花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物环氧二十碳三烯酸生物学作用

对于花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶作用生成的环氧二十碳三烯酸(EETs),最初在心血管及肾脏系统中被广泛研究,并发现EETs的舒张血管、抑制血小板的聚集、抑制血管平滑肌细胞的炎症反应及平滑肌细胞的迁移、增强纤维蛋白的溶解等作用,为预防及治疗许多心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化等提供了新的研究方向。近来研究发现EETs具有促进机体肿瘤细胞的增殖、迁移等作用,其有可能使EET成为肿瘤治疗的新靶点。深入研究EETs的生物学作用及其作用机制,将为临床治疗某些疾病提供新的思路。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET促进血管生成的研究

目的研究花生四烯酸细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）表氧化酶代谢产物表氧二十碳三烯酸（epoxyeicosatrienoic acid,EET）对牛主动脉内皮细胞（bovine endothelial cells,BAEC）、对血管生成的影响及其机制.方法分离BAEC培养,给予外源性EET刺激、重组腺相关病毒介导的各种CYP表氧化酶（CYP2J2,CYP2C11,CYPF87V）转染后,采用细胞计数、噻唑蓝比色法检测细胞增殖改变,用流式细胞仪检测对细胞增殖周期的影响,同时检测细胞趋化移行的改变,比较对Matrigel中毛细血管样结构形成的影响,观察表氧化酶过度表达对鸡胚尿囊绒毛膜血管生成和大鼠缺血后肢毛细血管生成的影响.结果各种EET刺激或表氧化酶病毒转染均显著促进BAEC的增殖、趋化和移行,并使Matrigel中毛细血管样结构的形成明显增加,且EET呈剂量依赖性效应,而合用一氧化氮合酶抑制剂、丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）抑制剂或磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）抑制剂均可显著抑制上述效应,另外表氧化酶病毒转染尚能明显促进CAM小血管和大鼠缺血后肢毛细血管的生成.结论花生四烯酸细胞色素P450（CYP）表氧化酶及其代谢产物EET可显著促进血管的生成,可改善局部组织的缺血,其作用由MAKP和PI3K介导,部分效应由其对一氧化氮的上调作用介导.     

花生四烯酸细胞色素P450酶代谢产物的生理作用

近十余年来对花生四烯酸细胞色素P450（CYP）氧化酶代谢途径及其产物的研究引起了学者们广泛的兴趣和重视，陆续发现并证实经此途径产生的花生四烯酸代谢产物有许多重要的生理和病理生理作用。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物与健康老年人血管内皮舒张功能障碍的相关性

目的 检测健康老年人血清环氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)代谢终产物的含量变化,分析其与血管内皮舒张功能的相关性.方法 120例志愿者按年龄分为青年组60例和老年组60例,每组男、女各30例.应用酶联法检测两组血清中14,15-环氧二十碳三烯酸代谢终产物14,15-双羟二十碳三烯酸(14,15-DHET)、前列环素终产物6酮-前列腺素F1α(6-Kote-PGF1α)和血栓素终产物血栓素B2(TXB2)的含量,同时检测血糖、血脂等生化指标.采用超声对肱动脉基础内径、血管内皮依赖性舒张功能(EDV)和硝酸甘油介导的血管内皮非依赖性舒张功能(NEDV)进行测定.结果 与青年组比较,老年组糖化血红蛋白(HbA1c )、三酰甘油和胆固醇增高(P＜0.01);血清14,15-DHET和6-Kote-PGF1α含量明显下降(P＜0.01),TXB2/6-Kote-PGF1α(T/P)比值和TXB2/14,15-DHET (T/D) 比值升高(P＜0.01);肱动脉基础内径增宽(P＜0.05),EDV和NEDV明显降低(P＜0.01).14,15-DHET含量与年龄和T/D比值呈负相关,与EDV正相关.结论 健康老年人血清中血管内皮依赖性的舒血管因子终产物14,15-DHET及6-Kote-PGF1α含量均下降,可能与内皮花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶及脂环氧酶的代谢产物生成减少有关,是衰老相关的血管EDV和NEDV功能受损的重要参考指标.

