转染血管生成素1对胃癌细胞在低氧环境下整合素β1表达的影响

目的 探讨低氧环境下血管生成素1(Ang-1)对人胃癌细胞中整合素β1的影响.方法 利用腺病毒作为载体将已构建成功含Ang-1基因的重组腺病毒(Ad-Ang-1)瞬时转染人胃癌细胞株BGC-823,利用低氧诱导剂氯化钴进行低氧干预低氧转染(D)组,以单纯转染(B)组及单纯低氧干预(C)组作为对照,以未转染未行低氧干预的正常细胞作为空白对照(A)组,利用半定量RT-PCR,免疫细胞化学和Western blot方法对4组细胞中整合素β1的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果 D纽整合素β1的mRNA及蛋白表达明显高于A、B、C组(P<0.05).结论 低氧环境下转染Ang-1能够明显提高人胃癌细胞BGC-823中整合素β1 mRNA及蛋白的表达,表明低氧环境下Ang-1促进肿瘤细胞的侵袭转移.     

孕妇外周血、脐血中Ang-1、Ang-2的表达与胎儿生长受限的相关性研究

目的探讨孕妇外周血、新生儿脐血中促血管生成素-1（Ang-1）、促血管生成素-2（Ang-2）的表达及其与胎儿生长受限（FGR）发病的关系。方法选择2010年7月至2012年10月在潍坊市人民医院产科住院分娩的FGR孕妇30例作为实验组,正常妊娠妇女60例作为对照组。酶联免疫法（EusA）检测两组孕妇外周血、新生儿脐血中Ang-1、Ang=2的浓度。结果（1）FGR组孕妇血清中Ang-1水平高于对照组,Ang-2水平低于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）FGR组新生儿脐血中Ang-1水平高于对照组,Ang-2水平低于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）FGR孕妇外周血、新生儿脐血中Ang-1／Ang-2水平显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈O．05）。（4）FGR组孕妇外周血、新生儿脐血中Ang_1／Ang-2与新生儿体重及胎盘重量呈负相关（P〈0．05）。结论孕妇外周血、脐血中Ang-1与Ang-2表达失调与FGR的发病密切相关。     

血管生成素1基因与血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞黏附作用

目的 探讨促血管生成素1(Ang-1)、血管内皮生长因子165(VEGF-165)对人胃癌细胞中整合素β1的影响.初步研究其对肿瘤黏附的影响及可能的作用机制.方法 利用腺病毒作为载体将已构建成功的含Ad-Ang-1+Ad-VEGF-165/2基因(A组)、Ad-Ang-1基因(B组)和Ad-VEGF基因(C组)的重组腺病毒瞬时转染人胃癌细胞株BGC-823,转染Ad-GFP作为阴性对照(D组),未转染的正常细胞作为空白对照(E组),通过细胞黏附法检测转染前后细胞与细胞外基质(ECM)黏附能力的改变,再分别使用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法对三组细胞中整合素β1的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果 细胞黏附实验显示转染Ad-Ang-1、Ad-VEGt-165、Ad-Ang-1+Ad-VEGF-165/2后,细胞与细胞外基底之间的黏附力明显增强(P<0.05),B组与C组无区别(P>0.05),A组的黏附率明显高于B组和C组(P<0.05);RT-PCR、Western blot结果显示整合素β1 mRNA和蛋白水平在A组、B组、C组中的表达要明显高于D组及E组(P<0.05),其中在A绢的表达最强.结论 转染Ad-Ang-1、Ad-VEGF-165和Ad-Ang-1+Ad-VEGF-165/2能够提高人胃癌细胞BGC-823中整合素β1 mRNA、蛋白的表达,从而促进肿瘤细胞的黏附和转移,A组的作用强于B组和C组.     

