高原环境对大鼠肝脏糖异生的影响

目的研究海拔4300 m高原环境对大鼠肝脏糖异生的影响及机制。方法健康成年大鼠36只,随机分为平原对照组(C组)、高原暴露1、3、7、15、30 d组(分别为H1、H3、H7、H15、H30组)。应用RT-PCR方法测定肝组织中葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、转录因子叉头框蛋白O1(Fox O1)的mRNA表达水平以及应用Western Blot法检测其蛋白表达水平,应用分光光度法测定肝糖原含量,使用自动生化分析仪检测血糖水平。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果与C组比较,(1)H1、H3和H7组肝组织中G6Pase的表达水平以及肝糖原含量显著增高(P值均0.05);(2)Fox O1的表达水平在H3、H7、H15及H30组中明显降低(P值均0.05);(3)各高原组血糖水平无明显变化。结论高原暴露急性期肝脏糖异生及糖原合成活跃,可能是高原习服的机制之一;腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和Fox O1对高原暴露大鼠肝脏糖异生具有调节作用;糖原含量增加可能抑制了AMPK的活性。     

丹栀逍遥散对非酒精性脂肪性肝病大鼠LKB1/AMPK/ACC通路及肝脂肪变性的影响

目的:探讨丹栀逍遥散对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏激酶B1(LKB1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰辅酶A羧化酶(ACC)通路及肝脂肪变性的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、水飞蓟宾组(26.25 mg·kg^-1)、丹栀逍遥散高、中、低剂量组(38.0、19.0、9.5 g·kg^-1),每组13只。采用高脂饲料连续喂养8周复制非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型。模型复制成功后水飞蓟宾组和丹栀逍遥散各剂量组大鼠开始灌胃给予相应的药物,连续给药4周,给药结束后进行取材和相关指标的检测。给药期间,观察各组大鼠的精神状况、毛色、饮食、活动等一般状态,记录给药前后大鼠体重变化;取大鼠肝、肾、脾脏并称重,计算脏器指数;生化法检测肝组织中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(NEFA)含量;苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肝组织病理变化;Western blot检测肝组织中LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC及其磷酸化水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠毛色发黄暗淡,精神萎靡;体重增量、肝脏指数、肝组织中ALT、AST、TG、TC、NEFA水平均显著升高(P<0.05),肝细胞排列紊乱,胞界不清晰,较多的脂肪空泡;肝细胞中LKB1、p-LKB1、AMPKα1、p-AMPKα1、AMPKα2、p-AMPKα2、p-ACC蛋白表达水平明显降低,ACC蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,水飞蓟宾组和丹栀逍遥散高、中剂量组大鼠一般状态有不同程度的改善,体重增量、肝脏指数、肝组织中ALT、AST、TG、TC、NEFA水平均显著降低(P<0.05),病理损伤程度减轻;肝细胞中LKB1、p-LKB1、AMPKα1、p-AMPKα1、AMPKα2、p-AMPKα2、p-ACC蛋白表达水平明显升高,ACC蛋白表达降低(P<0.05)。结论:丹栀逍遥散可能通过LKB1/AMPK/ACC信号通路,降低脂肪的合成,改善肝功能,减轻NAFLD模型大鼠肝脂肪变性。     