Abstract：

Objective To determine the relationship of cytochrome P-450 epoxygenase metabolites of arachidonic acids with impaired endothelium-dependent vasorelaxation in the healthy elderly. Methods A case-control study was employed.The study enrolled 60 healthy young adults (group A) and 60 healthy senior citizens (group B) of Han population in Shanghai. Serum contents of 14,15-dihydroxyeicosatrienoic acid (14,15-DHET) (a stable metabolite of 14,15-EET), 6-Kote-PGF1a (a stable metabolite of prostaglandin) and TXB2 (a stable metabolite of thromboxane A2) were measured using ELISA kits. The endothelium-dependent vasorelaxation (EDV) and endothelium-independent vasorelaxation (NEDV) in brachial arteries were determined by color Doppler ultrasound. Results Compared with group A, group B had significant higher levels of hemoglobin A1c, triglyceride and cholesterol levels (P＜0.01), and significant lower levels of 14,15-DHET and 6-Kote-PGF1a (P＜0.001), leading to increased values of TXB2/6-Kote-PGF1a and TXB2/14,15-DHET. There was bigger basal interior diameter of brachial arterials with reduced EDV and NEDV response (P＜0.01 and P＜0.05, vs. group A respectively) in group B. Moreover, the age was negatively correlated with 14,15-DHET and TXB2/14,15-DHET. Conclusions Our results indicate that the impaired EDV and NEDV in aging are associated with reduced production of arachidonic acid metabolites through cytochrome P-450 epoxygenase pathway and cyooxygenase pathway of endothelium in the healthy elderly.     

花生四烯酸细胞色素P450代谢途径在心力衰竭中作用的研究进展

<正>花生四烯酸是人体必需脂肪酸之一,其代谢产物具有较强的生物学活性,并在众多生理及病理过程中发挥重要调节作用。花生四烯酸在人体内主要通过环氧化酶(cyclooxygenases,COXs)、脂氧化酶(lipoxygenases,LOXs)及细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)3大途径进行代谢,其中花生四烯酸经CYP450途径产生环氧二十碳三烯酸     

花生四烯酸细胞色素P450代谢途径在高血压中作用的研究进展

花生四烯酸是人体必须脂肪酸之一，其代谢产物具有较强生物学活性并在众多生理病理过程中发挥着重要调节作用。其在人体内主要通过环氧化酶、脂氧化酶、细胞色素P450（CYP）三大途径进行代谢。其中，越来越多的研究表明，CYP代谢途径中其关键基因CYP通过调控经ω-羟化酶、表氧化酶作用的下游产物20羟-二十烷四烯酸及表氧一二十碳三烯酸的质／量，从而影响高血压的发生发展，并且对其分子生物学机制及遗传学的研究亦成为当前的研究焦点。本文主要对CYP途径在高血压中的作用简要做一综述。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET抑制脂多糖诱导的内皮细胞凋亡

目的研究花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产物一表氧化二十碳三烯酸 (epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)凋亡的影响。方法原代分离培养BAECs。分别在细胞培养基中加入 8,9-,11,12-,和14,15-EET1 h后,用LPS(100 ng／ml)诱导内皮细胞凋亡。用MTT法检测LPS对 BAECs的毒性作用,再通过细胞形态学(吖啶橙／溴化乙锭染色)和流式细胞仪计数检测其凋亡变化。结果LPS对BAECs的毒性作用呈剂量依赖性和时间依赖性。LPS可明显诱导BAECs凋亡,但8, 9-,11,12-,和14,15-EET干预的BAECs凋亡细胞数分别为(37．03±3．014)％、(33．45±7．918)％和 (35．75±7．858)％明显少于溶媒对照组(47．33±3．154)％。结论这些结果证明了花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs能明显的抑制LPS诱导的BAECs凋亡。这表明细胞色素P450 表氧化酶可能有保护心血管系统,防止其受到炎症损伤和粥样硬化的作用。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶在自发性高血压大鼠血压的调节中的作用

