普罗布考对体外培养的主动脉平滑肌细胞NF-κB活性的影响

目的：观察普罗布考（probucol ）对血管平滑肌细胞（VSMCs）核因子κB（NF-κB）活性的调控作用,以探讨probucol在 动脉粥样硬化（AS）和经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄（RS）防治中的某些可能的作用机 制。方法：采用电泳迁移位移测定法观察probucol对VSMCs NF-κB活 性的影响。结果：H2O2或胎牛血清（NCS）处理VSMCs 72 h后,NF -κB活性均明显增强;而加入100 μmol/L probucol 后,NF-κB活性受到部分抑制,抑 制率分别为37.1%和14.8%。结论：Probucol 抑制NCS、H2O2诱导 的VSMCs NF-κB的活性,可能是其临床有效防治RS及AS的作用机制之一。     

血脂康对培养的家兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨调脂中经血脂康对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：在培养的家兔主动脉VSMC中加入不同浓度的血脂康共同孵育24h,分别采用细胞计数及^3H－胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入实验观察血脂康对VSMC增殖及MDA合成的影响。结果：血脂康明显抑制VSMC增殖（P＜0．05）和DNA合成（P＜0．01）。结论：血脂康既具有降低血脂作用,又可能通过抑制VSMC增殖而防止动脉粥样硬病变恶化及血管成形术后血管再狭窄等作用。     

大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养及其临床意义

目的:建立大鼠主动脉平滑肌细胞的组织贴块培养法,进一步探讨其临床应用价值。方法:取大鼠主动脉切成1mm3的小块,均匀的贴在细胞培养瓶壁上,用RPMI1640培养基培养,并用透射电镜和相差显微镜进行鉴定。结果:相差显微镜下可见细胞呈梭形或长梭形,培养3周后细胞可重叠生长达多层,高低起伏呈“峰”“谷”状;透射电镜下见到平滑肌细胞的胞浆内有很多与细胞纵轴平行的肌丝及其相连的致密体,部分细胞周围可见肌膜。结论:贴块法培养平滑肌细胞具有方法简单、成功率高、稳定性强等优点,适于临床进行心血管疾病病因和机理的研究。     

大鼠主动脉平滑肌细胞的体外培养和观察

目的 建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型，为动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机制的研究提供了重要手段。方法 将大鼠主动脉翻转，两端结扎，用0.1%胶原酶消化血管内皮细胞，剩余血管剪成小块均匀种植于培养瓶底，加入DMEM培养液培养，观察血管平滑肌细胞的生长，结果 平滑肌细胞48h后贴壁生长，早期呈多角形，以后呈梭形伸展，胰酶消化后平滑肌细胞可传6－7代。结论 此方法简单易行，是获得血管平滑肌细胞的一种可靠方法。     

成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养

目的:建立成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法:方法:无菌条件下分离出成人胸主动脉的平滑肌层,剪成1 mm×1 mm×1 mm的碎片,用组织块贴壁法,以含胎牛血清的DMEM培养基进行培养,牛长融合的细胞用0.25%的胰酶消化、传代。观察培养细胞的形态学特点,并用免疫荧光的方法检测血管平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:在贴壁培养10～12天后,组织块的边缘开始有少量细胞爬出,呈长梭形,胞浆透亮、丰富:继续培养1～2周后组织块边缘融合,呈典型的"峰谷"样表现。消化传至3～8代,细胞的生长特性未见明显改变,免疫荧光显示细胞α-SMA的表达丰富。结论:组织块贴壁法培养人主动脉血管平滑肌细胞是一种稳定、可行的实验方法。     

主动脉平滑肌细胞的三维培养研究

目的研究主动脉平滑肌细胞(aortic smooth muscle cell,ASMC)在三维培养中是否仍能产生弹性蛋白。方法取一周龄SD大鼠胸主动脉,经原代、传代培养后,和胶原、血清及培养液混合形成ASMC胶原凝胶,进行三维培养;培养2周后用Comori醛复红弹性纤维染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,检测细胞胶原凝胶中所产生的弹性纤维,并进行电镜观察。结果传代细胞经α肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定,98％以上为ASMC。培养2周的ASMC胶原凝胶切片用二种染色方法均可显示有弹性纤维存在,电镜观察细胞超微结构呈典型的合成表型。结论 ASM在三难培养中能够产生弹性蛋白,并形成弹性纤维。     

普罗布考对过氧化氢诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨普罗布考（Ｐｒｏｂｕｃｏｌ）对Ｈ２Ｏ２诱导的平滑肌细胞（ＳＭＣＳ）增殖的抑制作用。方法：采用细胞计数法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察０．１～１００μｍｏｌ／Ｌ Ｐｒｏｂｕｃｏｌ对新生牛血清（ＮＣＳ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）促ＳＭＣＳ增殖的抑制作用。结果：１０μｍｏｌ／Ｌ及１００μｍｏｌ／Ｌ Ｐｒｏｂｕｃｏｌ作用９６ｈ,可抑制１０％ＮＣＳ刺激的ＳＭＣＳ增殖,而１,１０及１００μｍｏｏｌ／Ｌ Ｐｒ     