血管生成素1与血管内皮生长因子165对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究人血管生成素1(Ang-1)、血管内皮生长因子165(VEGF165)以及两种因子相互作用对人胃癌细胞株MGC-803增殖与凋亡的影响。方法应用MTT法测定腺病毒绿色荧光蛋白(Ad-GFP)(B组)、Ad-Ang-1(C组)、Ad-VEGF165(D组)以及Ad-Ang-1+Ad-VEGF165/2(E组)对MGC-803细胞增殖的影响;另设对照组(A组)。采用流式细胞术分析血清饥饿时其对凋亡的影响;运用Western blot方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 24、48、72 h时,C、D、E组吸光度均明显高于B、A组(P<0.05);E组吸光度明显高于C、D组(P<0.05)。与A组或B组相比,C、D、E组均能够抑制细胞凋亡(P<0.01),其中E组抑制凋亡作用最强。C、D、E组Bcl-2蛋白表达均比B、A组明显增高(P<0.05),Bax蛋白的表达则明显降低(P<0.05)。结论 Ang-1、VEGF165和Ang-1+VEGF165/2能够明显促进MGC-803细胞体外增殖,抑制血清饥饿时的凋亡;Ang-1与VEGF165联合作用要显著强于单用Ang-1或VEGF165。     

补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织Ang-1和Tie-2表达的影响

目的 探讨补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织中促血管生成素1 (Ang-1)和酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达的影响.方法 96只SD大鼠随机分为三组,每组32只.A组和M组注射胶原蛋白酶Ⅶ构建大鼠脑出血模型,S组为假手术组.A组每日采用补阳还五汤2mL灌胃,每天2次,连续治疗14d.A组和M组在脑出血建模后第1、3、7、14天获取大鼠出血部位脑组织,实时荧光定量PCR检测脑组织中Ang-1和Tie-2mRNA表达,分析其相关性.结果 M组Ang-1和Tie-2 mRNA表达水平在第1天低于S组(P＜0.01),但第7、14天高于S组(P＜0.01).第3、7、14天,A组Ang-1和Tie-2mRNA表达水平均高于M组(P＜0.05或P＜0.01).Ang-1与Tie-2mRNA表达水平呈正相关(r=0.89,P＜0.01).结论 脑出血大鼠脑组织中Ang-1和Tie-2mRNA表达水平先下降后升高,补阳还五汤可能通过上调Ang-1和Tie-2mRNA表达发挥治疗脑出血的作用.     

Ang-1对高糖中培养的RF/6A的影响

目的探讨血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）对高浓度葡萄糖中培养的猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A）的保护作用。方法RF/6A分3组培养：对照组（DMEM培养基含25mmol/L葡萄糖）、高糖组（DMEM培养基含40mmol/L葡萄糖）、Ang-高糖组（DMEM培养基含40mmol/L葡萄糖＋0.25mg/LAng-1）。利用台盼兰染色法及MTT比色法检测体外培养的各种RF/6A存活率及细胞活力,利用western-blotting法检测各组suivivin表达。结果1d时各组细胞存活率及活力无差异。3、5、7d时高糖组和Ang-高糖组细胞存活率及细胞活力均较正常组下降（P〈0.05）,高糖组细胞存活率及细胞活力低于Ang-高糖组（P〈0.05）。5d时,Ang-高糖组survivin表达明显较其他两组增多（P〈0.05）。结论高糖能降低RF/6A的存活率和活力,而Ang-1能明显增强高糖环境中RF/6A的存活率和活力,其机制可能与Ang-1上调凋亡抑制基因survivin的表达有关。     