背景与目的花生四烯酸细胞色素P450（CYP）表氧化酶代谢花生四烯酸产生表氧化廿烷酸（EETs），又称为内皮源性超极化因子（EDHFs），在局部微循环的调节中起着重要作用。然而EETs在血压的调节中是否起作用还不清楚。本研究通过对成年自发性高血压大鼠导入花生四烯酸细胞色素表氧化酶基因来观察其血压变化，从而进一步明确EETs在血压调节中的作用。方法：将含人类细胞色素P450表氧化酶CYP2J2 cDNA的真核细胞表达质粒pcDNA．2J2经静脉注射（3mg／kg）人雄性成年自发性高血压大鼠，并以pcDNA3．1对照。然后用尾部血压计测量血压。并在注射后3周和4周时处死动物，检测CYP2J2在不同组织中的表达情况。结果：注射质粒后对照组血压一直无显著性变化，而pcDNA．2J2治疗组大鼠血压显著降低（P〈0．05），这一降压效应持续两周以上。Western blotting显示在实验组动物肺、肝和肾的总蛋白中通过特异性抗-CYP2J2抗体可检测出显著量的人类CYP2J2蛋白的表达。结论：本实验显示对成年自发性高血压大鼠导人人类CYP2J2基因，使CYP2J2可以在动物组织中高表达，从而引起相对持久的降压作用，这些结果提示花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶通过产生EDHFs参与了动物血压的调节作用。     

细胞色素P450基因对高脂饮食诱导不同周龄小鼠动脉粥样硬化的保护作用

目的研究血管内皮高表达CYP2C8基因能否改善小鼠动脉粥样硬化。方法以20和40周龄APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-和CYP2C8Tg+/-基因(血管内皮特异性CYP2C8+/-转基因)的小鼠(n=10/组)为研究对象,相同基因背景和周龄的同窝APOEKO+/-和C57BL/6小鼠设为对照。采用PCR技术鉴定小鼠CYP2C8+/-基因;油红O染色检测APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-、CYP2C8Tg+/-、APOEKO+/-和C57BL/6小鼠主动脉斑块形成面积;酶比色检测APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-、CYP2C8Tg+/-、APOEKO+/-和C57BL/6小鼠血清TG、TCH、HDL。结果 20和40周龄APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-和CYP2C8Tg+/-小鼠主动脉斑块形成面积与同周龄野生型小鼠相比明显减少,并且明显改善了血脂代谢状态。结论高表达CYP2C8基因能够改善西方饮食诱导的不同周龄小鼠的动脉粥样硬化。     

细胞色素P450基因降低动脉粥样硬化小鼠MMP-9表达

目的研究血管内皮高表达CYP2C8基因能否降低动脉粥样硬化小鼠的MMP-9的表达。方法以20周龄APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-和CYP2C8Tg+/-小鼠(n=10/组)为研究对象,相同基因背景和周龄的同窝APOEKO+/-和C57BL/6小鼠设为对照。采用PCR技术鉴定小鼠CYP2C8+/-基因;油红O染色检测APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-、CYP2C8Tg+/-、APOEKO+/-和C57BL/6小鼠主动脉斑块形成面积;用Real-time PCR法检测各组小鼠的主动脉MMP-9基因表达水平,Western blot分析各组小鼠的主动脉MMP-9蛋白的表达情况。用ELISA法检测各组小鼠的血浆IL-1β和IL-10。结果 APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-和CYP2C8Tg+/-小鼠主动脉斑块形成面积明显减少,Real-time PCR分析显示高表达CYP2C8在主动脉中明显下调MMP-9基因的表达,Western blot分析结果显示:高表达CYP2C8在主动脉中明显下调MMP-9蛋白的活性。在血清学上,高表达CYP2C8明显上调IL-10而下调IL-1β。结论高表达CYP2C8基因能够降低小鼠的MMP-9的活性、减低炎性介质水平,通过抗炎和稳定粥样斑块而发挥抗粥样硬化作用。     

