IL-1β反义RNA在HepG2细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

目的:构建IL-1β反义RNA真核表达载体,转染HepG2细胞,探讨阻断IL-1β作用后对其NK细胞杀伤敏感性的作用。方法:RT-PCR方法扩增两段基因序列IL-1β1(17-331,315bp)和IL-1β2(246-505,260bp),经T-A克隆后构建反义RNA表达载体pcDNA3.0-antiIL1β1和pcDNA3.0-anti-IL1β2。采用阳离子聚合物(jetPEI)的方法转染HepG2肝癌细胞,RT-PCR方法检测反义RNA的表达水平,胞内因子染色的方法分析IL-1的表达水平,MTT方法分析NK-92细胞对HepG2杀伤活性的变化。结果:以LPS刺激的人PBMC总RNA为模板,RT-PCR扩增得到两个约315bp和260bp的基因片段,先构建克隆载体pMD18T-IL-1β1和pMD18T-IL-1β2,质粒PCR、XhoI酶切和DNA序列分析正确后,利用PfuDNA聚合酶进行PCR,产物纯化后经EcoRI、XhoI双酶切,反向插入pcDNA3.0,获得人IL-1β反义RNA真核表达载体pcDNA3.0-antiIL-1β1和pcDNA3.0-antiIL-1β2。PCR、PstI酶切和DNA序列分析正确后,将其分别转染HepG2细胞,RT-PCR检测显示HepG2细胞能够高水平表达两种反义RNA,胞内因子染色发现IL-1β的表达水平明显下降,同时该细胞对NK-92杀伤的敏感性明显升高,其中IL-1β1反义RNA的作用更为显著,效靶比10∶1时,NK细胞对HepG2的杀伤活性提高了约20%。结论:以促炎性细胞因子IL-1β为靶点进行干预,能够有效地下调肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗能力。     

小鼠IL-1β在H22细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

目的：重组表达小鼠IL-1β全长基因，转染H22肝癌细胞，分析对NK细胞杀伤活性的影响。方法：构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β，利用jetPEI转染H22肝癌细胞，RT—PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达，MTT方法分析转染前后，野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化。结果：RT—PCR扩增出小鼠IL-1β，长度约843bp。纯化的PCR产物与pIRES2-EGFP同时经Xho I和EcoR I双酶切，在T4连接酶作用下连接，转化大肠杆菌，提取质粒经PCR、限制性酶谱分析（XhoI＋EcoRI）和DNA序列测定后，确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β。将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中，RT—PCR和荧光观察证实，H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体，与转染空载体的对照组细胞相比，IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强，同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降，效靶比40：1时下降了约10％。结论：IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性，可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制。     

IL-1β对Hepa1-6细胞增殖、迁移及IFN应答的影响

目的:构建应用于小鼠肝脏内表达和研究的IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其对小鼠Hepal-6细胞体外增殖活性、迁移能力及干扰素增殖抑制效应等体外生物学行为的影响.方法:由C57BL/6小鼠腹腔液巨噬细胞扩增IL广1β基因,构建肝脏特异性pLIVE-IL-1β重组表达载体.利用transiT-LT1将鉴定后的pLIVE-IL-1β转染至Hepal-6肝癌细胞,RT-PCR及双抗体夹心ELISA法分析转染前后IL-1表达水平,MTT法分析IL-1对细胞体外增殖活性的影响;利用细胞划痕实验分析对其迁移能力的影响,并确定对IFN-α诱导的细胞增殖抑制效应的作用.结果:重组载体经限制性酶谱分析酶解出822 bp的条带,其序列与GenBank登录的小鼠IL-1β基因一致;转染后的Hepal-6细胞培养上清中IL-1β的表达明显增高,细胞体外增殖速度明显加快;给予IFN-α作用后,IL-1β的表达使细胞对于扰素的抵抗性明显增强.结论:小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1βp能够在小鼠肝癌细胞中高效表达IL-1β,并能够显著促进肿瘤的体外增殖和迁移能力,削弱IFN-α对Hepal-6细胞的增殖抑制作用.     

