前列腺素E2-EP4受体拮抗剂对大鼠实验性自身免疫性神经炎的作用

目的   探讨前列腺素E2-EP4受体拮抗剂L161982对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)的作用及其机制。方法   用牛周围神经髓磷脂(BPM)抗原乳剂免疫大鼠制备EAN模型。将21只Lewis大鼠随机分为治疗A组、治疗B组和对照组,治疗A组于免疫前1天至免疫后第8天(免疫阶段)每日腹腔注射 L161982(5mg/kg),治疗B组于免疫后第5至16天(发病阶段)每日腹腔注射 L161982(5mg/kg),对照组每日腹腔注射相同体积的L161982溶媒。观察各组发病时间和临床评分,于疾病高峰期(免疫后第16天)行坐骨神经组织病理学检查,免疫组化法检测坐骨神经中IFN-γ、IL-17表达,细胞计数试剂CCK-8法检测引流淋巴结淋巴细胞增殖反应。 结果   与对照组比较,治疗A组和治疗B组均能延迟EAN发病时间(P<0.05),减少坐骨神经炎性细胞浸润数目(P<0.05)和IFN-γ、IL-17表达(P<0.05),抑制BPM刺激T淋巴细胞增殖反应(P<0.05)。治疗A组疾病高峰期临床评分明显低于治疗B组和对照组(P<0.05)。结论   L161982可能通过抑制促炎性细胞因子IFN-γ、IL-17过度表达和自身反应性T淋巴细胞增殖减轻EAN病情,免疫阶段应用L161982具有更明显的治疗效果。     

雌二醇对Th1细胞极化与肝纤维化形成的影响

目的 探讨雌二醇(E₂)对Th1细胞极化以及与肝纤维化发生的影响。 方法 根据E₂水平将47例肝纤维化患者分为A组(E₂增高组)19例和B组(E₂正常组)28例,阴性对照作为C组(正常人)30例。应用流式细胞术检测T细胞亚群,化学发光法检测透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢP)和Ⅳ型胶原(CⅣ);ELISA法检测干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10),比较A、B组之间以及与C组的差异。 结果 A组E₂高于C组和B组(P<0.001)。A组HA、LN、PⅢP、CⅣ均高于C组(P<0.001, P=0.001, P=0.006, P<0.001),B组HA、LN、PⅢP、CⅣ也高于C组(均为P<0.001);A组PⅢP高于B组(P=0.045)。A组CD3⁺T细胞低于C组和B组(P<0.001, P=0.001),CD4⁺T细胞也低于C组和B组(P<0.001, P=0.024),B组CD3⁺、CD4⁺T细胞低于C组(P=0.002, P<0.001);A组、B组CD8⁺T细胞高于C组(P=0.001, P=0.012)。A组IFN-γ高于C组和B组(均为P<0.001),IL-2也高于C组和B组(P<0.001, P=0.003),B组高于C组(P=0.001, P=0.012);A组IL-4低于C组和B组(P=0.002, P=0.016),IL-10也低于C组和B组(P<0.001, P=0.012)。 结论 高E₂在延缓肝纤维化形成的同时也通过Th1细胞极化影响着机体的免疫功能,加速了肝纤维化的发展,E₂在肝纤维化的形成过程中扮演了双重角色。     

常山酮对小鼠子宫内膜异位症巨噬细胞极化的调控作用

目的 探讨常山酮(HF)对小鼠子宫内膜异位症(EMs)中巨噬细胞极化的调控作用。 方法 构建EMs小鼠模型,观察并计算小鼠异位灶体积。流式细胞术检测巨噬细胞标志物,包括M1型(CD16/32⁺, CD197⁺)和M2型(CD206⁺, CD14⁺);Western blotting检测巨噬细胞标志蛋白,包括M1型(iNOS, IL-12)和M2型(Arg-1, IL-10)的表达;ELISA检测各炎症因子水平,最后TGF-β1诱导单独分离的巨噬细胞,Western blotting和流式细胞术分别检测iNOS和Arg-1的表达及阳性细胞数目。 结果 HF抑制EMs鼠异位内膜的体积增加;使M1型细胞数目增加,M2减少;M1型标志蛋白的表达增加,M2降低;促炎因子含量升高,抑炎因子含量降低;HF使TGF-β1诱导的巨噬细胞中iNOS⁺细胞数目增加,IL-10⁺减少。 结论 HF可直接作用于巨噬细胞,维持EMs模型鼠炎症微环境的平衡,抑制巨噬细胞向M2型极化,减少EMs鼠异位内膜体积。     

