X射线对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的初步实验研究

目的：初步探讨一定剂量的X射线对体外培养乳鼠心肌细胞的损伤。方法：全自动生化分析仪定量测定不同剂量X射线照射后第24小时心肌细胞培养基乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase,LDH）的含量;激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞经40GyX射线照射后第24h的形态学改变。结果：心肌细胞有较高的辐射抗性,在0Gy～30Gy的放射剂量下心肌细胞培养基乳酸脱氢酶的含量变化不是很明显（P〉0．05）;当放射剂量≥40Gy时培养基乳酸脱氢酶的含量显著升高（P〈0．05）;激光扫描共聚焦显微镜观察到经40GyX射线照射后第24h的典型的心肌细胞形态学改变。结论：一定剂量的X射线对心肌细胞有直接损伤作用。     

乳鼠心肌细胞原代培养方法

目的:探讨新生乳鼠心肌细胞原代培养的条件和方法,培养纯度高、存活时间长的心肌细胞。方法:参照Simpson等的方法加以改进,采用含0.05%EDTA的胰蛋白酶多次消化心肌,差速贴壁1.5 h纯化心肌细胞进行培养,培养过程在37℃、5%CO2条件下进行。用台盼蓝染色法检测培养细胞的存活率,倒置显微镜下观察细胞形态变化,记录3 d、6 d、9 d、12d心肌细胞搏动频率,测定细胞活力。结果:原代培养乳鼠心肌细胞生长良好,培养3 d、6 d、9 d、12 d时,用台盼蓝染色法检测心肌细胞的存活率均大于96%,培养12 d时仍为97.02%。在倒置显微镜下观察,培养48 h左右的细胞之间相互连接的并有细胞搏动。培养6 d、9 d、12 d的细胞与培养3 d的相比,活力增强,差异显著(P<0.05),从6 d开始,细胞活力并未显著增强,两两比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:应用此方法培养的心肌细胞纯度高,存活时间长,是一种稳定、可靠的原代心肌细胞培养方法。     

体外培养成人心肌细胞凋亡模型的建立

目的　建立缺氧诱导体外培养的成人心肌细胞凋亡情况。方法　用胰蛋白酶和胶原酶进行消化 ,用差速黏附贴壁法、Brdu加入和人为破坏成纤维细胞法纯化心肌细胞 ,用IMDM培养基培养 ,4～ 6d后将体外培养的成人心肌细胞置于 3 %氧气、92 %氮气及 5 %二氧化碳孵箱中 ,6、12、2 4、48h缺氧后再恢复正常条件培养 4h ,造成缺氧损伤所致细胞凋亡模型 ,分别用倒置显微镜、电镜、TUNEL法技术检测凋亡发生的情况。结果　心肌细胞经历缺氧损伤后 ,倒置显微镜、电镜、TUNEL染色均观察到凋亡阳性细胞。TUNEL法定量检测 ,心肌细胞缺氧培养 6、12、2 4、48h后 ,其凋亡率分别为 :( 3 3± 0 9) %、( 8 3± 1 8) %、( 16 1± 2 6) %和( 19 4± 2 3 ) %。结论　心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高 ,认为缺氧一定时间可以诱导体外培养的成人心肌细胞凋亡     

萝卜硫素对阿霉素所致体外培养心肌细胞凋亡的影响

目的观察萝卜硫素对阿霉素所致心肌细胞凋亡的保护作用。方法 2012年3月—2013年3月选择出生1~3 d的SD大鼠30只,进行心肌细胞培养。培养4 d后心肌细胞随机分为5组:正常对照组、阿霉素损伤组、萝卜硫素低剂量组、萝卜硫素中剂量组、萝卜硫素高剂量组各6只。作用48 h后行心肌细胞活力测定、超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量、心肌细胞凋亡率测定。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果阿霉素损伤组心肌细胞活力、SOD活性[0.296±0.011、(2.296±0.011)U/L]低于正常对照组(P0.05),高、中、低剂量萝卜硫素组心肌细胞活力(0.491±0.014、0.411±0.012、0.341±0.052)、SOD活性[(4.452±0.014)、(3.981±0.012)、(3.341±0.052)U/L]高于阿霉素损伤组(P0.05);阿霉素损伤组MDA含量、心肌细胞凋亡率[(3.247±0.241)μmol/L、(50.8±2.2)%]高于正常对照组(P0.05),高、中、低剂量萝卜硫素组MDA含量、心肌细胞凋亡率低于阿霉素损伤组(P0.05)。结论萝卜硫素可通过其抗氧化及抑制心肌细胞凋亡作用对阿霉素所致心肌损伤起到保护作用。     