人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响

目的:将人caspase-1基因真核表达载体转染肝癌细胞后观察其表达水平及对IL-1β水平的影响,为研究cas-pase-1与IL-1β的关系及其在慢性炎症与肿瘤中的作用提供依据。方法:利用阳离子聚合物(jetPEI)将pIRES2-EGFP-caspase-1重组表达载体和pIRES2-EGFP对照载体转染人肝癌细胞HepG2(HepG2/caspase-1、HepG2/mock),48小时后倒置相差荧光显微镜下观察表达情况,利用RT-PCR、Western blot方法检测两组细胞caspase-1表达水平,采用caspase-1底物显色分析研究的方法检测两组细胞中caspase-1的活性。夹心ELISA法检测细胞培养上清以及细胞裂解液中IL-1β的表达水平。结果:转染48小时后倒置相差显微镜下可见,pIRES2-EGFP-caspase-1和pIRES2-EGFP重组表达载体均能在HepG2细胞中高效表达;HepG2/caspase-1细胞中caspase-1 mRNA表达水平显著提高;经LPS刺激后,HepG2/caspase-1细胞中caspase-1总蛋白的水平明显升高;caspase-1的生物活性水平与对照组相比具有显著性差异(t=25.679,P<0.05);HepG2/caspase-1细胞培养上清中IL-1β的水平明显高于HepG2/mock组细胞(t=3.417,P<0.05),胞浆裂解液中的变化相对不显著(t=2.396,P>0.05)。结论:人caspase-1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-caspase-1能够在肝癌细胞中高效表达caspase-1,且该重组表达载体在HepG2细胞中能提高活性IL-1β的表达。     

DNAM-1介导静止NK细胞对新分离的卵巢癌细胞的识别杀伤

NK细胞杀伤肿瘤的功能是众所周知的，但是对于静止NK细胞和新分离的人类肿瘤细胞间的相互作用几乎未见报道。最近，有研究针对来自健康供体的静息状态NK细胞和晚期卵巢癌患者低表达HLAI类分子的卵巢癌细胞进行了相关实验。     

分泌型小鼠IL-1β表达载体促进Hepa1-6肝癌细胞的增殖和迁移

目的:构建小鼠经典途径分泌型IL-1β真核表达载体,转染Hepa1-6细胞后,检测胞质及上清中IL-1β分泌表达水平,并考察其对肝癌细胞体外增殖活性、迁移能力的影响。方法:利用特异性上下游引物将小鼠AFP信号肽序列和小鼠IL-1β成熟蛋白编码基因进行拼接后,再与pLIVETM载体进行连接,DNA测序鉴定阳性克隆;jetPEI法将重组载体、pLIVETM空载体、pLIVE-lacZ转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6后,经β-gal染色监测转染效率;各转染组经LPS及monesin处理后双抗体夹心ELISA法分析细胞培养上清及细胞裂解液中IL-1β的表达水平;通过MTT方法分析经典途径分泌型IL-1β对细胞体外增殖活性的影响。结果:成功构建出了小鼠分泌型IL-1β真核重组表达载体pLIVE-smIL-1β;β-gal染色后,显示外源基因在3 d左右时转染效率最高;双抗体夹心ELISA法表明转染后与Hepa1-6/mock组细胞相比,Hepa1-6/smIL-1β组细胞胞质和上清中IL-1β的表达明显增高;MTT及细胞迁移实验分析证实,转染Hepa1-6/smIL-1β组细胞体外增殖速度明显加快。结论:该表达载体可以通过经典途径分泌促炎性因子IL-1β且高效表达成熟肽IL-1β,并能够显著促进肿瘤细胞的体外增殖和迁移能力。     

