线粒体钙单向转运体在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制

目的观察线粒体钙单向转运体在大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用及其机制。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为4组:A组(假手术组)、B组(脑缺血再灌注组)、C组(脑缺血再灌注+钌红组)、D组(脑缺血再灌注+精胺组),采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,各组在脑缺血2h后进行再灌注,再灌注24h后观察各组大鼠神经功能评分,检测各组血清脂质过氧化产物丙二醛(malondial-dehyde,MDA)的含量、血清乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,免疫组化检测皮质区Caspase-3阳性细胞数的变化。结果 B、C、D组神经功能评分升高,血清MDA的含量以及LDH活性显著高于A组,SOD活性与A组相比显著降低,caspases-3表达细胞与A组相比明显增多。C组能明显改善上述结果,而D组相反。结论抑制线粒体钙单向转运体可以明显减轻脑缺血再灌注损伤,其机制可能与减少氧自由基产生、维护线粒体功能有关。     

不同升压维持时间对脑缺血再灌注损伤的影响

目的探讨升压治疗局灶性脑缺血的保护作用及治疗的维持时间.方法40只大鼠随机分为5组:对照组(A组),升压维持时间15 min组(B组)、45 min组(C组)、90 min组(D组)和120 min组(E组).采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察各组脑梗死体积和神经功能缺损评分.结果B、C、D和E组脑梗死灶体积(P＜0.01),B、C和D组神经功能缺损评分(P＜0.05)均明显低于A组,B组明显低于C、D和E组(P＜0.01).结论缺血3 h再灌注时升压维持时间在2 h以内对脑损伤有保护作用,升压最佳维持时间是15 min.     

胰岛素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察胰岛素对脑缺血再灌注损伤的治疗作用,并探讨其作用机制.方法用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,根据胰岛素的给药时间不同共分成2大组,第1大组再分为A、B、C、D4组,第2大组再分为2组.在第1大组检测各组不同时限的血糖,测量计算脑梗死灶体积,并进行神经功能缺损评分;在第2大组采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化.结果在6 h内给予胰岛素治疗可使神经功能缺陷评分显著降低,脑梗死灶体积缩小,TUNEL阳性细胞也明显减少(P＜0.05).结论早期应用胰岛素能减轻脑缺血再灌注损伤,减轻再灌注后细胞损伤可能是其作用机制之一.     

高同型半胱氨酸血症对脑缺血再灌注损伤影响的实验研究

目的：探讨高同型半胱氨酸血症（HHcy）对脑缺血再灌注损伤的影响。方法：制备HHcy大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，检测缺血l、2和4h再灌注24h不同时间窗各组大鼠脑梗死体积及血浆总同型半胱氨酸（tHcy）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平。结果：HHcy组大鼠脑缺血再灌注不同时间窗各组分别较相应对照组脑梗死体积增加，SOD水平降低，MDA水平增高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；HHcy组和对照组大鼠脑缺血再灌注不同时间窗各组脑梗死体积的差值随缺血时间的延长而增加（均P〈0．05），但SOD与MDA水平的差值各组间无统计学意义（均P〉0.05）。结论：HHcy可能通过促进氧自由基产生等作用加重脑缺血再灌注损伤。     

异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤线粒体能量代谢的影响

目的 探讨静脉麻醉药异丙酚对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护作用.方法 SD大鼠48只按随机数字表法分为假手术组、模型组、50 mg/kg异丙酚和100 mg/kg异丙酚组,每组12只.后3组大鼠均制备脑缺血(2 h)再灌注(24 h)模型,恢复灌注后分别经腹腔内注射等体积生理盐水和50、100 mg/kg异丙酚.再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,应用TTC染色观察脑梗死的范围,化学比色法检测脑组织线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的改变.结果 与模型组比较,50、100mg/kg异丙酚组大鼠神经功能缺损评分较低,脑组织线粒体SDH、Na+-K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活性增高,差异有统计学意义(P＜0.05);与50mg/kg异丙酚组[(45.9±25.1)U/mg pro,(5.24±0.85)分]比较,100mg/kg异丙酚组SDH活性[(96.1±20.8)U/mgpro]较高,神经功能缺损评分(4.40±0.79)较低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论异丙酚对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,促进线粒体SDH、Na+-K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活性的恢复、保护线粒体功能是其机制之一.     