血管内皮抑素协同肿瘤特异性DC-T细胞的抗肿瘤效应

目的 探讨血管内皮抑素联合肿瘤特异性DC-T细胞对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应。方法 建立Lewis肺癌C57BL/6鼠移植瘤模型, 培养小鼠来源肿瘤特异性DC-T细胞, 随机分为A组(PBS对照组)、B组(DC-T组)及C组(DC-T+血管内皮抑素组)。测量小鼠的体质量及肿瘤组织质量和体积, Western blotting检测各组肿瘤组织内血管内皮生长因子(VEGF)和乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达, 流式细胞术检测肿瘤组织细胞悬液内髓源抑制性细胞(MDSC)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM, M1/M2)、成熟的树突状细胞(mDC)和CD8⁺T细胞的比例。结果 与A组比较,B组(P<0.05)、C组(P<0.01)肿瘤生长明显受到抑制;相较于A组, B组VEGF表达下降, 且HIF-1α表达增加(P<0.05), C组VEGF表达明显下降, 且HIF-1α表达明显增加(P<0.01);与A组比较, B组(P<0.05)、C组(P<0.01)的MDSC和M2型TAM比例下降, M1型TAM升高, 肿瘤组织内mDC和CD8⁺T细胞比例增加。结论 血管内皮抑素联合肿瘤特异性DC-T细胞治疗明显减缓肿瘤生长, 有效逆转了肿瘤微环境的免疫抑制, 从而发挥了协同抗肿瘤效应。     

流式细胞术检测脊髓损伤大鼠局部浸润的巨噬细胞亚群

目的:建立检测脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠局部浸润巨噬细胞亚群的流式细胞术方法。方法:取5只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学SCI撞击仪系统制作重物坠落SCI模型为SCI组;另设5只假手术大鼠为假手术组。SCI术后7 d收集损伤的脊髓,制备单细胞悬液,采用Percoll原液密度梯度离心法浓缩浸润的巨噬细胞。分别以CD68与CD86或CD163的不同荧光标记抗体组合作为鉴定M1和M2型巨噬细胞的标志,用流式细胞术检测损伤局部巨噬细胞亚群的变化。结果:假手术组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞占细胞总数的(0.07±0.02)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(9.90±3.28)%和(4.95±0.17)%;而SCI组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞的百分比为(0.21±0.09)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(18.71±0.49)%和(27.07±3.74)%,差异均有统计学意义(P0.05～P0.01)。结论:以小鼠抗大鼠CD68、小鼠抗大鼠CD86、小鼠抗大鼠CD163为标志,采用流式细胞术可以成功检测SCI局部浸润的M1和M2型巨噬细胞亚群。     