抗纤软肝颗粒对四氯化碳加乙醇诱导肝纤维化大鼠的影响

目的:观察中药抗纤软肝颗粒对四氯化碳(CCl_4)加乙醇诱导肝纤维化大鼠的影响。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为3组。分别为模型对照组(M)15只,抗纤软肝颗粒组(K)15只,正常对照组(N)10只。M、K组大鼠分别以40%CCl_4橄榄油液腹腔注射,2坎/w,并以5%乙醇为唯一饮水;N组大鼠同期注射等剂量的橄榄油。造模同时,K组大鼠即予抗纤软肝颗粒2g/100g/d(中等剂量)灌胃,1次/d;M、N组大鼠同期予等量生理盐水灌胃,共7周。观察大鼠肝脏病理学变化及血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、球蛋白(Glo)、Alb/Glo比值、ALT、AST的变化。结果:K组大鼠肝细胞变性坏死及肝纤维化程度较M组明显减轻,结缔组织明显减少,纤维间隔显著变薄,未见明显假小叶;M组大鼠血清Alb显著降低,ALT、AST均有明显升高(P0.05);K组大鼠Alb回升,ALT及AST明显下降,与M组比较差异有显著性意义(P0.05)。结论:抗纤软肝颗粒可通过保护肝细胞,降解纤维组织起到抗肝纤维化的作用。     

针灸联合自拟茶方调节肝AMPK、p38 MAPK、PPARγ信号改善脂肪肝大鼠脂质代谢紊乱的机制

目的探讨针灸联合自拟茶方改善脂肪肝大鼠脂质代谢紊乱的疗效及机制。方法以高脂饲料建立脂肪肝胰岛素抵抗模型大鼠,将大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组及治疗组,对照组及模型组不经药物干预,阳性对照组以吡格列酮进行治疗,治疗组以针灸联合自拟茶方进行治疗。检测肝脏组织匀浆三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。对各组大鼠肝脏病理、肝指数、肝酶[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)]、血脂水平[TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]、血清炎症相关因子α肿瘤坏死因子[(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、IL-6]及肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ蛋白表达进行测定。结果模型组各指标与对照组相比有明显差异,表明造模成功。治疗组肝脏细胞脂肪变性程度明显优于模型组,肝指数明显低于模型组(P<0.05),血清ALT、ALP、TC、TG、LDL-C、IL-1、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05),肝组织AMPK及PPARγ表达水平升高(P<0.05),p38MAPK表达水平降低(P<0.05)。治疗组在改善肝指数、降低血清TC、ALT、AST、IL-1、TNF-α水平及降低肝脏TC、TG水平、升高HDL-C、下调肝脏p38MAPK水平方面与阳性对照组无显著差异(P>0.05)。结论针灸联合自拟茶方可明显改善脂肪肝胰岛素抵抗模型大鼠的脂质代谢紊乱及胰岛素抵抗,该作用可能与上调肝脏AMPK及PPARγ表达水平、下调p38MAPK表达水平有关。     

苦碟子注射液用于肝纤维化大鼠疗效观察及其作用机制探讨

对10只肝纤维化大鼠模型(苦蝶子组),采用苦碟子注射液腹腔注射(0.4 mL/100 g,1次/d),连用2周后检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(AJb)含量,肝组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,并观察其肝脏内α-平滑肌蛋白(α-sMA)表达.结果与模型组比较,观察组显著降低肝血清ALT、AsT含量及肝组织中MDA水平明显降低,使血清Alb含量及肝组织中SOD活性显著升高(P＜0.01);肝脏内α-SMA阳性细胞数明显减少(P＜0.01),认为苦碟子注射液具有抗肝纤维化的作用,其机制可能为抗脂质过氧化及降低HSC活化.     

茶花粉水提物对酒精性肝损伤大鼠模型肝脏组织中COL1A1、α-SMA表达水平的影响

目的探究茶花粉水提物对酒精性肝损伤大鼠模型肝脏组织中胶原蛋白Ⅰ(COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平的影响。方法选取45只雄性SD大鼠,体重200±30 g,将大鼠制成酒精性肝损伤模型,并分为:模型组、低剂量茶花粉水提物组和高剂量茶花粉水提物组,每组各15只,另选15只作为对照组。测量大鼠肝脏质量并计算肝指数;检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量; HE染色观察肝脏组织的病理学改变;使用蛋白质印记检测肝脏组织中COL1A1和α-SMA表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠肝指数、血清ALT,AST水平、肝组织MAD水平,COL1A1和α-SMA蛋白表达水平均显著升高(P 0. 05),肝脏组织中SOD水平显著降低(P 0. 05);相比模型组,低剂量茶花粉水提物组和高剂量茶花粉水提物组大鼠肝指数、血清ALT,AST水平、肝组织MAD水平,COL1A1和α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P 0. 05),且高剂量茶花粉水提物组上述指标显著低于低剂量茶花粉水提物组,肝脏组织中SOD水平显著升高,且高剂量茶花粉水提物组显著高于低剂量茶花粉水提物组(P 0. 05)。结论茶花粉水提物可以降低酒精性肝损伤大鼠肝脏组织中胶原蛋白Ⅰ(COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,有效缓解酒精性肝损伤。     