颈交感神经干离断对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马iNOS表达的影响

目的采用颈交感干离断（TCST）模拟星状神经节阻滞，观察其对局灶性脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠脑梗死容积及海马诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达等的影响，并探讨其脑保护作用的机制。方法将大鼠随机分成实验组（A组）、对照组（B组）和假手术组（C组）；采用线栓法行大脑中动脉栓塞（MCAO）制作大鼠局灶性CIRI模型，A组于TCST后即行MCAO，2h后再恢复灌注；B组为单纯CIRI组；C组仅完成与A组相似的手术步骤但不造成MCAO、不行TCST；再灌注24h后观察各组大鼠神经行为学评分、脑梗死容积及海马iNOs的表达变化。结果A组大鼠脑梗死容积和神经行为学评分均低于B组（P〈0．05）；与A组、C组相比，B组大鼠海马iNOS的表达增加（P〈0．05），而A组与C组间无显著差异（P〉0．05）。结论TCST可通过下调大鼠海马iNOS的表达而对局灶性CIRI发挥脑保护作用。     

PI3K/AKT信号通路介导脂联素对脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/PKB）信号通路介导脂联素对脑缺血再灌注大鼠的保护作用。 方法 随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脂联素治疗组和PI3K/PKB抑制剂LY294002组（抑制剂组）,每组15只。通过线栓法构建大脑中动脉缺血模型,缺血1.5?h后再灌注。脂联素治疗组在再灌注2?h后,给予大鼠尾静脉注射脂联素（180?μg/100?g）;抑制剂组在再灌注2?h后给予大鼠尾静脉注射脂联素（180?μg/100?g）+LY294004（0.03?mg/100?g）;假手术组和模型组尾静脉注射相应体积的0.9%生理盐水（0.09?mL/100?g）。各组缺血再灌注24?h后,检测各组大鼠脑梗死面积和脑含水量;采用Longa 5分法进行神经功能缺损评分;蛋白质印迹法（Western blotting）检测大鼠脑组织PI3K、PKB、磷酸化的蛋白激酶B（phosphorylated PKB,p-PKB）和脂联素蛋白表达水平;酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测大鼠血清丙二醛（malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平。 结果 与假手术组相比,模型组大鼠的脑梗死面积、脑含水量、神经功能缺损评分和MDA水平均升高（均P<0.001）,SOD、脂联素、PI3K和p-PKB的表达水平均降低（均P<0.001）。与模型组比较,脂联素治疗组大鼠脑梗死面积、脑含水量、神经功能缺损评分和MDA水平均降低（均P<0.001）,SOD、脂联素、PI3K和p-PKB表达水平均升高（均P<0.001）;与脂联素治疗组比较,抑制剂组大鼠脑梗死面积、脑含水量、神经功能缺损评分和MDA水平均升高（均P<0.001）,SOD、脂联素、PI3K和p-PKB表达水平均降低（均P<0.001）。 结论 脂联素对脑缺血再灌注有明显保护作用,该保护机制可能与激活PI3K/PKB信号通路抑制氧化应激相关。     

ACEI对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的观察血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后神经功能和细胞凋亡的影响,探讨ACEI的脑保护机制。方法采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型,随机分依那普利组(A组)和高血压缺血再灌注组(B组);正常血压组分为假手术组(C组)和缺血再灌注组(D组)。用线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注时间22h。用免疫组织化学技术检测脑组织bcl-2、bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果(1)脑缺血再灌注后神经功能评分:A组神经功能评分较B组和D组降低(P<0.05,);D组神经功能评分低于B组(P<0.05)。(2)A组与B组和D组比较bcl-2表达明显增多(P<0.05),bax表达显著降低(P<0.05),神经细胞凋亡明显减少(P<0.05);B组与D组比较,bcl-2表达明显降低(P<0.05),bax表达明显增加(P<0.05),而神经细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论ACEI明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,减少神经细胞凋亡,上调脑组织bcl-2表达,抑制bax表达,提示对脑缺血再灌注损伤有脑保护作用。     

