血小板亲和萃取-HPLC分析法在栀子提取物抗血小板聚集效应物质分析中的应用

目的：应用血小板生物亲和萃取-HPLC分析法分析栀子提取物中抗血小板聚集的活性成分,并对活性成分进行药理实验,以验证血小板生物亲和萃取-HPLC分析法在栀子提取物抗血小板聚集效应物质分析中的可行性。方法：将栀子提取物在生理条件下与洗涤血小板相互作用,洗去非结合成分,调节pH破坏血小板结构后洗脱结合成分,将各洗脱液用已建立的指纹图谱方法进行HPLC分析,找出准活性成分,并进一步对活性成分进行药理实验。结果：可检测到栀子提取物中的主要与血小板结合成分为栀子苷,药理实验也进一步证实一定剂量范围栀子苷对由ADP、鼠尾胶原及凝血酶诱导的大鼠血小板聚集具有明显的抑制作用（P<0.01）。结论：血小板生物亲和萃取-HPLC分析法可以用于分析栀子提取物与血小板膜受体的相互作用,所筛选的活性成分与其药理作用有一定的相关性。     

基于网络药理学的栀子豉汤抗抑郁作用机制研究

目的建立活性成分-作用靶点、蛋白相互作用、靶点相应的生物功能和通路网络,探讨栀子豉汤的抗抑郁作用机制。方法通过中药系统药理学技术平台(TCMSP)数据库并结合文献挖掘和整理获取栀子豉汤的主要活性成分。依据反向药效团匹配(Pharm Mapper)方法预测栀子豉汤活性成分的作用靶点。采用Cytoscape软件构建栀子豉汤活性成分-作用靶点网络。通过String数据库结合Cytoscape软件绘制蛋白相互作用网络,并用Systems dock Web Site对其进行验证。通过ClueGO结合Clue Pedia插件对其靶点生物功能及涉及的通路进行分析。结果栀子豉汤中筛选得到16个活性成分,涉及43个靶点,网络分析结果表明靶点主要参与细胞、组织、器官、代谢、免疫和对应激的应答等过程,通过调节瘦素、雌激素、丝裂原活化蛋白激酶级联(MAPK cascade)、脑源性神经营养因子-酪氨酸激酶受体(BDNF-Trk B)、5-羟色胺受体(5-HT receptor)、白细胞介素(IL)等信号通路来发挥抗抑郁作用。结论体现了中药多成分-多靶点-多通路的特点,为进一步开展栀子豉汤的抗抑郁作用机制研究提供了新思路和新方法。     

栀子在治疗肝脏疾病中的研究进展

对中药栀子对肝脏的保护及治疗作用进行了文献整理和分析。以Pubmed和Medline search 2个数据库为检索平台,以栀子及肝脏为联合检索词,深入研究了近20年来,国内、外文献36篇,并对其进行分析归纳,集中介绍中药栀子的保肝及治肝的作用。分别对肝功能的生化指标、GSTs系统及肝细胞凋亡等进行了系统的归纳,阐述了栀子的保肝作用;另外,对栀子抗肝癌、抗肝硬化、抗肝炎以及抗脂肪肝等方面的治肝作用进行了系统的总结。现阶段关于栀子的药效学研究仅局限于其中单一成分对肝脏的作用,却未能使中药多成分、多靶点联合作用的用药优势得以发挥,为了进一步将栀子开发成为保肝、治疗肝脏疾病的良药,还需要进行大量关于栀子有效成分群对肝脏疾病作用的实验研究。     

基于网络药理学研究丹栀治疗围绝经期综合征的作用机制

目的:采用网络药理学研究分析牡丹皮-栀子药对治疗围绝经期综合征的多成分、多通路、多靶点的作用机制.方法:运用数据库检索得到牡丹皮-栀子药对的主要活性成分、相应作用靶点及围绝经期综合征的疾病靶点,用Consensus-PathDB数据库进行信号通路及基因本体论(GO)分析,并运用软件Cytoscape 3.7.0绘制关键成分-核心靶点网络图及蛋白互作网络图,软件imageGP绘制通路及GO分析气泡图.结果:得到包括堪非醇在内的关键活性成分17个,血管内皮生长因子(VEGF)A在内的核心靶点39个,GO分析得到包括细胞增殖调控在内的生物学过程970个;激素结合在内的分子功能116个;胰岛素受体复合体在内的细胞组分45个;富集到通路728条,涉及癌症通路和VEGF通路等.结论:牡丹皮-栀子药对可能通过调节激素水平、降低心血管疾病发生风险、改善胰岛素抵抗及调节癌症基因等靶点治疗围绝经期综合征.     