NKG2D配体在鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

NK细胞对靶细胞的杀伤活性与其细胞表面的受体和靶细胞表面的配体密切相关，NKG2D为NK细胞活化性受体，表达于所有的NK细胞表面，是介导NK细胞识别和溶解肿瘤细胞的主要活化性受体。NKG2D配体为MHCⅠ类链相关基因产物（MICA、MICB）及ULBPS（人巨细胞病毒UL16蛋白的结合蛋白ULBP1、ULBP2、ULBP3），NKG2D的配体在多种肿瘤细胞表达，其在鼻咽癌细胞的表达尚未见报道。本文通过流式细胞仪技术探讨其在鼻咽癌细胞CNE2的表达情况，并进一步分析其在NK细胞杀伤CNE2细胞中的作用。     

阿托伐他汀对人NK 细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制研究

目的:探讨阿托伐他汀对人NK 细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制。方法:不同浓度的阿托伐他汀作用于3 株结肠癌细胞(HCT-116、SW-480、Caco-2),CCK-8 法测定阿托伐他汀对结肠癌细胞生长抑制率的影响。SCGM 培养基体外扩增人NK 细胞,自动生化分析仪测定NK 细胞对3 株结肠癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测结肠癌细胞MICA/ B 的表达率。结果:(1)NK 细胞的培养:培养前CD3- CD56+的NK 细胞占外周血单个核细胞的比例为4.5%,培养10 d 时NK 细胞的比例增至93.1%。(2)阿托伐他汀对3 株结肠癌细胞生长抑制率的影响:阿托伐他汀作用48 h 后,在浓度5 ~40 μmol/ L 的4 个实验组中,HCT-116 细胞的生长抑制率较对照组升高(P<0.05)。作用96 h 后,在1.25 ~ 40 μmol/ L 的所有浓度组(6 个)中,HCT-116 细胞的生长抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。另外, HCT-116 细胞的生长抑制率随着阿托伐他汀浓度的升高而逐渐上升,相关分析显示,阿托伐他汀的浓度与HCT-116 细胞的生长抑制率呈正相关(r[48 h] = 0.13,r[96 h] = 0.22,P<0.05)。(3)NK 细胞经阿托伐他汀作用96 h 后,除浓度为20 μmol/ L 和40 μmol/ L 时抑制率高于对照组,其他各组对NK 细胞生长无明显影响。(4)阿托伐他汀对NK 细胞杀伤结肠癌细胞活性的影响:NK 细胞对HCT-116 细胞的杀伤活性在阿托伐他汀浓度2.5 ~10 μmol/ L 组均显著高于对照组,对SW-480 的杀伤活性在5 ~20 μmol/ L 组较对照组明显升高,对Caco-2 的杀伤活性在2.5 ~20 μmol/ L 组显著高于对照组(P<0.05),其中同一浓度时对HCT-116 细胞杀伤作用最强。(5)阿托伐他汀对结肠癌细胞MICA/ B 表达的影响:在阿托伐他汀浓度2.5 μmol/ L 及5 μmol/ L 组,HCT-116 细胞MICA/ B 的表达率与对照组比较显著升高(P <0.05),在10 μmol/ L 及20 μmol/ L 组,SW-480 细胞MICA/ B 表达率显著高于对照组(P <0.05),在2.5 ~40 μmol/ L 组,Caco-2 细胞MICA/ B 的表达率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论:(1)阿托伐他汀能够呈剂量依赖性抑制结肠癌细胞HCT-116、SW-480 及Caco-2 的生长;(2)阿托伐他汀能够增强NK 细胞对结肠癌细胞的杀伤活性,可能与阿托伐他汀上调结肠癌细胞MICA/ B 的表达有关;(3)阿托伐他汀可以上调3 株结肠癌细胞MICA/ B 的表达率,提高结肠癌细胞的免疫原性。     