脂联素通过LKB1途径激活腺苷酸活化蛋白激酶

目的 探讨脂联素是否通过LKB1途径激活骨骼肌及肝脏中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK).方法 将28只6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠分为普通饮食组(NC组,n=15)和高脂饮食组(HF组,n=13).喂养16 周后,取空腹静脉血测定血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及脂联素.采用Western印迹法测定各组大鼠骨骼肌及肝脏组织中AMPKα、磷酸化的AMPKcα和LKB1蛋白的表达.将原代培养的骨骼肌细胞及肝细胞分别予以脂联素和根赤壳菌素干预,免疫荧光技术测定各组细胞中AMPKα、磷酸化AMPKα和LKB1蛋白的表达.结果 与NC组比较,HF组大鼠体重、FFA、TG、FPG、FINS均升高(均P＜0.05),脂联素水平降低(P＜0.05).骨骼肌及肝组织巾AMPKα磷酸化和LKB1蛋白表达水平降低(均P＜0.05).原代培养大鼠骨骼肌细胞及肝细胞中脂联素显著增加AMPKα磷酸化及LKB1表达水平(均P＜0.05).加入根赤壳菌素表达明显降低(均P＜0.05).结论 脂联素在大鼠骨骼肌和肝脏组织可能通过LKB1途径激活AMPK.     

消黄去疸汤对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤大鼠的保护作用

目的:探讨消黄去疸汤改善胆汁淤积性肝损伤的疗效。方法:将28只SD大鼠按随机数字表法分为空白组(NOM)、模型组(MOD)、熊去氧胆酸组(UDCA)和消黄去疸汤组(XHQD),每组7只，各组大鼠每天给予相应药物灌胃1次，连续7 d。至第5天时，除NOM组外，其余各组大鼠予以α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃诱导胆汁淤积性肝损伤模型。监测大鼠90 min胆汁流量，计算各组大鼠肝脏指数，HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化，透射电镜观察肝细胞超微结构，全自动生化仪检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)与总胆汁酸(TBA)含量，Elisa法检测大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)的含量。采用qRT-PCR法测定大鼠肝组织中TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA的表达。结果:与NOM组比较，MOD组大鼠在各个时间段胆汁流量降低，AST、ALT、ALP、γ-GT含量增加，肝脏指数升高，DBil、TBil、TBA水平升高，SOD...     

腺苷酸激活蛋白激酶与肥胖大鼠肝脏脂质沉积的关系

目的探讨肥胖大鼠肝脏组织腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的表达及其对肝脏脂质沉积的影响。方法选用18只刚断乳的SPF级SD雄性大鼠,随机挑选6只普通饲料喂养为正常组,另一组12只高脂饲料喂养,12 w后成功建立肥胖模型大鼠6只。分别检测体重、Lee指数、内脏脂肪、肝湿重等指标。通过油红O染色和检测肝脏甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量评估两组大鼠肝脏脂质沉积的情况。采用Western印迹检测大鼠肝脏磷酸化(p)-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC水平。结果与正常组大鼠相比,肥胖组大鼠体重与Lee指数、附睾脂肪、肾周脂肪量、肝湿重、肝脏内TG与TC含量均显著升高,油红O染色结果显示肥胖组肝脏脂质沉积较正常组明显增多。Western印迹结果显示,与正常组大鼠比较,肥胖组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK和p-ACC/ACC表达明显降低。两组大鼠肝脏组织中p-AMPK、p-ACC表达水平与肝脏TG、TC呈负相关。结论高脂饮食诱导食源性肥胖大鼠可降低AMPK的活性,从而导致肝脏组织TG、TC合成增加,脂质在肝脏组织中沉积增加。     