栀子中京尼平苷的研究现状和应用前景

对京尼平苷的分离提取、分析和应用前景几个方面进行了综述。栀子是一种传统中药材，其中舍有京尼平苷等多种有效成分。京尼平苷是栀子果实中起利胆保肝作用的主要活性成分，随着中药现代化的进展，对中药有效成分的分离提取利用已成为新的热点课题。     

血小板细胞膜固相色谱法的建立及其对丹参效应物质的初步分析

 目的 建立血小板细胞膜固相色谱法,并应用其分析丹参对血小板作用的活性成分。方法 应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合中药提取液中的活性成分,洗去未结合的其他成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板细胞膜中释放出来,样品经固相萃取后用HPLC对这些成分进行解析。结果 丹参水提液的效应成分初步确定为6个,其中之一为原儿茶醛。结论 血小板细胞膜固相色谱法基本可以反映化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的相互作用;该体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性。     

栀子生品及炮制品对CCl4致大鼠急性肝损伤保护作用的比较

目的:比较栀子生品及炮制品对四氯化碳(CCl_4)致急性肝损伤大鼠的保护作用差异。方法:大鼠按体重随机等分为9组,分别为正常组,阳性组(联苯双酯35 mg·kg-1),模型组,生栀子高、低剂量组(2.0,1.0 g·kg-1),炒栀子高、低剂量组(2.0,1.0 g·kg-1),焦栀子高、低剂量组(2.0,1.0 g·kg-1),造模12 h后眼球取血,测定血清中天门冬氨酸转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),乳酸脱氢酶(LDH),总蛋白(TP)的活性,测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量。观察肝脏病理组织学变化。结果:与正常组比较,模型组显著升高AST,ALT,LDH水平和MDA含量,降低了TP的水平及SOD活性。肝细胞排列紊乱,细胞肿胀坏死明显。与模型组比较,栀子生品及炮制品组可显著降低大鼠血清中ALT,AST,LDH活性,其中生栀子组与炒栀子组效果较佳;各给药组均可增高SOD活性,降低MDA水平。各栀子给药组与模型组比较血清TP水平无显著性差异。各给药组肝细胞坏死、变性及炎性细胞浸润程度均有所改善,且生品组与炒品组改善较为显著。结论:栀子生品、炒品、焦品对CCl_4急性肝损伤大鼠均有较好的保护作用,而生品、炒品具有较优的保肝降酶、抗氧化作用,且炒品能够改善生品苦寒之性的缺点,缓和药性,临床应用可能更宜使用炒栀子。     

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学方法探讨栀子治疗缺血性脑中风的潜在药效物质及作用机制

目的 结合高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法（HPLC-Q-TOF-MS/MS）和网络药理学方法预测栀子治疗脑缺血的作用靶点及潜在的作用机制,为深入揭示栀子治疗脑缺血的药效物质及作用机制奠定基础。方法 根据色谱峰保留时间、精确相对分子质量、二级质谱裂解碎片等质谱信息,并结合文献数据,对栀子化学成分进行鉴定。通过中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）数据库和SwissTargetPrediction数据库预测栀子活性成分的潜在靶点;通过在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）,GeneCards数据库,京都基因与基因组百科全书（KEGG）等数据库筛选栀子预防或治疗脑缺血相关的靶标。利用DAVID 6.8对潜在靶点进行基因本体（GO）注释和KEGG通路富集分析,应用Cytoscape 3.6.0软件构建“活性成分-靶点-通路”网络,并通过Discovery Studio 2016软件对栀子的关键活性成分与作用靶点进行分子对接验证。结果 从栀子中鉴定了40个成分,包括环烯醚萜类、二萜色素类、有机酸类、单萜类等;根据活性成分预测出208个潜在的作用靶点,检索到560个与脑缺血相关的疾病靶点,将成分靶点与疾病靶点相映射得到交集靶点59个,包括肿瘤坏死因子（TNF）,半胱氨酸蛋白酶3（CASP3）和CASP8等;涉及通路包括TNF信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路等。分子对接结果表明栀子苷可与靶点前列腺素G/H合成酶2（PTGS2）,TNF和细胞核转录因子-κB p65（RELA）发生相互作用,西红花苷Ⅰ可与白细胞介素-2（IL-2）发生相互作用。结论 栀子的活性成分栀子苷、西红花苷Ⅰ等可能通过上调RELA,IL-2蛋白的表达,下调TNF,CASP8,CASP3,基质金属蛋白酶2（MMP2）蛋白的表达,调控TNF,PI3K/Akt,HIF-1等信号通路,发挥抗炎、抑制细胞凋亡等作用预防或治疗脑缺血性疾病。     