60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响

目的研究60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和照射组,照射组细胞分别用60Co γ射线5Gy、10Gy、20Gy单剂量照射心肌细胞,照射后48h检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,流式细胞仪检测60Coγ射线照射对体外培养的心肌细胞凋亡的影响,照射后48h及120h用结晶紫试验及MTT试验检测照射后心肌细胞活性变化,结果照射组LDH浓度明显高于未照射组,且随照射剂量增加而升高。照射后48h凋亡细胞较对照组升高,凋亡细胞比例与照射剂量呈正相关。结晶紫试验及MTT试验均提示照射后48h照射组心肌细胞活细胞活性与对照组无明显差异,照射后120h照射组活细胞活性明显低于对照组,且与照射剂量相关。结论60Co γ射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞,降低体外培养的心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡。     

氟化物致体外培养大鼠心肌细胞的形态损伤

应用原代培养的心肌细胞作为模型,研究氟化物毒性作用对体外培养心肌细胞的形态损伤,近年来文献中少见报道。用扫描电镜观察培养的细胞,视野广,可观察到细胞簇的全貌及细胞表面的超微改变。笔者通过扫描电镜观察在氟化物作用下体外培养心肌细胞的形态学改变,探讨了氟化物致心肌     

硒对体外心肌细胞过氧化损伤保护和骨架蛋白actin表达的影响

目的探讨硒对H2O2损伤心肌细胞的保护作用以及α-actin和β-actin表达的影响。方法培养乳鼠心肌细胞随机分为对照组,H2O2组,Se 0.05、0.5、1.0和5.0μmol/L组,采用透射电镜观察实验心肌细胞的超微结构,比色法检测心肌细胞培养介质中LDH和MDA含量,Western Blot检测α-actin和β-actin蛋白的表达。结果 Se 0.5μmol/L可减轻心肌细胞超微结构损伤;各加硒组LDH和MDA水平较H2O2组显著降低(P<0.05),较对照组显著升高(P<0.05),其中Se 0.5μmol/L组LDH和MDA含量在各加硒组中最低;Se 0.5μmol/L组α-actin表达水平较H2O2组升高并高于正常对照组;Se 0.5μmol/L组β-actin表达水平较损伤组升高,低于正常对照组。结论 0.5μmol/L硒对H2O2损伤心肌细胞具有较好的保护作用,可维持和保护α-actin和β-actin的表达,参与细胞骨架蛋白重构。     

三七总皂甙对新生鼠窒息心肌细胞凋亡的影响

目的:建立近似人类新生儿窒息的病理过程的新生鼠窒息心肌损伤模型,观察心肌细胞凋亡及使用三七总皂甙(TPNS)后心肌细胞凋亡的变化。方法:出生7天SD大鼠88只,雌雄不拘,随机分为对照组(n=8只),窒息组(n=40只),窒息+TPNS(n=40只)。将大鼠分别放入55ml的磨口瓶中,瓶内放入0.005kg的钠石灰,待大鼠安静后,窒息组,窒息+TPNS组塞紧瓶塞0.5h,取出吸氧120min后,放回母鼠身边继续喂养,分别于窒息后6h、24h、48h、72h、7天后处死;对照组放入55ml的磨口瓶中0.5h不塞瓶塞,取出吸氧120min后放回母鼠身边继续喂养,6h后全部处死。采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡,每组各随机抽取一个标本做电镜片HE染色的光镜病理片。结果:①窒息组、窒息+TPNS组各时段的心肌病理切片有明显的心肌细胞坏死,炎性细胞浸润和出血;电镜切片下有心肌细胞线粒体普遍肿胀,细胞核肿胀,染色质边集,肌纤维融合,Z线不清,线粒体空泡,脊模糊稀疏;对照组光镜和电镜病理切片均正常;②窒息组,窒息+TPNS组各时段心肌细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01),有明显统计学差异;③窒息组各时段心肌细胞凋亡率明显高于窒息+TPNS组(P<0.05)。结论:窒息时心肌细胞凋亡率上升是心肌损伤的一种形式;使用三七总皂甙后能明显减轻心肌细胞凋亡率,提示三七总皂甙对窒息所致心肌损伤有明显保护作用。     