新甲型H1N1流感重症死亡病例呼吸道及外周免疫器官病理形态学及免疫细胞的变化

目的 探索新型甲型H1N1流感病毒感染重症死亡病例呼吸道及外周免疫器官病理形态学及免疫细胞的变化。方法收集2009年北京甲型H1N1流感重症死亡病例8例,其中2例为系统尸体解剖标本,6例为床旁穿刺标本,以手足口病1例作为对照。HE染色观察病理形态学变化;免疫组织化学技术检测肺、脾和淋巴结免疫细胞变化。结果 实验组表现为坏死性支气管炎和周围炎,弥漫性肺损伤、肺出血、纤维化,巨噬细胞明显增生,淋巴细胞浸润不明显。甲型H1N1流感病毒血凝素和核蛋白抗原主要表达于呼吸道上皮及巨噬细胞。免疫细胞计数:CD68⁺巨噬细胞显著增多,CD20⁺B淋巴细胞、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞减少,CD56⁺细胞偶见,各类细胞与对照组比较差异无统计学意义。脾和淋巴结病变基本一致,灶状组织细胞增生,"噬红现象"明显,淋巴组织萎缩,残留滤泡内以滤泡树突状细胞(follicular dendritic cell, FDC)细胞为主。免疫细胞计数:CD68⁺巨噬细胞显著增多,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CD20⁺B淋巴细胞、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T免疫细胞数明显低于对照组(P<0.05);CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞的比值与对照组相比,差异无统计学意义;CD56⁺细胞在脾脏明显低于对照组,淋巴结内两组均偶见。结论 新型甲型H1N1流感重症患者外周免疫器官明显萎缩,特异性免疫功能减弱,其中细胞免疫反应下降更明显。     

IL-33诱导的小鼠过敏原非依赖性哮喘样模型肺组织免疫细胞及亚群的改变

目的 本研究旨在通过对白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）诱导的过敏原非依赖性哮喘样模型小鼠的观察,探索IL-33对小鼠肺组织中T、B淋巴细胞亚群,自然杀伤T（natural killer T,NKT）细胞和固有淋巴样2型细胞（type 2 innate lymphoid cells,ILC2）的生物学作用。方法 采用数字表法将小鼠随机分为氯化钠注射液（normal saline,NS）组和IL-33组,分别将NS、IL-33于1~6 d连续滴鼻,之后隔天滴鼻至18 d制备小鼠哮喘模型。采用有创肺功能检测小鼠气道高反应性;肺组织切片染色观察气道炎性反应;流式细胞术检测小鼠肺组织中T、B细胞亚群,NKT细胞和ILC2细胞数量及比例变化。结果 与NS组相比,鼻腔给予IL-33刺激可引起小鼠气道反应性增高,气道周围炎性细胞浸润和杯状细胞增生。IL-33组小鼠肺组织T细胞（CD3⁺T）及其亚群细胞数增多,Th2细胞（CD3⁺CD8^-IL-4⁺）出现优势分化,Th1/Th2细胞比例下降（P<0.01）;B细胞（CD19⁺B）及其亚群（B1a：CD19⁺CD23^-CD5⁺CD11b⁺,B1b：CD19⁺CD23^-CD5^-CD11b⁺和B2：CD19⁺CD23⁺B220⁺）以及ILC2细胞（lineage^-ICOS⁺ST2⁺）数出现明显增加（P<0.01）;NKT细胞（CD3⁺CD8^-CD49b⁺）比例无明显改变（P>0.05）。结论 IL-33可能通过直接或间接作用造成肺组织T、B淋巴细胞亚群和ILC2细胞的数量及比例改变,打破局部免疫系统平衡,引发哮喘炎性反应。     

HER2阳性乳腺癌细胞来源的可溶性PD-L1对巨噬细胞极化的调控作用探讨

目的 探讨人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌细胞对巨噬细胞极化的调控作用.方法 ELISA检测HER2-和HER2+乳腺癌患者外周血和乳腺组织中可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)水平;流式细胞术检测乳腺组织中M 1型(CD86+CD206-CD68+/CD68+)和M 2型(CD86-CD206+CD68+/CD68+)巨噬细胞比例;ELISA检测HER2-和HER2+乳腺癌细胞系培养上清液sPD-L1水平;流式细胞术检测HER2-和HER2+乳腺癌细胞系培养上清液处理后的外周血单个核细胞(PBMC)源巨噬细胞极化比例变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PBMC源巨噬细胞γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(INOS)、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)和精氨酸酶1(ARG1)mRNA表达水平.结果 HER2+乳腺癌患者外周血浆和组织中sPD-L1表达水平明显高于HER2-患者(均P<0.001);HER2+乳腺癌患者组织M1型巨噬细胞比例明显低于HER2-患者(P<0.001),M2型巨噬细胞比例明显高于HER2-患者(P<0.05);HER2-腺癌细胞系(SK-BR-3)和HER2+腺癌细胞系(MDA-MB-453)乳腺癌细胞条件性培养基(BCM)中sPD-L1水平随培养时间增加而上升;相比于HER2-腺癌细胞系,HER2+腺癌细胞系BCM中sPD-L1水平明显升高(P<0.05);HER2+腺癌细胞系BCM处理的M1型和M2型巨噬细胞比例及M1/M2比值明显高于HER2-腺癌细胞系(P<0.05或P<0.001);HER2+腺癌细胞系BCM处理组M1型巨噬细胞相关基因IFN-γ、IL-1β和iNOS mRNA水平明显降低(P<0.05),M2型巨噬细胞相关基因ARG1、TGF-β、IL-10 mRNA水平明显升高(P<0.001).结论 HER2+和HER2-乳腺癌细胞通过sPD-L1调控肿瘤组织免疫微环境巨噬细胞极化和功能.     

