普罗布考对体外培养的主动脉平滑肌细胞NF-κB活性的影响

目的：观察普罗布考（probucol ）对血管平滑肌细胞（VSMCs）核因子κB（NF-κB）活性的调控作用,以探讨probucol在 动脉粥样硬化（AS）和经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄（RS）防治中的某些可能的作用机 制。方法：采用电泳迁移位移测定法观察probucol对VSMCs NF-κB活 性的影响。结果：H2O2或胎牛血清（NCS）处理VSMCs 72 h后,NF -κB活性均明显增强;而加入100 μmol/L probucol 后,NF-κB活性受到部分抑制,抑 制率分别为37.1%和14.8%。结论：Probucol 抑制NCS、H2O2诱导 的VSMCs NF-κB的活性,可能是其临床有效防治RS及AS的作用机制之一。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞形成血管生成拟态的影响及其机制

目的： 探讨三氧化二砷(AS2O3)对肝癌HepG2细胞血管生成拟态（VM）形成的影响,初步阐明AS2O3对VM抑制的可能作用机制。 方法： 应用CCK-8法测定AS2O3对HepG2细胞作用72 h的半数抑制浓度（IC50）;以Matrigel胶体外三维培养HepG2细胞,将其分为空白对照组、1/2 IC50 AS2O3组和IC50 AS2O3组,IPP软件计算VM的数量、长度和面积,Westernblotting法检测VM相关蛋白VE-cadherin、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果:AS2O3作用HepG2细胞72 h后 IC50为10 μmol•L^-1。与对照组比较,1/2 IC50 AS2O3组和IC50 AS2O3组VM数量、长度和面积明显减少（P<0.01）;与1/2 IC50 AS2O3组比较,IC50 AS2O3组VM数量、长度和面积亦明显减少(P<0.05);与对照组比较,1/2 IC50 AS2O3组和IC50 AS2O3组VE-cadherin和MMP-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,而caspase-3和PCNA蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。结论：AS2O3　抑制HepG2细胞形成VM,其作用机制可能与抑制拟态通路相关蛋白VE-cadherin和MMP-2的表达有关。     

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对过氧化氢（H2O2）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的改善作用。方法：体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H2O2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H2O2损伤组细胞经H2O2（400 μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H2O2损伤12 h后加入含50 μg/mL AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果：H2O2损伤后HAECs 丙二醛（MDA）含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧（ROS）水平显著增加,超氧化物歧化酶（SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性及线粒体膜电位显著降低;H2O2损伤的HAECs 经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论：AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一     

健心方防治心力衰竭分子机理研究

[目的]探讨了健心方药物血清对于心肌细胞NF-kB活性的影响,阐明健心方保护心肌的作用机理。[方法]采用荧光素酶报告基因方法检测H2O2处理心肌细胞NF-kB活性的改变及丹参酮对损伤后心肌细胞NF-kB活性的影响。[结果]荧光素酶报告基因检测结果表明H2O2可明显增强心肌细胞NF-kB活性(P<0·05),而健心方药物血清可抑制这种激活作用(P<0·05);大小剂量的药物血清均可拮抗H2O2对心肌细胞的损伤作用(P>0·05)。[结论]心肌细胞损伤后NF-kB的激活是CHF发生发展中的重要过程,健心方可拮抗这种激活作用;健心方的心肌保护作用是通过对异常增高的NF-kB活性的拮抗产生的。     

AS2O3诱导人膀胱癌EJ细胞株凋亡作用的体外研究

目的观察三氧化二砷（Arsenic trioxide,AS2O3）对人膀胱癌EJ细胞生长抑制作用,并探讨其作用机理。方法四甲基偶氮唑蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromid,MTT）法检测EJ细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡,并对半胱天冬酶（Caspase）—3活性进行检测。结果AS2O3可有效地抑制EJ细胞生长,且呈时间、浓度依赖性特点;经药物作用后,膀胱癌细胞凋亡明显增加,凋亡率随作用时间的延长而增多。结论ASO可显著抑制膀胱癌细胞生长,诱导细胞凋亡是其作用机制之一。     

川芎嗪肉桂酰类双酯衍生物对内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的观察2,5-二（2,5-二甲氧基肉桂酰氧甲基）-3,6-二甲基吡嗪（TMPC）对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤,观察TMPC对内皮细胞氧化损伤的保护作用。结果TMPC对H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤有明显的保护作用,能减少内皮细胞脂质过氧化物丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的生成,提高超氧化物歧化酶（SOD）活性,减轻H2O2诱导的内皮细胞内游离钙离子升高引起的钙超载。结论TMPC可有效保护H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤,维持或恢复细胞正常的生理功能,其机制可能与TMPC能有效抑制细胞内钙超载,减少脂质过氧化物的生成,提高抗氧化物质的活性有关。     