葛根素预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法健康成年雄性SD大鼠120只,随机分成5组（n=24）：假手术组（S组）,脑缺血再灌注组（IR组）,Pc-24h100mg组,Pc-24h200mg组,Pc-24h400mg组,其中Pc-24h组于脑缺血前24h给予相应剂量葛根素腹腔注射行单次预处理,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,缺血90min,再灌注24h。大鼠清醒后进行神经功能缺陷评分,再灌注24h时处死大鼠,处死后取脑组织,测定脑梗死容积比（BIVP）、脑组织含水量及MDA水平。结果葛根素预处理可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能缺损评分,降低BIVP、脑组织含水量及MDA水平（P均〈20.01）。其中Pc-24h400mg组减低神经功能缺损评分、BIVP及脑组织含水量明显优于Pc=24h100mg及Pc-24h200mg组（P均〈0.01）,而Pc-24h100mg及Pc-24h200mg组之间无显著差异（P均〉0.05）。结论葛根素预处理可能通过抑制脑水肿及氧化损伤来减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。葛根素预处理的脑保护作用具有一定的量效关系。     

莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型,分别于MCAO后1h腹腔注射莱菔硫烷2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg.于缺血2h再灌注24h时进行神经行为缺损评分,TTC染色评价脑梗死体积,测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.免疫荧光组织化学染色法检测黄核蛋白NQ01和脂质过氧化酶Prx6的表达.结果 莱菔硫烷给药组与对照组相比均能改善大鼠脑缺血再灌注后神经行为缺损评分,减少脑梗死体积.其中5mg/kg组能显著改善大鼠脑缺血再灌注后神经行为缺损评分,减少脑梗死体积,增强SOD活性,降低MDA含量.免疫荧光组织化学染色法提示NQ01和Prx6的表达明显增强.结论 莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能与上调内源性抗氧化蛋白NQ01和Prx6的表达有关.     

Effect of nicorandil on infarct volume and marker enzyme activity in mitochondria of rats with cerebral ischemia/ reperfusion injury

BACKGROUND: Recent studies have suggested that mitochondrial ATP-sensitive K channel openers could reduce myocardium infarct size, and protect the function of the mitochondria.OBJECTIVE: To investigate the changes of cerebral infarction volume and the activity of marker enzymes in brain mitochondria of rats given the ATP-sensitive K channel opener, nicorandil, before focal cerebral ischemia/reperfusion (I/R).DESIGN, TIME AND SETTING: Randomized, controlled animal experiment, completed at the Brain Scientific Research Center of the Affiliated Hospital of Qingdao University from July to November 2007.MATERIALS: Sixty healthy male Wistar rats weighing 280-300g. Nicorandil, 5-hydroxydecanoate (5-HD) and cytochrome C were purchased from Sigma in the USA. Standard malondialdehyde (MDA) and protein were purchased from Nanjing Jiancheng Biotechnology Institute.METHODS: Sixty rats were randomly divided into a sham operation group, a middle cerebral artery occlusion (MCAO) group, a nicorandil group and a nicorandil 5-HD group. MCAO for 2 hours was performed in the MCAO group, nicorandil group and nicorandil 5-HD group. A total of 5mL saline were given to the MCAO group before MCAO. The nicorandil group was injected with the ATP-sensitive K channel opener nicorandil 10mg/kg intraperitoneally 30 minutes before MCAO. The nicorandil 5-HD group was injected with 5-HD 10mg/kg intravenously 15 minutes before the same treatment as the nicorandil group.MAIN OUTCOME MEASURES: Infarct volume by total brain slice calculation, activities of succinate dehydrogenase (SDH) and cytochrome oxidase (CO), and content of MDA were observed at 22 hours of reperfusion after 2 hours MCAO.RESULTS: Sixty rats were included in the final analysis, without any loss. (1) Infarct volume: compared with the MCAO group and nicorandil 5-HD group, the percentage of infarct volume was significantly decreased in the nicorandil group (P<0.01). (2) The content of MDA, expression of SDH and CO in brain: the expressions of SDH and CO in the sham operation group were significantly lower than those in the MCAO, nicorandil and nicorandil 5-HD groups (P<0.01). The expressions of SDH and CO in the nicorandil group were significantly higher than those in the MCAO and nicorandil 5-HD groups (P<0.05). The content of MDA in the brain of the nicorandil group was significantly lower than those in the MCAO and nicorandil 5-HD groups (P<0.01).CONCLUSION: Nicorandil can significantly reduce the infarct volume in a rat MCAO model, increase the activity of the mitochondria and protect against cerebral I/R injury.     