HIV感染者外周血CXCR5+CD4+T细胞水平与HIV病毒载量相关性

目的 研究外周血CXCR5+CD4⁺滤泡辅助性T细胞（follicular helper T,TFH）水平与HIV感染者血浆HIV病毒载量的相关性。方法 纳入2019年1月—2020年12月期间青海省第四人民医院收治的100例HIV感染者,根据CD4⁺T淋巴细胞计数分为A组（CD4⁺T淋巴细胞计数<200/ μL）23例和B组（CD4⁺T淋巴细胞计数200~<500/ μL）77例,以同期行健康体检80名健康者为对照组。分别检测HIV感染者外周血中HIV病毒载量、CD4⁺T淋巴细胞计数和TFH水平以及健康对照组CD4⁺T淋巴细胞计数以及TFH水平,并进行相关性分析。结果 A组血浆HIV病毒载量为（4.70±1.13） log /mL显著高于B组（2.74±0.74）log/mL（P<0.05）。A、B和健康对照组CD4⁺T淋巴细胞计数分别为（113.64±23.44）/μL、（334.10±31.52） / μL和（995.41±49.23） /μL,三者比较差异有统计学意义（P<0.05）。A、B和健康对照组TFH细胞计数绝对值分别为（18.63±5.67） /μL、（59.35±13.73） /μL和(194.85±25.78) /μL,A、B组均低于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;A、B和健康对照组TFH细胞百分比分别为（15.83±4.05）%、（17.57±5.08）% 和（19.59±4.25）%,A、B组均低于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关性分析显示,HIV病毒载量与CD4⁺T淋巴细胞计数以及TFH细胞计数呈负相关（P<0.05）。结论 HIV感染者外周血CD4⁺T淋巴细胞计数和TFH计数与HIV病毒载量呈负相关,且TFH计数可作为病情诊断和预后评估的重要指标,并有望成为HIV感染免疫治疗的新靶标。     

百令胶囊对环孢素A肾病大鼠免疫功能影响

目的观察百令胶囊对环孢素A大鼠免疫功能是否有调节作用。方法雄性SD大鼠随机分为对照组(C组,n=8)、模型组(M组,n=8)、百令组(T组,n=8)。第十二周末用流式细胞仪检测大鼠外周血T细胞亚群(CD4+、CD8+)、B细胞(CD45RA+)及NK细胞(CD161a+)占淋巴细胞的百分比,计算CD4+/CD8+比例。ELISA法测定外周血血清中IgG,IgM含量。结果 M组及T组的CD4+、CD8+T细胞及NK细胞占外周血淋巴细胞百分比与C组比较有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);M组CD4+/CD8+比值显著低于C组(P<0.05),T组CD4+/CD8+比值显著高于M组(P<0.05)。与C组比较,M组外周B细胞占淋巴细胞的百分比及血清IgG,IgM含量显著降低(P<0.05,P<0.01),与M组比较,T组外周B细胞占淋巴细胞的百分比及血清IgG、IgM含量显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论百令胶囊对环孢A肾病大鼠免疫失调及低下具有调节和促进作用。     

