采用负压吸引种植技术体外构建组织工程骨

目的探讨有效体外构建高质量组织工程骨的细胞种植技术。方法将分离、培养的兔成骨细胞分别通过负压吸引种植技术(A组)及常规种植方法(B组)接种于β-磷酸三钙(β-TCP)支架,计算接种时细胞与支架材料的复合效率,种植后24h通过扫描电镜观察材料中细胞数量及分布情况。体外培养第3、7、10、14d,检测工程骨中细胞数、碱性磷酸酶(ALP)活性。3周后,免疫组化检测组织工程骨Ⅰ型胶原的分泌情况。结果 A组细胞与支架材料平均复合率、Ⅰ型胶原染色面积、各时间点细胞数及ALP活性表达均高于B组(P<0.05)。结论与传统种植方法比较,采用负压吸引种植技术能在体外形成更高质量的组织工程骨。     

Matrigel凝胶和壳聚糖/磷酸甘油凝胶两种支架体外构建组织工程软骨的比较

目的 探讨适合构建组织工程软骨的细胞支架材料.方法 将体外分离培养的兔关节软骨细胞种植于Matrigel凝胶和壳聚糖/磷酸甘油(C/GP)凝胶两种支架上体外培养3周,对组织工程软骨进行大体标本、HE染色,ELISA检测培养上清液中透明质酸和Ⅱ型胶原的含量.结果 软骨细胞在两种支架内均生长良好,Matrigel凝胶中软骨细胞培养3周后仍能维持软骨细胞的表型,其分泌透明质酸和Ⅱ型胶原的能力较C/GP凝胶中软骨细胞强,并可更好的促进受损的软骨细胞增殖.结论 Matrigel凝胶和C/GP凝胶均可作为软骨细胞载体修复关节软骨缺损.Matrigel凝胶支架更适合软骨细胞的贴附生长,有利于维持软骨细胞的表型,是较好的软骨组织工程细胞支架.     

循环应力对构建组织工程软骨的影响

目的 探讨循环应力对体外构建组织工程软骨的影响。方法 分离兔关节软骨细胞,体外扩增培养后种植于PGA无纺网支架上。实验组在循环应力下培养（0-200kPa,0．1Hz）,对照组静态培养。实验组和对照组均培养4周。4周后取出组织工程软骨行大体标本观察。组织化学和免疫组织化学染色观察组织工程软骨结构以及Ⅱ型胶原分泌情况。结果 体外培养4周时,实验组的组织工程软骨形态和色泽更加接近正常透明软骨,厚度和组织弹性优于对照组,实验组的软骨细胞数量和细胞外基质合成明显增加,分泌Ⅱ型胶原能力更强。结论 循环应力刺激软骨细胞合成分泌Ⅱ型胶原增加,有利于在体外构建组织工程软骨。     

体外组织工程软骨的构建及其对关节软骨损伤的修复

目的探讨体外组织工程软骨的构建及其对关节软骨损伤治疗的可行性。方法①体外分离、培养、扩增骨髓基质干细胞,诱导分化培养为软骨样细胞;②以胶原膜为支架在体外构建组织工程软骨;③建立兔髋关节软骨缺损动物模型16只,对照组8只,实验组8只;应用组织工程软骨修复兔股骨头关节软骨缺损,8、16周后观察修复效果。结果8周后大体标本显示关节软骨缺损为白色软骨样组织填充,组织切片显示缺损处有新生软骨形成,阿新兰染色和Ⅱ型胶原免疫组化检测有GAG和Ⅱ型胶原强阳性表达;16周后关节软骨缺损仍为软骨样组织修复,部分见表面粗糙,镜下见软骨细胞排列紊乱。结论体外构建的组织工程软骨可用于修复兔股骨头关节软骨缺损,较长期的观察结果显示有退变倾向。     

PKH26标记和分子荧光活体成像技术在软骨组织工程研究中的应用

目的 探讨PKH26荧光标记和分子荧光活体成像技术在软骨组织工程中的应用。方法 用PKH26荧光标记犬软骨细胞,种植到多孔支架上,体外培养1周后异位移植到裸鼠背部,4周后用分子荧光活体成像系统示踪,并与X线检查结果对比。然后处死裸鼠取材,与免疫组织化学染色和免疫荧光观察结果对比。结果 4周分子荧光活体成像系统观察裸鼠背部标本处呈圆形强荧光,表明组织工程软骨在裸鼠体内生长良好。组织学切片结果显示番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色阳性,荧光显微镜下观察结果显示组织工程化软骨中细胞均呈红色荧光,Ⅱ型胶原免疫荧光染色呈绿色荧光,叠加后呈黄色荧光。结论 PKH26荧光标记和分子荧光活体成像2种方法结合应用于软骨组织工程中,能够较理想地且大体无创伤性评估组织工程化软骨组织在体内的生长情况。     