短期禁食诱导自噬对大鼠脑缺血损伤的保护作用

目的探讨短期禁食对大鼠脑局灶性缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法 57只成年雄性SD大鼠随机分为五组。假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、短期禁食组(Fasting组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)和溶剂对照组(vehicle组)。I/R组采用右侧大脑中动脉阻闭120 min后再灌注72 h。Fasting组大鼠禁食但不禁水48 h后给予脑缺血再灌注损伤。3-MA组将3-MA 30μg溶于生理盐水10μl,于短期禁食前30 min行侧脑室注射给药,24 h后第二次侧脑室注射给药,共两次。脑缺血损伤检测指标为神经行为学评分和脑梗死容积。自噬的检测采用Westernblot测定微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)的表达。结果再灌注后72 h,与I/R组比较,Fasting组可改善神经行为学评分,缩小脑梗死容积。Fasting组LC3-II的蛋白表达显著高于I/R组和S组。与Fasting组比较,3-MA组神经行为学评分降低,脑梗死容积扩大,脑损伤程度3-MA组与I/R组差异无统计学意义,表明抑制短期禁食所诱导的自噬,短期禁食的脑保护作用消失。结论短期禁食通过诱导自噬的形成减轻其后发生的大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。     

肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响

目的探讨肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血预处理组(LIPC组)、3-甲基嘌呤组(3-MA组),每组15只。制作脑缺血再灌注、肢体缺血预处理及3-MA干预大鼠模型,在脑缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能缺陷评分和脑梗死体积测定,HE染色观察细胞形态学改变,Western Bloting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达。结果与I/R组比较,LIPC组神经功能缺陷评分降低(P<0.05),脑梗体积明显减小(P<0.05),细胞损伤、坏死减轻(P<0.05),Beclin-1、Cathepsin B的蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论 LIPC对缺血再灌注损伤大脑具有保护作用,其机制可能与减弱自噬水平有关。     

富氢液多次给药对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响

目的 评价再灌注后多次给予富氢液对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和富氢液多次给药组(H组).I/R组和H组采用四血管阻塞法制备全脑缺血再灌注损伤模型.H组大鼠于再灌注即刻及再灌注后2、4、6h分别腹腔注射0 6mmol/L富氢液5ml/kg.I/R组大鼠给予等容量的生理盐水.再灌注24h时,测定海马丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量;再灌注72h时,尼氏染色观察海马组织形态学变化.结果 与I/R组比较,H组海马组织MDA、TNF-α、IL-6含量降低(P＜0.05),尼氏染色见海马CA1区神经元、尼氏小体数目增多,细胞形态趋于正常.结论 再灌注后多次给予富氢液可减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制脂质过氧化反应和炎性反应有关.     