脂多糖预处理对VEGF165、Ang-1与HMGBx1在缺血-再灌注损伤心肌中表达的影响

目的 探讨脂多糖预处理对血管内皮生长因子(VEGF165)、促血管生成素1(Ang-1)与高迁移率族蛋白B1(HMGBx1)在缺血-再灌注损伤心肌中表达的影响.方法 普通B6小鼠制作心肌缺血-再灌注动物模型,实验组手术前给予脂多糖.用TUNEL检测心肌细胞凋亡状况,用凝胶迁移率实验(EMSA)检测核转录因子(NF-kB)的活力,用Western blot检测VEGF165、Ang-1、HMGBx1在心肌中的表达.大鼠心肌成肌细胞H9c2,转染携带人VEGF165和Ang-1的腺病毒,随后过氧化氢刺激,检测HMGBx1的胞浆含量和NF-kB的活性.结果 小剂量脂多糖预处理能显著促进VEGF165、Ang-1在缺血-再灌注损伤心肌中的早期表达,并同时显著减少HMGBx1的表达和抑制心肌细胞凋亡.细胞实验提示VEGF165和Ang-1联合使用能显著减少心肌细胞胞浆中HMGBx1的含量和NF-kB的活性.结论 VEGF165和Ang-1可能通过抑制NF-kB的活性,减少HMGBx1的含量而对心肌细胞产生直接保护作用.     

Tie-2介导Ang-1、Ang-2调节大鼠失血性休克血管反应性双相变化的作用研究

目的 观察Tie-2在血管生成素-1(angiopoietin-1, Ang-1)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)调节失血性休克血管反应性双相变化中的作用。方法 采用离体微血管环张力测定技术和western blot技术,观察失血性休克后不同时间点肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)中Tie-2蛋白表达和磷酸化变化、抑制Tie-2对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响,以及给予Ang-1和Ang-2后缺氧的血管内皮细胞(vascular endothelial cell, VEC)和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)混合细胞中Tie-2蛋白表达和磷酸化变化,并观察抑制Tie-2对缺氧早期和晚期的混合细胞NO含量的影响。结果 (1) 肠系膜上动脉Tie-2蛋白表达和酪氨酸磷酸化在正常时很低,失血性休克后逐渐增高,在休克早期(休克10min),Tie-2蛋白表达变化不大,但酪氨酸磷酸化已明显增高(P<0.01);随着休克时间延长,Tie-2蛋白表达和酪氨酸磷酸化均进一步显著增高(P<0.01)。(2)Tie-2抑制剂可降低缺氧10min的血管高反应性(NE的Emax由13.479mN降低至10.122mN,P<0.05),并显著抑制Ang-1对缺氧10min血管反应性的维持作用(Emax由15.283mN降低至10.253mN,P<0.01);Tie-2抑制剂可改善缺氧4h的血管低反应性(NE的Emax由5.875mN增高至8.003mN,P<0.05),并显著拮抗Ang-2进一步降低缺氧4h血管反应性的作用(Emax由3.444mN增高至7.643mN,P<0.01)。(3)缺氧10min时,降低血管高反应性的Ang-2可降低Tie-2磷酸化,使其由0.0403降低至0.0123(P<0.01);缺氧4h时,恢复血管低反应性的Ang-1可降低Tie-2蛋白表达,使其由0.2276降低至0.0851 (P<0.01),也可以降低Tie-2磷酸化,使其由0.1437降低至0.0359 (P<0.01)。(4) NO含量在缺氧早期显著增高,Ang-2和Tie-2抑制剂显著抑制其增高(P<0.01);缺氧晚期NO含量较正常对照组增高得更为显著,Ang-1和Tie-2抑制剂可抑制其增高(P<0.01)。结论 Ang-1、Ang-2通过Tie-2受体调节大鼠失血性休克血管反应性双相变化。     