靶细胞萃取联用UPLC/Q-TOF-MS方法分析川芎中的药效成分

目的:建立靶细胞萃取联用UPLC/Q-TOF-MS技术分析川芎中药效成分的方法。方法:选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞,萃取川芎中的药效成分。在细胞对数生长期加入川芎供试品溶液,孵育2 h收集细胞并用液氮迅速冷冻,反复冻融使细胞破碎,离心得到萃取药物后的细胞样品。采用UPLC/Q-TOF-MS对其进行检测,分析川芎化学成分中与细胞结合的物质,即川芎中与细胞结合进一步发挥药效的可能有效成分。结果:从川芎中筛选到2个可能的药效成分,分别为阿魏酸和藁本内酯。结论:本研究建立的方法可以通过化合物与细胞中靶点(受体、通道、酶等)之间的特异性结合作用,筛选出川芎中药效活性成分,从而为药物活性成分的筛选以及药物机制的研究提供思路,同时推动了中药安全性的快速发展。     

基于网络药理学探讨黄秦艽保肝作用机制

该研究旨在预测民族药黄秦艽防治非酒精性肝病作用的活性成分和作用靶点及信号通路,并通过细胞实验对活性成分和相关靶点进行初步验证,阐述黄秦艽保肝的作用机制。通过中药成分及中药药理数据库和分析平台检索,结合药动学参数中的口服利用度和类药性原则筛选黄秦艽候选活性成分,通过蛋白数据库预测候选活性成分靶点,并预测与非酒精性肝病相关的疾病靶点。利用Cytoscape软件构建"活性成分-靶点-疾病"网络,通过STRING数据库构建蛋白互作网络,推测核心靶点。通过DAVID生物信息注释数据库进行GO注释分析、KEGG通路分析以及富集分析。最后通过黄秦艽水提物(WVBF)干预H2O2诱导LO2肝细胞损伤模型实验进行核心靶点和通路的初步验证。通过MTT法和实时无标记法检测细胞活力,采用实时定量PCR法分析相关基因的表达量。首先,该文通过网络药理学从黄秦艽中获得14个活性成分,成分对应的潜在靶点共有287个,与非酒精性肝病相关靶点有587个,活性成分靶点与疾病靶点交集后获得13个核心靶点。其次,GO富集分析显示,这些基因主要影响核受体的活性、转录因子的活性、类固醇激素受体活性、泛素样蛋白连接酶结合、蛋白质异二聚化活性、转录辅助因子的结合等26个生物过程。KEGG富集分析显示,PI3K-AKT信号通路、HIF-1信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、TNF信号通路和一些癌症相关通路基因富集较多。最后,通过体外肝细胞实验成功验证TNF-α和MAPK8是其重要靶点,这提示黄秦艽对肝损伤有显著改善作用。由上述结果得出,基于网络预测黄秦艽通过多成分-多靶点-多途径共同调控非酒精性肝病的物质基础和生物学机制,核心靶点通过细胞成功验证,这为民族药黄秦艽的深度开发提供了数据基础和科学依据。     

血小板细胞膜固相色谱法在脉络宁注射液效应物质分析中的应用

 目的应用血小板细胞膜固相色谱法分析脉络宁注射液的活性血小板作用成分。方法应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合脉络宁注射液中的活性成分,排除未与血小板靶点结合的非活性成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板膜上释放出来,样品经固相萃取处理后用HPLC对这些成分进行分析,利用制备色谱得到筛选出的活性成分。结果脉络宁注射液的效应成分初步确定为8个。结论血小板细胞膜固相色谱法可以进行抗血栓栓塞性疾病血管内给药制剂活性成分的筛选,同时反映了化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的作用强度。     

HPLC-ESI-MS鉴定罗氏海盘车中的多种化合物及相关指纹图谱研究

目的：建立高效液相色谱-电喷雾质谱（HPLC-ESI-MS）联用技术用于海洋中药罗氏海盘车有效成分快速鉴定及其指纹图谱研究的方法。方法：对罗氏海盘车药材进行超声波提取,采用HPLC-ESI-MS 对罗氏海盘车粗提物中多种化合物进行分析,并在此基础上建立罗氏海盘车药材的HPLC 特征指纹图谱。结果：结合文献,应用HPLC-ESI-MS 鉴定出罗氏海盘车提取物中的11 种化合物;在化合物鉴定的基础上,建立了罗氏海盘车药材的HPLC 指纹图谱,发现不同批次罗氏海盘车的质量存在差异。结论：本方法可用于罗氏海盘车药材有效成分的快速鉴定及质量控制。     