IL-12依赖于TRAIL途径增强NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能

目的:探讨IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的相关机制。方法:纯化正常人NK细胞,分为加或不加IL-12两个刺激组,通过基因芯片筛选差异基因,并通过流式细胞术在单个细胞水平检测相关杀伤分子的表达。结果:基因芯片系统结果显示IL-12刺激组和未刺激组相比,17种基因具有显著性差异(fold change≥10),其中5种基因上调,12种基因下调。在IL-12的刺激作用下,TRAIL的表达在CD56+CD16+和CD56-CD16+NK细胞上显著增加。同时,Jurkat细胞亦高表达TRAIL受体TRAIL-R2(DR5)。TRAIL中和抗体RIK-2可以阻断IL-12诱导的NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能。结论:TRAIL是IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的主要途径之一。     

IL-2活化人NK细胞的作用机理

淋巴因子激活的杀伤细胞可以杀伤NK细胞耐受的靶细胞[1 ] ,用足量的IL 2处理NK细胞可加强其细胞毒作用 ,因此IL 2广泛应用于肿瘤等疾病的治疗。对IL 2促进NK细胞毒作用的分子机制 ,尤其是活化NK细胞后激活信号传导的过程知之甚少。国外许多研究已表明[2 ] ,Ca2 和蛋白激酶C (Proteinkinasec ,PKC)对调节NK细胞的活性起主导作用。本研究目的旨在探讨IL 2是否触发了NK细胞由Ca2 介导的信号传导途径 ,以初步探讨IL 2活化NK细胞的分子机制 ,为临床更好地应用IL 2治疗肿瘤及病毒性疾病提供理论依据。1　材料与方法1.1　主要试…     

肝纤维化启动期大鼠血清对肝星形细胞TGF-β1表达的影响

目的　研究大鼠血清与肝星形细胞表达 TGF- β1的关系 ,为临床的早期诊断和中医药治疗肝纤维化提供新的思路。　方法　制备正常大鼠血清、免疫性肝纤维化大鼠血清和益气活血复方药物血清 ,培养肝星形细胞(HSC) ,激光共聚焦显微镜定量分析其 TGF- β1的表达。　结果　 (1)造模 3周时大鼠血清使培养的 HSC中 TGF- β1表达显著增强 ,正常鼠血清、造模 5周和 7周 (即纤维化形成后 )血清没有此作用 ;(2 )添加益气活血药物血清可使造模 3周鼠血清刺激 HSC高水平表达的 TGF- β1作用消失。　结论　 (1)造模 3周鼠血清中含有强烈的刺激 HSC激活的物质 ;(2 )活血化淤方剂的作用靶点是血液中的活性物质 ,通过拮抗血液中 HSC活化物质达到抗纤维化的作用     

TCRVβ8.4 基因转染人PBMC对肝癌细胞杀伤活性的研究

目的：探讨转染hTCRVβ8.4基因后健康人PBMC的免疫学特性及其对起源于乙肝病毒的肝癌细胞株BEL-7402杀伤活性的改变。方法：将hTCRVβ8.4基因克隆至真核表达载体pcDNA3．1(-)上，并转染健康人PBMC，流式细胞术检测转染后PBMC中TCRVβ8.4蛋白表达，乳酸脱氢酶释放活性法检测重组质粒转染后PBMC对癌细胞BEL-7402的杀伤活性。结果：TCRVβ8.4在基因转染后淋巴细胞中表达显著增高；与BEL-7402共培养后，基因转染组CD3^ TCRVβ8.4T细胞增殖明显高于对照组；BEL-7402刺激后免疫细胞活化，表达CD122的细胞数量增多，表达CD19(B细胞活化的标志)的B细胞增加；重组质粒转染后，PBMC对肝癌细胞BEL-7402杀伤活性增强；透射电镜观察发现，重组质粒转染的PBMC使BEL-7402凋亡。结论：hTCRVβ8.4基因修饰可显著增强淋巴细胞在超抗原BEL-7402刺激下的增殖及免疫细胞活化，基因修饰后T淋巴细胞杀伤活性明显增强。     

Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb抑制由IL-23诱导PBMC IFN-γ的产生

目的：探讨重组人白介素23（IL-23）诱导正常人PBMC IFN-γ的产生，细胞亚群和调节因素。方法：正常人PBMC在不同条件下与IL-23进行培养，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪，分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的细胞亚群。结果：IL-23呈剂量依赖性诱导PBMC IFN-γ产生，并可与IL-2协同诱导IFN-γ的产生。细胞亚群分析的结果表明，IL-23诱导高表达CD56^＊NK细胞产生IFN-γ，对CD4^＊和CD8^＊T细胞无明显作用。Th2细胞因子和抗IL-12受体β1 mAb（IL-12Rβ1）抑制IL-23诱导IFN-γ产生。结论：IL-23可直接作用于CD3^＊CD56^＊NK细胞，诱导产生IFN-γ。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制IL-23诱导IFN-γ产生，提示可以用于由IL-23引起自身免疫病的治疗。     

细胞间粘附分子—1在培养大鼠肝癌细胞的表达

用免疫组织化学方法观察了细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在培养大鼠肝癌细胞的定位，为进一步研究肝癌细胞中ＩＡＣＭ－１的意义提供形态学依据。结果表明，几乎所有大鼠肝癌细胞都呈ＩＣＡＭ－１免疫反应性。肝癌细胞中ＩＣＡＭ－１免疫反应物呈细颗粒状，存在于细胞的胞体和突起的胞质中。     

重组IL-12腺病毒载体对肺炎小鼠NK细胞功能的影响

目的:探讨重组IL-12腺病毒载体(AdCMV IL-12)对肺炎小鼠NK细胞功能的影响.方法:90只BALB/c小鼠随机分为4组,A组:空白对照组15只,不给予病毒,滴鼻生理盐水.B组:对照组25只,每只鼻腔滴入10~5TCID_(50)/0.1 mL的Ad3悬液100 μL.C组:AdCMV IL-12组25只,每只鼻腔滴入10~5TCID_(50)的Ad3/0.1 mL悬液100 μL,3 d后滴鼻给药吸入AdCMV IL-12(5×10~8 PFU/只)100 μL.D组:AdCMVLacZ组25只,每只鼻腔滴入10~5TCID_(50)/0.1 mL的Ad3悬液100 μL,3 d后滴鼻给药吸入AdCMVLacZ(5×108 PFU/只)100 μL.开始滴入病毒定为0 d.于第5天,摘眼球取血,颈椎脱臼处死,无菌条件下取肺,用于转染及病毒毒力检测.无菌条件下取脾脏做NK细胞活性检测.测定血清IL-12及FIN-γ含量.结果:含有目的基因的腺病毒载体能有效转染支气管及肺组织并在局部表达目的基因.血清IL-12浓度为C组>A组>B组、D组,NK、FIN-γ浓度为C组>B组、D组>A组.病毒滴度:A组细胞生长良好.B、D组于10~(-4)出现细胞病变,C组于原液中出现病变.结论:重组IL-12腺病毒载体可通过滴鼻给药成功转染至肺组织,升高血液IL-12浓度,通过增加NK细胞活性而增加了IFN-γ的释放,从而导致病毒滴度下降,限制CVB病毒复制的作用.     

AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达

目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 并检测其在真核细胞内的表达.方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因, 将其克隆至pIRES2-EGFP载体, 构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因, 克隆至pafpIRES2-EGFP, 进行酶谱分析及DNA序列测定.利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞, 倒置相差荧光显微镜下观察, RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化.结果:SOE-PCR方法获得长度为537 bp的AFP和ECMV嵌合基因, 克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP, 获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 细胞转染分析证实, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达, RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高.结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β.     