内钙拮抗剂TMB-8对过氧化氢所致的培养牛主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的：观察内钙拮抗剂TMB－8对过氧化氢（H2O2）介导的血管内皮细胞损作的作用,方法：用10umol/L H2O2损伤内皮细胞,观察不同浓度TMB－8对损伤内皮细胞形态学的作用,检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量,丙二醛（MDA）生成量,超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活性,结果：TMB－B能减轻内皮细胞形态学的改变,明显降低LDH释放,抑制MDA产物生成,保护SOD和GSH－PX的活性,结论：TMB－8对H2O2损伤的内皮细胞具有保护作用。     

表儿茶素对H2O2引起的Huh7细胞氧化应激的作用

目的：探索表儿茶素对H2O2引起的Huh7细胞氧化应激的作用及其机制。方法：对H2O2和表儿茶素干预培养的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞存活率,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧（ROS）生成量,免疫印迹测定丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）,增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA）,磷酸化应激激活的c-Jun蛋白水平。结果：0.8mmol/LH2O2孵育1h可诱导显著Huh7细胞损伤,细胞存活率下降到（40±3.2）%,ROS生成量比未处理细胞多5.4倍。细胞经150μmol/L表儿茶素与H2O2共孵育后,细胞存活率提高到（94.5±9.84）%;表儿茶素能显著抑制H2O2引起的Huh7细胞ROS生成,ROS生成下降60%（P〈0.01）。表儿茶素抑制H2O2引起Huh7细胞死亡和ROS生成随剂量增加抑制作用加强。表儿茶素抑制H2O2激发Huh7细胞磷酸化c-Jun表达,提高细胞Akt、PCNA水平。结论：表儿茶素抑制H2O2引起的Huh7细胞氧化应激损伤而导致的细胞死亡,其作用机制是通过减少细胞内活性氧生成,抑制H2O2激活磷酸化c-Jun,提高细胞Akt,PCNA水平。     

红景天苷对H2O2诱导子鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨红景天苷对H2O2诱导子鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法在原代培养的SD大鼠子鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量红景天苷（10、30、90μg／m1）对心肌细胞凋亡率、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响。结果红景天苷可以减少心肌细胞凋亡率,降低MDA和LDH含量,增加SOD活性。结论红景天苷对H2O2诱导的子鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化有关。     

血管周围脂肪组织中AngⅡ介导VSMCs增殖的机制

  目的 探讨血管周围脂肪组织(PVAT)中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的相关机制。方法 培养大鼠平滑肌细胞,MTT试验检测AngⅡ处理后细胞增殖率,检测AngⅡ处理后活性氧（ROS）、H2O2及HOCL水平; 预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）、ERK1/2抑制剂（PD98059）分别作用于AngⅡ处理的细胞,观察其对细胞总蛋白、细胞周期的影响,并检测H2O2及HOCL含量的变化。结果 AngⅡ（终浓度100 nmol/L）处理24 h后细胞与未予AngⅡ处理比较可明显诱导细胞增殖（P＜0.05）,且ROS随着升高;预先给予NADPH抑制剂apocynin、H2O2水解酶catalase、ERK1/2抑制剂PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞与单用AngⅡ处理的细胞比较可抑制细胞增殖（P＜0.05）;预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）与单用AngⅡ处理的细胞比较可降低H2O2及HOCL含量（P＜0.05）,但ERK1/2抑制剂（PD98059）与单用AngⅡ处理组比较无此效应（P>0.05）。结论 在PVAT中ROS在介导AngⅡ诱导VSMCs增殖的通路可能为Nox/H2O2/HOCL/ERK1/2。     