Anemonin Alleviates Nerve Injury After Cerebral Ischemia and Reperfusion (I/R) in Rats by Improving Antioxidant Activities and Inhibiting Apoptosis Pathway

In the present study, we aimed at evaluating the potential neuroprotective effect and the underlying mechanism of anemonin against cerebral ischemia and reperfusion (I/R) injury. Anemonin was administered to rats by the intraperitoneally (i.p.) route once daily for 7 days before middle cerebral artery occlusion (MCAO). Focal cerebral ischemia was induced by 90 min of MCAO followed by 24 h of reperfusion. After that, animals were sacrificed by decapitation, brain was removed, and various biochemical estimations, neurological status, and assessment of cerebral infarct size were carried out. MCAO followed by 24 h of reperfusion caused a significant increase in infarct size, neurological deficit score, malondialdehyde (MDA) content, reactive oxygen species (ROS) level, and DNA fragmentation, as well as a decrease in the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced glutathione (GSH), glutathione peroxidase (GPx), and Na⁺, K⁺-ATPase in the brain. Furthermore, elevated Bax expression, increased caspase-3 cleavage, and decreased Bcl-2 expression were observed in nontreated rats in response to focal cerebral I/R injury. However, pretreatment with anemonin significantly reversed these levels of biochemical parameters, reduced cerebral infarct size, and improved the neurologic score in cerebral ischemic animals. Additionally, a wide distribution of anemonin in plasma and brain tissues and the brain-to-plasma partition coefficient (Ri) ratio of 0.7 at 90 min indicated that this compound could penetrate the blood-brain barrier (BBB). These results showed that pretreatment with anemonin provided a significant protection against cerebral I/R injury in rats by, at least in part, its antioxidant action and consequent inhibition of apoptosis.     

人参皂甙-Rd预先给药对大鼠脑的保护作用

目的探讨人参皂甙-Rd（Rd）预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠70只,随机分为7组（n=10）,即缺血再灌注组（CON组）、Rd 5 mg组、Rd 10 mg组、Rd 20 mg组、Rd 40 mg组、Rd 80 mg组和丙二醇溶剂组（VEC组）。所有大鼠均采用右侧颈内动脉尼龙线栓法制作大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,并于脑缺血前1 h分别经腹腔注射相应剂量Rd及丙二醇。于再灌注后24 h、48 h和72 h进行神经行为学评分（NBS）,并于72 h行2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测量脑梗死容积百分比。结果与CON组和VEC组比较,Rd 5 mg组、Rd 10 mg组、Rd 20 mg组、Rd 40 mg组和Rd 80 mg组脑缺血再灌注后24 h、48 h、72 h神经行为学评分均较高,再灌注后72 h梗死容积均较低（P〈0.05）。Rd剂量小于40 mg/kg时,其保护效果随剂量的增加而增加。Rd 80 mg组与Rd 20 mg和Rd 40 mg组相比,NBS显著减小,脑梗死容积百分比明显升高（P〈0.05）;与Rd 5 mg组和Rd 10 mg组相比,NBS和脑梗死容积百分比均无明显差异（P〉0.05）。结论人参皂甙-Rd预先给药对大鼠短暂局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,并在5-40 mg/kg之间存在剂量依赖性的保护作用。     

山楂总黄酮对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的 研究山楂总黄酮（HFs）对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用.方法 SD雄性大鼠90只随机分为5组,各组按规定预防给药15 d后,按照Longa法制作大脑中动脉闭塞模型,假手术组除不插入栓线外其余相同,缺血2 h后再灌注.分别于再灌注3 h、24 h进行神经行为评分;再灌注24 h后断头取梗死侧大脑皮质匀浆,测定丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮合成酶（NOS）、诱导型一氧化氮合成酶（iNO）活性.结果 山楂总黄酮各剂量组再灌注3 h、24 h神经行为评分明显低于缺血再灌注组;与I/R组比较,再灌注24 h后,山楂总黄酮各剂量组缺血梗死侧大脑皮质丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量明显降低,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性升高,一氧化氮合成酶（NOS）、诱导型一氧化氮合成酶（iNO）活性也明显低于I/R组,各组间差异有统计学意义.结论 山楂总黄酮对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠有一定的保护作用,其作用机制可能与提高脑组织中SOD和CAT活性、抑制脂质过氧化及炎症反应有关.