栀子药材中三种有效成分HPLC定量分析结果不确定度的评定

采用HPLC方法同时测定栀子药材中栀子苷、绿原酸和藏红花素Ⅰ的含量,通过对测试方法流程进行分析,确定不确定度来源,结合含量测定方法验证数据,计算了不确定度分量、合成不确定度及扩展不确定度;结果表明,用HPLC方法定量分析栀子药材中栀子苷、绿原酸和藏红花素1的方法满足现代药物分析方法学的要求,且三者的扩展不确定度分别为0.1024,0.2254,0.1265.     

HPLC—ESI—MS鉴定罗氏海盘车中的多种化合物及相关指纹图谱研究

目的：建立高效液相色谱一电喷雾质谱（HPLC—ESI—MS）联用技术用于海洋中药罗氏海盘车有效成分快速鉴定及其指纹图谱研究的方法。方法：对罗氏海盘车药材进行超声波提取,采用HPLC—ESI—MS对罗氏海盘车粗提物中多种化合物进行分析,并在此基础上建立罗氏海盘车药材的HPLC特征指纹图谱。结果：结合文献,应用HPLC—ESI—MS鉴定出罗氏海盘车提取物中的11种化合物;在化合物鉴定的基础上,建立了罗氏海盘车药材的HPLC指纹图谱,发现不同批次罗氏海盘车的质量存在差异。结论：本方法可用于罗氏海盘车药材有效成分的快速鉴定及质量控制。     

Cytotoxic sesquiterpenoids from the ethanol extract of fruits of Celastrus orbiculatus

AIM OF THE STUDY: To investigate the cytotoxic compounds against human melanoma A375-S2 and human cervical carcinoma Hela cell lines from the fruits of Celastrus orbiculatus. MATERIALS AND METHODS: The ethanol extract of the fruits of C. orbiculatus was found to exhibit significant cytotoxic activity. After partition, the column chromatography and Semi-preparative HPLC were used for activity guided fractionation from the active petroleum ether-soluble part. NMR and ESI-MS spectra for structure analysis were recorded on spectrometers, respectively. The cytotoxic activities of the isolated compounds were determined using the MTT assay. RESULTS: Four sesquiterpenoids (1-4) were isolated by activity guided fractionation from the ethanol extract of the fruits of C. orbiculatus. Compounds 1-3 exhibited promising cytotoxicities against the Hela cells and A375-S2 cells. The cytotoxic activities of compounds 1-3 seemed to be dose-dependent, which exhibited more potent inhibition for the proliferation of two cell lines when increased the concentrations of every compounds. Among these compounds, compound 2 showed most cytotoxicities against either Hela cells or the A375-S2 cells. CONCLUSIONS: The cytotoxic activity of the ethanol extract of fruits of C. orbiculatus against human melanoma A375-S2 and human cervical carcinoma Hela cells due to its content of sesquiterpenoids, supports its potential therapeutic value for the treatment of tumor.     

病理及生理状态下的栀子血清药物化学对比研究

目的以血清药物化学结合现代色谱技术为研究手段,阐明清热药栀子苦寒药性的药效物质基础。方法采用HPLC法,建立药材指纹图谱的色谱洗脱条件,Wistar大鼠ig给予栀子水提物,肝门静脉采血,对比大鼠在生理及苯酚诱导的热病症候状态下,血清中药物成分吸收的变化情况。结果建立了6批栀子水提物共有峰的色谱指纹图谱;确定最佳给药剂量、采血时间及血清处理方法。与生理状态下的大鼠给药组比较,热病症候状态下大鼠对栀子苷有显著的增量吸收,另有2个移行成分生成。结论大鼠在热证状态下对栀子水提物中栀子苷的增量吸收,以及血清中出现的移行成分等现象,表明这些成分有可能代表栀子苦寒药性。     

栀子类药材及其不同发育期果实中栀子甙的含量分析

采用中国药典２０００年版方法对不同产地山栀子中的栀了甙进行了定性鉴别和含量测定,并对临川产山栀子和瑞金产水栀子不同发育期果实中的栀子甙进行了定性定量分析。结果表明：江西产区的山栀子中栀子甙含量高于其他地区的产品。水栀子、朝鲜栀子为栀子类药材中含栀子甙很高的品种,山栀子和水栀子所含栀子甙在果实发育期有两个高峰期。