miR-199a对肝癌HepG2细胞增殖的影响及机制

目的：探讨miR-199a对肝癌HepG2细胞增殖的影响及机制。方法：使用DNA重组技术,将含有miR-199a的基因片段克隆人带有EGFP的慢病毒载体pLV-GFP-puro,DNA测序鉴定阳性克降,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带miR-199a的质粒共转染293T细胞包装病毒,纯化后感染肝癌HepG2细胞。用荧光显微镜观察感染效率;MTT法检测细胞增殖活性;Westernblot检测HepG2细胞miR-199a和NF-kB相关抗凋亡基因（TRAF2、cIAP2、Bfl-1和cFLIP）的表达情况。结果：成功构建了miR-199a重组慢病毒载体,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108TU/mL;感染后HepG2细胞高表达miR-199a,抑制HepG2细胞增殖,并证实过表达miR-199a有效稳定IkBa表达,抑制NF-kB活性,进一步抑制NF-kB相关抗凋亡基因TRAF2、cIAP2\Bfl-1和cFLIP表达。结论：miR-199a重组慢病毒过表达载体有效感染HepG2细胞,并抑制HepG2细胞增殖,其机制可能与miR-199a抑制NF-kB活性及其相关抗凋亡基因表达有关。     

桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 研究桔梗多糖（PGP）对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性;DCFH-DA检测细胞内ROS;qPCR、Western Blot方法分别检测NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达。结果 与模型组相比,PGP预处理24h后,加入终浓度为600 μmol/L H2O2处理2h,LDH、MDA含量和细胞内ROS减少,SOD与GSH-Px活性增强,同时,PGP下调NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达水平。结论 PGP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制NADPH氧化酶2(NOX2)过表达有关。      

丹酚酸A 对H2O2 所致大鼠脑微血管内皮细胞氧化损伤保护的实验研究

目的 观察丹酚酸A 对H2O2所致大鼠脑微血管内皮细胞（RCMECs）氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机 制。方法 分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞,用H2 O2 损伤的方法建立氧自由基损伤模型。采用丹酚酸A 进行干预后,分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、血栓素B2（TXB2）水平、6- 酮基前列腺素1α（6-keto-PGF1α）的含量,以及细胞内和培养液中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果 H2O2致RCMECs 氧化损伤后,细胞LDH 释放水平、TXB2和MDA 的含量均明显增加,同时6-keto-PGF1α 含量和SOD 活性显著下降;而丹酚酸A 预处理后能呈浓度依赖性的降低RCMECs 氧化损伤后LDH 水平、TXB2含量和细胞内外的MDA 含量,提高受损细胞6-keto-PGF1α 的表达和细胞内外SOD 活性。结论 丹酚酸A 对H2O2所致RCMECs 氧化损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

Ghrelin对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的：研究Ghrelin对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）内游离钙离子浓度的影响,并揭示Ghrelin血管活性的调节机制。方法：组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs,Western blot验证生长激素促泌素受体（GHS-R1a）在VSMCs中的表达。钙荧光染料furo-2AM标记VSMCs,高速钙离子成像分析系统检测Ghrelin对静息状态胞内钙荧光强度（FI）的影响,并观察Ghrelin对KCl和AngII增强胞内钙FI作用的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536和GHS-R1a拮抗剂（D-Lys3）-GHRP-6对Ghrelin作用的影响。结果：GHS-R1a在VSMCs内有表达。Ghrelin本身对VSMCs内钙FI无作用,也不能抑制KCl引起的VSMCs内钙FI升高,但可抑制AngII引起的VSMCs内钙FI升高,而这种抑制作用可被Sq22536和GHS-R1a逆转。结论：Ghrelin可抑制由AngII引起的大鼠主动脉VSMCs胞内钙离子的升高,机制可能和激活cAMP/PKA信号通路有关。     

阿替洛尔对过氧化氢损伤乳鼠心肌细胞有保护作用

目的：观察阿替洛尔对过氧化氢（H2O2）致心肌细胞氧化损伤的保护作用，并探讨此作用的机制。方法：用H2O2作用于新生SD大鼠心肌细胞，建立心肌细胞过氧化氢损伤模型。用阿替洛尔预处理后，观察心肌细胞状态，测定心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）活性。结果：阿替洛尔提高心肌细胞过氧化损伤的细胞存活率（P〈0.05），减少LDH和MDA的生成（P〈0．05）。结论：阿替洛尔对心肌细胞过氧化损伤有一定起保护作用。     