IL-1、IL-6、TNF-α在慢性酒精性中毒大鼠肝脏的表达

目的探讨慢性酒精中毒对大鼠肝脏白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法采用酒精灌胃加高脂饲料法形成慢性酒精性肝损伤雄性SD大鼠模型,血清谷酰转肽酶(GGT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平为基础参考指标。40只SD大鼠随机分为正常对照组、酒精模型组,每组20只。应用Western印迹方法检测SD大鼠肝组织中IL-1、IL-6、TNF-α表达情况。结果慢性酒精中毒大鼠血清GGT、ALT、AST水平较正常对照组显著升高(P<0.05),肝组织IL-1、IL-6、TNF-α较正常对照组显著升高(P<0.01)。结论慢性酒精中毒的SD大鼠血清、肝组织IL-1、IL-6、TNF-α表达明显升高,造成肝脏损伤,严重可发展至肝硬化。     

尿石素A预处理对肝缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

目的探讨尿石素A(Uro-A)对肝缺血再灌注损伤(HIRI)大鼠模型的保护作用。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Uro-A低剂量组(1 mg/kg)和Uro-A高剂量组(3 mg/kg),每组10只。造模前Uro-A低剂量和高剂量组每天灌胃药物1次,持续5 d。动物麻醉后造模,恢复血流后6 h检测血清中ALT、AST与乳酸脱氢酶(LDH)的含量,ELISA法检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、IL-1β、IL-6和TNFα含量,观察肝脏病理损伤与肝细胞凋亡情况,Western Blot法检测肝脏中内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、下游应激转录因子(CHOP)和凋亡蛋白家族(Caspase-12)的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 Uro-A高剂量组ALT、AST、LDH、MDA、CAT、IL-1β、IL-6、TNFα、CHOP、GRP78、Caspase-12水平及凋亡率均较模型组降低,SOD含量较模型组升高,差异均有统计学意义(P值均0.05)。模型组肝脏结构破坏严重,阳性率90%,Uro-A高剂量组肝脏结构完好,未见明显组织增生与炎性细胞增多,阴性率80%。与Uro-A高剂量组相比,Uro-A低剂量组ALT、AST、LDH水平和细胞凋亡率均显著升高(P值均0.05)。结论 Uro-A预处理可降低大鼠肝脏缺血再灌注造成的损伤,减少氧化损伤与炎症因子的释放,其机制与通过抑制内质网应激通路减少肝细胞的凋亡有关。     

硒-甲基硒代半胱氨酸抑制原发性肝癌大鼠肿瘤血管生成的作用及机制

目的探讨硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methyl selenocysteine,MSC)抑制原发性肝癌大鼠肿瘤血管生成的作用及机制。方法选取重庆医科大学实验动物中心提供的清洁级SD大鼠120只,采用随机数字表法分成4组,分别为对照组(30只)、MSC低剂量组(30只)、MSC中剂量组(30只)和MSC高剂量组(30)只,采用小剂量间断DNE法制备原发性肝癌大鼠模型,MSC低、中、高剂量组大鼠分别使用12.5 mmol/L、50 mmol/L和200 mmol/L MSC灌胃,给药剂量为5 ml/kg,对照组使用等剂量生理盐水灌胃,每周5次,共进行6周。采用全自动生化分析仪检测血清AST和ALT水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)水平,观察大鼠肝脏病理状态,采用免疫组织化学法检测大鼠微血管密度(microvascular density,MVD)与组织内VEGF、HIF-α的表达。结果 MSC低剂量组AST水平最高,对照组ALT水平最高,组间大鼠血清AST、ALT水平差异有统计学意义(F值分别为13.057、12.991,P值分别为0.015,0.023)。对照组大鼠HIF-1α、VEGF及MVD水平最高,组间差异有统计学意义(F值分别为13.054、12.973、13.068,P值分别为0.029、0.014、0.032)。MSC中、高剂量组大鼠肝组织内VEGF、HIF-1α表达强度显著低于对照组(χ~2值分别为13.521、14.205,P值分别为0.042、0.033)。结论 MSC可有效抑制原发性肝癌大鼠模型瘤体中新生血管的生成,其机制与MSC抑制癌组织内HIF-1α和VEGF的表达有关。     