花生四烯酸细胞色素p450表氧化酶基因对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的治疗作用

目的研究过表达花生四烯酸细胞色素p450表氧化酶基因CYP2J2对野百合碱(MCT)诱导的大鼠原发性肺动脉高压的治疗作用,并对其机制进行初步探讨。方法模型组18只雄性大鼠一次性注射MCT(60 mg/kg·w),对照组18只。三周后分六组:MCT 生理盐水(n=6),MCT pCB6(n=6),MCT pCB6-2J2(n=6),生理盐水(n=6),pCB6(n=6),pCB6-2J2(n=6)。两周后,测右室收缩压RVSP和右室肥厚指数RV/(LV s),western blot检测CYP2J2、Smad4蛋白的表达。结果模型组注射生理盐水、pCB6组RVSP分别为(41.48±0.45)和(38.13±3.68)mm Hg,显著高于正常对照组动物(20.89±3.09)mm Hg,(P<0.05)和模型组注射pCB6-2J2组(29.48±5.67)mm Hg,(P<0.05)。模型组注射生理盐水、pCB6组RV/(LV S)分别为(0.425±0.08)和(0.358±0.07)显著高于正常对照组动物(0.24±0.03)(P<0.01)和模型组注射pCB6-2J2组(0.28±0.02) (P<0.05)。Western blots显示模型组注射生理盐水、pCB6组Smad4蛋白表达水平均明显低于注射pCB6-2J2组。结论过表达CYP2J2基因显著缓解野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压,降低右室收缩压和减轻右心室肥厚程度,上调了TGFβ信号通道中的Smad4蛋白。     

环氧二十碳三烯酸防治心血管疾病的研究进展

<正>心血管疾病当前仍然是人类死亡的主要原因之一,因此应重视心血管疾病防治的研究。环氧二十碳三烯酸(EET)作为花生四烯酸的代谢产物,在血管和心脏的生理方面有着重要的作用[1]。EET血管作用包括舒张血管、降血压、促进血管生成、抗动脉粥样硬化和抗炎作用,以及扭转缺血再灌注损伤的作用,从而达到维持血管稳态的目的。在心脏方面,其作用机制为收缩心肌细胞和增加冠状动脉血流量两大     

细胞色素P450基因对高脂饮食诱导不同周龄小鼠动脉粥样硬化的保护作用机制

目的在高脂饮食诱导小鼠动脉粥样硬化中研究CYP2C8基因对动脉粥样硬化的作用及相关机制。方法 :以20和40周龄APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-和CYP2C8Tg+/-转基因的小鼠为研究对象,相同基因背景和周龄的同窝APOEKO+/-和C57BL/6小鼠设为对照。在第5,20,40周时测各组动物EET含量,用Real-time PCR法检测各组小鼠的主动脉PPAR-γ和MCP-1基因表达水平,Western blot分析各组小鼠的主动脉(p-)eNOS和NF-κB蛋白的表达与小鼠的肝脏PI3K、(p-)AKT、(p-)ERK和(p-)P38等信号通路蛋白的表达情况。结果 :在高脂饮食中,CYP2C8Tg+/-组和APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-组的EET浓度明显增高。Western blot显示:高表达CYP2C8在肝脏中明显上调PI3K、(p-)AKT、(p-)ERK和(p-)P38蛋白;在主动脉明显上调(p-)eNOS蛋白,下调NF-κB蛋白。Real-time PCR分析显示高表达CYP2C8在主动脉中下调MCP-1蛋白。结论 :本研究高表达CYP2C8基因具有显著的抗炎作用,这一作用是...     

转染细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应的保护作用及机制研究

目的研究过度表达表氧化酶基因,增加内源性EETs的产生是否对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应具有保护作用,并初步从对血管VCAM-1表达的影响探讨其机制。方法将携带细胞色素P450表氧化酶基因的真核表达载体pCB6质粒导入大鼠体内,2周后经静脉给予TNF-α,6 h后观察去甲肾上腺素预收缩的主动脉血管环对乙酰胆碱的舒张反应,并以western blot 检测血管中VCAM-1蛋白质的表达情况。结果 TNF-α降低了主动脉环对乙酰胆碱的舒张反应, CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α降低的血管舒张反应增强。TNF-α增加了血管VCAM-1表达,CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α诱导的VCAM-1表达减少。结论CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因能提高了血管对舒血管物质的反应性。本研究提示,通过上调体内表氧化酶基因表达水平提高内源性EETs浓度可减轻炎症介导的血管损伤,这为研究动脉粥样硬化的防治提供了新的思路。     