低氧对大鼠大脑皮层细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的影响

目的:观察不同氧浓度环境下不同时间处理对大鼠大脑皮层细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的影响。方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮层细胞,设1%、4%两个低氧浓度和3、6 h两个低氧处理时间,处理结束后收集各组细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)方法检测各组细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA情况。结果:与相应的常氧对照组相比,1%和4%氧浓度环境处理细胞3 h和6 h时,IL-1β和TNF-αmRNA表达量均无明显变化(P>0.05);处理细胞3 h时,IL-6 mRNA表达量均无明显变化(P>0.05),但有上升的趋势,处理细胞6 h时IL-6 mRNA表达量均显著升高(P<0.05)。结论:1%和4%氧浓度环境虽均对大脑皮层细胞表达IL-1β和TNF-α mRNA无影响,但可诱导细胞表达IL-6 mRNA,且具有时间依赖性。     

β-catenin在IL-24抑制肝癌细胞的血管生成和肿瘤生长中的作用

目的研究IL-24对肝癌细胞在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的血管生成和肿瘤生长的影响及其机制的初探。方法实验采用病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5的重组慢病毒IL-24和慢病毒空载体Mock分别感染肝癌细胞HepG2,24 h后接种于CAM,4 d后观察CAM上形成的肿瘤背面血管数目,并剥离肿瘤组织称其重量,继而进行Western blot检测肿瘤组织中β-catenin的表达。结果 CAM实验显示,与Mock感染的HepG2细胞相比,慢病毒IL-24感染的HepG2细胞形成的肿瘤背面血管分支数目和肿瘤重量明显下降。Western blot结果发现慢病毒IL-24感染的HepG2细胞形成的肿瘤组织中β-catenin显著低于Mock组。结论 IL-24能够抑制肝癌细胞的肿瘤血管生成和肿瘤生长,这种作用可能是通过下调β-catenin的表达来实现的。     

MICA在NK细胞杀伤胰腺癌PANC-1细胞中的作用

探讨MHC I类链相关分子A(MHC class I chain-related A,MICA)在NK细胞杀伤胰腺癌PANC-1细胞中的作用。应用NK细胞分选试剂盒从外周血中分选高纯度NK细胞用于实验,体外培养PANC-1细胞和NK细胞,应用抗体封闭法,观察NKG2D与膜型MICA识别在NK细胞杀伤PANC-1细胞中的作用。将健康志愿者NK细胞在含有sMICA阳性胰腺癌患者血清的培基液中培养,观察NK细胞对PANC-1细胞的杀伤作用。经MICA或NKG2D抗体封闭后,NK细胞的杀瘤活性较封闭前显著减弱(P0.01)。胰腺癌患者血清sMICA水平显著高于健康志愿者和慢性胰腺炎患者(P0.01),胰腺癌患者血清中的sMICA可以显著降低NK细胞对PANC-1细胞的杀伤活性。NKG2D与膜型MICA识别在NK细胞杀伤人胰腺癌PANC-1细胞中起重要作用;sMICA是造成胰腺癌免疫逃逸的重要分子机制之一。     

人巨细胞病毒感染THP-1源性巨噬细胞对IL-1β表达的影响

目的 观察HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后,促炎细胞因子IL-1β表达的时序性变化.方法 构建HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型,设立HCMV AD169标准毒株感染组、模拟感染对照组、LPS+ATP对照组和poly(dA:dT)对照组.用ELISA法测定THP-1源性巨噬细胞培养上清IL-1β水平在病毒感染细胞后lh、3h、6h、12h、24 h和48 h的时序性变化.分别用real-time PCR和western blot检测感染后6 h IL-1β基因和蛋白的表达水平.结果 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞6h后,促炎细胞因子IL-1β基因的相对表达量是模拟感染组的7.77倍.HCMV感染THP-1源性巨噬细胞1h后,细胞上清IL-1β表达量逐渐显著增高,感染后3h和6h继续升高,感染后12h达到高峰,一直持续到48 h.HCMV感染THP-1源性巨噬细胞6h HCMV感染组IL-1β蛋白表达明显高于模拟感染对照组和poly(dA:dT)对照组,而与LPS+ATP对照组比较无统计学差异.结论 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞可诱导IL-1β高表达,且呈时序性增高趋势.