主动脉平滑肌细胞的三维培养研究

目的：研究主动脉平滑肌细胞（aortic smooth muscle cell,ASMC)在三维培养中是否仍能产生弹性蛋白。方法：取一周龄SD大鼠胸主动脉，经原代、传代培养后，和胶原、血清及培养 液混合形成ASMC胶原凝胶，进行三维培养；培养2周后用Gomori醛复红弹性纤维染色和弹性蛋白免疫组织化学染色，检测细胞胶原凝胶中所产生的弹性纤维，并进行电镜观察。结果：传代细胞经α肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定，98％以上为ASMC。培养2周的ASMC胶原凝胶切片用二种染色方法均可显示有弹性纤维存在，电镜观察细胞超微结构呈典型的合成表型。结论：ASMC在三难培养中能够产生弹性蛋白，并形成弹性纤维。     

明党参多糖对NF—kB结合活性的影响

目的：观察明党参多糖对转录活化核蛋白因子ＮＦ－ｋＢ结合活性的影响。方法：在内毒素（ＬＰＳ）诱导Ｊ７４４．ａ．１小鼠的巨噬细胞析，可诱生出同的ＮＦ－ｋＢ活性，分别采用ＬＰＳ先刺激，ＬＰＳ后刺激和ＬＰＳ与明党参多糖同时刺激等３种方法对其处理，并分离核蛋白，行聚丙酰凝胶电泳及光密度扫描定量分析。结果：发现明党参多糖在３种情况下均可降低ＬＰＳ刺激所致的ＮＦ－ｋＢ结合活性。结论：明党参多糖要显著降低ＬＰＳ刺     

胶原酶解离体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞

用0．2％胶原酶Ⅰ解离原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞。取出主动脉胸、腹段，剥除外膜，血管纵向剖开，去除内皮细胞。撕下中膜，快速剪切，用0．2％胶原酶液置摇摆仪上振摆消化约8h(37℃，35次／min)，离心弃上清，加培养液，在37℃温箱培养。结果 光电显微镜下见细胞呈梭形或长梭形。用抗肌动蛋白a-actin的单克隆抗体鉴定平滑肌细胞的特异性肌动蛋白，见胞浆内有明显的细胞细丝，呈现淡黄棕色，细丝与细胞长轴相平行，呈现阳性。表明用0．2％胶原酶解离原代培养法进行平滑肌细胞培养，细胞产量高、质量好、培养时间短、稳定性强、培养成功率高，是一种快速简便的培养方法。     

成人动脉平滑肌细胞体外培养模型的建立

目的：建立成人动脉血管平滑肌细胞（hVSMC)体外培养模型,并保持体外传代培养过程中hVSMC生物学特性的稳定。方法：运用改良的植块贴壁法,在植块贴壁过程,培养基选取,换液时间及培养液用量等多个关键环节进行改进,成功建立了成人hVSMC体外培养模型,并用光镜和透射电镜对培养细胞进鉴定和形态学观察。结果：培养的细胞生长良好,光镜下呈长梭形及“峰与谷”样生长,透射电镜下可见肌丝,密斑及密体,具有典型的hVSMC特征,经传代培养至35代,细胞生长特性未见异常改变,结论：改良植块贴壁法能使hVSMC原代培养的时间明显缩短,传代后hVSMC生物学特征的稳定性好,细胞扩增量大,且培养与纯化能同步进步。     

尼群地平对猪主动脉平滑肌细胞泡沫化的影响

为了探讨尼群地平抗动脉粥样硬化的机制，本实验观察了不同剂量的尼群地平对培养的猪主动脉平滑肌细胞泡沫化过程的影响。结果表明，剂量为２．５μｇ／ｍｌ的尼群地平能有效地抑制猪主动脉平滑肌细胞泡沫化。     

体外培养对家兔血管平滑肌细胞细胞周期和超微结构的影响

目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）细胞周期和超微结构的影响,确认体外培养对VSMCs增殖和细胞表型的影响。方法选择以未经培养传代的VSMCs和体外培养的第四代VSMCs作对比研究,采用流式细胞术检测VSMC细胞周期,透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换及增殖特征。结果电镜观察显示,未经培养传代的VSMCs胞浆中肌丝分布丰富、均匀,并可见到收缩表型VSMCs的典型结构——密斑,内质网、高尔基复合体等细胞器相对较少;而体外培养至第四代时VSMCs胞浆中肌丝明显减少,内质网、高尔基复合体明显增多。流式检测结果显示,体外培养至第四代时的VSMCs和原代细胞比较,细胞增值率增加;G0／G1期细胞减少,S期细胞增多。结论VSMCs体外培养至第四代,在细胞增殖的同时,即可从典型的收缩表型转化为合成表型,提示VSMCs是一种很容易去分化的细胞,体外培养可使VSMCs增殖并伴表型转化。     

