大鼠双眼上巩膜静法制备高眼压大鼠模型,将SD大鼠造模后随机分为假手术组、模型组、黄芪组、点药组、联合组。造模后4周开始干预,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予黄芪(20 g/kg)灌服、降眼压药(贝美前列素)点眼及2种措施同时干预;干预4周后,采用激光共聚焦显微镜定量分析不同组大鼠的RGC数目及凋亡率的差异。结果假手术组RGC数目明显高于其他各组(P0.01),RGC凋亡率明显低于其他各组(P0.01);模型组恰好与假手术组相反;点药组较黄芪组RGC数目多而凋亡率低,但均无显著性差异(P0.05);联合组RGC数目明显高于点药组和黄芪组(P0.05)而凋亡率明显低于此2组(P0.05)。结论黄芪可通过抑制高眼压大鼠RGC凋亡发挥神经保护作用,与降眼压药物联合应用可提高其保护作用。     

Sulindac derivative- induced apoptosis in a human umbilical vein endothelial cell line ECV304

Objective To investigate the effects of sulindac metabolites on proliferation and apoptosis in the human umbilical vein endothelial cell line ECV304 in vitro.Methods The proliferation profile of ECV304 was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method. Cell cycle distribution, apoptosis and the ultrastructure of ECV304 were detected by flow cytometry (FCM) and electron microscopy, respectively.Results MTT assay showed that the sulfide inhibited the proliferation of ECV304 and its effect was dose- dependent; the IC50 was 200 μmol/L. FCM showed that the sulfide changed cell cycle distribution. The cell cycle distribution was as follows: G1 phase (control group 77. 74%±1. 58%; sulfone group 75. 63%±2. 12%; sulfide group 46. 12%±1. 60%); S phase (control group 13. 64%±1. 22%; sulfone group 16. 40±2. 30%; sulfide group 27. 26%±2. 08%); G2- M phase (control group 8. 61%±0. 67%; sulfone group 7. 98%±0. 49%; sulfide group 26. 62%±3. 54%). The apoptosis rates in the control group, sulfone group and sulfide group were 6. 08%±3. 39%, 4. 81%±2. 14% and 51. 90%±5. 67%, respectively. Sulfide reduced the proportion of G1 phase, increased the proportion of S phase, G2- M phase and the apoptosis rate significantly (P&lt;0. 01, vs control). In the sulfide- treated cells, there were nuclear fragmentation and chromosomal condensation, shrinkage of the cell and loss of contact with neighboring cells. Apoptotic bodies were observed. Sulfone showed no effect on cell proliferation, cell cycle distribution or cell morphology.Conclusions Sulfide can significantly reduce the proliferation of ECV304, change the cell cycle distribution and arrest cells in G2- M phase where apoptosis may be induced. Sulfone has no such effects on this cell line.     

葡萄糖和胰岛素对人脐静脉内皮细胞蛋白C受体分泌水平的影响

目的：探讨在葡萄糖和胰岛素作用下人脐静脉内皮细胞可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)的分泌,阐明内皮功能损伤与糖尿病血栓形成的机制。方法：将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为葡萄糖组(5.5、20.0和40.0 mmol·L-1)、胰岛素组(0.1、1.0和10.0 nmol·L-1)、高糖(40 mmol· L-1)环...     

EDA-A1基因突变体对人脐静脉内皮细胞 ECV304增殖及细胞周期的影响

目的：研究少汗型外胚层发育不良症 EDA‐A1基因突变体对人脐静脉内皮细胞（ECV ）周期和增殖活性的影响。方法构建 EDA‐A1基因编码序列（CDS）突变体和野生型的真核表达载体 pcDNA3．1（‐）‐EDA‐A1‐M /W ,转染人脐静脉内皮细胞,逆转录 PCR（RT‐PCR）扩增 EDA‐A1基因,蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测 EDA‐A1蛋白表达,M TT 法、流式细胞术检测EDA‐A1基因突变体对 ECV 细胞增殖和细胞周期的影响。结果 RT‐PCR 、Western blot 结果显示,野生型组和突变体组 ECV细胞表达 EDA‐A1基因及其蛋白,而空质粒转染组[pcDNA3．1（‐）]和空白对照组细胞无表达。与对照组（空质粒租）相比,突变体组 ECV 细胞增殖活性下降,生长抑制率为45．70％（P＜0．01）,野生型细胞增殖活性无明显改变（P＞0．05）。突变体组中有更多细胞进入 G0/G1期、S 期;野生型组 S 期细胞增多,G2/M 期细胞明显减少（P＜0．05）。结论突变体和野生型 EDA‐A1基因对 ECV 细胞增殖和细胞周期有不同的生物学功能。     

高糖对人脐静脉内皮细胞GSH-PX活力、NOS及ICAM-1表达的影响

目的:探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV3 0 4,分为对照组和高糖组,用分光光度比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)活力,RT- PCR法检测细胞间粘附分子1(ICAM- 1)mRNA水平,免疫细胞化学法观察内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达。结果:高糖组GSH- PX活力明显下降,eNOS、iNOS蛋白表达明显增高,ICAM- 1mRNA水平也显著上升。结论:在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞GSH PX活力下降,ICAM -1mRNA、eNOS和iNOS蛋白表达增高,对糖尿病血管病变早期进展起一定的作用。