慢性粒细胞白血病骨髓巨噬细胞表达与细胞因子的相关性

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中巨噬细胞及白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-10、γ干扰素(INF-γ)的表达及相关性以明确其临床意义.方法 选择CML慢性期30例(CML-CP组)、加速期21例(CML-AP组)、急变期20例(CML-BP组)、经治疗后完全缓解的患者44例、未缓解7例以及30例缺铁性贫血患者(对照组),采用免疫组化染色法检测上述各组患者骨髓组织中CD68、CD163的表达变化;应用流式细胞仪分析相应患者骨髓IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ表达;比较骨髓巨噬细胞在CML患者不同时期骨髓组织CD68、CD163的表达差异与IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ表达变化的关系.结果 CML各组患者骨髓组织中CD68、CD163均有不同程度的表达,且随着病情的进展表达逐渐增高,即对照组＜CML-CP组＜CML-AP组＜CML-BP组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);同时,CD163与CD68阳性细胞数密切相关(P＜0.05).与对照组比较,CML-CP组骨髓IL-2、INF-γ明显降低(P＜0.05),IL-1β、IL-4、IL-10表达明显升高(P＜0.05);随着病情进展,IL-2、INF-γ表达逐渐降低,即对照组＞CML-CP组＞CML-AP组＞CML-BP组,其组间差异有统计学意义(P＜0.05),且与CD163表达呈负相关;IL-1β、IL-4、IL-10表达逐渐升高,对照组＜CML-CP组＜CML-AP组＜CML-BP组,组间差异有统计学意义(P＜0.05),并与CD163表达呈正相关.患者经治疗完全缓解后,CD68及CD163仍高于对照组(P＜0.05);IL-2、INF-γ有所回升,但仍低于对照组(P＜0.05),IL-1β、IL-4、IL-10有所降低,同样也高于对照组(P＜0.05).未缓解组所测指标与CML-BP组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 巨噬细胞在CML患者骨髓中的异常浸润并逐渐从M1型向M2型巨噬细胞激化及IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的异常表达,改变了正常骨髓微环境,有利于白血病细胞的生存和增殖分化,可能与CML的发生、发展相关.     

CD68+和CD163+巨噬细胞在口腔鳞状细胞癌中的浸润及作用

目的 了解CD68+、CD163+巨噬细胞的浸润数量与口腔鳞状细胞癌(OSCC)临床特征的相关性,探讨CD68+、CD163+巨噬细胞在OSCC中的作用及意义.方法 选取贵州医科大学附属口腔医院和贵阳市口腔医院2013-2016年手术切除的,经术后病理确诊,且有完整临床资料的OSCC患者42例,另设12例口腔颌面部正常组织作对照.应用免疫组织化学法检测CD68+、CD163+巨噬细胞在OSCC中的浸润数量,并分析其与OSCC临床特征的相关性.结果 OSCC中CD68+、CD163+巨噬细胞的浸润数量明显高于对照组(P<0.05);CD68+、CD163+巨噬细胞在中低分化的浸润数量明显高于高分化的浸润数量(P<0.05);CD68+巨噬细胞在有淋巴结转移的浸润数量明显低于无淋巴结转移的数量(P<0.05),在有淋巴结转移中CD163+巨噬细胞的浸润数量明显高于CD68+(P<0.05).CD68+和CD163+巨噬细胞在OSCC中的浸润数量呈正相关(r=0.48,P=0.00).结论 肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、M2型巨噬细胞对OSCC具有一定的作用,TAMs可能抑制OSCC的淋巴结转移,而M2型巨噬细胞可能促进OSCC的淋巴结转移.     