急性低氧条件下血管紧张素Ⅱ对下丘脑CRH和AVP分泌的作用

目的:研究低氧条件下血管紧张素Ⅱ对下丘脑促肾上腺皮质素释放素(CRH)和精氨酸加压素(AVP)分泌的作用.方法:低氧暴露采用人工模拟低压低氧.CRH和AVP的测定采用放射免疫测定法.血浆皮质酮测定采用荧光法.结果:7 km(8.2％O_2)急性低氧暴露1 h,AngⅡ不影响低氧引起的下丘脑CRH的分泌[低氧对照组:(15±4)ng/ME,低氧、脑室给Ang Ⅱ组:(160±8)ng/ME]但可增加下丘脑AVP的分泌[ME中AVP水平从低氧对照组(5.7±1.6)ng/ME下降到低氧、脑室给A Ⅱ组(2.6±1.2)ng/ME],同时血浆皮质酮水平也升高[从(356±58)μg/L plasma升高到(536±134)μg/L plasma],此作用可被AVP抗体部分反转.结论:急性低氧条件下,Ang Ⅱ对CRH的分泌无明显直接作用,它可能通过增加下丘脑AVP的分泌进而刺激下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的功能.     

血管生成素1基因转染对胃癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨人血管生成素1(Ang-1)对人胃癌细胞BGC-823基质会属蛋白酶2(MMP-2)表达情况的影响.方法 利用腺病毒作为载体将已构建成功的含Ang-1基因的重组腺病毒(Ad-Ang-1)瞬时转染人胃癌细胞BGC-823为实验组,转染编码绿色荧光蛋白的复制缺陷型腺病毒重组体(Ad-GFP)为阴性对照组,未转染的正常细胞为对照组.应用RT-PCR和Western blot印迹检测三组细胞中MMP-2在mRNA和蛋白表达的情况.结果 MMP-2在实验组中表达明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 Ang-1能显著提高人胃癌细胞BGC-823的MMP-2的表达,提示Ang-1可能具有促进肿瘤细胞侵袭的作用.     

人参皂苷Rg1对人胃癌BGC-823的抑制作用研究

目的:研究人参皂苷Rg1对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823活性、增殖、凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3及形态学影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,加入不同浓度人参皂苷Rg1加以干预,生长曲线法、MTT法、蛋白质含量分别观察人参皂苷Rg1对BGC-823细胞活性、增殖的影响,荧光定量PCR法测定凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3 mRNA含量变化,形态学方法观察人参皂苷Rg1促BGC-823细胞凋亡作用。结果:人参皂苷Rg1 40、60、80 mg/L不同剂量均不同程度抑制细胞的增殖,且有明显的量-效、时-效关系;人参皂苷Rg1对BGC-823细胞具有明显的细胞毒作用,其IC50为29.56 mg/L;人参皂苷Rg1可明显减少肿瘤细胞内蛋白含量,提高细胞内Bax-2、caspase-3 mRNA含量,提高经人参皂苷Rg1作用后,凋亡细胞皱缩,胞浆稀少或缺乏,淡红色;染色质凝聚,成深紫色;细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制细胞增殖,降低细胞活性,表现出较好的抗肿瘤活性,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞蛋白质合成、促进BGC-823细胞凋亡有关。     

端粒重复序列结合因子1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的研究端粒重复序列结合因子1（TRF1）蛋白在胃癌中的表达及其与胃癌发生发展的关系。方法用Westerllblot方法检测TRFI蛋白在10例正常胃黏膜、15例胃癌前病变、20例胃癌、5例淋巴结转移胃癌组织中的表达。结果TRFI蛋白在癌前病变组、胃癌组、转移癌组比正常组表达高；胃癌组、转移癌组比癌前病变组表达高（P〈0．01）：存胃癌组织中，TRF1蛋白的表达与胃癌分化程度有关，分化越差，表达越高（P〈0．01）。结论TRFI蛋门可能在胃癌的发生发展中起重要作用。     

表没食子儿茶素没食子酸醋对人胃癌细胞迁移、袭和FoxM1基因表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸醋（表没食子儿茶素没食子酸醋,EGCG）对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的EGCG处理人胃癌BGC823细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹方法检测FoxM1基因蛋白水平变化。结果人胃癌BGC823细胞经EGCG处理后,迁移和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性（P〈0.01）。EGCG处理组FoxM1基因蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论 EGCG可降低人胃癌细胞侵袭能力,下调FoxM1基因表达,是其重要机制之一。     