重组腺相关病毒介导的细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症的影响

目的研究过度表达细胞色素P450表氧化酶基因引起内源性EETs产生增加是否能抑制由TNF—α诱导的内皮炎症。方法以携带三种不同表氧化酶基因的重组腺相关病毒rAAV- CYP2C11、rAAV—CYP2J2和rAAV—CYPF87V转染人脐静脉内皮细胞,然后再以TNF—α干预,来研究它们对内皮VCAM-1的表达及外周血单核细胞PBMC与内皮细胞粘附的影响。结果TNF-α诱导了 HUVEC中VCAM-1蛋白质的表达,rAAV—CYP2C11、rAAV—CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用。 TNF-α诱导了PBMC与HUVEC的粘附(100±0．0％ vs 620．1±65．3％),rAAV-CYP2C11、rAAV- CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用(分别为120．3±33．4％ vs 387．7±27．4％．131．0±28．7％ vs 535．0±69．7％)。结论CYP2C11和CYP2J2基因具有显著的保护内皮细胞、对抗炎症介质介导的内皮损伤的作用。     

细胞色素P450表氧化酶通过PI3K/AKT及ERK/MAPK途径抗内皮细胞凋亡的机制

目的:研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导内皮细胞抗凋亡的机制。方法:在原代培养的牛主动脉内皮细胞(BAECs)中,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V2周,证实其在内皮细胞中高效表达。用TNF-α(10ng/ml)和放线菌素D(ActD)(5ng/ml)诱导凋亡,流式细胞计数观察其凋亡变化,用Western blot法检测蛋白激酶B(AKT)及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化水平,用流式细胞计数的方法观察空白组及转染F87V组加入AKT抑制剂、LY294002、芹菜素及PD98059后的细胞凋亡比例。结果:与对照组比较,转染细胞色素P450表氧化酶基因后BAECs能高效表达P450表氧化酶基因F87V(P<0.05);流式计数凋亡细胞数,转染表氧化酶较对照组明显减少(P<0.05);转染CYP P450表氧化酶后,AKT及ERK的磷酸化增加;磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和MKK的抑制剂后转染F87V组较对照组凋亡细胞比例明显减少(P<0.05)。结论:细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V能通过MAPK(ERK1/2)与PI3K/AKT途径发挥抗凋亡作用。     

细胞色素P450表氧化酶对内皮细胞凋亡及NF—κB表达的影响

目的研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡及NF-KB活性的影响。方法在原代培养的牛主动脉内皮细胞中，分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-2J2，rAAV-2C11，rAAV—F87V两周后，用肿瘤坏死因子（TNF-d）（10ng／ml）和放线菌素D（ActD）（5ng／ml）诱导凋亡，通过DNA ladder观察细胞凋亡，同时ELISA法测定NF-κB的活性。结果与对照组相比，转染细胞色素P450表氧化酶基因后能抑制内皮细胞的凋亡，同时诱导细胞凋亡后，转染CYP450各基因组NF-KB中P65的活性较对照组明显降低。结论细胞色素P450表氧化酶能明显的抑制肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡，并通过抑制NF-κB的核转位发挥抗凋亡作用。     

细胞色素P450表氧化酶2J2基因G312R多态性与脑卒中的关系

目的探讨我国汉族人群细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)基因G312R多态性与脑卒中的关系。方法选择脑卒中病例180例和性别、年龄相匹配的健康人群190例,采用PCR-RFLP方法进行CYP2J2基因G312R多态性分析。结果370例均为野生型,未发现杂合子和突变后纯合子。结论CYP2J2基因G312R突变不是我国部分人群缺血性脑卒中、脑出血发病的遗传危险因素。     

花生四烯酸的CYP代谢途径与心肌缺血再灌注损伤

花生四烯酸（AA）主要由环氧化酶（COX）、脂加氧酶（LOX）及细胞色素P450（CYP）途径代谢。近年来发现，AA的CYP代谢途径与心肌缺血再灌注（MIR）损伤的关系密切。本文就AA的CYP代谢酶在心脏中的表达、CYP代谢途径对MIR的影响及作用机制做一综述。