前列腺素E2对CD4+CD25+调节性T细胞免疫功能影响的实验研究

目的 探讨前列腺素E2对CD4+CD25+调节性T细胞免疫功能的影响。 方法 分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+ Treg,利用固相包被抗CD3和加入可溶性CD28辅助活化,予以PGE2刺激。根据刺激剂量不同,分成对照组、A (7 μmol/L)、B (14 μmol/L)、C (28 μmol/L)组,观察PGE2对Treg的增殖、IL-10、IL-2分泌和Foxp3表达的影响。 结果 PGE2刺激12 h,3组细胞较对照组增殖反应差异均无统计学意义(P＞0.05);B、C组IL-2表达显著降低(P＜0.05),而Foxp3表达明显升高(P＜0.05);C组IL-10分泌升高(P＜0.05);刺激24 h,B、C组细胞增殖反应较对照组显著增强(P＜0.05);A、B、C组IL-2分泌均下降(P＜0.05),而Foxp3表达均升高(P＜0.05);C组IL-10分泌升高(P＜0.05);刺激72 h,3组增殖反应、IL-10以及Foxp3表达均显著升高(P＜0.05),而IL-2分泌下降(P＜0.05)。 结论 PGE2能直接增强CD4+CD25+ Treg的免疫抑制功能,从而可能进一步对效应T细胞免疫功能产生影响。      

过表达miR-27a对急性脑梗死大鼠海马神经元损伤的影响及其机制

目的 探究过表达miR-27a对急性脑梗死大鼠海马神经元损伤的影响及可能机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Agomir阴性对照组(Agomir-NC组)和miR-27a agomir组(Agomir组),每组15只。采用改良Longa线栓法构建急性脑梗死大鼠模型,于造模前1天和造模成功时,分别经侧脑室注射15 mg/kg的agomir-NC或miR-27a agomir。术后72 h,采用Zea-Longa评分法对大鼠神经功能缺损进行评分;采用氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)测量大鼠脑梗死面积;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠海马组织细胞凋亡水平;qRT-PCR法检测各组大鼠海马组织miR-27a的表达水平;流式细胞术(FCM)检测各组大鼠海马组织中Iba-1⁺/CD68⁺小胶质细胞所占百分比;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α及iNOS的表达水平;Western blotting检测大鼠海马组织中TLR4信号通路相关蛋白TLR4、MyD...     

生理状态下大鼠大网膜I型与II型乳斑内CD68、CD163阳性巨噬细胞数量对比研究

目的 对比研究生理状态下大鼠大网膜I型与II型乳斑内CD68、CD163阳性巨噬细胞的数量.方法 SD大鼠大网膜铺片,CD68、CD163双重标记,免疫荧光显微镜下观察计数CD68、CD163阳性巨噬细胞,对比分析I型与II型乳斑内CD68、CD163阳性巨噬细胞的数量.结果 I型与II型乳斑内均可见CD68阳性、CD163阳性巨噬细胞;I型乳斑内CD68阳性巨噬细胞与CD163阳性巨噬细胞数量比较差异无统计学意义（P﹥0.05）;II型乳斑内CD68阳性巨噬细胞与CD163阳性巨噬细胞数量对比差异无统计学意义（P﹥0.05）;I型与II型乳斑内CD68阳性巨噬细胞与CD163阳性巨噬细胞的数量基本相同.结论 生理状态下大鼠大网膜I型与II型乳斑内均存在CD68、CD163阳性巨噬细胞;均存在巨噬细胞的极化分型,主要以M2型巨噬细胞的形式存在,推断乳斑具有发挥降低炎症反应,发挥组织修复的功能.     

IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤中的保护作用

 目的 探讨IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)诱导的肝细胞损伤中的保护作用及其相关分子机制。方法 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测在不同极化类型的人单核巨噬细胞THP-1中IL-37 mRNA和蛋白质水平。通过慢病毒转染构建稳定过表达IL-37的细胞株,qRT-PCR检测CD206、CD86、ARG1和iNOS mRNA水平,流式细胞术检测CD163、CD86蛋白质水平。通过Transwell法将THP-1细胞与人肝细胞L02细胞共培养并构建H/R模型,CCK-8法及流式细胞术检测L02细胞存活率及凋亡率,ELISA检测细胞培养液中谷丙转氨酶(alanine transaminase, ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)含量,HE染色观察细胞形态变化。Western blot检测THP-1细胞中STAT6及其磷酸化水平。结果 M2型巨噬细胞中IL-37 mRNA及蛋白质水平上调。IL-37促进巨噬细胞M2型极化。IL-37诱导的M2型巨噬细胞与L02细胞共培养,在H/R状态下显著提高肝细胞存活率(P=0.015),并降低细胞凋亡率和ALT、AST水平(P＜0.001),减轻细胞损伤。 Western blot提示过表达IL-37的 THP-1细胞中STAT6蛋白质磷酸化水平上调(P＜0.01)。结论 IL-37能促进巨噬细胞M2型极化,并对H/R诱导的肝细胞损伤有保护作用,其机制可能与STAT6信号通路有关。     