脂联素信号通路分子在非酒精性脂肪性肝病模型构建不同时期的表达变化

目的研究肝脏脂联素信号通路分子在大鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)形成过程不同时期的表达变化.方法 SD雄性大鼠24只随机分为4组:正常组N组(6只),模型组M4组(6只),模型组M8组(6只),模型组M12组(6只).正常组给予普通饲料喂养, NAFLD模型组给予高脂饲料喂养.分别于第4周末处死M4组大鼠,第8周末处死M8组大鼠,第12周末处死N组和M12组大鼠.采用HE染色法观察各组大鼠肝组织病理学改变;ELISA检测各组大鼠血清脂联素水平;RT-PCR法检测大鼠肝脏AdipoR2、PPARα的mRNA表达; Western blot蛋白印记法检测各组大鼠肝脏AdipoR2、PPARα及磷酸化AMPK蛋白表达.结果肝脏HE染色显示,第12周末时模型组大鼠可见肝细胞肿胀明显,细胞质内可见大量的脂肪空泡,少量肝细胞发生坏死,提示造模成功. ELISA法结果表明,与正常组相比,模型组大鼠第4周末、第8周末、第12周末血清脂联素水平逐渐降低,每两组之间比较差异有显著性(P0.05). RT-PCR法结果表明,与正常组相比,模型组大鼠肝脏第4周末、第8周末、第12周末AdipoR2、PPARα的mRNA表达逐渐减弱,每两组之间比较差异有显著性(P0.05). Western blot蛋白印记法结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肝脏AdipoR2、PPARα及磷酸化AMPK蛋白表达在第4周末、第8周末、第12周末逐渐减弱,每两组之间比较差异有显著性(P0.05).结论脂联素信号通路分子在NAFLD形成过程中表达逐渐减弱.脂联素信号通路活性逐渐降低可能是NAFLD形成的机制之一.     

盐酸戊乙奎醚对百草枯中毒大鼠血清TGF-β1、HIF-α1表达的影响

目的探讨盐酸戊乙奎醚对百草枯中毒大鼠血清及肺组织转化生长因子(TGF)-β1、缺氧诱导因子(HIF)-1α表达的影响。方法选择百枯草中毒大鼠80只,随机分成两组各40只。对照组给予生理盐水灌胃干预。观察组:盐酸戊乙奎醚大鼠尾静脉注射。观察不同时点两组大鼠血清及肺组织TGF-β1、HIF-1α的水平与表达情况。结果观察组大鼠血清TGF-β1、HIF-1α含量都低于对照组(P0.01)。实验后7、14 d,观察组大鼠的血清及肺组织TGF-β1、HIF-1α水平都低于对照组(P0.01)。结论盐酸戊乙奎醚通过调节百草枯中毒大鼠血清及肺组织TGF-β1、HIF-1α的表达来减慢肺纤维化的产生、改善大鼠缺氧状况、进一步减轻肺损伤。     