维生素E及叶酸对高血糖孕鼠子代心肌细胞凋亡的影响

目的探讨维生素E(Ve)及叶酸对高血糖诱导的乳鼠心肌细胞凋亡蛋白caspase-3表达的影响。方法将50只清洁级成年SD孕鼠随机分为5组,分别为正常对照组(A组)、妊娠糖尿病组(B组)、叶酸组(C组)、维生素E组(D组)和Ve+叶酸组(E组)。除对照组外,其余大鼠于妊娠d 1腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg制备妊娠糖尿病动物模型,对照组给予等量0.1 mmol/L(p H 4.5)柠檬酸钠—柠檬酸缓冲液。孕d 5,D、E 2组予50 mg/kg维生素E灌胃,C、E组予0.4 mg/kg叶酸灌胃,A、B组予等量的生理盐水灌胃,持续7 d。取自然分娩的乳鼠心肌组织于光镜下观察心肌结构的改变,应用免疫组织化学法检测各组乳鼠心肌细胞caspase-3抗原的表达。蛋白免疫印迹(western-blot)检测各组乳鼠心肌细胞caspase-3的表达。结果 (1)造模前各组血糖值比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后,B、C、D、E组血糖值明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);B、C、D、E 4组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)光镜下观察B、C、D、E组乳鼠心肌组织呈现不同程度损伤,表现为细胞坏死、水肿、轮廓不清,心肌纤维排列疏松紊乱、炎性细胞浸润。(3)5组乳鼠心肌细胞凋亡蛋白caspase-3的表达不同,差异有统计学意义(P<0.01)。结论妊娠糖尿病孕鼠对子代心肌细胞凋亡影响明显,孕期补充维生素E、叶酸对乳鼠心肌细胞凋亡有明显改善作用,且叶酸抑制凋亡的作用优于维生素E,同时补充维生素E和叶酸的效果优于单独补充一种。     

高糖对乳鼠体外心肌细胞TGF-β1分泌的影响及胰岛素干预作用

目的观察高糖对心肌细胞分泌转化生长因子TGF-β1(TGF-β1)的影响和胰岛素的干预作用。方法在乳鼠心肌细胞培养基中，加入高糖，用ELISA法检测培养液中TGF-β1的含量，在高糖刺激的同时分别加入不同浓度胰岛素再次检测。结果高糖刺激后TGF-β1分泌增加，加入低浓度的胰岛素后分泌量减少，加入高浓度胰岛素后分泌进一步增加。结论高糖刺激心肌细胞TGF-β1分泌增加，低浓度的胰岛素可拮抗此作用，而高浓度胰岛素与高糖协同作用则增加TGF-β1分泌。     