宫颈癌细胞培养上清液诱导THP-1巨噬细胞M2表型

目的：研究宫颈癌细胞培养上清液诱导并维持THP-1巨噬细胞M2表型的作用。方法：培养宫颈癌 细胞系HeLa细胞至第3天，收集细胞培养上清液用以检测肿瘤相关细胞因子（IL-4、IL-6及IL-10）及生长因 子（ANG -2、HGF、VEGF）分泌情况。将培养至对数生长期的巨噬细胞分为空白对照组（Mθ组）、M2细胞诱导组（M2组）以及HeLa细胞培养上清液处理组（Mθ+sHeLa组）。其中M2组予以20ng/mLIL-4、20ng/mLIL-10处理 使其向M2细胞极化，Mθ+sHeLa组加入50%HeLa细胞培养上清液处理培养3d。随后，利用流式细胞术检测 各组细胞表面HLA-DR、CD163、CD206的变化；同时，收集细胞培养上清液并检测其中相关细胞因子、生长 因子及TGF-β3的含量。最后，采用流式细胞术及Westernblot检测巨噬细胞中JAK-STAT6信号通路的变化。 结果：HeLa细胞培养上清液中IL-6、HGF、VEGF含量较多。经过HeLa细胞培养上清液处理后的巨噬细胞表面 CD163和CD206含量升高（ P ＜0.05）。相较于Mθ组，M2组及Mθ+sHeLa组的巨噬细胞培养上清液中的相关细胞 因子（IL -4、IL-6及IL-10）、生长因子（ANG -2、HGF、VEGF）及TGF-β3含量升高（ P ＜0.05）。去除HeLa细胞培 养上清液后48h后，相较于Mθ组，Mθ+sHeLa组分泌相关细胞因子、生长因子及TGF-β3含量升高（ P ＜0.05）。 流式细胞术及Westernblot结果显示，与Mθ组比，Mθ+sHeLa组的pSTAT6水平升高（ P ＜0.05）。结论：HeLa 细胞培养上清液可通过激活JAK-STAT6信号通路诱导的THP-1巨噬细胞向M2表型的极化促进肿瘤的生长和血 管生成。     

人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

  目的  探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响。  方法  利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体，通过扫描电镜及Western blot 鉴定外泌体。将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理；SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养；SHG449+M0+exosome组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养后，加入标记有PKH-67的外泌体使其进入M0型巨噬细胞。  结果  （1）人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体成功提取，且进入M0型巨噬细胞；（2）外泌体进入胶质瘤细胞SHG449诱导极化的巨噬细胞后细胞形态转化，且M2型巨噬细胞活化标志物Arginase、CD206以及CCL22，TGF-β表达下降（Arginase:P < 0.01，CD206:P < 0.05， CCL22:P < 0.05，TGF-β:P < 0.01），M1型活化标志物iNOS，CD68以及IL-1β，TNF-α表达上升（iNOS:P < 0.01，CD68:P < 0.01，L-1β:P < 0.000 1，TNF-α:P < 0.001）；（3）被外泌体诱导极化的巨噬细胞导致胶质瘤细胞增殖能力下降（P < 0.05），凋亡能力上升（P < 0.000 1）。  结论  人骨髓间质细胞分泌的外泌体可抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2表型转化，并诱导其向M1表型转化，调节肿瘤免疫微环境，从而达到抑癌的作用。