伊立替康联合TRAIL对胃癌细胞SGC7901凋亡的影响

目的探讨伊立替康和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响并初步探讨其作用机制。方法不同浓度的伊立替康和/或200μg·L-1TRAIL作用于人胃癌细胞SGC7901细胞,MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;TRAIL和/或伊立替康作用SGC7901细胞后,Western-blot检测蛋白表达。结果 200μg·L-1的TRAIL对胃癌细胞的增殖抑制率为18.46%,TRAIL(200μg·L-1)联合伊立替康(28.67mg·L-1)引起明显的增殖抑制和细胞凋亡(P<0.05)。TRAIL(200μg·L-1)单药和伊立替康(28.67mg·L-1)单药都没有改变Bax、Caspase-8蛋白的表达,而两者联用增加了Bax、Caspase-8蛋白的表达。结论伊立替康通过增加Bax、Caspas-8蛋白表达来增强TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡。     

血管形成素-1基因转染对血管内皮细胞影响的实验研究

目的　探讨血管形成素 1(Ang1)基因重组腺病毒 (Ad .Ang1)的获取及其对人脐静脉上皮细胞 (ECV30 4 )的影响。方法　以逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)自人脾组织中克隆出Ang1全长cDNA ,测序后克隆到Ad5腺病毒载体中 ,制备纯化的Ad .Ang1;以Ad .Ang1转染ECV30 4细胞 ,1至 7d后 ,用RT PCR与Westernblot分别检测ECV30 4中Ang1转录与表达情况 ,同时观测其对ECV30 4的影响。结果　克隆的Ang1DNA片段为 15 15bp的全长cDNA。所获得的Ad .Ang1与 β 半乳糖苷酶 (LacZ)基因重组腺病毒 (Ad .LacZ)滴度分别为 5 6× 10 8pfu/ml、5 3× 10 8pfu/ml。β 半乳糖苷 (X gal)染色显示LacZ基因转染Hela细胞 ,蓝染率可达 95 %以上。Ang1基因转染后第 1、3、7d可检出mRNA表达 ,第 3、7d可检测到其蛋白表达。XTT检测显示Ad .Ang1组与对照组相比 ,各时间点的OD值差异不显著 ,P >0 0 5。结论　Ad .Ang1在体外培养的ECV30 4细胞中能有效表达 ,但对ECV30 4细胞增殖功能无明显促进作用     

重组人血管内皮抑制素对人胃癌MGC-803细胞株VEGF表达的影响

目的探讨重组人血管内皮抑制素(rhEndo)对人胃癌细胞株MGC-803血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法免疫组化法观察MGC-803细胞株VEGF的蛋白表达。rhEndo处理MGC-803后,用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测VEGF表达量的变化。结果 MGC-803细胞高表达VEGF蛋白,经rhEndo处理后VEGF mRNA和蛋白表达量明显减低(P<0.05)。结论 rhEndo能抑制MGC-803细胞中VEGF的表达。     

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的：观察钠氢交换蛋白1（Na＋／H＋,exchanger 1,NHE1）在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC‐7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应（real time PCR ,RT‐PCR）和免疫印迹（Western Bloting）技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES‐1和胃癌细胞株SGC‐7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5‐（N‐乙基‐N‐异丙基）]阿米洛利[5‐（N‐ethyl‐N‐isopropyl） amiloride （EIPA ）]处理胃癌 SGC‐7901细胞24 h ,MTT法检测其对SGC‐7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和 SGC‐7901胃癌细胞中,其mRNA 和蛋白表达水平均明显增高（P＜0．05）;EIPA10μm／mL ,20μm／mL ,30μm／mL处理,均能抑制胃癌SGC‐7901细胞的过度增殖（P＜0．05）,且呈现良好的剂量‐效应关系。结论 NHE1 mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC‐7901细胞的增殖,N H E1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。