阿司匹林抗氧化作用机制的探讨

目的 探讨阿司匹林（AS）抗氧化作用的机制。方法 观察不同浓度的AS在抗H2O2损伤内皮细胞过程中诱导铁蛋白（Fn）表达的情况,以及添加外源性FeCI3和细胞内铁螯合剂去铁胺时对AS诱导Fn表达的影响。结果 极低剂量（0．1mmol/L）的AS即可诱导内皮细胞Fn表达超过对照25％（P＜0．05）,使乳酸脱氢酶（LDH）释放率减少50％,保护74．4％的细胞避免H2O2的损伤,同时使氧自由基指标丙二醛明显下降。AS与Fn表达之间表现出剂量与时间依赖关系,且对细胞的保护作用逐渐增强。但使用去铁胺去除细胞内游离铁能明显降低AS诱导Fn表达的作用,而加入FeCI3后诱导Fn表达的作用增强。结论 初步证实AS的抗氧化作用是通过影响细胞内铁代谢变化,增加Fn表达实现的。     

硫化氢抑制局部肾素水平影响动脉粥样硬化的研究

目的:观察硫化氢(H2S)是否通过抑制局部肾素活性影响动脉粥样硬化(AS)?方法:用高脂饲料结合维生素D3的方法建立大鼠动脉粥样硬化模型,治疗组给予腹腔注射硫氢化钠(NaHS)56 ?滋mol/(kg?d),共计12周?用HE?油红O染色观察血管病理变化和脂质浸润,放免法检测血浆及组织肾素活性,免疫组化法观察血管局部肾素的表达?结果:模型组血浆总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)水平明显升高,血浆和动脉组织H2S水平显著降低,动脉组织肾素水平明显增高?NaHS组血脂和血浆H2S水平有所改善,动脉组织肾素水平降低,AS斑块和脂质浸润减少?结论:局部肾素在AS中发挥重要作用,H2S能通过抑制动脉局部肾素表达产生抗AS作用?     

La（C7H5O3）2·（C9H6NO）抑制Hela细胞生长作用机制研究

目的：观察La（C7H5O3）2·（C9H6NO）对体外培养的Hela细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法：应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果：不同浓度的La（C7H5O3）2·（C9H6NO）处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖受到显著抑制,并呈浓度及时间依赖性;0．5、1．0、5．0、10．0μmol／L La（C7H5O3）2·（C9H6NO）处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著减少（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论：La（C7H5O3）2·（C9H6NO）对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

CGRP对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及Caveolin-1表达的影响

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对过氧化氢（H2O2）诱导离体培养的人脐静脉内皮细胞（hU-VECs）损伤的保护作用及其机制。方法 CGRP预孵育hUVECs后,用不同浓度H2O2处理hUVECs,噻唑蓝比色法（MTT）观察hUVECs活性;Western-blot检测Caveolin-1表达。结果 CGRP（0.1-100.0 nmol/L）能呈浓度依赖性提高hUVECs活性。H2O2（0.2-5.0 mmol/L）能呈浓度依赖性降低hUVECs活性。CGRP（10~100 nmol/L）预孵育hUVECs 30 min能明显提高H2O2诱导的hUVECs抗损伤能力（P（0.05）;与0.1%FBS组比较,100 nmol/LCGRP和0.05 mmol/L H2O2处理组细胞Caveolin-1蛋白水平表达下降（P（0.05）;0.8 mmol/L H2O2处理组细胞Caveolin-1蛋白表达水平上升（P〈0.05）;与H2O2处理组比较,100 nmol/L CGRP预孵育hUVECs 30 min能显著降低细胞Caveolin-1蛋白水平的表达（P（0.05）。结论 CGRP对H2O2诱导的hUVECs损伤有一定的保护作用,其机制可能与下调氧化应激导致的hUVECs Caveolin-1的表达有关。     

Toll样受体4突变对失血性休克致小鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨Toll样受体4（TLR4）突变在单纯性失血性休克（无复苏）所致小鼠急性肺损伤（ALI）中的作用及机制。方法：以TLR4基因突变的C3H／HeJ品系及TLR4野生型的CBA品系小鼠为研究对象，每组20只。心脏穿刺复制失血性休克模型，在不同时间点取出肺组织，观察肺组织病理形态变化；通过逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）半定量方法检测肺组织TLR4 mRNA的表达水平；用凝胶电泳迁移（EMSA）法检测肺组织中核因子-kB（NF-kB）的量。结果：失血性休克刺激后，基因突变小鼠肺组织中性粒细胞浸润、红细胞渗出较野生型小鼠明显减轻；基因突变小鼠肺组织TLR4 mRNA表达及NF-kB活性变化不明显，而野生型小鼠TLR4mRNA在2、4和6h表达增加，NF-kB在失血性休克后1和2h活性显著增加。结论：TLR4在失血性休克所致ALI中起重要作用，其突变可减轻失血性休克所致的ALI。