小剂量茶碱对大鼠气道上皮细胞NF—kB活性的影响

目的 :观察小剂量茶碱是否对体外培养的哮喘模型大鼠气道上皮细胞中NF κB的活性存在影响。以进一步阐明茶碱类药物抗炎作用和免疫调节作用的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为 2组 ,对照组 (5只 ) ,哮喘模型组 (15只 ) ;模型组以卵清蛋白致敏和激发 ,建立哮喘模型。体外培养哮喘模型组和对照组大鼠的气道上皮细胞。分别观察加入脂多糖 (LPS)刺激前后NF κB活性的变化 ;在哮喘模型组大鼠的气道上皮细胞中加入不同浓度的氨茶碱与LPS(1μg·ml- 1 )共同培养 4h后 ,以及加入同一浓度氨茶碱和LPS(1μg·ml- 1 )共同培养不同时间后NF κB活性的变化。NF κB活性采用免疫组织化学方法检测 ,以细胞核染色作为阳性标准 ,以细胞核阳性的百分比表示NF κB的活性。结果 :经LPS刺激前 ,对照组和哮喘组大鼠气道上皮细胞胞浆NF κB均有一定程度的表达。细胞核表达的细胞 ,哮喘组为 (6 .4 %± 1.2 ) % ,而对照组为 (4 .7%± 1.7) % ,二者相比较 ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。经 1μg·ml- 1 脂多糖刺激 2h后 ,两组细胞胞核NF κB表达均明显上升 ,哮喘组为 (82 .5± 5 .2 ) % ,对照组为(79.3± 3.4 ) % ,两者相比 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 )。在哮喘组大鼠上皮细胞中加入 1μg·ml- 1 脂多糖及各种浓度氨茶碱     

mm—LDL对内皮细胞转录因子NF—kB活性的影响

目的 研究轻微修饰低密度脂蛋白（mm-LDL）激活内皮细胞转录因子NF－kB的信号传导途径以及NF－kB对血小板源性生长因子B链（PDGFb）表达的调控作用。方法 以FeSO4修饰法制备mm-LDL,以正常LDL（n-LDL）作对照,作用于培养内皮细胞后提取核蛋白,用凝胶阻滞实验检测转录因子NF－kB停车场 及结合活性的变化。观察自由基清除剂probucol及PDTC对mm-LDL激活内皮细胞转录因子NF－kB的影响。通过检测报告基因探讨核因子诱导激酶（NIK）和核因子－kB抑制亚基激酶（IKK）在激活内皮细胞转录因子NF－kB的信号传导途径中的作用以及mm-LDL激活的NF－kB对PDGFb基因启动子的作用。结果 mm-LDL能激活培养内皮细胞转录因子NF－kB,自由基清除剂probucol和PDTC对mm-LDL激活内皮细胞转录因子NF－kB还能增加带有PDGFb基因上游调控序列（－189／＋43)的报告基因荧光素酶的活性。Slot blot结果显示变异型NIK能显著减少受mm-LDL刺激的内皮细胞PDGFb mRNA含量。结论 mm-LDL可通过NIK－IKK途径激活内皮细胞转录因子NF－kB并促进PDGFb基因表达。     

成年鼠骨髓间质细胞在体外培养中分化为平滑肌细胞

目的　探讨小鼠骨髓间质细胞在体外经条件培养基诱导定向分化成平滑肌细胞的可行性 ,为研究血管损伤后新生内膜形成机制奠定基础。方法　采用骨髓干细胞培养基和贴壁法从骨髓中分离骨髓间质细胞 ,通过补加人血管平滑肌条件培养基诱导骨髓间质细胞分化成平滑肌细胞 ,采用形态学和免疫荧光染色分析分化后的细胞特异性标志物 ,并测定 1μmol/L血管紧张素Ⅱ对细胞胞液钙离子浓度及细胞收缩功能的影响 ,通过加入氯沙坦抑制血管紧张素Ⅱ受体验证血管紧张素Ⅱ特异性激活钙通道引发的细胞收缩。结果　骨髓间质细胞经诱导在体外可传代生长 ,稳定传代 6代后 ,分化的细胞形态呈梭形平滑肌样 ,融合后形成峰谷状排列。表达平滑肌特异性蛋白标志物α 肌动蛋白、肌钙结合蛋白和平滑肌肌球蛋白。分化后的细胞经血管紧张素Ⅱ刺激产生瞬间胞液钙离子转移并偶联细胞收缩反应 ,细胞 [Ca2 + ]i呈现瞬间增高变化 ,[Ca2 + ]i为 2 131nmol/L± 14 0nmol/L ,经用氯沙坦后 [Ca2 + ]i被阻断 ,为 4 0 2nmol/L± 31nmol/L。结论　骨髓间质细胞经体外诱导可分化为有收缩功能的平滑肌细胞 ,可用于平滑肌细胞分化和血管损伤后新生内膜形成起源等研究。