关节软骨组织工程支架材料研究进展

组织工程学是一门交叉学科,它利用工程学和生命科学的原理,来研究和发展具有生物活性的人工替代物.用以维持、恢复或提高人体受损组织的功能.目的是利用人体活细胞在适宜的支架材料上生长成天然的组织和器官以替代人体内受损和缺失的组织和器官.支架材料的选择是组织工程学研究的焦点之一.支架材料作为人工细胞外基质,为功能细胞的停泊、生长、繁殖、新陈代谢提供三维空间.理想的软骨组织工程支架应具有良好的生物组织相容性、良好的结构相容性、良好的表面活性、生物可降解性、可塑性和一定的机械强度.目前,关节软骨组织工程支架材料研究主要涉及天然材料、人工合成材料、人工和天然复合材料、纳米材料.本文就关节软骨组织工程支架材料进行综述.     

组织工程化软骨形成的细胞浓度选择

目的探讨兔组织工程化软骨形成的合适细胞浓度。方法分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后以1,2,4,6,8,10×107/ml 6种不同浓度种植到PLGA支架上。在体外培养软骨细胞支架复合物,4周终止培养,进行HE、Masson组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。结果体外培养的软骨组织,与正常软骨组织有相似的组织学特性,形成软骨组织适宜细胞浓度为4×107/ml。结论体外形成兔软骨组织的适宜细胞接种浓度为4×107/ml。     

壳聚糖、Ⅱ型胶原和PGA三种支架体外构建组织工程软骨的比较研究

目的 观察兔关节软骨细胞在壳聚糖、Ⅱ型胶原、聚羟基乙酸(PGA)三种细胞支架上的生长情况,探讨更适合构建工程软骨的细胞支架材料.方法 多聚赖氨酸包埋壳聚糖、Ⅱ型胶原和PGA三种多孔海绵支架.将体外分离培养的兔关节软骨细胞种植于三种支架上.体外培养4周,对组织工程软骨进行大体标本观察和HE染色,检测软骨内DNA含量、Ⅱ型胶原和糖胺多糖(GAG)的分泌量.结果 软骨细胞在壳聚糖支架内生长良好,培养4周后仍能维持软骨细胞的表型,其分泌Ⅱ型胶原和GAG的能力较其他两种支架好(P＜0.01).结论 壳聚糖支架更适合软骨细胞的贴附生长,有利于维持软骨细胞的表型,是较好的软骨组织工程细胞支架.     

组织工程心脏瓣膜体外构建的初步研究

目的:初步体外构建组织工程人工心脏瓣膜。方法:种子细胞选用胸骨骨髓,抽取后分离出人骨髓间充质干细胞,体外培养,扩增待用。脱细胞瓣膜支架的构建应用破膜剂曲拉通-脱氧胆酸钠对新鲜猪主动脉瓣膜36片(实验组)进行处理48h后,与对照组未经处理的猪主动脉瓣膜(36片)进行对比,在光镜和电镜下观察脱细胞效果。将人骨髓间充质干细胞接种于脱细胞瓣膜支架上静态培养7d,观察细胞-支架复合体生长状况。结果:曲拉通-脱氧胆酸钠法脱细胞彻底,保持原有纤维结构。种植的人骨髓间充质干细胞7d后可生长于瓣膜支架的表面。结论:曲拉通-脱氧胆酸钠法是一种较为理想的猪瓣膜脱细胞方法;人骨髓间充质干细胞能在脱细胞猪瓣膜支架上较好地黏附和生长,从而初步构建组织工程人工心脏瓣膜。     

魔芋葡甘聚糖/透明质酸钠复合材料构建组织工程髓核支架的实验研究

目的：构建一种新型的组织工程髓核支架材料,为应用组织工程技术修复退变椎间盘的研究奠定实验基础。方法以魔芋葡甘聚糖（konjac glucomannan,KGM）、透明质酸钠（Sodium hyaluronate,SH）为原料,应用真空冷冻干燥、化学交联等技术构建一种新型的组织工程髓核支架,同时对其理化性能及生物学、力学性能进行初步分析。结果支架材料大体及光学显微镜下观察呈三维立体多孔结构;扫描电子显微镜（ scanning electronic microscopy, SEM）观察显示支架材料为三维不均匀多孔结构;噻唑蓝比色法（MTT）分析结果显示支架材料生物相容性良好,无细胞毒性;体外生物降解性能检测结果显示支架材料具有良好的生物降解性能,12周时总降解率为87.6%;孔径为（572.5±51.8）μm,孔隙率为（82.1±7.5）%,吸水率为（1293.5±73.8）%;力学测试结果表明,支架材料具有一定的抗压强度。结论本研究制备的组织工程髓核支架材料具有理想的三维结构和理化性能,符合理想支架材料的结构要求,为进一步行体内外生物学性能研究提供了实验基础和依据。     