低氧和复氧对大鼠糖脂代谢的影响及其作用靶点的研究

目的探讨慢性持续性低氧和复氧对大鼠糖脂代谢和不同组织中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、核转录因子κB(NF-κB)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)mRNA表达的影响。方法建立慢性低氧大鼠模型,随机分为7组:常氧3周、6周、12周对照组,低氧3周、6周组和复氧6周、12周组,每组各8只。比较各组血糖、血脂水平和不同组织中HIF-1α、NF-κB和AMPK的表达情况。结果 (1)低氧6周组FPG低于常氧6周组[(3.52±0.59)vs(8.80±1.64)mmol/L,P0.01];复氧6周组FPG高于低氧6周组[(7.20±2.2)vs(3.52±0.59)mmol/L,P0.05],与常氧6周组比较,差异无统计学意义。(2)低氧组TC、TG、HDL-C水平低于常氧组(P0.01),复氧后TC和HDL-C可恢复至常氧水平。低氧组LDL-C、FFA水平高于常氧组(P0.01),且在复氧后可完全恢复至常氧水平。(3)低氧组皮下脂肪组织中HIF-1α、NF-κB和AMPK mRNA表达水平高于常氧组[(276.87±2.77)vs(100±4.03),(184.41±2.17)vs(100±1.56),(259.88±3.03)vs(100±2.95),P0.05]。结论慢性持续性低氧可导致大鼠血糖、血脂的改变,复氧可使其恢复至正常水平。大鼠皮下脂肪组织中HIF-1α、NF-κB和AMPK等基因的表达可能在上述过程中发挥了一定的作用。     

巨噬细胞极化在白藜芦醇抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨巨噬细胞极化在白藜芦醇(Res)抗肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)中的作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血-再灌注组(I/R组)、Res后处理组(Res组),每组8只。建立急性HIRI模型,于再灌注6 h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10、转化生长因子(TGF)-β的浓度,采用Real-time PCR法检测肝脏组织TNF-α及IL-10 mRNA的表达情况,采用流式细胞术分析肝脏M1、M2型巨噬细胞分布情况。结果 Res后处理可以降低肝脏功能学指标ALT、AST、AKP的血清浓度;与I/R组比较,Res组IL-10和TGF-β含量升高,而IL-6和TNF-α含量降低,同时IL-10 mRNA表达量升高而TNF-α表达量下降;流式细胞分析结果显示Res后处理可以降低M1型巨噬细胞的比例,使巨噬细胞向M2型转化。结论 Res对HIRI的保护是通过调节巨噬细胞极化发挥作用的。     

奥拉西坦对大鼠脑梗死的脑保护作用及机制

目的研究奥拉西坦对大鼠脑梗死的脑保护作用及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/热休克蛋白70(HSP70)通路所起的作用。方法选择成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组、脑梗死组、奥拉西坦组、奥拉西坦+YC-1组、奥拉西坦+8-bAMP组、奥拉西坦+Que组。采用线栓法建立脑梗死模型,奥拉西坦组给予200 mg/kg奥拉西坦尾静脉注射,奥拉西坦+YC-1组、奥拉西坦+8-bAMP组、奥拉西坦+Que组在奥拉西坦尾静脉注射的基础上分别给予HIF-1α抑制剂YC-1、AMPK抑制剂8-bAMP、HSP70抑制剂Quercetin尾静脉注射。干预14天后,测定其脑梗死体积、行为学指标及脑组织中氧化应激指标的含量、HIF-1α/AMPK/HSP70通路分子的表达情况。结果与脑梗死组比较,奥拉西坦组大鼠的脑梗死体积明显缩小,平衡木站立时间、平衡木行走时间明显延长,脑组织中活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量明显减少,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的含量及核因子E2相关因子2(Nrf2)、HO-1、AMPK、HSP70的表达水平明显增多。与奥拉西坦组比较,奥拉西坦+YC-1组、奥拉西坦+8-bAMP组、奥拉西坦+Que组大鼠脑组织中ROS、MDA、8-OHdG的含量明显增多,SOD、GPx的含量及Nrf2、HO-1的表达水平均明显减少(P0.05)。结论奥拉西坦能够通过激活HIF-1α/AMPK/HSP70通路减轻大鼠脑梗死的脑损伤。     