低剂量X线辐射对A549细胞凋亡的适应性反应

目的 研究低剂量X射线辐照对A549细胞凋亡的适应性反应及时间效应,并初步探索适应性效应的可能机制。方法 分别用X射线50 mGy、200 mGy、500 mGy照射A549细胞,间隔3 h、6 h、12 h、24 h、48 h后,用20 Gy的效应剂量照射,检测细胞凋亡;并检测初始剂量和效应剂量间隔照射6 h的细胞周期分布及DNA损伤。20 Gy及0 Gy照射组为对照组。结果 低剂量间隔3 h、6 h、12 h、24 h后再接受20 Gy照射,50 mGy～20 Gy、200 mGy～20 Gy、500 mGy～20 Gy 3组的细胞凋亡率均分别显著低于20 Gy组（P < 0.05）;间隔48 h,50 mGy～20 Gy、200 mGy～20 Gy、500 mGy～20 Gy 3组的细胞凋亡率与20 Gy组无显著性差异。低剂量照射与效应剂量间隔6 h,50 mGy及200 mGy叠加20 Gy效应剂量组,G0/G1期细胞百分数显著低于20 Gy剂量组（P < 0.05）,50 mGy～20 Gy、200 mGy～20 Gy组G2/M期细胞百分数显著降低（P < 0.05）,500 mGy～20 Gy组G0/G1及G2/ M期细胞百分数与20 Gy照射组无统计学差异。与20 Gy组相比,3个低剂量叠加20 Gy组细胞及DNA损伤程度降低,但无统计学意义。结论 低剂量X射线照射能诱导A549细胞凋亡的适应性反应,且与初始剂量和效应剂量间隔的时间有关,适应性效应可能与低剂量X射线引起的细胞周期改变有一定关系。     

胚胎干细胞维持基因组稳定性机制的研究进展

胚胎干细胞(ESCs)具有体外无限增殖及高度自我更新能力,体外一定条件下可分化为3个胚层来源的各种细胞。胚胎干细胞对损伤高度敏感,任何遗传突变都会影响其基因组稳定性及整个细胞系功能,甚至将突变遗传给子代细胞。因此胚胎干细胞必须具有某种高度有效机制来预防或修复DNA损伤,从而维持基因组的稳定性。简要综述胚胎干细胞维持基因组稳定性的机制。     

槲皮素抑制HSP70表达对紫外线C致DNA损伤的影响

目的研究热休克蛋白70(HSP70)在紫外线C致DNA损伤中的保护作用。方法用254 nm紫外线不同照射剂量(10,20,40,80 J/m2)照射槲皮素(quercetin)抑制HSP70表达的A549细胞株(A549/quercetin),用Western-blot检测HSP70的水平,用碱性单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,用彗星细胞率和Olive尾矩评价DNA损伤情况。A549细胞作为正常对照组,DMSO处理作为溶剂对照组(A549/DMSO)。结果无论在A549组、A549/DMSO组,还是在A549/quercetin组,DNA损伤的彗星细胞率随着紫外照射的剂量增加而逐渐增加,在10 J/m2时,未观察到HSP70的保护作用,3组的彗星细胞率差异无统计学意义;在20 J/m2照射时,可以观察到HSP70的保护作用,但不明显;40 J/m2照射时,观察到HSP70对DNA有很明显的保护作用;80 J/m2照射时,HSP70的保护作用又逐渐地消失了。进一步分析40 J/m2照射的Olive尾矩显示,与A549组或A549/DMSO组相比,A549/quercetin组Olive尾矩明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HSP70能保护细胞免受一定剂量范围内的紫外线C照射引起的DNA损伤。     

环孢素A对滋养细胞生物学行为的良性调节作用

环孢素A（CsA）是一种强效免疫抑制剂,在临床上被广泛应用于防治器官移植后排斥反应和治疗某些自身免疫性疾病。体外研究发现,低浓度CsA既能促进滋养细胞增殖、减少滋养细胞凋亡,也能增强滋养细胞的迁移与侵袭。体内研究发现,低剂量CsA可明显降低自然流产模型小鼠的胚胎吸收率,改善妊娠结局。这些研究结果提示,低剂量CsA对滋养细胞的生物学行为具有良性调节作用,有可能成为防治自然流产、子痫前期等滋养细胞功能异常导致的妊娠相关疾病的一种新策略。     