纤维蛋白胶在甲状腺功能亢进手术中应用观察

目的总结甲状腺功能亢进(甲亢)手术使用纤维蛋白胶不放置引流的临床经验。方法对132例甲状腺Ⅲ度及以下肿大的甲亢手术创面喷洒纤维蛋白胶不放置引流(下称蛋白胶组)与184例甲亢手术切口放置胶管引流(下称引流组)进行比较。结果蛋白胶组切口术后无出血,无切口积液,无切口感染,切口甲级愈合,无不良反应,术后平均住院(4.8±0.5)d;引流组切口放置引流管24~48 h,切口引流量平均135ml,切口出血1例(0.54%),切口积液5例(2.71%),切口感染1例(0.54%),术后平均住院(5.6±0.7)d。结论在甲状腺Ⅲ度及以下肿大的甲亢手术中创面喷洒蛋白胶不放置引流是可行的。     

三种不同载体材料体外生物相容性的比较

目的探讨纳米晶羟基磷灰石胶原复合材料(NHAC)、非纳米晶羟基磷灰石胶原复合材料(HAC)和珊瑚羟基磷灰石(CHA)的体外生物相容性,为组织工程提供理想的细胞基质载体材料。方法将人骨髓基质干细胞分别与上述三种载体材料体外复合培养,应用倒置显微镜、扫描电镜、四唑盐比色试验(MTT法)及碱性磷酸酶(ALP)活性测定,对材料上复合培养的细胞进行形态学和功能测定。结果骨髓基质干细胞能在NHAC和CHA两种材料上良好地黏附、增殖和生长。细胞的活性和碱性磷酸酶活性未受到材料的影响;而HAC不利于人骨髓基质干细胞的黏附、增殖,并使碱性磷酸酶活性降低。结论NHAC和CHA两种材料具有良好的生物相容性,可作为骨组织工程理想的骨替代材料;HAC不适合做细胞外基质。     

改良鼠耳廓软骨细胞体外培养的实验研究

目的为组织工程化软骨修复机体软骨缺损提供实验基础。方法用消化组织块培养法体外培养猪耳廓软骨细胞,并观察其在纳米材料支架复合MSCs支架上的生长情况。结果软骨细胞在PH值为7.0,含10%胎牛血清的DMEM培养液中生长良好,可传代10代,细胞数目扩增为原来的400-500倍;软骨细胞在纳米材料支架复合MSCs支架上生长良好,分泌基质旺盛。结论改良消化组织块方法培养软骨细胞是一种可以大量扩增软骨细胞数目的切实可行的方法 ,纳米材料支架复合MSCs支架上是软骨细胞良好的生长支架。     

聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯作为软骨细胞支架的实验研究

目的探讨聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯（PHBV）作为软骨细胞支架的可行性。方法采用“压片-热处理-粒子析出”技术制备PHBV多孔支架并观测其结构。体外分离培养软骨细胞后接种到PHBV支架进行培养，第3、7、14天后取材行扫描电镜观察；培养至2、6、10周后行组织学观察。结果PHBV支架孔径在200-300μm之间孔隙率80％；软骨细胞-PHBV复合物在体外培养期间支架无塌陷及形变，软骨细胞在支架上黏附、增殖良好，并能分泌细胞外基质。随着培养时间延长，新生软骨的组织学特征日益明显。结论PHBV支架具有适宜的孔结构和生物相容性，可以作为软骨组织工程支架材料。     

甲状腺功能亢进手术中纤维蛋白胶的应用与观察

目的 总结甲状腺功能亢进(甲亢)手术使用纤维蛋白胶不放置引流的临床经验.方法 对392例甲状腺Ⅲ度及以下肿大的甲亢手术创面喷洒纤维蛋白胶不放置引流(下称蛋白胶组)与386例甲亢手术切口放置胶管引流(下称引流组)进行比较.结果 蛋白胶组切口术后无出血,无切口积液,无切口感染,切口甲级愈合,无不良反应,术后平均住院(4.6...     

猪小肠粘膜下层作为组织工程肌腱支架材料的实验研究

摘要 目的：探讨猪小肠粘膜下层（small intestinal submucosa,SIS）作为组织工程肌腱支架的可行性。方法：将肌腱细胞接种到经过处理的SIS卷轴上,形成细胞-支架复合物。24只罗曼鸡被随机分为两组,实验组为细胞－SIS复合物,对照组为自体移植肌腱。术后3、6、9周取材并进行大体形态、组织形态学、体式显微镜观察和生物力学测定。结果：实验组术后局部反应小,伤口一期愈合。组织学检查显示,3周时胶原纤维数量相对少,排列紊乱,第6周时细胞数量增多,形态也略显规则,第9周时纤维数量多且排列规则。生物力学测定证实9周后两组植入物抗拉力强度在统计学上无著性差别(P>0.05)。结论：以SIS与肌腱细胞构建的肌腱组织能够达到替代肌腱缺损的要求,SIS可以作为肌腱组织工程的一种理想的支架材料。