成体肝脏 Numb基因过表达可抑制胆汁性肝纤维化进展

目的探讨成体肝脏Numb基因过表达是否可有效干预胆汁淤积性肝纤维化(CLF)的进展。方法 SD大鼠24只, 随机分为假手术组(Sham, n=6)、胆总管结扎组(BDL, n=6)、空载体质粒组(Numb-EV, n=6)和Numb基因过表达组(Numb-OE, n=6)。胆总管结扎制备CLF模型, 并于造模的同时将载有克隆Numb基因的腺相关病毒(AAV)经脾脏注射至大鼠体内, 4周末取材。检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(Alb)、血清总胆红素(TBil)、血清胆汁酸(TBA)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与细胞角蛋白(CK)7、CK19的表达情况及肝组织病理情况。多组均数比较采用方差分析。结果与Sham组比较, BDL组大鼠肝组织Numb mRNA水平显著降低(0.872±0.237与0.452±0.147, P=0.003);与Numb-EV组比较, Numb-OE组肝组织Numb mRNA水平显著升高(0.487±0.122与1.094±0.345, P<0.01)。与Sham组比较, BDL组肝组织...     

二甲双胍对布加综合征小鼠模型肝纤维化的影响

目的 探讨二甲双胍对于布加综合征小鼠模型肝脏纤维化的影响及其机制。方法 C57雄性小鼠30只随机分为4组：假手术组(SHAM组)6只,假手术+二甲双胍组(SHAM+M组)5只,布加综合征模型组(BCS组)10只,布加综合征模型+二甲双胍组(BCS+M组)9只。模型组行下腔静脉部分结扎术,SHAM组不结扎,二甲双胍组造模同时饮水中给予0.1%二甲双胍。6周后处死小鼠取材,HE染色、天狼猩红染色观察小鼠肝脏组织病理和胶原沉积变化,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维蛋白原(Fibrinogen)表达情况,实时荧光定量PCR检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Ⅰ型胶原(Collagen1)的mRNA表达,Western Blot检测HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、Fibrinogen、α-SMA、Collagen1蛋白的相对表达量。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与SHAM组相比,病理染色结果显示BCS组肝脏明显纤维化,中央静脉旁肝细胞排列紊乱,肝窦扩张并伴有红细胞淤积和少量炎症细胞浸润,胶原沉积。BCS组HIF-1...     

肝纤维化过程中整合素α5β1动态变化与扶正化瘀方干预作用

目的 探讨肝纤维化形成过程中整合素α5β1蛋白的变化特点,及其扶正化瘀方影响该蛋白表达的抗肝纤维化作用机制。方法 四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂低蛋白饲料复合建立大鼠肝纤维化模型。135只大鼠分为正常组、模型组与扶正化瘀方药物干预组。模型组又分为2d、1、2、3、4、5、6周共7个动态观察点。药物组自造模之日起以扶正化瘀方稀释液灌胃,共用药6周。其余大鼠灌以等量生理盐水。天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,Western印迹法分析肝组织纤维连接蛋白(FN)、α5β1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量,并分析其相关性。结果 随肝纤维化形成,模型组大鼠肝组织FN、α5β1与α-SMA蛋白表达量逐渐上升,早期以FN升高明显,而后以α5β1及α-SMA增加较为显著,三者之间呈明显正相关。与模型组比较,扶正化瘀方预防组大鼠肝脏胶原沉积减轻,肝羟脯氨酸含量下降。FN、α5β1与α-SMA蛋白表达减少。结论 CCl4大鼠肝纤维化形成中肝脏整合素α5β1表达逐渐增加,肝损伤早期FN显著上升,并可通过α5β1促进肝星状细胞活化与肝纤维化。扶正化瘀方抑制肝纤维化大鼠肝脏FN与整合素α5β1表达,该作用为扶正化瘀方抗肝纤维化机制之一。