移动式X射线机

概述了移动式X射线机的工作原理、基本结构、存在的问题及发展前景,为购置提供了良好的建议。     

轮状病毒性肠炎并肠道外损伤73例临床分析

目的了解赣州地区2008年4月～2010年11月轮状病毒导致的肠道外损伤及发病情况。方法对73例轮状病毒感染患儿的各系统损害及心肌酶谱变化情况作临床分析统计。结果轮状病毒性肠炎肠道外损伤以心肌损伤为首位,其次为呼吸道、肝、肾、神经系统,轮状病毒性肠炎心肌损伤发生率明显高于非轮状病毒性肠炎。结论轮状病毒性肠炎肠道外损伤发生率高,临床工作中应注意肠道外脏器的功能监测,早期发现肠道外脏器损害并给予治疗,避免病情进一步加重。     

轮状病毒性肠炎并肠道外损伤73例临床分析

目的了解赣州地区2008年4月～2010年11月轮状病毒导致的肠道外损伤及发病情况。方法对73例轮状病毒感染患儿的各系统损害及心肌酶谱变化情况作临床分析统计。结果轮状病毒性肠炎肠道外损伤以心肌损伤为首位,其次为呼吸道、肝、肾、神经系统,轮状病毒性肠炎心肌损伤发生率明显高于非轮状病毒性肠炎。结论轮状病毒性肠炎肠道外损伤发生率高,临床工作中应注意肠道外脏器的功能监测,早期发现肠道外脏器损害并给予治疗,避免病情进一步加重。     

酒精致雄性大鼠生殖细胞损伤的实验研究

目的:探讨酒精对雄性哺乳动物生殖细胞损伤的机理研究。方法:实验组用不同剂量44°白酒对成年雄性大鼠灌胃,造成饮酒后生殖细胞损伤模型,饮酒2个生精周期后断头取血并做内脏和生殖系统病理切片,光镜观察及体视学图像分析,并做交配后子鼠畸形的观察。结果:睾丸与附睾相对重量随饮酒量增大和周期延长而降低。精子活力显著低于对照组(P<0.01),精子活动率较正常对照组明显降低(P<0.05),精子畸形率明显高于对照组(P<0.01),血清LH、FSH及T均较正常水平低,病理及体视学显示高剂量组曲精小管萎缩变细,间隙增宽,心、肝、脑、肾无异常。结论:酒精对雄性哺乳动物生殖细胞有明显的损伤作用,减少饮酒对优生有重要意义。     

二甲双胍对子宫内膜异位症在位内膜细胞增殖与凋亡的影响

目的研究二甲双胍（metformin）对体外培养子宫内膜异位症（EMS）在位内膜细胞增殖与凋亡的影响。方法选择2012年1月至7月于河北医科大学附属邢台市人民医院妇科就诊的50例EMS患者的在位子宫内膜为研究对象,并纳入研究组（均经腹腔镜或开腹手术确诊）。选择同期在本院因宫颈病变、子宫纵隔、卵巢畸胎瘤、单纯卵巢囊肿行手术治疗的88例患者的子宫内膜为对照组（均排除EMS）。两组患者的年龄等一般临床资料比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。建立细胞模型,以不同浓度（1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1 000μmol/L）二甲双胍干预24h、48h、72h,通过3-（4,5二甲基噻唑-2）-2,5二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测不同浓度二甲双胍对EMS在位内膜细胞增殖的影响,并应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变及细胞凋亡情况,应用酶联免疫吸附（ELISA）法测定检测其对Bcl-2、Bax表达水平的影响。本研究遵循的程序符合河北医科大学附属邢台市人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与受试对象签署临床研究知情同意书。结果不同浓度二甲双胍对对照组患者的正常在位内膜细胞增殖无明显抑制作用。二甲双胍干预48h、72h后,EMS患者的在位内膜细胞增殖明显受到抑制（P〈0.05）,以二甲双胍浓度为1 000μmol/L时最为明显（P〈0.01）,并呈时间-剂量依赖性。二甲双胍干预后EMS患者在位内膜细胞G1期比例明显高于对照组（P〈0.05）。二甲双胍浓度为10μmol/L、100μmol/L、1 000μmol/L时,EMS在位内膜细胞的Bcl-2表达水平较对照组降低,Bax表达水平较对照组升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论二甲双胍可显著抑制EMS在位内膜细胞增殖,促进其凋亡,阻滞细胞周期进程。